Guía de Practicas de Laboratorio

OCTUBRE 2016
FACULTAD DE SALUD PBLICA

AGOSTO 2017
ESCUELA DE MEDICINa
Laboratorio de
GUA DE
PRCTICAS DE
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA Y
PARASITOLOGA
ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE SALUD PBLICA ESCUELA DE
MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
Contenido
ACTIVIDAD PRCTICA N 01..................................................................................................3

TEMA: BIOSEGURIDAD.......................................................................................................3
ACTIVIDAD PRCTICA N 02................................................................................................12
TEMA: EQUIPOS Y MATERIALES DEL LABORATORIO. (Funciones y manejo)..........12
MICROSCOPIO PTICO BINOCULAR..............................................................................13
TEMA: COLORACIN DE GRAM......................................................................................20
TEMA: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO.........................................................26
TEMA: TOMA DE MUESTRAS...........................................................................................31
TEMA: DETERMINACIN DE LA SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA..............40
TEMA: DIAGNSTICO DE STAPHYLOCOCCUS............................................................45
TEMA: DISCUSIN DE CASOS CLNICOS: ALGORITMO PARA DIAGNSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS..........................................................................................
ACTIVIDAD PRCTICA N 09....................................................................................................
TEMA: DISCUSIN DE CASOS CLNICOS: DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES
PRODUCIDAS POR LOS BACILOS GRAMPOSITIVOS ESPORULADOS Y NO
ESPORULADOS........................................................................................................................
TEMA: DIAGNSTICO DE ENTEROBACTERIAS...........................................................49
TEMA: COLORACIN DE ZHIEL NIELSEN PARA EXAMEN DIRECTO POR
BACILOSCIPA DE MT.........................................................................................................54
GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 1

ESCUELA DE MEDICINA
TEMA: DIAGNSTICO DE LABORATORIO MICOLGICO..............................................

TEMA: ANLISIS Y DISCUSIN DE CASOS CLINICOS: ALGORITMO PARA
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR HONGOS.............................
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PRODUCIDOS POR VIRUS( HEPATITIS B).......
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR VIRUS FLAVIVIRUS..........
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR PARASITOS.........................
TEMA: RECONOCIMIENTO MACROSCPICO DE HELMINTOS.....................................

ESCUELA DE MEDICINA
ACTIVIDAD PRCTICA N 01
TEMA: BIOSEGURIDAD
1.- OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Contribuir con los conocimientos necesarios para generar en los
estudiantes una cultura de responsabilidad en un ambiente de
laboratorio, mediante la aplicacin de normas y el conocimiento de los
equipos, reactivos y suministros existentes en el laboratorio.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Socializar Manuales de Procedimientos, Manejo de Equipos, Plan de
Contingencia y Bioseguridad.
Identificar en el laboratorio equipos, materiales, insumos y reactivos.
2.- CONTENIDOS TERICOS MNIMOS
SEGURIDAD BIOLGICA
o bioseguridad es el trmino utilizado para referirse a los principios,
tcnicas y prcticas aplicadas con el fin de evitar la exposicin no
intencional a patgenos y toxinas, o su liberacin accidental. En cambio, la
proteccin biolgica (o bioproteccin) se refiere a las medidas de
proteccin de la institucin y del personal destinadas a reducir el riesgo de
prdida, robo, uso incorrecto, desviaciones o liberacin intencional de
patgenos o toxinas.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante el desarrollo del curso de Microbiologa, en el laboratorio se pueden
llegar a utilizar sustancias o muestras biolgicas que, en ocasiones
representan riesgos potenciales a la salud, debido a que pueden ser:
corrosivas, reactivas, explosivas, txicas, inflamables o biolgico
infecciosas.
Manejo de materiales peligrosos y/o biolgico infecciosos
1. Precauciones generales: Se refieren a las medidas para minimizar la

difusin de enfermedades transmisibles, especialmente hepatitis B o
SIDA y para evitar incendios, cortaduras o exposiciones simples, de
corta duracin o accidentales a sustancias qumicas peligrosas.
2. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero, orina,

tejido, cadver o cultivo como potencialmente infeccioso. Todas las

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sustancias qumicas proporcionadas, equipos y materiales del

laboratorio debern ser utilizados con el mximo cuidado, atendiendo
a las indicaciones de peligrosidad y cuidados especficos, segn el
caso.
3. Se debe conocer los smbolos y los cdigos de color sobre las

precauciones y los peligros en el laboratorio. Asegurarse de conocer
la localizacin de extinguidores, del botiqun y de las salidas de
emergencia.
4. Usar mandil en el laboratorio, el que deber estar cerrada durante

todo el tiempo que se permanezca en el laboratorio.
5. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben usarse para
efectuar punciones vasculares y para manipular sangre, lquidos
corporales, cultivos de microorganismos, sustancias o superficies
contaminadas. Despus del uso de cualquier material biolgico, se
procede al lavado de manos con los guantes puestos. Despus de
quitarse los guantes debemos lavarnos nuevamente las manos.
6. Todos los materiales desechables y no desechables se deben

descontaminar en una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio de 4 a 7
% de concentracin, durante ms de 20 minutos antes de ser
desechados.
7. Los elementos punzocortantes deben desecharse en recipientes

especiales destinados para ello, los cuales deben estar etiquetados
con la leyenda que indique "Peligro, residuos punzocortantes
biolgico-infecciosos" y marcados con el smbolo universal de riesgo
biolgico. Nunca re encapuchar las agujas
8. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas con hipoclorito

de sodio al 1%, con alcohol al 70% o con agua oxigenada.
9. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y

peligrosas, por lo que se deber:
a) Conocer las propiedades (venenosas, custicas o corrosivas) y
el uso correcto de las mismas.
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar, directamente las
sustancias. Para determinar el olor se acerca la tapa del frasco
cuidadosamente a la nariz, o bien, si se trata de sustancias
voltiles o vapores acercar stos con la mano a la nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, especialmente la
cara; usar bata y guantes para proteger la ropa y el cuerpo;

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nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de un matraz con

lquidos en ebullicin o material de reaccin hacia el vecino, o a
s mismo, ya que puede proyectarse el contenido; para las
sustancias que no tienen un efecto pronunciado sobre la piel,
pero cuya ingestin es peligrosa, evitar la contaminacin de
alimentos, cigarros o manos que despus se llevarn a la boca
o con las que se tocarn alimentos (nunca ingerir alimentos en
el laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear con la boca,
especialmente los cidos fuertes, productos custicos,
oxidantes fuertes y compuestos venenosos.
10. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a cargo del
rea de prcticas. Es una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que sean, se comuniquen
inmediatamente al profesor. Nunca realizar actividades
experimentales sin la supervisin del responsable del grupo.
11. Manejar adecuadamente los residuos peligrosos derivados de
las prcticas, identifique su nivel de riesgo y el mecanismo para su
desecho.
Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho
Tipo de residuo Estado Fsico Envasado Color

Bolsa de
Slido
plstico
Sangre Lquido Rojo
Recipiente
hermtico
Bolsa de
Cultivos y cepas de Slidos plstico
Rojo
agentes infecciosos Lquidos Recipiente
hermtico
Bolsa de
Slidos plstico
Residuos no anatmicos Rojo
Lquidos Recipiente
hermtico
Bolsa de
Slidos plstico
Patolgicos Amarillo
Lquidos Recipiente
hermtico
Recipientes
Objetos punzocortantes
Slidos rgidos Rojo
usados y sin usar

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CLASIFICACIN DE LOS RESIDUOS
Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones de

enseanza o investigacin as como en hospitales y clnicas contienen
residuos no peligrosos o municipales, residuos biolgicos infecciosos y
residuos especiales
Residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI)
Aquello que ha entrado en contacto con pacientes o animales, sus
muestras biolgicas y/o cepas de microorganismos, se clasifican en:
sangre, cultivos, patolgicos (tejidos, rganos, partes y fluidos corporales,
etctera), no anatmicos (gasas, algodones, jeringas, etctera) y
punzocortantes (lancetas, agujas, pipetas Pasteur, etctera).
Residuos municipales
Aquellos que no representan peligro para la salud y sus caractersticas
son similares a los residuos domsticos comunes.
Residuos especiales CRETI
Residuos que constituyen un peligro para la salud por sus caractersticas
agresivas tales como: Corrosividad, Reactividad, Explosividad, Toxicidad
e Inflamabilidad.
Es importante no olvidar que, la mezcla de residuos municipales con
residuos biolgico infecciosos hace que se consideren en su totalidad
como biolgico infecciosos, mientras que la mezcla de residuos biolgico
infecciosos con peligrosos CRETI se deben consideran como peligrosos
CRETI.
Indicaciones generales para evitar incendios o explosiones al

utilizar solventes inflamables.
1. Los solventes inflamables (alcohol, ter, cloroformo, acetona, tolueno,

xilol, etctera) se utilizan en la mayora de los laboratorios, por lo que
se recomiendan las siguientes precauciones:
a) No fumar en el interior del laboratorio.
b) No utilizar la llama del mechero y cerciorarse de que no hay
cerca lquidos inflamables.
c) No mantener el mechero encendido cuando est fuera de uso.
d) Si se vierten accidentalmente sobre las mesas, secar de
inmediato con un trapo hmedo y enjuagar ste en el chorro de
agua, exprimindolo.
e) Nunca calentar un lquido orgnico sobre una flama. Para
calentar, usar bao de agua o parrilla elctrica.
2. En caso de incendio debe hacerse lo siguiente: para un incendio
pequeo en un vaso, un matraz, etctera, ste se cubrir con un
recipiente mayor o se ahogar el fuego con un trapo mojado o se
combatir con un extinguidor.

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3. Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la mesa o el

piso, se utilizar un extinguidor de Dixido de carbono. Si el fuego no
puede vencerse de inmediato, se evacuar el laboratorio y se avisar
al departamento contra incendios de la institucin.
4. Los accidentes ms frecuentes que ocurren en el laboratorio son las
lesiones debidas a cortes, laceraciones, etctera, por cristalera rota.
5. En caso de heridas pequeas dejar que sangre unos segundos; tener
cuidado de no dejar partculas de vidrio en la herida y aplicar un
desinfectante.
6. Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas por un
mdico. Mientras tanto, evitar el sangrado aplicando presin en un
punto ms arriba de la herida o antes de ella (no mantener la presin
por ms de 5 minutos).
7. Casi siempre, los choques elctricos en el laboratorio son de poca
importancia; las precauciones de seguridad se deducen de la
naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato elctrico con las
manos hmedas o cuando se est parado sobre un piso hmedo.
Siempre apagar y desconectar los aparatos antes de cualquier
manipulacin.

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3.- PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

Bioseguridad Desechos
Riesgo Precauciones
Contaminantes Manejo de Laboratorio
4.- METODOLOGA
Se utilizar un mtodo experimental activo que permite al estudiante, la

aplicacin de los conocimientos tericos adquiridos, mediante una tcnica
colectiva que permita generar un ambiente de trabajo grupal responsable y
respetuoso, mediante la participacin activa de los estudiantes.
5.- EQUIPOS, MATERIALES Y OTROS IMPLEMENTOS

Manual de Procedimientos Manual de Bioseguridad
Manual de Manejo de Equipos Plan de Contingencia
6.- PROCEDIMIENTO
Socializar los manuales vigentes y aprobados para su aplicacin en

las diferentes prcticas de laboratorio.
Recorrer las instalaciones del laboratorio para el reconocimiento de
equipos, materiales, insumos y reactivos.
7.- RECOMENDACIONES
Es necesario manipular con mucho cuidado equipos, materiales, insumos y
reactivos, considerando todos las recomendaciones adjuntas en los
respectivos manuales.
Considerar el manejo, recoleccin, almacenamiento, transporte,
tratamiento, recuperacin y disposicin de los residuos patognicos.
8.- LOGROS DE APRENDIZAJE

Al finalizar la prctica el estudiante ser capaz de:
HABILIDADES
Reconocer los materiales equipos, materiales, insumos y
reactivos.
Distinguir los riesgos en el manejo de equipos, materiales,
insumos y reactivos.
DESTREZAS
Emplear correctamente equipos, materiales, insumos y
reactivos.
Aplicar las normas de seguridad necesarias en el trabajo de

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laboratorio.
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en el empleo de los equipos y
materiales de laboratorio.
Trabajar en equipo, compartiendo con respeto los espacios y
puesto de trabajo.
9.- CONCLUSIONES
Al finalizar la prctica los estudiantes adquieren los conocimientos

necesarios para generar una cultura de responsabilidad en un ambiente de
laboratorio, mediante la aplicacin de normas y el conocimiento de los
equipos, reactivos y suministros existentes en el laboratorio.
10.- ANEXOS
MTODOS DE DESINFECCIN
MTODOS FSICOS
Ebullicin Permite que el agua llegue a una temperatura de
100C, por 15 min. No elimina esporas
Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura 63C durante 30
minutos
Radiacin Luz ultravioleta (UV) longitud de onda larga y baja
ionizante: energa
MTODOS QUMICOS
Alcoholes, Aldehdos, Halgenos, Metales Pesados, Compuestos de amonio
cuaternario, fenoles, etc. Usados en perodos de tiempo ms cortos
desinfectantes que se aplican sobre tejido vivo (piel) se denominan antispticos
MTODOS DE ESTERILIZACIN
MTODOS FSICOS
Incineraci Es el mtodo ms comn los desechos peligrosos se convierten
n enceniza
Autoclave. Se emplea en objetos termoestables; bsicamente es una
Calor
gran olla de presin. Produce desnaturalizacin y coagulacin de
hmedo
protenas
El calor seco deseca a la clula, lo que incrementa los niveles de
electrolitos, y provocan fusin de membranas. La accin destructiva
Calor seco
del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando
el material est seco o la actividad de agua del medio es baja
Filtracin Se filtra la sustancia a travs de una membrana de acetato por efecto

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del vaco
MTODOS QUMICOS O BIOCIDAS
xido de etileno (EtO) el ms comn, pero tambin usamos vapor de formaldehdo y
perxido de hidrgeno, glutaraldehdo, cido peractico 1, etc.
PICTOGRAMAS DE SEGURIDAD
RIESGO BIOLGICO
Todo aquello que pueda contener
bacterias, virus u otros
microorganismos con capacidad de
infeccin o cuando contiene
toxinas producidas por
microorganismos que causen
efectos nocivos a los seres vivos.
Ejemplo: jeringas, sangre. Medidas
de prevencin: evitar el contacto
con los ojos, la piel y las vas
respiratorias. Utilizar elementos de
proteccin personal.
E = EXPLOSIVO
Es toda sustancia slida o lquida o
mezcla de sustancias que pueden
desprender gases a una
temperatura, presin y velocidad
tales que pueden detonar, producir
violentas deflagraciones, o explotar
al exponerse al calor cuando estn
parcialmente confinadas. Ejemplo:
azida de plomo, fluoruro de
carbono. Medidas de prevencin:
almacenarlas alejadas de otros
productos, evitar todo choque,
friccin y mantener alejadas de
fuentes de calor, chispas o fuego
O = OXIDANTE

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Sustancias capaces de aportar

oxgeno cuando reaccionan con
otra sustancia, por lo que cuando
entran en contacto con
combustibles o inflamables avivan
la reaccin pudiendo desarrollar
reacciones violentas. Ejemplo:
nitrito de sodio, hiposulfito de
sodio. Medidas de prevencin:
mantener alejadas de las
sustancias combustibles o
inflamables, ya que pueden
favorecerlos incendios y dificultar
su extincin.
Xn = NOCIVO
Sustancias de menor toxicidad
pero pueden causar daos a la
salud. Tambin se incluyen
aquellas mezclas o preparados que
tienen alguna sustancia que puede
ser txica pero que se encuentra a
una baja concentracin en la
mezcla.
Xi = IRRITANTE
Sustancias que pueden causar
irritacin a la piel, mucosas, o los
ojos, por contacto inmediato,
prolongado o repetido, pudiendo
tambin provocar inflamacin.
Ejemplo: Cloroformo, SDS,
hipoclorito de sodio,
aminoantipirina.
Medidas de prevencin: evitar el
contacto con los ojos, la piel y las
vas respiratorias. Utilizar
elementos de proteccin personal.
F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin

es menor de 0C y su punto de
ebullicin mximo de 35C.

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INFLAMABLE
Sustancias lquidas cuyo punto de
ignicin es menor a 40C. Ejemplo:
etanol, tolueno, ter dietlico.
Medidas de prevencin: mantener
alejado de fuentes de calor, de
ignicin o eventuales chispas, de
materiales combustibles y
oxidantes.
N = NOCIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE
Aquellas sustancias o preparados
que cuando son liberados al medio
ambiente pueden presentar un
efecto inmediato o diferido,
poniendo en peligro a alguna
especie. Ejemplo: tiourea,
otoluidina.
Medidas de prevencin: evitar que
los derrames alcancen los
desages, tratar los residuos en
condiciones ambientalmente
adecuadas.
T+ = ALTAMENTE TXICO, T = TXICO
Sustancias que pueden causar
dao en forma aguda o crnica a la
salud o causar la muerte si son
inhaladas, ingeridas o se absorben
por la piel, an en pequeas
cantidades. Ejemplo: azida de
sodio, dinitrofenol, bromuro de
etidio.
Medidas de prevencin: evitar todo
contacto directo. Utilizar elementos
de proteccin personal. Emplear
estrictas medidas de higiene
personal y del ambiente del
laboratorio.
C = CORROSIVO

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Sustancias capaces de atacar y

destruir los tejidos orgnicos si
entran en contacto con ellos o bien
atacar ciertos metales o
materiales. Ejemplo: hidrxido de
sodio, cido clorhdrico, cido
actico.
Medidas de prevencin: evitar el
contacto con los ojos, la piel y las
vas respiratorias. Utilizar
elementos de proteccin personal.
11.- BIBLIOGRAFA
1. Organizacin Mundial de la Salud.(2005). Manual de Bioseguridad del Laboratorio. 3era.

Edicin Ginebra, Suiza. Edisines OMS.
2. OPS, . d. (2009). Curso de Gestin de Calidad y Buenas Prcticas de Laboratorio. Washington
DC.
3. OPS/OMS. (2009). Curso de Gestin de Calidad y Buenas Prcticas de Laboratorio.
Washington, DC: OPS.
4. INH "Leopoldo Izquieta Perez". (04 de 2009). Instituto Nacional de Higiene y Medicina
Tropical "Leopoldo Izquieta Perez". Recuperado el 15 de 02 de 2011, de www.inh.gob.ec
5. Saenz, S. G. (2006). Sistema de Mejora Continua en el Laboratorio. Valencia: Universitat.

ESCUELA DE MEDICINA
TEMA: EQUIPOS Y MATERIALES DEL LABORATORIO. (Funciones y manejo)
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Facilitar la operacin de equipos y el manejo correcto de materiales,
empleados en el laboratorio de Microbiologa y Parasitologa, durante el
desarrollo de prcticas estudiantiles.
Preparar materiales para su uso y familiarizarse con el empleo de
los mismos.
Emplear equipos, facilitando comprensin de los requerimientos
tcnicos relacionados con el uso y las rutinas bsicas de limpieza
requeridas por los mismos.
2. CONTENIDOS TERICOS MNIMOS

Se presenta en cada equipo una breve explicacin sobre los principales
usos o aplicaciones en el laboratorio, describiendo las rutinas bsicas de
limpieza y mantenimiento requeridas por los equipos y que deben ser
ejecutadas por estudiantes.

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MICROSCOPIO PTICO BINOCULAR
Equipo de precisin conformado por

subsistemas pticos: lentes, filtros,
prismas, condensadores;
mecnicos: elementos para
controlar la posicin de la muestra
en el espacio tridimensional;
elctricos: transformadores y
sistemas de iluminacin, y
electrnicos: cmaras, sistemas de
televisin, etc., que interactan
entre s para amplificar y controlar
la formacin de imgenes de
objetos de tamao reducido, cuyas
caractersticas no alcanzan a ser
detectadas por el ojo humano
BALANZA ANALTICA
Mide la masa de un cuerpo o
sustancia, utilizando como medio
de comparacin la fuerza de la
gravedad que acta sobre el
cuerpo. En el laboratorio se utiliza
la balanza para efectuar actividades
de control de calidad con
dispositivos como las pipetas, para
preparar mezclas de componentes
en proporciones predefinidas y para
determinar densidades o pesos
especficos.
INCUBADORA

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Es un equipo diseado para

mantener una cmara a
temperatura controlada, con el fin
de conservar organismos vivos en
un entorno que resulte adecuado
para su multiplicacin, facilitando
un crecimiento rpido y constante
de microorganismos con resultados
de incubaciones fiables y
reproducibles
AUTOCLAVE HORIZONTAL DE MESA
Es un equipo diseado con el fin de
eliminar, de forma confiable,
mediante el empleo de calor
hmedo, los microorganismos que,
de otra manera, estaran presentes
en objetos, materiales y medios de
cultivo que se utilizan en
actividades de diagnstico,
docencia e investigacin
CENTRFUGA
La centrifuga est diseada para

utilizar la fuerza centrfuga que se
genera en los movimientos de
rotacin, con el fin de separar los
elementos de una mezcla.
MICROCENTRFUGA

ESCUELA DE MEDICINA
Se emplea en procesos como la

separacin por sedimentacin de
los componentes slidos de los
lquidos biolgicos, y en particular,
en la separacin de los
componentes de la sangre: glbulos
rojos, glbulos blancos, plasma y
plaquetas, entre otros, y para la
realizacin de mltiples pruebas.
Simplifica las tareas cotidianas, y
combina diseo, seguridad,
robustez con facilidad de uso. Su
pantalla es de grandes
dimensiones, de fcil lectura y un
men intuitivo.
REFRIGERADOR NO FROST
Posibilita mantener en un ambiente

(espacio refrigerado) diversas
sustancias, medios de cultivo y
cepas de microorganismo,
fundamentalmente bacterias y
hongos, para que los mismos se
conserven en buenas condiciones,
mientras ms baja la temperatura,
menor actividad qumica y
biolgica). Para lograr esto se
requiere que la temperatura interior
del refrigerador sea inferior a la
temperatura ambiente.
FREEZER

ESCUELA DE MEDICINA
Posibilita mantener en un ambiente

controlado (espacio refrigerado)
fluidos corporales (sangre y
derivados, lquidos biolgicos) y
tejidos, reactivos, qumicos,
biolgicos.
BAO MARA
El bao de Mara es un equipo que

se utiliza en el laboratorio para
realizar pruebas serolgicas y
procedimientos de incubacin,
aglutinacin, inactivacin,
biomdicos y farmacuticos. Por lo
general, se utilizan con agua, pero
tambin permiten trabajar con
aceite. Los rangos de temperatura
en los cuales normalmente son
utilizados estn entre la
temperatura ambiente y los 60 C.
Tambin se pueden seleccionar
temperaturas de 100 C, utilizando
tapa de caractersticas especiales
CMARA DE FLUJO LAMINAR

ESCUELA DE MEDICINA
Es un equipo diseado para

controlar los aerosoles y micro
partculas asociados al manejo del
material biolgico, potencialmente
txicos o infecciosos, que se
generan en los laboratorios como
resultado de actividades como la
agitacin y centrifugacin, el uso y
manejo de pipetas, la apertura de
recipientes con presiones internas
diferentes a la atmosfrica,
utilizando condiciones diseado
para proteger al usuario, al
ambiente y la muestra con la que
se trabaja. Se las conoce tambin
como Cabinas de flujo laminar y/o
gabinetes de bioseguridad.
COCINA ELCTRICA
Equipo elctrico empleado para el

calentamiento y disolucin de
sustancias generalmente
incorporadas a los medios de
cultivo.
3. PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

Equipos Esterilizacin
Materiales
4. METODOLOGA
5. EQUIPOS, MATERIALES Y OTROS IMPLEMENTOS

Microscopio ptico binocular Lpiz de cera o cristalogrficos.
Balanza analtica Mecheros de alcohol
Incubadora Pipetas automticas
Autoclave horizontal de mesa Asa y aguja bacteriolgica de
nicrn
Autoclave horizontal Lminas cubre y portaobjetos
Centrfuga Materiales de vidrio para

ESCUELA DE MEDICINA
medidas
Erlenmeyers vidrio prex
Micro centrfuga
diferentes medidas
Refrigeradora no frost Tubos con y sin rosca diferentes
medidas
Freezer Cajas de Petri : cristal y
plsticas
Bao de agua ( Bao de Mara) Hisopos de algodn
Cmara de flujo laminar Papel de empaque (Kraft)
Cocina elctrica Algodn de rama
6. PROCEDIMIENTO
a. Se procede a mostrar mediante un recorrido los principales equipos y

materiales existentes en el laboratorio, ofreciendo una breve
explicacin sobre sus usos y funcionamiento, facilitando la
familiarizacin de los estudiantes con los equipos y los materiales
ms comunes en el trabajo microbiolgico.
b. Se organizan equipos de trabajo, donde unos preparan materiales
(tubos y placas de Petri de cristal, hisopos) que sern empleados en
prximas prcticas, y que otros esterilizarn, operando en este caso
un equipo, que ser el autoclave. Posteriormente intercambiaran
actividades.
7. RECOMENDACIONES
Continuar examinando el Manual de manejo de equipos, as como el
Manual de procedimientos, reforzando los conocimientos sobre el uso
y manejo de equipos, y las condiciones especficas de trabajo de cada
uno en particular.
8. LOGROS DE APRENDIZAJE
HABILIDADES
Seleccionar adecuadamente los materiales necesarios para la
ejecucin de procederes especficos.
Valorar la utilizacin de diferentes equipos en dependencia del
procedimiento a realizar.
DESTREZAS
Operar los equipos habituales en el trabajo del laboratorio.
Preparar y usar adecuadamente materiales comunes en el
laboratorio.
PROCEDERES

ESCUELA DE MEDICINA

Trabajar en equipo, compartiendo con respeto los espacios y
puesto de trabajo.
9. CONCLUSIONES
Se introduce a los estudiantes en la preparacin de materiales de uso
frecuente en el Laboratorio de Microbiologa, proporcionndoles
lineamientos para facilitar la operacin de equipos, asegurando su correcto
funcionamiento durante el desarrollo de prcticas estudiantiles.
10. ANEXOS
Cristalera general de trabajo
ERLENMEYER FRASCOS GOTEROS
VASOS DE KOPLIN TUBOS DE ENSAYO
CAJAS PETRI
11. BIBLIOGRAFA

ESCUELA DE MEDICINA
1) Gonzlez, J. (2004) Laboratorio de Microbiologa: Instrumentacin y

principios bsicos. La Habana, Editorial Ciencias Mdicas.
2) Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa. Octubre
2015 septiembre 2016. ESPOCH. Facultad de salud pblica. Escuela de
Medicina.
TEMA: COLORACIN DE GRAM
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Comprender la aplicabilidad clnica de las tinciones o coloraciones.
Ejecutar la tcnica para la coloracin de Gram.
Fundamentar los diferentes pasos en el procedimiento de la
coloracin.
Existen una serie de procedimientos bsicos en bacteriologa mdica, que

permiten la realizacin de exmenes directos, entre otros: las coloraciones
o tinciones. Estos procedimientos son fundamentales para el estudio de los
diferentes grupos bacterianos as como para el aislamiento y la
identificacin de bacterias de importancia mdica a partir de diferentes
tipos de muestras clnicas.
Las coloraciones tienen diferentes objetivos: demostrar los

microorganismos y algunas otras clulas en diferentes especmenes; poner
de manifiesto algunas caractersticas morfolgicas y estructuras
microbianas tales como: esporas, flagelos, grnulos, cpsulas, etc., y
diferenciar los microorganismos segn su comportamiento tintorial.
La tincin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en

Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras
clnicas, fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX. Se utiliza
tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, agrupacin y
respuesta que brindan estas ante esta tincin, separando la mayora de las
especies bacterianas en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
positivas.

ESCUELA DE MEDICINA
Se ha demostrado que la estructura de la pared bacteriana es la base de la

reaccin diferencial frente a la coloracin de Gram, e incluso de la creacin
de otras coloraciones que respondan a ese particular. Los fundamentos de
la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la
cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se
encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoicos
que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambin conocido como
murena)
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es

delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica
exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas.
Tiene una capa delgada de peptidoglucano unida a una membrana exterior
por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protenas,
fosfolpidos y lipopolisacridos.
La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a

la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las Gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a

que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes
orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener
el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto
este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por
el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente
y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin
del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros
cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal
violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.
Tambin se sealan diferencias en la permeabilidad, que sugiere que el

alcohol decolora la membrana externa de las bacterias Gramnegativas, las
cuales permiten la salida del complejo cristal violeta-Lugol.
En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por

cumplir varias funciones:
Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.

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Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los

morfotipos bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben
de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los
cultivos. Si se observan mayor nmero de formas bacterianas que las
aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados as
como la atmsfera de incubacin.
A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos

distintos: los cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados
despus de la divisin celular (Micrococos), aparecer por pares
(Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera
irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma

de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los
designa vibrios.
El primer paso de cualquier coloracin es la preparacin del frotis.
- Recomendaciones para la preparacin de frotis
Es importante utilizar lminas limpias y en perfecto estado, libre de rayones

y de manchas, deben ser previamente pasadas por la llama del mechero
para eliminar trazas de grasa y no se deben tocar con las yemas de los
dedos.
Zona para identificacin

Las lminas se deben identificar de manera inequvoca con un lpiz de cera
o con marcador de tinta indeleble para evitar confusiones, por lo general en
un extremo lateral y por el reverso donde se disponga el frotis.
Zona para el frotis

El frotis debe ser delgado, translcido y homogneo para que, durante el
proceso de tincin, reciba en toda su superficie el mismo tratamiento con
las diferentes sustancias qumicas y se debe usar para la preparacin la
tcnica asptica. }
Si el frotis se realiza a partir de un medio slido, se aade en el centro de la

lmina portaobjeto 1 gota de solucin salina o agua destilada estril. Se
toma media colonia y se hace una dilucin sobre la gota de agua con un
asa de nicrn, previamente estril, en forma rectangular, evitando tocar
cualquier extremo de la lmina.

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Si el frotis se realiza de un medio lquido se toma 1 gota del medio de

cultivo, se coloca sobre el centro de la lmina portaobjeto y se extiende en
forma rectangular con un asa de nicrn, previamente estril, evitando tocar
cualquier extremo de la lmina.
La preparacin se debe secar al aire o acelerar el proceso en incubadora,
pero retirar inmediatamente seco el mismo.
Al fijar el frotis, se debe tener cuidado de no calentar demasiado porque se
alteran las caractersticas tintoriales del material contenido en la muestra,
esto se logra pasando la lmina 3 veces por la llama del mechero.
Igualmente se debe permitir que la lmina se enfre antes de hacer la
tincin.
Alternativamente los frotis se pueden fijar utilizado metanol. Para ello, se
coloca la lmina sobre una superficie nivelada. Con cuidado se cubre el
frotis completamente con metanol absoluto y se deja secar al aire hasta
que el metanol se haya evaporado.

Tincin Pared celular
Clasificacin Gram positivos
Colorantes Gram negativos

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4.- METODOLOGA
Tincin de Gram
Prepare el frotis
Colquelo en el rea de tincin
Cbralo con cristal violeta y djelo por 1 min. Vierta el colorante y
lave el frotis con agua corriente. Escurra bien.
Cubra con iodo o lugol de Gram por 1 min. Vierta el colorante y lave
el frotis con agua corriente. Escurra bien.
Cubra con alcohol acetona por 30 segundos, si usara alcohol etlico al
90 % deje en contacto con el frotis por 1 min de Gram por 1 min.
Vierta el decolorante y lave el frotis con agua corriente. Escurra bien.
Cubra con solucin de safranina por 30 segundos. Vierta el
decolorante y lave el frotis con agua corriente. Escurra bien.
Examine las lminas portaobjetos con el lente de 100X y aceite de
inmersin, colocando una gota en el centro de la lmina.
Realice descripcin de lo observado.
Identifique las bacterias Gram positivas y Gram negativas.
La metodologa para la tincin inicia con la aplicacin de un colorante

bsico, violeta de genciana o violeta cristal; todas las bacterias se tien de
color azul en este punto del procedimiento. A continuacin se aplica una
solucin de yodo, considerado un mordiente o fijador: las clulas que
conservan el complejo de violeta de genciana-yodo mantiene un color azul
y las que no, cuando se tratan con alcohol acetona, se decoloran por
completo con la adicin de este decolorante. Como ltimo paso se aplica
otro colorante (safranina) de forma que las clulas Gram negativas
decoloradas adquieran un color contrastante de rojo o rosado; las clulas
Gram positivas adquieren un color violeta o azul.

Muestras de bacterias Gram Frasco gotero con solucin de
positivas y negativas violeta cristal.
Frasco gotero con solucin de
Lminas portaobjetos
lugol de Gram
Lpiz de cera Alcohol, acetona
Agua destilada o Sln salina Frasco gotero con solucin de
fisiolgica safranina
Recipiente con hipoclorito de
Incubadora
sodio al 5 %

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Mecheros de alcohol Portalminas

Pinzas o puente de coloracin. Aceite de inmersin
Frasco lavador Microscopios pticos
binoculares
6.- PROCEDIMIENTO
a. Observacin e identificacin de un cultivo puro.
b. Realizacin del frotis a partir de un medio slido.
c. Preparacin del fregadero para coloracin.
d. Reconocimiento y seleccin de soluciones empleadas en la tincin.
e. Ejecucin de la tcnica.
f. Observacin, identificacin e informes de resultados.
7.- RECOMENDACIONES
Cumplir la metodologa indicada
Practicar las normas de bioseguridad y seguridad general, en el
manejo de microorganismos, equipos y materiales durante el proceso.

HABILIDADES
a. Organizar los procederes a ejecutar segn marcha tcnica.
b. Fundamentar secuencialmente la metodologa a emplear.
DESTREZAS
a. Preparar los frotis segn el tipo de muestra a utilizar.
b. Realizar la coloracin de Gram
PROCEDERES
a. Demostrar responsabilidad en el manejo de muestras biolgicas, y
el empleo de los equipos y materiales de laboratorio.
b. Trabajar en equipo, siendo capaz de discutir, organizar y
jerarquizar los procedimientos a ejecutar.
9.- CONCLUSIONES
Se logr conocer la tcnica y el fundamento en la metodologa para la

coloracin de Gram. Se realiz el procedimiento. Se determin la
importancia de la aplicabilidad microbiolgica y clnica de dicha tincin.

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10.- ANEXOS
11.- BIBLIOGRAFA
1) Brooks, G.F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

Captulo 2. Estructura celular .Pgs. 36-37
2) Brooks, G. F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

Captulo 47.Principios de microbiologa mdica diagnstica. Pg. 705.
3) Koneman, E. (2010).Diagnstico microbiolgico, Editorial Mdico

Panamericana, Pgs. 110-111.
4) Manual de bioseguridad e higiene del Laboratorio de Microbiologa.

Octubre 2015 Septiembre 2016.ESPOCH. Facultad de salud pblica.
Escuela de Medicina.

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5) Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa. Octubre

2015 Septiembre 2016.ESPOCH. Facultad de salud pblica. Escuela de
Medicina.
TEMA: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Entrenarse en la preparacin de diferentes medios de cultivo utilizados
en el rea de microbiologa.
Reconocer el procedimiento para la elaboracin de diferentes
medios de cultivo.
Preparar medios de cultivo especficos empleados en prcticas
subsiguientes.
Un medio de cultivo es un sustrato slido, lquido o semislido que

contiene nutrientes que permiten el desarrollo de microorganismos. En
las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar
sobre el medio elegido las muestras en las que los microorganismos van
a crecer y multiplicarse para formar colonias. Puesto que la diversidad
metablica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de
cultivo es tambin muy grande. La mayora de los medios de cultivo se
comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. Los
constituyentes habituales de los medios de cultivo son:
Agar: Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se

obtiene de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de
degradarlo.
Azcares: Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los
ms empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
Extractos: Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o
vegetales obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de
levadura, de malta, etc.
Peptonas: Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin
qumica o enzimtica de protenas animales o vegetales.

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Fluidos corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o

suero sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de
algunos microorganismos patgenos.
Sistemas amortiguadores: Son sales que se aaden al medio para
mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.:
fosfatos bisdicos o bipotsicos.
Indicadores de pH: Son indicadores cido-base que se aaden para
detectar cambios de pH en el medio.
Agentes reductores: Sustancias que se aaden al medio para crear las
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o
anaerobios. Ej.: cistena.
Agentes selectivos: Sustancias como el cristal violeta, las sales
biliares etc. que a determinadas concentraciones en el medio actan
como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.

Medio de cultivo Nutrientes
Agar Metabolismo
Clasificacin
4. METODOLOGA
Los medios para el cultivo y crecimiento de los microorganismos se

comercializan habitualmente en forma de polvos deshidratados,
estriles, debiendo conservarse en sus frascos originales con la tapa
fuertemente ajustada.
a. Leer cuidadosamente el rtulo del envase, identificando

correctamente el medio a preparar, fijarse en la fecha de
vencimiento.
b. Tomar aproximadamente la cantidad requerida del cultivo
deshidratado de acuerdo a las instrucciones del fabricante y el
volumen total que se desee preparar, aplicando regla de tres.
c. Colocar sobre papel de aluminio, y llevar a la balanza analtica,
cumpliendo todas las instrucciones para el manejo de dicho equipo.
d. Obtenida la cantidad requerida, transferir el polvo a un recipiente de
vidrio resistente al calor, que debe estar limpio y agregar el agua
destilada (libre de inhibidores del crecimiento) medida en una
probeta, si el Erlenmeyer a utilizar no est graduado. Realizar toma y
ajuste de pH mediante cinta, usando reactivos necesarios segn el
caso.
e. Agitar vigorosamente hasta obtener una suspensin o solucin (si es
caldo) homognea. Los caldos suelen dar soluciones transparentes

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que no necesitan calentamiento ni ninguna otra manipulacin antes

de ser llevados al autoclave.
f. Calentar casi hasta ebullicin con agitacin constante y a fuego
suave (o a Bao Mara) para lograr su solubilizacin completa si la
solucin contiene agar.
g. Tapar el Erlenmeyer con un tapn grueso de algodn sobre el que se
colocar papel de aluminio sellando la boca del mismo o disponer la
suspensin o solucin en tubos teniendo en cuenta el uso que se les
dar. Los tubos que contengan estas soluciones que sern
esterilizadas en autoclave deben contener slo dos terceras partes de
su volumen total ocupado por el lquido para evitar desbordes. Si
presentan tapa a rosca, estas no deben ajustarse completamente
cuando se introducen en el autoclave para su esterilizacin, la tapa
debe quedar con media rosca.
h. Llevar al autoclave para su esterilizacin, luego de revisar
nuevamente la etiqueta del frasco para precisar estos requerimientos,
cumpliendo con el procedimiento establecido para el manejo del
mismo. Habitualmente la mayora de los medios de cultivo, salvo
excepciones que no se esterilizan, o que lo hacen a parmetros
particulares, deben esterilizarse durante 15 minutos a 121 C, a 1,5
atmsferas de presin.
i. Colocar cinta indicadora para el control fsico del proceso sobre algn
recipiente y esperar se complete el ciclo predeterminado,
manteniendo control del avance del mismo.
j. Retirar de la autoclave, cumpliendo los requisitos establecidos, una
vez concluido el ciclo, tomando las respectivas precauciones de
seguridad general, pues tanto equipos como medios de cultivo,
generan elevadas temperaturas.
k. Llevar a la cmara de flujo laminar para distribuir segn corresponda,
en condiciones de esterilidad, cuando tengan una temperatura
cercana a los 600C, en cajas de Petri estriles, siempre cerca de la
llama de un mechero, o inclinar aquellos medios slidos en tubos, de
manera que alcancen las proporciones necesarias en Slant y Bottom.
l. En el caso de los medios de Agar Sangre y Agar Chocolate, se
establecen procedimientos diferentes a partir de este paso, para el
primero cuando la base alcance una temperatura de 50 C (la
temperatura que resiste el dorso de la mano) se aade sangre de
carnero de preferencia, en una proporcin de un 5%, dejndose caer
por las paredes del Erlenmeyer, mezclando suavemente con
movimientos rotatorios. Para el Agar Chocolate cuando la base
alcance una temperatura de 80 C, se aade la sangre de carnero en
una proporcin de un 5%, dejndose caer por las paredes del
Erlenmeyer, mezclando suavemente con movimientos rotatorios,

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hasta que rompan los eritrocitos y el medio adquiere color chocolate.

Si se usa sangre humana no debe contener anticoagulantes.
m. Verter de inmediato en las cajas Petri estriles, de tal manera que
tenga una altura de 0.4 cm
n. Esperar unos segundos se solidifiquen, y se elimine el vapor que
puede generar agua de condensacin en el interior de cajas y tubos,
y proceder a tapar, rotulando los medios con las iniciales usadas en el
laboratorio para la identificacin.
o. Conservar en refrigeracin, si no van a ser usados de inmediato,
colocndolos en forma invertida y guardndolos en fundas plsticas.
p. Tomar una caja o tubo de cada tipo de medio y colocar en la
incubadora a 37C como prueba de esterilidad del medio de cultivo.
Tambin inocular con una cepa ATCC que permita evaluar el buen
funcionamiento del medio de cultivo.
q. Se prepararn los medios de cultivo que sern usados en prcticas
posteriores (AS, Agar Mac Conkey, Agar Mueller Hinton, Agar citrato,
Caldo malonato, Agar SIM, entre otros.

Tubos de cristal con y sin tapa
Balanza digital
de rosca
Autoclave Papel de aluminio
Cmara de flujo laminar Esptulas
Refrigeradora Tapones de algodn
Cocineta Medio de cultivo seleccionado
Vasos de precipitacin Agua destilada
Erlenmeyers prex de 250 Mechero Bunsen
o 500 mL
Probeta graduada Lpiz de cera
Cajas de Petri Diferentes frascos de medios de
cultivo
6. PROCEDIMIENTO
a. Seleccin e inspeccin del medio de cultivo a preparar.
b. Clculos a realizar segn necesidad del medio a utilizar.
c. Examinar la marcha tcnica a desarrollar
d. Reconocimiento y manejo de materiales y equipos a emplear.
e. Ejecucin de los procedimientos.
f. Control de calidad.

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7. RECOMENDACIONES
Cumplir las indicaciones del fabricante para la elaboracin de
cualquier medio de cultivo, siguiendo la marcha tcnica
anteriormente descrita.
Practicar las normas de seguridad general y bioseguridad, en el
manejo de equipos y materiales durante el proceso.
HABILIDADES
Organizar los procederes a ejecutar segn marcha tcnica.
Elegir el procedimiento de acuerdo al medio de cultivo a utilizar.
DESTREZAS
Preparar medios de cultivo cumpliendo con los estndares
tcnicos.
Operar equipos segn normas vigentes en el Manual de manejo
de equipos.
PROCEDERES
Trabajar en equipo, siendo capaz de jerarquizar los
procedimientos a ejecutar.
9. CONCLUSIONES
Se logr conocer diferentes medios de cultivos para sembrar y cultivar
microorganismos. Se aprendieron los pasos para elaborar un medio de
cultivo, los clculos respectivos de las cantidades necesarias para su
preparacin. Se determin la importancia que tiene el cumplimiento de
una marcha tcnica en funcin de la elaboracin de medios de cultivo.
10. ANEXOS
Clasificacin:
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:
lquidos
semislidos
slidos

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Segn su formulacin:
Qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno

de los compuestos que hay en el medio.
Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de

levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la
composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya
estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula
puede requerir.
Segn su uso:
Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos,

excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar
CLED).
Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o

grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...).
Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en

el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su
respiracin, etc. (por ejemplo, medio de Mc Conkey).
Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para

apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se
utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un
mismo medio.
Medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que

permite el crecimiento de una especie.
Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento

temporal a especmenes transportados o en transferencia; mantienen
su viabilidad y su concentracin simple.
11. BIBLIOGRAFA
1) Brooks, G.F. (2010). Microbiologa Mdica. Mxico, D F.: Mc Graw-

HillCaptulo5.Cultivo de microorganismos. Pgs. 65-73
2) Brooks, G.F. (2010) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-
Hill.Captulo 6. Metabolismo microbiano. Pgs. 75-96

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3) MERCK (Eds). 2002. Manual de Medios de Cultivo. Darmstadt, Alemania.

364pp.
4) Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa.Octubre
2015 Septiembre 2016.ESPOCH. Facultad de salud pblica.Escuela de
medicina.
TEMA: TOMA DE MUESTRAS
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Enfatizar en las diferentes metodologas utilizadas en la toma de las
diferentes muestras biolgicas,
Aprender la forma de obtener una muestra biolgica satisfactoria y
el manejo correcto de las mismas para tener resultados confiables
y seguros.
Realizar la toma de muestras de exudados nasales y farngeos.
Dentro de la prctica mdica, es muy importante obtener muestras

adecuadas que contribuyan adecuadamente con el diagnstico, por lo que
es necesario conocer los procedimientos correctos para obtener muestras
de calidad para que sean correctamente analizadas.
El diagnostico microbiolgico de laboratorio se sustenta en las muestras
obtenidas del paciente o portador que propicia la identificacin directa o
indirecta de los agentes causales de la infeccin o enfermedad infecciosa.
Se denomina MUESTRA a la porcin o volumen de lquidos corporales,
sangre, orina, heces fecales, exudados, etc., que obtenemos de un paciente
o portador, donde presuntamente se encuentran microorganismos
patgenos o los anticuerpos inducidos por sus componentes antignicos.
Para que el diagnostico de laboratorio sea fidedigno, es indispensable entre
otros requisitos que las especies patgenas se encuentren en una cuanta
relativamente proporcional, existiendo adems determinados factores y
procederes como: la demora en realizar la siembra de la muestra, los
inadecuados mtodos de conservacin, la insuficiente o excesiva cantidad
de muestra a utilizar para el cultivo, la mala calidad de su obtencin y la no
observancia de las reglas de asepsia; pueden en algunos casos, afectar la
viabilidad del germen adems de propiciar contaminaciones que en su

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conjunto afecten la calidad de los resultados al perder la muestra

representatividad.
Productos patolgicos: Productos resultantes de la actividad de algunos

microorganismos al interactuar con los tejidos, los ms comunes son el pus
y el esputo.
Indicaciones generales:
Para todas las muestras es importante realizar un montaje en fresco y un
frotis para colorearlo con Gram y otras coloraciones de la muestra directa,
siempre que este examen directo de la misma aporte al diagnstico.
Toda muestra debe llevar una etiqueta en donde se identifique:
Datos generales( nombre y apellidos) del paciente
Edad
Procedencia del paciente
Fecha y hora de la toma
Tipo de muestra
Conservacin de la muestra (las muestras pueden llegar al

laboratorio en medio de transporte o integras con o sin persevantes)

Muestra Muestra representativa
Producto patolgico
4. METODOLOGA
Toma de diferentes tipos de muestra:

Secrecin ocular:
Limpiar los bordes de los prpados con gasa estril empapada en
solucin salina o agua estril
Con el dedo pulgar de la mano izquierda invierta el prpado inferior y

a la altura del ngulo interno del ojo, aplique la punta del hisopo.
Siembre en medio de transporte o directamente en un medio

primario.

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Secrecin de odo:
Limpiar el odo externo y pabelln de la oreja con gasa estril

empapada de solucin salina o agua estril
Con un hisopo estril tomar la muestra a nivel del conducto auditivo

externo llevndolo hacia arriba y en esta forma rectificamos un tanto
la curvatura normal del conducto auditivo externo
Proceda a la siembra
Secrecin nasal:
Realice la limpieza como se indic anteriormente
Con un hisopo estril tomar la muestra del tabique, dirigindose hacia

la parte posterior y hacia arriba, hacer un ligero raspado de mucosa
Secrecin farngea:
El paciente debe permanecer sentado frente a la luz y previamente
no debe realizar aseo bucal
Indique al paciente que abra la boca sin sacar la lengua y diga ah
Con el bajalenguas deprima la lengua de modo que observe las

amgdalas y el fondo de la faringe
Introduzca el hisopo y raspe con firmeza en las amgdalas y parte

posterior del paladar blando
Si existe una Procin infectada e la garganta (se observa una zona

enrojecida o blanca o puede haber pus) deber tomar la muestra de
esta zona
Hay que tener cuidado de no contaminar la punta del hisopo con

saliva
Secrecin vaginal:
Se solicita a la paciente que no se haga lavado previo

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Sin va a usar espejo vaginal, introduzca suavemente en el canal

vaginal y visualice el fondo de saco vaginal y cuello uterino
Introduzca un hisopo y tome la muestra de fondo de saco lateral o

posterior
Si toma la muestra sin espculo, con la mano izquierda, abra los

labios mayores y visualice la entrada del canal vaginal
Introduzca el hisopo con la mano derecha hasta sentir el fondo de

saco vaginal y haga un delicado raspado a ese nivel
Realice con la muestra montaje en fresco, coloraciones y cultivo
Orina:
Deber recolectar la primera orina de la maana
El paciente deber realizar un aseo del rea genital con agua y jabn
y no deber secarse
Elimine el primer chorro de orina en el sanitario
Recoja la parte intermedia de la orina en un frasco estril
Llevar la muestra lo ms pronto posible al laboratorio
Secrecin uretral:
a. Si el paciente es sintomtico, es decir tiene secrecin:
Pedir al paciente que se descubra
Con un hisopo estril se toma la muestra a nivel de meato

urinario
b. Si el pacientes es asintomtico:
Se deber examinar la orina, realizando la prueba de los 3

vasos

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Esputo:
Indique al paciente que se haga un aseo bucal previo a la obtencin
de la muestra
Debe recogerse el primer esputo de la maana
Si es posible el paciente deber estar de pie
Debe hacer una inspiracin profunda para llenar de aire los pulmones
Con una sola aspiracin fuerte, vaciar los pulmones tosiendo al

mismo tiempo tan fuerte y profundamente como pueda
Escupir en un recipiente estril el material expectorado
La muestra debe ser mucosa, de lo contrario de desechar, pues la

saliva no sirve para el examen
Nota: es preferible que el paciente est en ayunas para evitar el vmito

que pueda venir al provocar la tos.
Heces:
Se puede utilizar dos tipos de muestra:
Hisopado rectal
Introduzca el hisopo por el orificio anal, unos 5 cm
Haga un raspado en esa regin
Siembre y haga placas de frotis para coloracin y montaje en

fresco
Muestra total
Se solicita al paciente una muestra de heces fresca
Deber ser la primera muestra de la maana
Traer la muestra en una caja plstica limpia

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L.C.R.:
Se obtendr antes de instaurar cualquier teraputica antibitica.

Quien realice la toma de la muestra deber lavarse las manos previas
al procedimiento, colocarse sobre tnica y guantes estriles.
Se localiza la zona elegida para la puncin lumbar mediante
palpacin de los espacios intervertebrales una vez colocado el
paciente en la posicin adecuada.
Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de uso 10 cm de dimetro
en el rea elegida, la aplicacin del desinfectante se hace de forma
concntrica del centro a la periferia.
Se coloca campo estril
Se repite la operacin con Yodo povidona que se deja secar durante
un minuto.
Realizar la puncin entre los espacios intervertebrales L3-L4, L4-L5 o
L5-S1, siguiendo las normas de la ms estricta asepsia.
Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir
libremente el lquido Cefalorraqudeo que se recoger en tres tubos,
sin conservantes, con tapn de rosca.
El primer tubo es el que debe enviarse para el estudio bioqumico, el
segundo para el estudio microbiolgico y el tercero para investigacin
de clulas (este suele ser el ms transparente aunque la puncin
haya sido traumtica). No obstante, el tubo ms turbio se enviar a
Microbiologa
Sangre:
Visualice la vena de la cual extraer la sangre
Desinfecte el rea de puncin por 3 ocasiones con 3 torundas

distintas, una superficie de 8 cm de dimetro.
Con una jeringuilla estril canalice la vena y proceda a la extraccin
Si tiene a su disposicin el medio de cultivo, inocule este con 5 10

ml de sangre en adulto o 1 a 2 ml en pacientes peditricos (debe
tener un mechero de alcohol cerca del medio antes de la inoculacin)

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Se puede obtener la muestra en tubo vacutainer tapa lila y luego

inocular el medio de cultivo
lceras genitales:
Limpiar la lcera y la regin cercana con agua o solucin salina estril
Puede tomar la muestra con asa bacteriolgica o hisopo, es mejor con

asa
Levante suavemente el borde de la lcera
Seque el primer sangrado que aparezca con una gasa estril y tome
el exudado para cultivo y examen directos
Otras lceras:
Se procede igual que el punto anterior
Secrecin o contenido ganglionar:

Identifique el ganglio infartado
Esterilice el rea
Utilizando una jeringuilla estril, puncione el rea hasta llegar al

ganglio y absorba el contenido
Heridas:
Se procede como en las lceras
Abscesos:
Esterilice el rea del absceso
Con una jeringuilla estril absorba el contenido
Otras muestras:
Biopsias de tejidos y vsceras en las cuales solicitan investigacin de
microorganismos. Si solicitan cultivo debern llegar al laboratorio con
la brevedad posible sin ningn fijador, en agua estril. Si se solicita
otro tipo de estudio histopatolgico deber llegar en el fijador
adecuado.
Procedimientos para la siembra o inoculacin de medios de cultivo:

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1. Permitir que los medios de cultivo adquieran la temperatura

ambiente. Medios fros pueden inhibir el crecimiento de algunos tipos
de bacterias.
2. Tomar una muestra de secrecin farngea o nasal de su compaero

con un hisopo estril
3. Junto al mechero encendido, abra la caja e inocule la muestra en un

tercio superior de la caja Petri con el medio de cultivo Agar sangre,
con el hisopo que tomo la muestra.
4. Con el asa esterilizada, estre sobre el inculo de extremo a extremo

hasta 1/3 de la caja.
5. Esterilice y enfre el asa, , a partir de la estria anterior, estre el resto

del medio de cultivo, tenga cuidado y topando la ultima estra del
cuadrante anterior
6. Repetir el paso anterior usando la parte que queda del agar y

realizando estras ms separadas, as se aislarn mejor las colonias.
7. Realice cortes en el agar, as se observa mejor la hemlisis.
Recomendaciones:
a. Al estriar utilice toda la superficie del medio de cultivo, no
realice nicamente lneas.
b. No es necesario esterilizar el asa en cada estra si se trabaja

con muestras que contienen pocas bacterias o con cultivos
puros.
c. Las estras deben estar juntas solo en el inoculo, en el resto se

trata de separar las colonias.

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d. Nunca estre sobre una previa
8. Incubar las cajas Petri invertidas a 37 C, durante 24 horas a 48 horas
9. Tomar las cajas de la incubadora y observar el crecimiento

bacteriano.

Placa de Petri con medio de Mechero de gas
Agar Sangre
Recipiente con Hipoclorito de
Bajalenguas estril
Sodio al 5 %
Lpiz de cera Asa bacteriolgica de nicrn.
Hisopo estril. Incubadora
6. PROCEDIMIENTO
a. Seleccin e inspeccin del medio de cultivo a utilizar atemperado,
garantizando adems esterilidad.
b. Rectificar datos generales recogidos en la solicitud de estudio con el
paciente.
c. Explicar al paciente el procedimiento a realizar y buscar su
consentimiento.
d. Examinar la regin anatmica afectada, buscando obtener un
producto patolgico o una muestra representativa del proceso
infeccioso.
e. Reconocimiento y manejo de materiales a emplear.
f. Ejecucin de los procedimientos ya descritos para realizar toma de
exudados nasales y farngeos, que se realizaran entre los estudiantes.
g. Emplear procedimientos revisados para la siembra o inoculacin de
medios de cultivo.
h. Incubar a 37C, durante 24 a 48 horas.

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i. Retirar y examinar.
7. RECOMENDACIONES
Cumplir las indicaciones descritas para la toma de muestras
correspondientes.
Cumplir las normas de bioseguridad.
HABILIDADES
Instruir al paciente en los requisitos previos para alguna toma de
muestras para estudios microbiolgicos.
Organizar los procederes a ejecutar segn marcha tcnica,
cumpliendo con las medidas de bioseguridad.
DESTREZAS
Realizar tomas de muestras para estudios microbiolgicos.
Emplear procedimientos estudiados para la siembra o inoculacin
de medios de cultivo.
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en la interaccin con el paciente.
Trabajar en equipo, siendo capaz de jerarquizar los procedimientos
a ejecutar.
9. CONCLUSIONES
Aprendern a examinar las regiones anatmicas afectadas, seleccionado
productos patolgicos o muestras representativas de un proceso infeccioso
o un portador donde se aslen los agentes patgenos o los anticuerpos
inducidos por sus componentes antignicos.
10. ANEXOS

ESCUELA DE MEDICINA
11. BIBLIOGRAFA
1) Brooks, G.F. (2010). Microbiologa Mdica. Mxico, D F.: Mc Graw-

HillCorrelacin entre la microbiologa mdica diagnstica y la clnica.
Captulo 47.Principios de microbiologa mdica diagnstica.
Octubre 2015 septiembre 2016.ESPOCH. Facultad de salud pblica.

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TEMA: DETERMINACIN DE LA SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Determinar la sensibilidad de las bacterias frente a un antibitico
determinado
Aplicar el mtodo de Kirby Bauer para la realizacin de un
antibiograma por difusin.
Analizar y realizar lectura e interpretacin de resultados.

Hacia finales de los aos 50 del siglo XX, las pautas para el test de
susceptibilidad eran un verdadero caos, porque no exista un
procedimiento estandarizado aceptable. En 1977, los participantes en
una reunin organizada por la OMS en Ginebra, expresaron su alarma
por la creciente difusin de la resistencia a los antibiticos en el
mundo, causada por el uso cada vez mayor, y a menudo
indiscriminado, de estos productos. En los ltimos aos las bacterias
resistentes han causado brotes graves de infecciones que produjeron
muchas muertes. Por ello es necesario mantener una vigilancia
estrecha de la resistencia de las bacterias a los antibiticos, utilizando
pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos
comparables. La informacin microbiolgica y epidemiolgica
disponible ayudar a los clnicos a seleccionar el agente
antimicrobiano ms apropiado para tratar cada infeccin. Para que la
prediccin sea vlida, la prueba de sensibilidad deber efectuarse
mediante un mtodo exacto y reproducible, cuyos resultados puedan
aplicarse directamente a la situacin clnica. El criterio definitivo de
fiabilidad de cualquier mtodo de prueba de la sensibilidad es su
correlacin con la respuesta del paciente al tratamiento
antimicrobiano.
Estas van dirigidas a:
1. Guiar al clnico en la seleccin de un agente antimicrobiano de la
mxima eficacia para ser utilizado ante un determinado paciente.
2. Servir de instrumento epidemiolgico al detectar la resistencia de
los microorganismos dentro del hospital y en el seno de la comunidad.

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Los mtodos para determinar sensibilidad y resistencia en las

bacterias pueden ser:
1. Cuantitativos: determinan la menor concentracin de un

antibitico que inhibe visiblemente el crecimiento de un
microorganismo: concentracin inhibitoria mnima (CIM).
2. Cualitativos: son aquellos que, empleando la difusin de un
antibitico concentrado en un disco de papel, permiten categorizar a
los microorganismos en susceptibles, intermedios o resistentes
cuando se enfrentan a un agente antimicrobiano especfico
(difusin).
Los mtodos ms comnmente utilizados en los laboratorios de

microbiologa son:
1. Difusin en discos.
2. Difusin por revestimiento de agar.
3. Dilucin en macrocaldo.
4. Dilucin en microcaldo.
MTODOS DE DIFUSIN EN DISCOS PARA PRUEBAS.

Difusin en agar por diseminacin superficial (Bauer-Kirby)
Principio. El disco impregnado de antibitico hace contacto con la
superficie hmeda del agar. El agua es absorbida por el papel de
filtro y el antibitico difunde hacia el medio circundante. La velocidad
de difusin del antibitico fuera del disco es mayor que la de su
difusin hacia el medio, de modo que la concentracin del antibitico
inmediatamente adyacente al disco puede exceder la del mismo
disco. Sin embargo, a medida que aumenta la distancia al disco,
ocurre una reduccin logartmica de la concentracin del antibitico
hasta que se alcanza un punto en el que el desarrollo bacteriano de la
superficie del agar ya no es inhibido. El resultado es una zona de
inhibicin del desarrollo con bordes bien delineados (halo de
inhibicin)

Resistencia Disco de
Suceptibilidad antibioGrama.
AntibioGrama
4. METODOLOGA
A partir del aislamiento en cultivo puro, obteniendo colonias aisladas
en Agar Mueller Hinton, tanto de microorganismos Gram positivos
como negativos, se proceder a tocar con un asa de nicrn,
previamente estril, 5 colonias del germen en estudio. Las mismas se

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inocularn en un tubo que contenga 3 ml de solucin salina fisiolgica

al 0.9 %. Se flameara el asa de nicrn directamente a la llama del
mechero. Posteriormente se proceder a ajustar con el patrn 0.5 de
la escala de Mac Farland, obteniendo un crecimiento en fase
exponencial del microorganismo en estudio, equivalente a 10 5 UFC.
Si el grado de turbidez queda por debajo de lo requerido se proceder
a inocular ms cantidad de cultivo; si por el contrario queda ms
turbio, ser necesario aadir ms solucin salina fisiolgica hasta
obtener el grado de turbidez deseado
Posteriormente se introduce un hisopo estril que se embeber en la
sln salina y se retirara el hisopo escurriendo el mismo, rotndolo
contra las paredes del tubo, y se proceder con el hisopo a estriar,
inoculando el microorganismo en 3 direcciones en una placa estril de
Agar Mueller Hinton Se desechara el hisopo en el recipiente con
hipoclorito de sodio al 5 %.Previamente se habrn temperado los
discos de antibioGrama seleccionados para el germen en estudio, y
con ayuda de una pinza estril, manteniendo una distancia entre
disco y disco de 25 mm y de 15 mm con respecto al borde la placa, se
colocaran los discos de antibiticos, segn el dimetro de la placa de
Petri, dejndose reposar durante unos minutos, antes de incubar en
posicin invertida, a 37 o C, durante 24 horas.
Se dispondr de antibiogramas ya realizados de los microorganismos
en estudio, realizndose por los estudiantes la lectura e
interpretacin de los resultados, para lo cual realizarn primero la
observacin de las placas, detectando presencia o no de halos de
inhibicin del crecimiento, realizando la medida de los mismos,
comparando con la tabla de las NNCSL correspondiente en uso.
Se expresaran para cada antibitico los resultados en cualquiera de
las 3 categoras correspondientes: sensible, intermedio y resistente.
5. EQUIPOS, MATERIALES y OTROS IMPLEMENTOS
Cepas de microorganismos Gram Recipiente con hipoclorito de

positivos y Gram negativos sodio
Placas de Agar Mueller Hinton Hisopos estriles
Tubos con 3 ml de Sln salina al Discos de antibiticos para Gram
0.9 % positivos y negativos
Asas de nicrn Pinzas
Mecheros de alcohol Incubadora
Patrn 0,5 de la Escala de >Mac
Instrumento de medicin en mm
Farland
6. PROCEDIMIENTO

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a. Organice el puesto de trabajo

b. Prepare materiales necesarios para la ejecucin del antibioGrama por
difusin por el mtodo de Kirby Bauer.
c. Comience la ejecucin desarrollando secuencialmente los pasos
descritos con anterioridad.
d. Trabaje empleando los procedimientos correspondientes de
bioseguridad relacionados con el manejo de muestras biolgicas.
e. Realice la lectura e interpretacin de los resultados
f. Termine el procedimiento empleando los lineamientos
correspondientes de bioseguridad relacionados con el destino final de
materiales en contacto con muestras biolgicas.
g. Haga informe final.
7. RECOMENDACIONES
Cumplir con la marcha tcnica indicada

Cumplir con los lineamientos del Manual de Bioseguridad e Higiene
del Laboratorio.

HABILIDADES
Organizar los procederes a ejecutar segn marcha tcnica,
cumpliendo con las medidas de bioseguridad.
Aplicar el mtodo de Kirby Bauer para la realizacin de un
antibiograma por difusin.
Analizar y realizar lectura e interpretacin de resultados.
DESTREZAS
Emplear procedimientos estudiados para la siembra o inoculacin
de medios de cultivo.
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en la interaccin con el paciente.
Trabajar en equipo, siendo capaz de jerarquizar los procedimientos
a ejecutar.
9.- CONCLUSIONES

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Se realiza la determinacin de la suceptibilidad antimicrobiana de

grmenes Gram positivos y negativos, mediante el mtodo de
antibioGrama por difusin de Kirby Bauer, enfrentando los mismos a
antibiticos seleccionados, realizando la lectura e interpretacin,
expresados en las 3 categoras reconocidas por dicho mtodo:
sensible, intermedio y resistente.
10.- ANEXOS
Discos de antibiticos usados para grmenes Gram positivos y Gram
negativos.
GRAM POSITIVOS GRAM NEGATIVOS
Oxacilina (ox) Ampicilina (am)
Eritromicina (E) Cefuroxima (cxm)
Clindamicina (cc) Ampicilina + sulbactam
(sam)
Cefoxitin (fox) Gentamicina (gm)
Sulfas (sxt) Norfloxacina (nor)
Ciprofloxacina (cip) Nitrofurantona (fm)
Vancomicina (va) Sulfas (sxt)
RESULTADO FINAL MEDICIN DE HALOS
11.- BIBLIOGRAFA
1) Brooks, G.F. (2010). Microbiologa Mdica. Mxico, D F.: Mc Graw-Hill.

Captulo 28. Quimioterapia antimicrobiana. pg. 339

ESCUELA DE MEDICINA

Captulo 47. Principios de microbiologa mdica diagnstica. Medios
auxiliares de laboratorio en la seleccin del tratamiento antimicrobiano.
pg. 715
3) Kenneth, Ryan. (2011). Microbiologa Mdica. Mxico, D F.: Mc Graw-Hill.
Captulo 23. Frmacos antibacterianos y resistencia.pgs.310 -329.

ESCUELA DE MEDICINA
TEMA: DIAGNSTICO DE STAPHYLOCOCCUS
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar Staphylococcus mediante la aplicacin de pruebas
enzimticas y bioqumicas.
Diferenciar especies de estafilococos mediante la aplicacin de
pruebas enzimticas y bioqumicas.
Fundamentar las diferentes pruebas fisiolgicas que permitan la
identificacin y diferenciacin de los estafilococos.
Los estafilococos son clulas esfricas Grampositivas con un dimetro de

0,5 a 1,5 m, que se agrupan irregularmente en forma de racimos de uva.
Ogston es quien introduce el nombre de Staphylococcus (Staphyl, que
significa racimos de uva). Rosenbach, sobre una base taxonmica, es quien
describe por primera vez este gnero.
El gnero incluye alrededor de 30 especies y siete subespecies; de ellas, las
de mayor importancia clnica son: S. aureus, S. epidermidis y S. saprofiticus.
Los estafilococos son no mviles, no esporulados, usualmente catalasa
positiva y no capsulados o tienen limitada la formacin de la cpsula. La
mayora de las especies son anaerobios facultativos.
El S. aureus puede producir enfermedades como abscesos, fornculos,
infecciones pigenas diversas, sepsis mortal, sndrome de choque txico,
meningitis, neumona, pioartrosis, osteomielitis y envenenamiento
alimentario por la produccin de enterotoxina tanto por su capacidad para
multiplicarse y extenderse en los tejidos, como por la produccin de
muchas sustancias extracelulares; algunas de estas sustancias son
enzimas, otras se denominan toxinas, aunque pueden funcionar como las
anteriores. Muchas de las toxinas se encuentran bajo el control gentico de
los plsmidos, otras estn incluidas bajo el control cromosmico o
extracromosmico.
Por su parte, los estafilococos coagulasa negativa desempean un
importante papel como causa de sepsis nosocomial en salas de oncologa,
neonatologa, ciruga y terapia, reportndose el S. epidermidis en el 74 al
92 % de las bacteriemias intrahospitalarias. Tambin es causa de
infecciones cardacas despus de una ciruga cardiovascular.
Staphylococcus saprophyticus es un agente primario de las peritonitis en

ESCUELA DE MEDICINA
pacientes con dilisis peritoneal ambulatoria y un agente comn de

infecciones urinarias.
Entre toxinas y enzimas citamos algunas de las ms importantes no solo

desde el punto de vista patolgico, sino diagnostico tambin, pues sobre
estas en particular se sustentan los elementos ms prcticos para la
identificacin de este gnero y especies patgenas:
Catalasa. Los estafilococos producen catalasa, la cual es una enzima que

descompone el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua.
Qumicamente la catalasa es una hemoprotena de estructura similar a la
hemoglobina, excepto que los cuatro tomos de hierro estn en estado
oxidativo (Fe+++) en lugar de reducido (Fe++).
La prueba de la catalasa diferencia a los estafilococos que son catalasa
positiva de los estreptococos que son catalasa negativa.
Coagulasa. El S. aureus produce coagulasa, que es una enzima proteoltica

de composicin qumica desconocida con actividad semejante a la
protrombina, capaz de transformar el fibringeno en fibrina, lo cual provoca
la formacin de un cogulo visible en un sistema analtico adecuado, y
coagula el plasma oxalatado o citratado en presencia de un factor
contenido en muchos sueros.
La accin de la coagulasa supera la cascada normal de la coagulacin. La
coagulasa puede depositar fibrina sobre la superficie de los estafilococos,
con lo cual es capaz de interferir en su ingestin por clulas fagocticas y su
destruccin dentro de dichas clulas. Se considera que la produccin de
coagulasa es sinnimo de potencial invasor patgeno.
Existe una variedad de tcnicas que pueden ser utilizadas para la

identificacin y diferenciacin de cepas; entre las que citamos:
1. La morfologa colonial.
2. Las pruebas fisiolgicas o reacciones bioqumicas: estas incluyen no
slo la actividad enzimtica (catalasa, coagulasa, fosfatasa alcalina;
ureasa; -glucuronidasa; arginina dihidrolasa; esterasa; nitrato
reductasa, pirrolidonilarilamidasa; lipasa; proteasa; hemolisina), sino
tambin la determinacin de la produccin de cido a partir de varios
carbohidratos (L-lactosa, maltosa, D-turanosa, D-manitol, D-trehalosa,
D-melozitosa, D-manosa, sacarosa, D-ribosa, D-xilosa, L-arabinosa).
Dada la importancia de las pruebas de catalasa y coagulasa en el
diagnstico de los estafilococos, haremos nfasis en ellas.

Enzimas Coagulasa
Catalasa Plasma

ESCUELA DE MEDICINA
4. METODOLOGA
Prueba de la catalasa.
Se lleva a cabo en portaobjeto o en tubos.
Prueba en portaobjeto: con una aguja de puncin o un palillo aplicador

con la punta
Aguzada, se transfieren clulas del centro de una colonia a la superficie
de un portaobjeto.
Se aaden una o dos gotas de perxido de hidrgeno al 3 %: si la prueba
es positiva, aparecen gas, burbujas o efervescencia.
Se utiliza para diferenciar estafilococos (catalasa positiva) de

estreptococos (catalasa negativa).
Prueba de la coagulasa.
La coagulasa est presente en dos formas: libre y fija, cada una de las
cuales posee diferentes propiedades que requieren del uso de tcnicas
separadas.
Coagulasa fija (prueba en portaobjeto): la coagulasa fija, conocida como

factor de aglutinacin, est unida a la pared celular bacteriana y no se
halla presente en los filtros de cultivos. Los hilos de fibrina formados
entre las clulas bacterianas suspendidas en el plasma (fibringeno)
provocan aglutinacin, indicada por la presencia de agregado visible en
el portaobjeto.
La actividad de la coagulasa fija no es inhibida por los anticuerpos
formados por la coagulasa libre.
Coagulasa libre (prueba en tubos): la coagulasa libre es una sustancia

semejante a la
trombina, que se encuentra presente en los filtros de cultivos; cuando
una suspensin de bacterias se mezcla en partes iguales con una
pequea cantidad de plasma en un tubo de ensayo, se forma un cogulo
visible como consecuencia de la utilizacin de los factores de
coagulacin del plasma, de manera similar a cuando se aade trombina.
Mtodo: se mezcla plasma de conejo (o humano) citrato diluido (1:5),

con un volumen igual de caldo de cultivo de la cepa a estudiar y se
incuba a 37 C.
Se incluye como testigo un tubo con plasma, mezclado con caldo estril;
si se forma un cogulo en un plazo de 1 a 4 horas, la prueba ser
positiva.

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Placas de agar sangre con
crecimiento de cepas de
Staphylococcus identificadas Tubos con plasma humano
como productoras de
coagulasa positiva y negativa
Lmina portaobjetos Asas de nicrn
Lpiz de cera Mecheros de alcohol
Aplicador Recipiente con hipoclorito de
sodio
Perxido de hidrgeno al 3% Incubadora
6. PROCEDIMIENTO
a. Organice el puesto de trabajo.
b. Prepare materiales necesarios para la ejecucin de las pruebas de
identificacin
e. Termine el procedimiento empleando los lineamientos
7. RECOMENDACIONES
del Laboratorio.
HABILIDADES
Distinguir caractersticas macroscpicas relacionadas con el aspecto
colonial de estafilococos.
Reconocer los elementos antignicos responsables de la patogenicidad
de estafilococos.
DESTREZAS
Utilizar adecuadamente los materiales necesarios en el desarrollo de
las tcnicas diagnsticas.
Emplear apropiadamente los reactivos usados en el desarrollo de las
tcnicas diagnsticas.
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en el empleo de los equipos y materiales de

ESCUELA DE MEDICINA
laboratorio, as como en el manejo de muestras biolgicas.
9. CONCLUSIONES
Se ejecutan procedimientos diagnsticos que establecen la
patogenicidad de los Staphylococcus, sobre la base de la determinacin
de pruebas fisiolgicas o reacciones bioqumicas.
10. BIBLIOGRAFA

Captulo 13. Estafilococos pgs. 185-191
Captulo 24. Estafilococos pgs. 331-341.
TEMA: DISCUSIN DE CASOS CLINICOS. Algoritmo para
diagnstico de Enfermedades infecciosas.
Dra. Berlis Gmez Leyva
Tcnica docente: Ingeniera Natalia Moreno
1 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer casos clnicos en los que se implican enfermedades
infecciosas, llegando al diagnstico etiolgico.
Reconocer el agente etiolgico
Realizar los pasos a seguir para el diagnstico de laboratorio
microbiolgico.
2 CONTENIDOS TERICOS MNIMOS
El reconocimiento de los agentes etiolgicos causantes de las

Enfermedades infecciosas es de gran importancia, debido a su
elevada incidencia en la poblacin.
El algoritmo para llegar al diagnstico de laboratorio es vital para
lograr un diagnstico oportuno y rpido y por tanto poder tratar al
paciente de forma inmediata.

ESCUELA DE MEDICINA
Con la discusin de los diferentes casos clnicos el estudiante podr

reconocer primeramente el agente etiolgico causal de la
enfermedad, describir sus caractersticas morfolgicas y tintoriales ya
estudiadas en clases y las pruebas bioqumicas y enzimticas que se
deben realizar para su diagnstico de laboratorio.
3 PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

Enfermedades infecciosas Pruebas bioqumicas
Diagnstico etiolgico Pruebas enzimticas

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4 METODOLOGA
Presentacin y Lectura del caso clnico
Reconocimiento del agente etiolgico

Describir morfologa y caractersticas tintoriales del agente causal.
Describir los procedimientos que se realizan para su identificacin en
el laboratorio.
Describir las tcnicas, pruebas bioqumicas y enzimticas para su
reconocimiento.
5 EQUIPOS, MATERIALES Y OTROS IMPLEMENTOS

pizarra Artculos actualizados.
Libro de texto
6 PROCEDIMIENTO
a Lectura e interpretacin del caso clnico
b Reconocer agente etiolgico
c Describir caractersticas morfolgicas y tintoriales.
d Describir las pruebas bioqumicas y enzimticas para su diagnstico.
7 RECOMENDACIONES
Reconocer cuales son las medidas de bioseguridad para el trabajo en
el aboratorio.
8 LOGROS DE APRENDIZAJE
HABILIDADES
a Reconocer los agentes etiolgicos a partir de un caso clnico
b Describir las caractersticas morfolgicas y tintoriales del agente
c Conocer las pruebas bioqumicas y enzimticas que se realizan
para su diagnstico

ESCUELA DE MEDICINA
9 CONCLUSIONES
Se logr reconocer el agente causal y los procedimientos para su

diagnstico de laboratorio microbiolgico.

ESCUELA DE MEDICINA
ANEXOS
RECONOCIMIENTO DE ESTAFILOCOCOS Y OTRAS BACTERIAS
ESTUDIADAS EN CLASES.
ALGUNAS PRUEBAS DIAGNSTICAS DE IMPORTANCIA.
ESTAFILOCOCOS
Los estafilococos son cocos gran positivos que se agrupan en forma de
racimos, tienen alrededor de 1 m de dimetro; son anaerobios
facultativos, inmviles y no espatulados.
Staphylococcus ureas es la bacteria ms importante, es un
microorganismo coagulase positivo, fermenta el manitol, desarrolla colonias
color oro y es catalasa positivo. Es un miembro constante de la flora
microbiana, en el 10 al 20% de la poblacin. Estas bacterias se acumulan
de preferencia en las cavidades nasales (35%), perineo e ingles (20%),
axilas (5 a 10%), ombligo y manos (13%).
El S. ureas es un patgeno agresivo, produce muchos componentes
celulares y productos extracelulares que contribuyen a su patogenicidad.
Los componentes celulares que forman parte de la estructura bacteriana
consisten en:
Peptidoglicanos
Protena A
Cpsula
Los componentes extracelulares (factores de virulencia no estructurales) se
refieren a enzimas y toxinas producidas por la bacteria.
Enzimas
Catalasa: evita la accin de los radicales txicos al degradar el
perxido de hidrgeno producido durante la fagocitosis.
Coagulasa: convierte el fibringeno en fibrina al unirse a la
protrombina, favoreciendo la formacin de cogulos, durante la
infeccin, al interior de este cogulo quedan atrapados clulas
fagocticas, detritus celulares y bacterias, originando abscesos.
Otras: hialuronidasa, lipasa y ADNasa.
Toxinas
Leucocidinas: produce degranulacin y lisis de los granulocitos.
Exfoliatina: toxina causante de la descamacin de la piel y formacin de
ampollas intraepidrmicas en la piel.

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Toxina 1 del sndrome de shock txico (TSST-1).

Enterotoxinas: Las enterotoxinas B y C responsable del sndrome del shock
txico en cerca del 50% de los casos no menstruales.
Enfermedades cutneas causadas por estreptococos y

estafilococos
Estafilococos
Estreptococos
Imptigo
Ectima Imptigo
Foliculitis Ectima
Furnculo, furunculosis Erisipela
ntrax Celulitis
Foliculitis de la barba Dactilitis ampollosa distal
Periporitis Enfermedad perianal
Hidrosadenitis Fascitis necrotisante
Sndrome de la piel escaldada Escarlatina
Sndrome del shock txico
Escarlatina estafiloccico
La foliculitis, la forunculosis y la piodermitis estafiloccica (ntrax) se

producen por abscesos localizados dentro de los folculos pilosos o
alrededor de ellos. Estas infecciones se diferencian entre s sobre la base
del tamao y el grado de compromiso de los tejidos subcutneos.
La mayora de microorganismos producen lesiones por la obstruccin del
folculo piloso con aceites de la piel (secrecin sebcea) o por traumatismos
menores. El Stafhylococcus ureas es el agente etiolgico ms comn,
aunque algunas enterobacterias tambin pueden causar foliculitis, pero con
una frecuencia mucho menor.
Infecciones en las capas ms profundas de la epidermis y la dermis

La mayora se producen como resultado de la inoculacin de
microorganismos por soluciones de continuidad. Las ulceras cutneas por
lo comn implican perdida de tejido epidrmico y parte de tejido drmico.
Muchas bacterias y hongos pueden causar lesiones cutneas ulcerosas o
nodulares posterior a inoculacin directa por ejemplo Corynebacterium

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diphteriae, Bacillus antharacis, especies de Nocardia, Micobacterium

marinum y Sporothrix schenckii.
Celulitis y erisipela se caracteriza por dolor, tumefaccin, eritema y calor

localizados en un rea cutnea, y se debe ms frecuentemente a
Staphylococcus ureas o Streptococcus pyogenes. Otras bacterias que
pueden producirla son los estreptococos del grupo B (en ancianos,
diabticos o pacientes con enfermedad vascular perifrica), Haemophilus
influenzae (celulitis periorbitaria en nios), Pseudomonas aeruginosa (tras
heridas punzantes), Erysipelothrix rhusiopatiae (en carniceros y
manipuladores de pescado).
Infecciones de los tejidos subcutaneos

Las infecciones de los tejidos subcutneos pueden manifestarse como
abscesos, ulceras y fornculos. El Staphylococcus ureas es el agente
etiolgico ms comn de los abscesos subcutneos en individuos sanos,
aunque los microorganismos que se encuentren depende mucho del sitio de
infeccin, otros abscesos son polimicrobianos.
En muchos casos las infecciones de la epidermis y de la dermis se
extienden y pueden convertirse en infecciones subcutneas e incluso
alcanzar fascias o msculos.
Miositis (compromiso del musculo) es producida por distintos agentes

infecciosos.
Algunas infecciones vricas (gripe, dengue, coxackievirus B) y parasitarias
(triquinosis, cisticercosis, toxoplasmosis) pueden producir miositis. La
mionecrosis forma parte del cuadro denominado gangrena gaseosa,
causado por Clostridium perfringens y otras especies de Clostridium, que
ocurre generalmente como consecuencia de traumatismos penetrantes
severos.
Infecciones de las heridas
Pueden producirse como complicaciones de una ciruga, traumatismos,
mordeduras o enfermedades que interrumpan la superficie de la mucosa o
la piel.
Mordeduras

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En las mordeduras humanas se observan principalmente, Streptococcus

anginosis, estreptococos alfa hemolticos, S. ureas, Eikenella corrodens y
estreptocos del grupo A (Streptococcus pyogenes), tambin intervienen
anaerobios como Pervotella, Fusobacterium, Veillonella y
peptoestreptococcus.
INFECCIONES FNGICAS
Los hongos son microorganismo eucariotes de mayor tamao y complejidad
que las bacterias. Segn su morfologa los hongos se pueden dividir en dos
grupos: mohos (hongos filamentosos) y levaduras.
MICOSIS SUPERFICIALES DERMATOFITOS

Infectan estructuras queratinizadas
Se dividen en funcin de la estructura que parasitan en:
Tricophyton: pueden afectar pelo, piel y uas
Epidermohyton: piel
Microsporum: piel y pelo
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
El diagnstico laboratorial inicial debe basarse en parmetros que
identifique o confirmen un proceso infeccioso o /y inflamatorio para lo
cual podramos utilizar una biometra hemtica completa, VSG,
protena C reactiva, procalcitonina y reactantes de fase aguda de la
inflamacin y los siguientes procedimientos microbiolgicos para
identificar al posible agente causal:

Tincin de Gram: Identifican a los estafilococos formando pares,
ttradas y por ultimo racimos irregulares, clulas esfricas
grampositivas, presencia o ausencia de inflamacin
Cultivo: Sirve para la identificacin de la bacteria y su perfil de
susceptibilidad a los antibacterianos. Para el crecimiento de
estafilococo se utilizan los siguientes medios de cultivo.
AGAR SANGRE
El S. Aureus crece formando colonias redondas, lisas, convexas,
traslucidas de color amarillo intenso en ocasiones blancas, cremosas

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de ms de 2 mm de dimetro y de bordes lisos, puede producir beta

hemlisis por consumo completo de eritrocitos contenidos en el
medio. En este medio el S. Epidermidis presenta colonias de color
blanco grisceo, por lo que anteriormente se lo llam estafilococo
albus. Estas bacterias crecen en 24 horas aproximadamente a
temperatura de 37C.
AGAR TRIPTICASA DE SOYA (5% sangre de bovino) Este es un
medio especial de ESTAFILOCOCO N 110, crecen colonias amarillas
de S. Aureus y blancas de S. Epidermidis
AGAR MANITOL-SALINO (7.5%)
Este es un medio utilizado para identificar S. Aureus, el cual produce

fermentacin del manitol y cambio del pH por tanto el rojo fenol cambia de
color rosado del medio normal a amarillo, mostrando tambin colonias
redondas por un halo de color amarillo que identifican al S. aureus.

ESCUELA DE MEDICINA
10 BIBLIOGRAFA
1 Brooks, G.F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

Captulo 2. Estructura celular .Pgs. 36-37
2 Brooks, G. F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

3 Koneman, E. (2010).Diagnstico microbiolgico, Editorial Mdico

4 Manual de bioseguridad e higiene del Laboratorio de Microbiologa.

5 Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa. Octubre
Medicina.

ESCUELA DE MEDICINA
diagnstico de Enfermedades producidas por los Bacilos
grampositivos esporulados y no esporulados.
11 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer casos clnicos en los que se implican la presencia de los
microorganismos grampositivos esporulados y no esporulados, llegando
al diagnstico etiolgico.
microbiolgico.
El reconocimiento de los agentes etiolgicos causantes de

enfermedades como la Difteria, Ttanos, Tos ferina, ntrax, Botulismo
es de gran importancia debido a la morbilidad y mortalidad que
pueden estos presentar en la poblacin.
El algoritmo para llegar al diagnstico de laboratorio es vital para
lograr un diagnstico oportuno y rpido y por tanto poder tratar al
paciente de forma inmediata.
Con la discusin de los diferentes casos clnicos el estudiante podr
reconocer primeramente el agente etiolgico causal de la
enfermedad, describir sus caractersticas morfolgicas y tintoriales ya
estudiadas en clases y las pruebas bioqumicas y enzimticas que se
deben realizar para su diagnstico de laboratorio.

Diagnstico etiolgico Pruebas bioqumicas
Pruebas enzimticas

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14 METODOLOGA

Describir morfologa y caractersticas tintoriales del agente causal.
el laboratorio.
Describir las tcnicas, pruebas bioqumicas y enzimticas para su
reconocimiento.

pizarra Artculos actualizados.
Libro de texto
16 PROCEDIMIENTO
e Lectura e interpretacin del caso clnico
f Reconocer agente etiolgico
g Describir caractersticas morfolgicas y tintoriales.
h Describir las pruebas bioqumicas y enzimticas para su diagnstico.
17 RECOMENDACIONES
el laboratorio.
HABILIDADES
d Reconocer los agentes etiolgicos a partir de un caso clnico
e Describir las caractersticas morfolgicas y tintoriales del agente
f Conocer las pruebas bioqumicas y enzimticas que se realizan
para su diagnstico

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19 CONCLUSIONES

ANEXOS
Introduccin
Transporte de la muestra
Aunque las bacterias anaerobias fueron descubiertas a finales del siglo XIX,
en la poca dorada de la Microbiologia, no fue hasta los 70 cuando se
sentaron las bases del conocimiento actual. El grupo del Instituto
Politcnico de Virginia en los Estados Unidos estableci los principios de la
moderna taxonoma y clasificacin y desarrollo un sistema que permita el
aislamiento de las especies ms sensibles al oxgeno En el momento actual
el inters por las bacterias anaerobias ha disminuido, sin duda porque en el
pasado se sobredimensin su importancia clnica, porque su conocimiento
ha permitido el establecimiento de pautas de quimioprofilaxis eficaces para
las infecciones con un origen quirrgico porque se estudia
sistemticamente la sensibilidad a los antimicrobianos de las especies ms
resistentes y esto permite tener datos para establecer terapias empricas
con altos porcentajes de xito y porque el trabajo con anaerobios sigue
siendo lento e incluso desesperante cuando se intenta llegar a un
diagnstico de especie.
En el transporte de una muestra para la bsqueda de bacterias anaerobias
se debe evitar la presencia de oxgeno, aunque estas pueden sobrevivir
varias horas, incluso das, en un medio de transporte adecuado,
dependiendo de su naturaleza.
En general, en las muestras purulentas pueden sobrevivir ms tiempo que
en los lquidos claros. Para el transporte en anaerobiosis se encuentran
disponibles en el mercado tubos, frascos y viales con una atmsfera
anaerobia que contienen un medio de transporte reducido y resarzurina
como indicador de la presencia de oxgeno (Port-A-Cul , Becton Dickinson).
Las jeringas utilizadas en la aspiracin de pus no deben utilizarse como
transporte debido al riesgo de pinchazos y la posible expulsin accidental
de su contenido; adems, el oxgeno difunde a travs de la estructura de
plstico de sus paredes. Una vez realizada la aspiracin se debe expulsar el
posible contenido gaseoso, tapando la aguja con una gasa estril
impregnada en alcohol para eliminar el riesgo de aerosoles. A continuacin,
se cambia la aguja por otra estril y se inocula el contenido, previa
desinfeccin del tapn de goma, en la superficie del agar de un vial de
transporte para anaerobios.
En un frasco estril que se puede introducir en una bolsa de anaerobiosis
de plstico transparente y flexible. Adems, existen frascos de transporte
para muestras de tejido y biopsias que contienen una base de agar y un

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indicador de anaerobiosis. El tejido se introduce aproximadamente a 5 mm

de la base e inmediatamente despus se enrosca el tapn.
- SNC (abscesos y empiemas) (Aspiracin Biopsias)
- Cabeza y cuello (Aspirados Biopsias)
- Tracto respiratorio inferior (Catter telescopado protegido, Lavado
broncoalveolar
Puncin pulmonar percutnea. Toracocentesis)
- Bacteriemia (Hemocultivo, Vlvula, verruga, Lquido pericrdico).
- Endocarditis
- Pericarditis
- Peritonitis y abscesos (Aspiracin y ciruga, Bilis tomada

quirrgicamente,
Tomas en profundidad)
- Colecistitis
- Heridas laparotomas (Heces, Heces para toxina y recuento)
- Diarrea asociada a antimicrobianos
- Intoxicacion por C. perfrigens
- Intoxicacion por C. perfrigens,- Botulismo (Alimento sospechoso
(recuento), Alimento sospechoso,(toxina, bacteria)
- Ttanos (Material de la presunta puerta de entrada)
Examen directo.
Proporciona de forma inmediata informacin semicuantitativa acerca de los
Microorganismos presentes y un diagnstico presuntivo de la existencia de
bacterias anaerobias.
BIBLIOGRAFA
1. Allen SD, Emery CL, Lyerly DM. Clostridium. En: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH,
Pfaller MA, Yolken RH editores. Manual of Clinical Microbiology, Eighth Edition.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.; 2003. p. 835-855.
2. Dowell VR Jr. Botulism and tetanus: selected epidemiologic and microbiologic aspects.
Rev Infect Dis1984;6: S202-S207.
3. Garca-Rodrguez JA, Cantn R, Garca Snchez JE, Gmez-Luz ML, Martnez
Martnez L, Rodrguez-Avial C, Vila J. Procedimientos en Microbiologa Clnica 11.
Mtodos bsicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos. SEIMC.
4. Guerrero Gmez C, Snchez Carrillo C. Procedimientos en Microbiologa Clnica 1a.
Recogida, transporte y procedimiento general de las muestras en el laboratorio de
Microbiologa. SEIMC.
5. Isenberg HD: Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.; 1992, 1997

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TEMA: DIAGNSTICO DE ENTEROBACTERIAS
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar Enterobacterias mediante la aplicacin de pruebas
Diferenciar Enterobacterias mediante la aplicacin de pruebas
Fundamentar las diferentes pruebas fisiolgicas que permitan la
identificacin y diferenciacin de las Enterobacterias.
Enterobacteriaceae es una compleja familia, compuesta por

bacilos Gramnegativos,
Que fermentan y oxidan la glucosa en su metabolismo, oxidasa negativa
pues carecen de indofenol oxidasa, reducen los nitratos a nitritos,
pueden ser mviles por medio de flagelos pertricos, o pueden carecer
de estos y ser inmviles.
Se hallan ampliamente distribuidos por la naturaleza; muchas de sus
especies tienen como hbitat el intestino del hombre y los animales.
Diversos son los gneros que conforman esta familia, pero los
principales patgenos o potencialmente patgenos para el hombre se
circunscriben a 25 especies como las ms frecuentes. Las especies que
se encuentran en ella son de las que ms frecuentemente se identifican
en los laboratorios de microbiologa clnica como causa de infecciones
tanto comunitarias como nosocomiales.
Dentro de gneros como Escherichia, Shigella, Salmonella, Enterobacter,
Klebsiella, Serratia, Proteus y otros ms, microorganismos entricos, por
ejemplo, Escherichia coli, son parte de la microflora normal y en forma
incidental producen enfermedad, en tanto que otros, las salmonelas y las
shigelas, por loregular son patgenos para el ser humano.
Las enfermedades producidas por estas bacterias pueden estar

localizadas en el intestino, como ocurre con las diferentes clases
de E. coli, Salmonella, Shigella y Yersinia; cada una de ellas tiene

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un patrn de patogenicidad propio, as como caractersticas clnicas y

epidemiolgicas que las definen.
Los mecanismos con que cuentan las enterobacterias para

producir enfermedad son variados, pudiendo estar presentes la
invasin, la toxigenicidad por toxinas termoestables o termolbiles, las
citotoxinas, las endotoxinas, la adhesin y la diseminacin hemtica.
En la actualidad, cada uno de los mecanismos ha sido identificado en
las distintas especies, estando muchos de ellos relacionados con la
informacin mediada por plsmidos o la cromosmica.
El diagnstico se basa en su comportamiento fisiolgico, en su definicin
de antgenos, el estudio del ADN, la determinacin de plsmidos, el
estudio de las toxinas y la determinacin de los patrones de resistencia.
Por medio de su estructura antignica, muchos de estos
microorganismos pueden agruparse en serogrupos y serotipos

Pruebas fisiolgicas Pruebas bioqumicas
3. METODOLOGA
En placas de Agar Mac Conkey con bacilos Gram negativos aislados se
realiza la identificacin bioqumica, procediendo de la siguiente manera:
a. Disponer a la temperatura ambiente en gradilla una serie de tubos de
cultivo para reacciones bioqumicas. (T.S.I., S.I.M., Urea, Citrato,
Manitol)
b. Resembrar del medio de cultivo que contiene las colonias de bacilos
Gramnegativos seleccionadas como sospechosas a los medios para
bioqumicas
En los medios inclinados sembrar por estras
En los medios verticales sembrar por picadura
En los medios lquidos sembrar por emulsin
c. Etiquetar con los datos correspondientes. Llevar a la incubadora por
24 horas.
d. Retirar las series de tubos con las reacciones bioqumicas.
e. Interpretar las reacciones bioqumicas en cada uno de los tubos, de la
siguiente manera.
PRUEBA DE LA UREA
Principio
La urea es una diamida del cido carbnico, cuya hidrlisis por accin de
la ureasa da 2 molculas de amonaco. La ureasa es una enzima
constitutiva que se sintetiza independientemente de la presencia o no de
la urea. La prueba determina la capacidad de la bacteria de desdoblar la

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urea, con la consiguiente alcalinizacin del medio. Es una actividad

caracterstica de especies de Proteusy se usa para diferenciar
Klebsiella(+) de Escherichia(-) y Proteus(+ rpido) de Providencia (-);
Yersiniapseudotuberculosis (+) de Yersiniapestis (-).
Resultados
Ensayo positivo: aparicin de color rojo en el medio por una
alcalinizacin del mismo.
Ensayo negativo: no hay cambio de color.
PRUEBA DEL SIM (H2S, indol, motilidad)

Principio
Determinar si la bacteria a travs de Triptofanasas puede degradar el
Triptfano a indol.
Determinar si hay produccin de H 2S a partir de aminocidos
azufrados dando como resultado un color negro
Determinar si la bacteria es mvil mediante la difuminacin de la
misma hacia los lados, de lo contrario, la bacteria slo crece en la
lnea de inoculacin
Principio del Indol

El indol es uno de los productos del metabolismo del aminocido
triptofano. Con un medio rico en triptofano, el indol se puede detectar
por su habilidad para combinarse con ciertos aldehdos para formar un
compuesto coloreado. El ensayo constituye un mtodo rpido para
detectar organismos productores de indol. Como indicador de la
presencia del aldehdo se usa el reactivo de Erlich. Es especialmente til
en la identificacin preliminar de Escherichiacoli, y para diferenciar
Edwardsiella(+)deSalmonella(-).
Procedimiento
Agregar 5 gotas del reactivo de Erlich por la pared del tubo.
Observar un color rosado en la interfase entre el caldo y el
reactivo.
Resultados
Ensayo positivo: desarrollo de un color rojo en la interfase del
reactivo y el caldo, segundos despus de agregar el reactivo.
Ensayo negativo: no hay cambio de color o hay un color amarillo
en la interfase.
AGAR T.S.I.
Principio
El agar de T.S.I. contiene 2 azcares: lactosa (1%) y glucosa (0.1%). Si el
microorganismo fermenta glucosa, tanto la puncin como la estra

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aparecern de color amarillo. Si el organismo fermenta lactosa y, la

estra permanecer cida (amarilla). Si no fermenta lactosa, la estra se
vuelve alcalina (roja). Los organismos que no fermentan glucosa no
producen cambios en el pH del medio o producirn productos alcalinos y
el medio permanecer rojo. La produccin de SH2 se manifiesta por un
ennegrecimiento del medio.
Resultados
Estra cida/fondo cido (amarillo/amarillo): fermentacin de glucosa,
lactosa (E. coli)
Estra alcalina/fondo cido (rojo/amarillo): fermentacin de glucosa
solamente (Shigellaspp.)
Estra alcalina/fondo alcalino (rojo/rojo): no fermentador
(Pseudomonasaeruginosa)
Precipitado negro en el fondo: produccin de SH2 (Salmonella spp)
Burbujas o roturas: produccin de gas (E. coli, Salmonella spp.)
PRUEBA DEL CITRATO

Principio
Es uno de los test del IMVIC (Indol

, Rojo de metilo, Vogues-proskauer y Citrato) usado para diferenciar
enterobacterias. Hay microorganismos capaces de utilizar el citrato
como nica fuente de carbono produciendo alcalinidad, se detecta en un
medio de cultivo con citrato como nica fuente de carbono mediante el
crecimiento y la alcalinizacin del medio. Este aumento de pH se
visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH
7,6. Cuando el resultado es positivo el medio de cultivo se vuelve azul y
cuando es negativo se mantiene verde.
Procedimiento
Se inocula el agar inclinado en una sola estra en el pico. Utilizar un

cultivo de 24 horas en un medio slido y cuidando no arrastrar medio de
cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento a
partir del medio de cultivo del inculo. Incubar a 35C durante 24horas.
El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la
estra, acompaado o no de un viraje del indicador al azul.
Resultados
(+)Klebsiellaspp , ( - ) EscherichiaColi

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Con la ayuda de una tabla de bioqumicas, compare los resultados

obtenidos con los de la tabla e identifique el germen aislado.

Placa de Petri con medio de
Agar Mac Conkey con Aplicadores
enterobacterias aisladas
Tubos con medio Kliger Gradillas
Tubos con medio Urea Lpiz de cera
Tubos con medio Citrato Mechero de alcohol
Tubos con medio Malonato Recipiente con Hipoclorito de Na
al 5 %
Tubos con medio SIM Aguja bacteriolgica de nicrn.
Placas de Petri Asa bacteriolgica de nicrn.
Papel de filtro Incubadora
5. PROCEDIMIENTO
a. Organice el puesto de trabajo.

b. Prepare materiales necesarios para la ejecucin de las pruebas de
identificacin
e. Termine el procedimiento empleando los lineamientos
6. RECOMENDACIONES
del Laboratorio.
HABILIDADES
Distinguir caractersticas macroscpicas relacionadas con el
aspecto colonial de Enterobacterias.
Reconocer los elementos antignicos responsables de la

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patogenicidad de las Enterobacterias.

DESTREZAS
Utilizar adecuadamente los materiales necesarios en el desarrollo
de las tcnicas diagnsticas.
Emplear apropiadamente los reactivos usados en el desarrollo de
las tcnicas diagnsticas.
PROCEDERES
materiales de laboratorio, as como en el manejo de muestras
biolgicas.
8. CONCLUSIONES
Se ejecutan procedimientos diagnsticos que identifican y diferencian
enterobacterias, sobre la base de la determinacin de pruebas
fisiolgicas o reacciones bioqumicas.
9. ANEXOS
10. BIBLIOGRAFA

Correlacin entre la microbiologa mdica diagnstica y la clnica.
Captulo 15. Bacilos Gramnegativos
Entricos (Enterobactereacea)
Octubre 2015 septiembre 2016.ESPOCH. Facultad de salud pblica.
TEMA: COLORACIN DE ZHIEL NIELSEN PARA EXAMEN DIRECTO POR

BACILOSCIPA DE MICOBACTERIAS. (M. tuberculoso y M. leprae)
1.- OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar a los Bacilos cidos Alcohol resistentes mediante la coloracin
de Ziehl Neelsen.
Ejecutar la tcnica para la coloracin de Ziehl Neelsen.
Fundamentar los diferentes pasos en el procedimiento de la
coloracin.

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El examen bacteriolgico del esputo constituye la tcnica de eleccin para

la bsqueda de TB pulmonar. El examen directo o baciloscopia, que
permite la determinacin de BAAR, tiene un valor prioritario en el
diagnstico de esta entidad; la tcnica detecta la fuente principal de la
infeccin para proceder a un inmediato tratamiento y control. Adems de
ser rpida, simple, tener bajo costo permitiendo y amplia cobertura en el
diagnstico.
Se examina el esputo, exudados u otro material mediante la Tincin de

Ziehl- Neelsen, no recomendndose los lavados gstricos y orina, debido a
que pueden presentar micobacterias saprfitas y producir una tincin
positiva.
En la pared celular de las micobacterias encontramos Lpidos los
cuales incluyen cidos miclicos (cidos grasos de cadena larga,
ceras y fosftidos. El dipptido muramil forma complejos con el cido
miclicos y puede generar la formacin de de granulomas, los
fosfolpidos inducen a la necrosis caseosa.
Las cepas virulentas del M, Tb forman cordones serpentinas,
inhibiendo la migracin de los leucocitos, es causa de granulomas
crnicos.
Cada tipo de micobacterias contiene protenas que inducen la
reaccin de la tuberculina y varios tipos de polisacridos.
3.- PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

Tincin Ziehl Neelsen Pared celular
BAAR Lpidos
Colorantes Ceras
4.- METODOLOGA
Tincin Ziehl Neelsen
Prepare el frotis a travs de un esputo.

Colquelo en el rea de tincin
Cbralo con Fushina bsica y djelo por 5 min. Mientras le damos
calor con la llama del mechero por debajo de la lmina portaobjeto,
hasta que comience a emitir vapores..
Lave el frotis con agua corriente. Escurra bien.

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Cubra con alcohol clorhdrico al 3% por un minuto la lmina

portaobjeto. Lave el frotis con agua corriente. Escurra bien.
Cubra con azul de metileno al 2% espere Tres minutos. Lave el frotis
con agua corriente. Escurra bien.
Examine las lminas portaobjetos con el lente de 100x y aceite de
inmersin, colocando una gota en el centro de la lmina.
Realice descripcin de lo observado.
Identifique las BAAR.
La metodologa para la tincin inicia con la aplicacin de un colorante

bsico, Fushina fenicada; todas las bacterias se tien de color rosado en
este punto del procedimiento. A continuacin se adiciona el alcohol
clorhdrico, decolorndose las que no son BAAR con la adicin de este
decolorante. Como ltimo paso se aplica otro colorante (azul de metileno)
de forma que las clulas decoloradas adquieran un color azul o sea la no
BAAR, mientras que las positivas al diagnstico sern aquellas que quedan
teidas de rosadas.
El calor que se emite es para ayudar a dilatar esas paredes ricas en cera de
las micobacterias y que el colorante bsico penetre quedando teidas de
rosado y resistiendo al decolorante cido.

Muestras de esputos Frasco gotero con solucin de
Fushina fenicada.
Lminas portaobjetos Frasco gotero con Alcohol cido
clorhdrico al 3%.
Lpiz de cera Azul de metileno 2%.
Agua destilada o Sol. salina Microscopios pticos binoculares
fisiolgica
Recipiente con hipoclorito de Incubadora
sodio al 5 %
Mecheros de alcohol Portalminas
Pinzas o puente de coloracin. Aceite de inmersin
Frasco lavador
6.- PROCEDIMIENTO
g. Observacin e identificacin de la muestra de esputo.
h. Realizacin del frotis.
i. Preparacin del fregadero para coloracin.
j. Reconocimiento y seleccin de soluciones empleadas en la tincin.
k. Ejecucin de la tcnica.

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l. Observacin, identificacin e informes de resultados.
7.- RECOMENDACIONES

HABILIDADES
Fundamentar secuencialmente la metodologa a emplear.
DESTREZAS
Preparar los frotis segn el tipo de muestra a utilizar.
Realizar la coloracin de Ziehl- Neelsen
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en el manejo de muestras biolgicas, y
el empleo de los equipos y materiales de laboratorio.
Trabajar en equipo, siendo capaz discutir, organizar y jerarquizar
los procedimientos a ejecutar.
9.- CONCLUSIONES
Se logr conocer la tcnica y el fundamento en la metodologa para la

coloracin de Ziehl- neelsen. Se realiz el procedimiento. Se determin la
importancia de la aplicabilidad microbiolgica y clnica de dicha tincin para
el diagnstico de la Tuberculosis.
10.- ANEXOS

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11.- BIBLIOGRAFA
1. Balandrano S, Anzaldo G, Pea GP. Manual de procedimientos de

laboratorio Tuberculosis. Mxico. 1996.
2. Brooks, G. F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

3. Koneman, E. (2010).Diagnstico microbiolgico, Editorial Mdico

4. Manual de bioseguridad e higiene del Laboratorio de Microbiologa.

5. Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa. Octubre
Medicina.

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TEMA: DIAGNSTICO DE LABORATORIO MICOLGICO.
1.- OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar a partir de pelos y uas las caractersticas microscpicas de
hongos.
Ejecutar la tcnica para la identificacin de hifas, esporas,
clamidosporas.
El examen directo a travs del microscpico de muestras como son:

pelos, uas, lesiones cutneas permite realizar el diagnstico rpido de
afecciones micticas de importancia mdica y las cuales son muy
comunes en la comunidad.
Los hongos son microorganismos Eucariticos, aerobios, no
fotosintticos, inmviles, los cuales tienen una pared celular que
constituye el 90% del peso seco del hongo, formada por quitina, celulosa,
glucanas, y mananas. El 10 al 20% lo forman protenas y glicoprotenas
con propiedades antignicas.
Son capaces de sintetizar lisina y contienen Ergosterol en sus
membranas celulares sitio en el que actan algunos fungistticos.

Hifas Pared celular
Esporas pseudomiscelios
Clamidosporas Ergosterol
3.- METODOLOGA
Examen directo
Prepare la muestra a partir de pelos, raspado de uas.

Colquelo en lmina portaobjeto.

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Centre cubre y portaobjeto coloco la muestra y adiciono una gota de

Hidrxido de potasio al 10%.
Observo al microscopio con lente de 10 y 40 la presencia de hifas,
esporas, clamidosporas.
La metodologa para la observacin es aadir entre cubre y porta KOH al

10%, lactofenol azul de algodn, dar calor. Pudiendo observar en la piel y
uas hifas y artrosporas. En el pelo vemos esporas alrededor de este,
formando cadenas pequeas o grandes, o esporas o filamentos dentro del
pelo. Pudiendo encontrar especies de dermatofitos.

Muestras de pelo, uas. Microscopios pticos binoculares
Lminas portaobjetos Tijeras
Lminas cubreobjetos Pinzas o puente de coloracin.
Perxido de hidrogeno al Mecheros de alcohol
10%
5.- PROCEDIMIENTO
a. Observacin e identificacin de la muestras.
b. Realizacin del Examen directo
c. Preparacin del montaje.
d. Reconocimiento de las estructuras morfolgicas de la especie.
e. Observacin, identificacin e informes de resultados.
6.- RECOMENDACIONES

HABILIDADES
Fundamentar secuencialmente la metodologa a emplear.
DESTREZAS
Preparar el examen directo segn el tipo de muestra a
utilizar.
Realizar el montaje de la muestra entre cubre y porta.
PROCEDERES
Demostrar responsabilidad en el manejo de muestras

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biolgicas, y el empleo de los equipos y materiales de

laboratorio.
Trabajar en equipo, siendo capaz discutir, organizar y
jerarquizar los procedimientos a ejecutar.
8.- CONCLUSIONES
Se logr conocer la tcnica para realizar examen directo micolgico en

muestras de pelos y uas. Se determin la importancia del diagnstico
rpido para el tratamiento oportuno ya que el crecimiento es lento y
llevara semanas para conocer las caractersticas de las colonias..
9.- ANEXOS
10.- BIBLIOGRAFA
6. Bonifaz A. Micologa mdica Bsica. 1era. ed. Mxico D.F. Fco. Mndez
Cervantes, 1990. 1996.

ESCUELA DE MEDICINA
7. Brooks, G. F. (2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill.

8. Koneman, E. (2010).Diagnstico microbiolgico, Editorial Mdico

9. Manual de bioseguridad e higiene del Laboratorio de Microbiologa.

10. Manual de manejo de equipos del Laboratorio de Microbiologa.
diagnstico de Enfermedades producidas por hongos.
20 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer casos clnicos en los que se implican la presencia de
afecciones micticas. Diagnstico etiolgico.
microbiolgico.
Las afecciones micticas son de vital importancia en cuanto a la morbilidad

o mortalidad que le pueden producir al hombre.
Conocer la identificacin de los mismos a travs de los procederes que se
realizan en el laboratorio es fundamental.
Diagnstico etiolgico Examen directo
Medio Sabouraud
Pruebas de cultivo para
identificacin

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23 METODOLOGA

Describir morfologa y caractersticas del agente causal.
el laboratorio.
Describir las tcnicas, pruebas para examen directo y cultivo.

Pizarra Artculos actualizados.
Libro de texto
25 PROCEDIMIENTO
i Lectura e interpretacin del caso clnico
j Reconocer agente etiolgico
k Describir caractersticas morfolgicas.
l Describir las tcnicas, pruebas para examen directo y cultivo.
26 RECOMENDACIONES
el laboratorio.
g HABILIDADES
h Reconocer los agentes etiolgicos a partir de un caso clnico
i Describir las caractersticas morfolgicas.
j Describir las tcnicas, pruebas para examen directo y cultivo.

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28 CONCLUSIONES

ANEXOS
La mayora de los organismos levaduriformes crecen fcilmente en un gran
nmero de medios de cultivo usados rutinariamente en el laboratorio de
Microbiologa (agar sangre, agar chocolate, agar Cled, etc.). Sin embargo, el
agar glucosado de Sabouraud (SDA), con o sin antibiticos aadidos, es el
medio de aislamiento por excelencia para la
Identificacin de levaduras.
Criterios microscpicos
Prueba del tubo germinal o filamentacin precoz.
Slo C. albicans es capaz de producir verdaderos tubos germinales; sin
embargo, otras especies como C. tropicalis pueden producir pseudohifas
precoces de aspecto similar a los tubos germinales pero con una zona de
constriccin caracterstica adyacente a la clula madre, por lo que esta
prueba es til para diferenciar C. albicans del resto de las
especies de Cndida, aunque no est exenta de falsos negativos.

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BIBLIOGRAFIA
1 Berardinelli C, Opheim DJ. New germ tube induction medium for the
identification of Candida albicans. J Clin Microbiol 1994; 22: 861-862
2 Fleming III WH, Hopkins DM, Land GA. New culture medium for the
presumtive identification of Candida albicans and Cryptococcus
neoformans. J Clin Microbiol1977; 5: 236-243.
3 Freydire AM, Guinet R. Rapid methods for identification of the most
frequent clinical yeasts. Rev Iberoam Micol 1997; 14: 85-89.
diagnstico de Enfermedades producidas por virus. Hepatitis B.
29 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
afecciones virolgicas. Diagnstico etiolgico.
microbiolgico para la identificacin viral.
Las afecciones virales son de vital importancia en cuanto a la morbilidad o

mortalidad que le pueden producir al hombre.
Conocer la identificacin de los mismos a travs de los procederes que se
realizan en el laboratorio es fundamental.
Diagnstico etiolgico Tcnicas serolgicas

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32 METODOLOGA

el laboratorio.
Describir las tcnicas serolgicas.

Libro de texto
34 PROCEDIMIENTO
m Lectura e interpretacin del caso clnico
n Reconocer agente etiolgico
o Describir caractersticas morfolgicas.
p Conocer las tcnicas que se emplean para la identificacin viral.
35 RECOMENDACIONES
el laboratorio.
k HABILIDADES
l Reconocer los agentes etiolgicos a partir de un caso clnico
m Describir las caractersticas morfolgicas.
n Conocer las tcnicas que se emplean para la identificacin viral.

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37 CONCLUSIONES

ANEXOS
VIRUS DE LA HEPATITIS
1.- INTRODUCCION
La hepatitis es una enfermedad inflamatoria que afecta al hgado. Su causa

puede ser infecciosa (viral, bacteriana, etc.), inmunitaria (por auto
anticuerpos, hepatitis autoinmune) o txica (por ejemplo
por alcohol, venenos o frmacos).
Hay virus especficos para la hepatitis (virus hepatotrficos), es decir,

aquellos que slo provocan hepatitis. Existen muchos: virus A, virus B, C, D,
E, F, G. Los ms importantes son los virus A, B, C y, en menor medida, el D
y el E, siendo los ltimos, F y G los ltimos descritos y los menos
estudiados.
Vas de transmisin
Virus A (HAV) y E (HEV): fecal-oral. La forma de transmisin ms
frecuente es por el agua contaminada: verduras lavadas con esta agua,
mariscos de aguas pantanosas, etc., por lo que la higiene es fundamental
para una buena prevencin. Tambin lo puede contagiar un familiar o
cualquier otra persona infectada por el virus.
Virus B (HBV), D (HDV). Por va parenteral: por transfusiones, heridas,
jeringas contaminadas; por contacto sexual al estar presente los virus en
los distintos fluidos corporales (semen, saliva) o por relaciones sexuales
traumticas con heridas.
Virus C (HCV); Por va parenteral, contaminacin con sangre infectada, se

ha encontrado presencia del virus en algunos fluidos aunque no puede
considerarse en cantidad como para producir la trasmisin del virus. El
contagio por va sexual de la hepatitis C es muy poco frecuente; se cree
que se transmite por va parenteral nicamente en aquellos casos en los
que haya relaciones sexuales con sangrado y altos niveles de dao en la
mucosa anogenital. Se cree que el sexo vaginal con penetracin implica un
nivel de riesgo menor de transmisin en comparacin con las prcticas

ESCUELA DE MEDICINA
sexuales que implican niveles mayores de traumatismo para la mucosa

anogenital (penetracin anal, fisting o el uso de juguetes sexuales.
Cuando acude a la consulta un paciente con una sintomatologa que pueda

hacer sospechar de la presencia de un trastorno de origen heptico, se
procede, en primer lugar, a estudiar su historial clnico para comprobar si
sigue algn tipo de tratamiento farmacolgico, si presenta antecedentes
familiares de enfermedades hepticas, etctera. Adems, se someter al
paciente a una serie de preguntas destinadas a conocer sus hbitos de
vida, o las actividades que desempea que puedan ser consideradas
factores de riesgo para la adquisicin de la enfermedad.
Diagnstico de Laboratorio
Para detectar anticuerpo contra lahepatitis C (anti-VHC) se dispone de dos
formas principales de anlisis: losinmunoanlisis enzimticos (EIA; enzyme
immunoassays) y las determinaciones de inmunotransferencia
recombinante (RIBA, recombinant inmunoblot assays). Las tcnicas
inmunoenzimticas (ELISA) de tercera generacin, detectan anticuerpos
contra diferentes eptopes del VHC. Este examen se utiliza como tamizaje
para la deteccin de pacientes o donantes de sangre infectados. Su
sensibilidad es de alrededor de 97% (17, 19) y su especificidad de 99%,
detectando la presencia de anticuerpos entre las 4 y 10 semanas post
infeccin.
EIA. Desde 1989 se han desarrollado tres generaciones de pruebas de
anticuerpo por EIA. El EIA es la principal herramienta de deteccin de
hepatitis C. El anticuerpo EIA de primera generacin, que incorporaba el
eptopo c100-3 de la regin no estructural NS4, se emple hasta 1992, en
cuyo momento fue sustituido por el EIA de segunda generacin (EIA-2). El
EIA-2 contiene antgenos de hepatitis C del core viral y de las regiones no
estructurales NS3 y NS4. Recientemente la FDA de los Estados Unidos ha
aprobado un EIA de tercera generacin que contiene antgenos de core
reconfigurado y NS3 as como un nuevo antgeno de la regin NS5,
destinado a deteccin en hemoderivados, pero que en la actualidad se
emplea en algunos centros con fines diagnsticos (vase Figura 2). El EIA-3,
con una sensibilidad del 97% mejora ligeramente la sensibilidad del 95%
observada con EIA-2.
RIBA. Estas pruebas complementan al EIA. Ambas clases de

determinaciones deanticuerpos contienen los mismos antgenos de VHC. La
prueba RIBA est en la
actualidad en la tercera generacin de desarrollo. RIBA-2 emplea los
mismos antgenos recombinantes que EIA-2. Los resultados de una
determinacin de RIBA-2 se pueden interpretar como positivos si son
positivos dos antgenos o ms, como indeterminados si slo un antgeno es
positivo, y como negativos si lo son todos los antgenos. Recientemente se

ESCUELA DE MEDICINA
ha aprobado en los Estados Unidos una prueba de tercera generacin

(RIBA-3). Esta determinacin incorpora el antgeno NS5 a los antgenos
estndar que se emplean en RIBA-2 . Esta prueba de disminuye el nmero
de resultados indeterminados y es ms especfica que la RIBA-2.
Existen distintos tipos de anlisis de sangre que se emplean para evaluar si

el hgado funciona bien. Se debe deterinar:
alanina-aminotransferasa (ALAT,denominada anteriormente

SGPT)
aspartato-aminotransferasa (ASAT, conocida anteriormente

como SGOT).
La ALAT y la ASAT son enzimas producidas en el hgado que se propagan

por la sangre cuando el hgado est daado. Suelen presentar niveles
elevados cuando se padece una infeccin por el VHC. Muchas personas
portadoras el VHC muestran elevaciones ligeras o moderadas de esas dos
enzimas, por lo que ste suele ser el primer indicador de la presencia del
virus.
alcalina-fosfatasa (ALK)
gamma-glutamil-transferasa (GGT).
Reaccin en cadena reversa de la polimerasa transcriptasa (RT-

PCR) Es una variante de la PCR en la que usamos ARN como molde inicial
en vez de ADN, y emplea una transcriptasa inversa (como Tth) para realizar
la sntesis de un ADN complementario al ARN (ADNc). De esta forma, el
desarrollo inicial de una RT-PCR sera:
1er paso: retrotranscripcin a partir del ARN.
2 paso: amplificacin a partir de la primera hebra de ADNc.
3er paso: PCR estndar

Diagnstico serolgico y molecular del VHB
- Posterior a la infeccin con VHB, el primer marcador serolgico detectable
en el suero durante las primeras 12 semanas es el HBsAg que aparece
antes del comienzo de los sntomas, alcanzando su pico durante la
enfermedad clnicamente evidente y luego declina a niveles indetectables
en un intervalo de 3 a 6 meses. Tpicamente desaparece al sexto mes
despus de la exposicin.

ESCUELA DE MEDICINA
- El HBeAg, VHB-DNA y la DNA polimerasa aparecen en el suero

inmediatamente despus del HBsAg y todos estos marcadores representan
replicacin viral activa y por ende la transmisibilidad es alta en este
momento. En las infecciones de evolucin limitada, estos marcadores dejan
de detectarse al poco despus de que las transaminasas alcancen su pico
mximo. Estos marcadores de multiplicacin vrica proporcionan valiosa
informacin en los pacientes con infeccin crnica, gracias a que nos
ayudan a determinar si hay lesin heptica o con infeccin crnica, gracias
a que nos ayudan a determinar si hay lesin heptica o no.
- La IgM anti-HBc (Inmunoglobulina de fase aguda contra el antgeno core
de la hepatitis B) comienza a ser detectable en suero poco antes del
comienzo de los sntomas, al cabo de una a dos semanas de la aparicin
HBsAg y semanas a meses antes de que existan concentraciones de anti-
HBs. A lo largo de los meses
- siguientes la IgG anti-HBc reemplaza a la IgM. La diferenciacin entre
infeccin reciente o antigua por el VHB puede lograrse determinando el
tipo de inmunoglobulina que constituye el anti-HBc. La IgM anti-HBc
predomina durante los primeros seis meses despus de la infeccin
aguda. Por lo tanto los pacientes con hepatitis B aguda, incluidos los que
estn en periodo de ventana, tienen IgM anti-HBc. Los pacientes que se
recuperaron de la hepatitis B en un pasado lejano y en los portadores de
infeccin crnica por el VHB, el anti-HBc es sobre todo de tipo IgG.
-
.
BIBLIOGRAFIA
1 Jawetz, Melnick. Adelberg. Medical Microbiology, 24th Edition,
McGraw-Hill, 2007
2 3. Fauci, Anthony et al. Harrison Principios de Medicina Interna.
Editorial Mc Graw Hill, 17ava edicin, China, 2009. Pp: 1932-1948.
3 Kumar, Vinay, Abul K. Abbas y Nelson Fausto. Patologa estructural y
funcional. Editorial Mc Graw Hill, 7ma edicin, Barcelona, 2008. Pp:
894-901.
4 Brooks, Geo et al. Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y
Adelberg. Editorial el manual moderno, 24ava edicin, Mxico DF,
2008. Pp: 489-507.

ESCUELA DE MEDICINA
5 Graham J. VA extends new hepatitis C drugs to all veterans in its

health system. JAMA. 2016;316(9):913-915. doi:
10.1001/jama.2016.8669
diagnstico de Enfermedades producidas por virus de la Familia
Flavivirus.
38 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer casos clnicos en los que se implican la presencia de virus de
la familia Flavivirus: Fiebre amarilla, Dengue, Zica.
microbiolgico.
El dengue clsico es primariamente una enfermedad en nios mayores y

adultos; est caracterizado por un inicio sbito de fiebre y una variedad de
signos y sntomas inespecficos incluyendo cefalea frontal, dolor retro-
orbital, dolor de cuerpo, nuseas, vmitos, dolor articular, diaforesis y
brote. Los pacientes pueden estar anorxicos, con sabor mtalico en boca y
tener un leve dolor de garganta. La constipacin es ocasionalmente
reportada; la diarrea y los sntomas respiratorios son raramente reportados
y son debidos a infecciones concomitantes. La temperatura inicial se eleva
hasta 38,5C y la fiebre tarda de 2 a 7 das. Una relativa bradicardia es
notada a pesar de la fiebre. Puede haber irritacin conjuntival e inflamacin
de la garganta. La presencia de linfoadenopatas es comn. El brote es
variable y ocurre en el 50% de los pacientes en forma temprana o como
erupcin tarda. Un segundo brote ocurre entre el da 2-6 de la enfermedad,
es escarlatiniforme o mculo papular. Este brote usualmente empieza en el
tronco y se disemina a la cara y las extremidades. En algunos casos se
observa un intenso patrn eritematoso, con islas de piel normal. La
duracin de este segundo brote es de 2-3 das. Al final de la fase febril de la
enfermedad o despus de que la temperatura cae, aparecen las petequias

ESCUELA DE MEDICINA
separadas o confluentes. Un intenso prurito es seguido de descamacin de

las palmas de las manos y plantas de los pies.
Las manifestaciones hemorrgicas en el dengue clsico no son infrecuentes
y varan de leves a severas.
Las hemorragias cutneas incluyen petequias y prpuras, otras
manifestaciones son sangrado intestinal, epistaxis y hemorragias
gastrointestinales. La hematuria y la ictericia son raras.
Los hallazgos de laboratorio asociados con dengue clsico incluyen
neutropenia seguida de linfocitosis, con marcada aparicin de linfocitos
atpicos. Las enzimas hepticas en el suero estn levemente elevadas. La
trombocitopenia es comn, se ha reportado en epidemias que el 34% de los
pacientes con dengue clsico tienen conteo de plaquetas en menos de
100.000/mm 3. Es generalmente auto limitado y raramente fatal, la fase
segunda de la enfermedad tarda de 3-7 das, pero la fase de convalecencia
puede prolongarse por semanas, se asocia con cansancio y depresin sobre
todo en adultos. Esta
Infeccin no deja secuelas permanentes.

Diagnstico etiolgico Pruebas serolgicas
Medidas de Prevencin y
Control
41 METODOLOGA

el laboratorio.
Reconocer las tcnicas serolgicas que se emplean.

Libro de texto

ESCUELA DE MEDICINA
43 PROCEDIMIENTO
q Lectura e interpretacin del caso clnico
r Reconocer agente etiolgico
s Describir caractersticas morfolgicas del virus.
t Describir las pruebas serolgicas que se emplean para el diagnstico.
44 RECOMENDACIONES
el laboratorio.
o HABILIDADES
p Reconocer los agentes etiolgicos a partir de un caso clnico
q Describir las caractersticas morfolgicas.
r Describir las pruebas serolgicas que se emplean para el
diagnstico.
46 CONCLUSIONES

ANEXOS
Diagnstico de laboratorio
El diagnstico definitivo de infeccin por dengue, es hecho solamente en el
laboratorio y depende del aislamiento viral, de la deteccin del antgeno
viral o el RNA viral en el suero o tejido, o deteccin de anticuerpos
especficos en el suero del paciente.
Una muestra sangunea en la fase aguda debe tomarse, tan pronto sea
posible luego del inicio de la enfermedad febril. Una muestra sangunea en
la fase de convalecencia, idealmente debe ser tomada de 2-3 semanas
despus.
Diagnstico serolgico

ESCUELA DE MEDICINA
Cinco pruebas serolgicas han sido usadas en el diagnstico de infeccin

por dengue : inhibicin-hemaglutinacin (IH), fijacin de complemento (FC),
neutralizacin (NT), prueba de inmunocaptura enzimtica de la
inmunoglobulina M (MAC-ELISA) e inmunoglobulina indirecta G (ELISA). De
acuerdo con la prueba usada, el diagnstico serolgico inequvoco lo da el
aumento significativo de cuatro veces o ms en los ttulos de anticuerpos
especficos entre las muestras sricas de la fase aguda y la fase de
convalecencia. La batera antigna de la mayora de estas pruebas, incluye
los cuatro serotipos del
dengue, otros flavivirus como el virus de la fiebre amarilla, de la encefalitis
japonesa, el virus de la encefalitis de San Luis, o flavivirus como el virus
Chikungunya y el virus de la encefalitis equina.
Idealmente estas pruebas deben contener un antgeno no infectado de
control.
MAC-ELISA, es una invaluable herramienta para la vigilancia del dengue. El
reas donde el dengue no es endmico, se usa en la vigilancia clnica de las
enfermedades virales, con la certeza de que cualquier positivo indica
infeccin reciente en los ltimos 2-3 meses. Una apropiada serovigilancia,
por MAC- ELISA durante una epidemia determina rpidamente su
diseminacin. Es de especial ayuda en pacientes hospitalizados, quienes
son generalmente admitidos en fase tarda de la enfermedad. Se debe
enfatizar que esta prueba no se debe usar en la forma de toma de
decisiones en relacin con el manejo del paciente.
Aislamiento viral
Cuatro sistemas de aislamiento viral han sido usados para el virus dengue,
inoculacin intracerebrales en ratones de 1-3 das de edad, cultivos de
clulas de mamferos (LLC-MK2), inoculacin intratorcica de mosquitos
adultos y el uso de cultivos de clulas de mosquitos.
Nueva tecnologa diagnstica

TR-PCR (Reaccin de cadena de polimerasa-transcriptasa reversa): es un
mtodo rpido, sensible, simple y reproducible con los adecuados controles.
Es usado para detectar el RNA viral en muestras clnicas de humanos, tejido
de autopsia y mosquitos. Tiene una sensibilidad similar al aislamiento viral
con la ventaja de que problemas en el manipuleo, almacenaje y la
presencia de anticuerpos no influyen
en su resultado. Sin embargo, debe enfatizarse que la PCR no sustituye el
aislamiento viral.
SONDA DE HIBRIDACION
Sonda de hibridacin detecta cidos nucleicos virales. No es un mtodo
usado rutinariamente. Su ventaja es que puede ser usado en tejidos de

ESCUELA DE MEDICINA
autopsia y muestras clnicas humanas. Es menos sensible que la TR-PCR,

pero ms que la PCR.|
BIBLIOGRAFA
1. Allen SD, Emery CL, Lyerly DM. Clostridium. En: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH,
Pfaller MA, Yolken RH editores. Manual of Clinical Microbiology, Eighth Edition.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.; 2003. p. 835-855.
2. Dowell VR Jr. Botulism and tetanus: selected epidemiologic and microbiologic aspects.
Rev Infect Dis1984;6: S202-S207.
3. Garca-Rodrguez JA, Cantn R, Garca Snchez JE, Gmez-Luz ML, Martnez
Martnez L, Rodrguez-Avial C, Vila J. Procedimientos en Microbiologa Clnica 11.
Mtodos bsicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos. SEIMC.
4. Guerrero Gmez C, Snchez Carrillo C. Procedimientos en Microbiologa Clnica 1a.
Recogida, transporte y procedimiento general de las muestras en el laboratorio de
Microbiologa. SEIMC.
5. Isenberg HD: Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.; 1992, 1997
diagnstico de Enfermedades producidas por parsitos.
47 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
afecciones parasitarias. Diagnstico etiolgico.
Describir morfologa.
microbiolgico.
Enfermedades parasitarias, enfermedades causadas por parsitos. Los

parsitos son seres vivos que viven de otros seres vivos, como de su
cuerpo, para alimentarse y tener un lugar donde vivir.

ESCUELA DE MEDICINA
Los parsitos varan en tamao desde muy pequeos, organismos

unicelulares llamados protozoarios, hasta gusanos, que pueden observarse
a simple vista. El suministro de agua contaminada puede causar infecciones
por Giardias. Los gatos pueden transmitir toxoplasmosis, peligrosa para las
mujeres embarazadas. Otras, como la malaria, son comunes en otras partes
del mundo.
Tipos de enfermedades parasitarias
Segn el agente causal, las parasitosis pueden ser:
Protozoosis. Enfermedades parasitarias causadas por protozoos, que son organismos

unicelulares eucariotas; como la malaria, tripanosomiasis africana, giardiasis.
Helmintiasis. Enfermedades parasitarias causadas por gusanos (vermes o helmintos) que son
animales (pluricelulares y eucariotas) de cuerpo alargado y blando; a su vez pueden ser
Trematodiasis. Enfermedades parasitarias causadas por trematodos, vermes planos del filo
platelmintos; como la esquistosomiasis, la fascioliasis.
Cestodiasis. Enfermedades parasitarias causadas por cestodos, vermes planos del filo
platelmintos; como la teniasis, la cisticercosis, la hidatidosis.
Nematodiasis. Enfermedades parasitarias causadas por nematodos o vermes cilndricos; como
la filariasis, triquinelosis, la elefantiasis.
Diagnstico:
Examen de heces en fresco: muestra tomada, como mximo, 20 minutos

antes de la realizacin del respectivo examen; para detectar trofozoitos
mviles.
Examen seriado de heces, para la deteccin de quistes.
Examen concentrado:
- Willis
- Ritchie
- Kato-Kats
- Tcnica de Graham
- Tcnicas de Inmunofluorescencia( IFI, ELISA)

Diagnstico etiolgico Examen directo
Mtodo concentrados
Mtodos serolgicos
50 METODOLOGA

ESCUELA DE MEDICINA

el laboratorio.
Describir las tcnicas, pruebas para exmenes directos y
concentrados.

Libro de texto
52 PROCEDIMIENTO
u Lectura e interpretacin del caso clnico
v Reconocer agente etiolgico
w Describir caractersticas morfolgicas.
x Describir las tcnicas, pruebas para exmenes directos y
concentrados.
53 RECOMENDACIONES
el laboratorio.
s HABILIDADES
t Reconocer los agentes etiolgicos a partir de casos clnicos
u Describir las caractersticas morfolgicas.
v Describir las tcnicas, pruebas para exmenes directos y
concentrados.

ESCUELA DE MEDICINA
55 CONCLUSIONES

Montoya, M N (2011). Atlas de Parasitologa. Medelln, Colombia: Corporacin para
investigaciones biolgicas.
BIBLIOGRAFIA
1. Brooks, G.F.(2011) Microbiologa Mdica. Mxico, DF.: McGraw-Hill. Captulo 46.
2. Montoya, M N (2011). Atlas de Parasitologa. Medelln, Colombia: Corporacin para
investigaciones biolgicas.

ESCUELA DE MEDICINA
ACTIVIDAD PRCTICA N17
TEMA: RECONOCIMIENTO MACROSCPICO DE HELMINTOS
1. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer e identificar las diferentes formas de los parsitos
helmintos adultos
Reconocer caractersticas morfolgicas macroscpicas que
permitan clasificar e identificar

Entre las enfermedades infecciosas, las producidas por parsitos constituyen importantes
problemas de salud del ser humano.
Muchos parsitos son agentes patgenos en todo el mundo y se encuentran entre las principales
causas de morbilidad y mortalidad en regiones de frica, Asia, Amrica central y Amrica del
Sur. No obstante, con la pandemia del SIDA tambin se han visto afectado los pases
desarrollados.
Los parsitos afectan a millones de personas, perjudican el desarrollo econmico de las

naciones y estn estrechamente vinculados con la pobreza y los sectores sociales ms
desamparados.
Por todo ello, las enfermedades parasitarias son consideradas uno de los problemas ms
importantes de la salud pblica. La malaria, causa entre 1.5 a 2.7 millones de muertes anuales y
el 40% de la poblacin mundial vive en reas endmicas.
Los helmintos constituyen uno de los agentes biolgicos de mayor importancia en los pases de
regiones tropicales y subtropicales relacionados con los graves problemas econmicos y
sociales de estas regiones que permiten la adquisicin y transmisin a grandes grupos de
poblacin de las formas infectantes de los mismos.

ESCUELA DE MEDICINA
En el caso de los helmintos, estos parsitos provocan enfermedades que dejan secuelas en la
salud sobre todo en la poblacin ms joven.
Conocer cmo se clasifican y aplicar las caractersticas morfolgicas macroscpicas que

describiremos a continuacin, en el reconocimiento e identificacin de los mismos son
elementos importantes en el diagnstico coproparasitolgico macroscpico de las helmintosis,
puesto que en numerosas circunstancias nos enfrentaremos a un paciente que ha expulsado
alguna de las formas adultas, tanto macho o hembra, o parsitos hermafroditas de estos
gneros, lo que no solo tendr valor diagnostico por la identificacin del agente causal sino
tambin teraputico y preventivo, toda vez que conozcamos los ciclos evolutivos de estas
especies.
Clasificacin
1. Nemtodos
Helmintos
2. Platelmintos
Nemtodos:
Caracteres morfolgicos
1. Gusanos cilndricos
2. Tegumento quitinoso
3. Son dioicos (sexo separados)
4. De color blanquecino a rosado
5. No segmentados
6. Su tamao oscila desde mm hasta cms, siendo la hembra mayor que
el macho.
7. La parte anterior presenta labios, papilas o cpsulas bucales y la
posterior es recta en la hembra y enrollada en el macho.
Clasificacin de los platelmintos:
Cstodos: (Cintas)

ESCUELA DE MEDICINA
Son parsitos aplanados, acintados y segmentados compuestos por

un rgano de fijacin llamado esclex, cuello y cuerpo, constituido
por segmentos llamados progltides.
El esclex es de forma cuadrangular, posee ventosas y ganchos.
Los progltides pueden ser inmaduros (los ms jvenes y cerca del
esclex), estos son ms anchos que largos; los maduros en la parte
central del parsito que poseen rganos sexuales y son tan largos
como anchos y los grvido ms prximos a la extremidad distal del
parsito, contienen gran cantidad de huevos, son ms largos que
anchos y cuando se desprenden salen al exterior.
Taenias:
Las especies de inters mdico son Taenia saginata y solium.
Caractersticas morfolgicas del parsito adulto:
Tienen forma aplanada, blandos, de color blanco nacarado.

Hermafroditas, generalmente solitario (lombriz solitaria)
Miden varios metros de longitud.
Tremtodos:
Son gusanos planos no segmentados que poseen un tegumento blando y

tienen forma de hojas. Requieren por lo menos de 2 hospederos.
Presentan ventosas y miden varios centmetros.
Atributos patognicos.
Traumticos: Hay destruccin de tejidos e infeccin de los mismos
Mecnicos: Produce obstruccin o compresin. El parsito se aloja

en conductos del organismo y los obstruye o compresiona cuando
ocupa espacios en vsceras.
Bioqumicos: Algunos parsitos producen sustancias qumicas o

metablicas que llevan a la destruccin de los tejidos.
Expoliativo: Consume elementos nutrientes del hospedero, como
sangre entre otros.
Inmunolgicos: Productos de excrecin de los parsitos que

producen reacciones de hipersensibilidad inmediata y tarda.

ESCUELA DE MEDICINA

Parsitos Atributos patognicos
Helmintos Parasitismo
4. METODOLOGA
1. Se dispone en los puestos de trabajo los frascos de helmintos adultos
preservados
2. Se procede por equipos al anlisis y discusin de las caractersticas
morfolgicas estudiadas, fundamentando mediante estas el
reconocimiento e identificacin de los mismos.

Frascos conteniendo Frascos conteniendo parsitos
parsitos adultos machos y adultos machos y hembras de
hembras de Trichuristrichura
Ascarislumbricoides
parsitos adultos machos y adultos hermafroditas de Taenias
hembras de
Strongyloidesstercolaris
parsitos adultos machos y adultos hermafroditas de
hembras de Fasciolas
Enterobiusvermicularis
6. PROCEDIMIENTO
a Observar los frascos conteniendo las formas adultas hembras y
machos de helmintos.
b Observar los frascos conteniendo las formas hermafroditas de
platelmintos
c Describir los caracteres morfolgicos generales y particulares que
permiten clasificar e identificar a los helmintos.
7. RECOMENDACIONES
Cumplir con los lineamientos del Manual de Bioseguridad e Higiene.
Utilizacin de Atlas de Parasitologa y otros elementos tecnolgicos
que permitan familiarizarse e identificar especies de helmintos.
HABILIDADES
Comparar y diferenciar las caractersticas morfolgicas

ESCUELA DE MEDICINA
macroscpicas correspondientes a cada gnero de helmintos

en el reconocimiento e identificacin de los mismos.
DESTREZAS
Aplicar las caractersticas morfolgicas correspondientes a
cada gnero de helmintos en el reconocimiento e identificacin
de los mismos.
PROCEDERES
Trabajar en equipo, siendo capaz de asociar y analizar los
conocimientos adquiridos, que le permitan el reconocimiento e
identificacin macroscpica de los helmintos.
9. CONCLUSIONES
Se realiza la observacin macroscpica de gneros y especies de
helmintos, causantes comunes de parasitosis humanas, reconociendo e
identificando los mismos como un elemento importante dentro del
diagnstico coproparasitolgico.
10. ANEXOS
11.- BIBLIOGRAFA
1) Brooks, G.F. (2010). Microbiologa Mdica. Mxico, D F.: Mc Graw-Hill

Captulo 46. Parasitologa Mdica. pgs. 683-692
2) Montoya, M N (2011). Atlas de Parasitologa. Medelln, Colombia:
Corporacin para investigaciones biolgicas.
Captulo 53, 55, 56. Nematodos intestinales. Cestodos. Trematodos.
pgs. 631, 652, 662.
ELABORADO POR: REVISADO POR: APROBADO POR:
Ing. Natalia Moreno

Montoya Ing. Paola Ocaa Dra. Silvia Proao
Lucero

ESCUELA DE MEDICINA
TCNICO DOCENTE DIRECTORA DE

COORDINADORA DE
DEL LABORATORIO ESCUELA DE
LABORATORIOS
DE MICROBIOLOGA MEDICINA

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OCTUBRE 2016

FACULTAD DE SALUD PBLICA

ACTIVIDAD PRCTICA N 01..................................................................................................3

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 1

TEMA: DIAGNSTICO DE LABORATORIO MICOLGICO..............................................

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 2

2.- CONTENIDOS TERICOS MNIMOS

Manejo de materiales peligrosos y/o biolgico infecciosos

1. Precauciones generales: Se refieren a las medidas para minimizar la

2. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero, orina,

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 3

sustancias qumicas proporcionadas, equipos y materiales del

3. Se debe conocer los smbolos y los cdigos de color sobre las

4. Usar mandil en el laboratorio, el que deber estar cerrada durante

6. Todos los materiales desechables y no desechables se deben

7. Los elementos punzocortantes deben desecharse en recipientes

8. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas con hipoclorito

9. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 4

nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de un matraz con

Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho

Tipo de residuo Estado Fsico Envasado Color

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 5

CLASIFICACIN DE LOS RESIDUOS

Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones de

Indicaciones generales para evitar incendios o explosiones al

1. Los solventes inflamables (alcohol, ter, cloroformo, acetona, tolueno,

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 6

3. Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la mesa o el

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 7

3.- PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

Se utilizar un mtodo experimental activo que permite al estudiante, la

5.- EQUIPOS, MATERIALES Y OTROS IMPLEMENTOS

Socializar los manuales vigentes y aprobados para su aplicacin en

8.- LOGROS DE APRENDIZAJE

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 8

Al finalizar la prctica los estudiantes adquieren los conocimientos

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 9

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 10

Sustancias capaces de aportar

Sustancias cuyo punto de ignicin

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 11

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 12

Sustancias capaces de atacar y

1. Organizacin Mundial de la Salud.(2005). Manual de Bioseguridad del Laboratorio. 3era.

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 13

TEMA: EQUIPOS Y MATERIALES DEL LABORATORIO. (Funciones y manejo)

2. CONTENIDOS TERICOS MNIMOS

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 14

MICROSCOPIO PTICO BINOCULAR

Equipo de precisin conformado por

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 15

Es un equipo diseado para

La centrifuga est diseada para

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 16

Se emplea en procesos como la

Posibilita mantener en un ambiente

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 17

Posibilita mantener en un ambiente

El bao de Mara es un equipo que

CMARA DE FLUJO LAMINAR

GUA DE PRCTICAS. OCTUBRE 2017- AGOSTO 2017. 18

Es un equipo diseado para

Equipo elctrico empleado para el