Rev. Fac. Agron. (Maracay) 27:11-15. 2001.

Composicin de un endospermo artificial para embriones de mandarina

Cleopatra (Citrus reshni Hort ex Tan)

Nadina Nieves Rodrguez; Jos C. Lorenzo Feijo;

Mara A. Blanco Jerez; Justo L. Gonzlez Olmedo;
Ral Tapia Tussell; Alfredo Gonzlez Fuentes*

ABSTRACT

In an artificial seed system the somatic embryo is encapsulated in a matrix of sodium

alginate which supports, protects and contents necessary nutriments for the germination and
conversion processes. The aim of this work was to assay an artificial endosperm with zygotic
embryos of Cleopatra tangerine and to prove the effectiveness of the endosperm with somatic
embryos as a model system to further works in artificial seed. Zygotic embryos were obtained
from mature seeds and somatic embryos from immature fruits, cultivated in vitro. Murashige
and Skoog basal medium supplemented with aminoacids, sucrose and gibberellic acid was
used. The nutritional medium effect on embryos naked or encapsulated in calcium alginate,
enriched with the endosperm medium were proved. It was evident that nutrients, contained by
the endosperm, had a positive effect on the germination of zygotic embryos and the
germination and conversion processes of somatic embryos of Cleopatra tangerine.
Key words: Citrus reshni, zygotic embryos, somatic embryos, artificial seed

Recibido: junio, 1999 Aceptado: enero, 2001

* Centro de Bioplantas, UNICA, Carretera a Morn km 9, CP 69450, Ciego de Avila, Cuba. E-mail: nnieves@bioca.unica.cu
 COMPENDIO

En el sistema de semilla artificial, el embrin somtico es encapsulado en una matriz de

alginato de sodio que lo soporta, protege y contiene los nutrimentos necesarios para los
procesos de germinacin y conversin. El objetivo del trabajo es estudiar un endospermo
artificial con embriones cigticos de mandarina Cleopatra (Citrus reshni) y comprobar su
efectividad en embriones somticos del propio cultivar como un sistema modelo para futuras
investigaciones en la semilla artificial. Se trabaj con embriones cigticos obtenidos de semillas
maduras y embriones somticos a partir de frutos inmaduros cultivados in vitro. Utilizando
como medio base el establecido por Murashige y Skoog enriquecido con aminocidos, sacarosa y
cido giberlico. Se prob el efecto del medio nutriente en embriones desnudos o encapsulados
en alginato de calcio, enriquecido con el medio del endospermo. Result evidente que el
suministro de nutrientes aportados por el endospermo tuvo un efecto positivo en los procesos de
germinacin del embrin cigtico y en la germinacin y conversin del embrin somtico de
mandarina Cleopatra.
Palabras clave: Citrus reshni, embrin cigtico, embrin somtico, semilla artificial

INTRODUCCION

La definicin original de una semilla artificial o sinttica fue dada por Murashige en
1978, quien la defini como "un embrin somtico simple encapsulado", o sea, un producto
clonal que podra ser manejado y usado como una semilla real para el transporte, el almacenaje
y la siembra y que, por tanto, podra eventualmente crecer, tanto in vitro como ex vitro, hasta
convertir en planta completa. Por su parte, McKersie y Bowley (1993) definen la semilla
artificial como un embrin somtico desecado, encapsulado con un endospermo sinttico que
porte los nutrientes de reserva del embrin y con una cubierta artificial que sea capaz de
permitir el manejo mecnico y la plantacin.
El embrin natural de los ctricos se ha utilizado en estudios relacionados con la semilla
artificial por su reconocida sensibilidad a la desecacin, relativamente gran tamao y fcil
manipulacin (Kitto y Janick, 1985a; Nieves et al., 1998). La morfologa, fisiologa y bioqumica
de las semillas se ha estudiado por Bewley y Black (1978) y en particular la semilla y la
germinacin de mandarina Cleopatra (Nieves et al., 1995; 1997).
El objetivo de este trabajo es estudiar la composicin de un endospermo artificial con
embriones cigticos de mandarina Cleopatra y probar su efectividad en embriones somticos
del propio cultivar como un sistema modelo para trabajos futuros en la semilla artificial.

MATERIALES Y METODOS

En trabajos previos, Nieves et al. (1998) determinaron la composicin de un endospermo

artificial con embriones cigticos de este cultivar. Se emple como medio basal las sales MS
(Murashige y Skoog, 1962) y vitaminas MT (Murashige y Tucker, 1969) suplementados con
cido giberlico (2 mg x l-1), cido glutmico (8 mg x l-1), arginina (6 mg x l-1) y sacarosa (3 g x
l-1).
La obtencin de los embriones somticos se realiz a partir de vulos obtenidos de frutos
inmaduros cultivados en medio MT (Murashige y Tucker, 1969) con extracto de malta. Los
embriones se seleccionaron con grado similar de desarrollo visual y se colocaron sobre medio
slido en dos condiciones diferentes: desnudos y encapsulados. Tanto el medio como las
cpsulas contenan los nutrientes del endospermo. Se estableci un control en condiciones
similares, con embriones cigticos obtenidos a partir de semillas maduras, los cuales fueron
despojados de los cotiledones en condiciones estriles.
La encapsulacin se realiz en alginato de sodio al 2% acomplejado con cloruro de calcio al
1% por 10 minutos. Las cpsulas se colocaron en placas de Petri sobre agar enriquecido con los
nutrimentos del medio, o sin nutrimentos (segn el tratamiento) y se colocaron a 25 C, y un
fotoperodo de 16 horas/luz (DFFF= 48 mol m-2 s-1).
Con una frecuencia de dos das se evalu la germinacin y conversin de los embriones,
tomando como criterio la emergencia de la raz y del primer par de hojas verdaderas. Se
emplearon 20 embriones por tratamiento, con tres rplicas cada una. Los resultados se
analizaron estadisticamente mediante el utilitario estadstico SPSS. Las medias se analizaron
segn la Prueba de Duncan para p<0.05.

RESULTADOS Y DISCUSION

En el Cuadro 1 se expone la respuesta de los embriones somticos de mandarina

Cleopatra comparados con el comportamiento de los embriones cigticos del propio cultivar.
Ambos tipos de embriones observaron similar comportamiento, tanto desnudos como
encapsulados (Cuadro 1). La germinacin y conversin de los embriones cigticos se
comportaron al 100%, excepto la conversin de los encapsulados que fue de 93%. Los
embriones somticos desnudos germinaron a un 93%, mientras que los encapsulados
alcanzaron el 100%, con similar porcentaje en la conversin. Es importante sealar que a los
cuatro das de colocados en el medio, ya los embriones cigticos haban germinado, mientras
que los somticos lo hicieron de forma irregular y fue a los 20 das que completaron ese
porcentaje, lo que pone de manifiesto la falta de sincronismo en el desarrollo de estos
embriones. Resulta interesante sealar que los embriones somticos presentaron mayor vigor y
coloracin que los embriones cigticos, aunque su desarrollo no fue uniforme debido al desfasaje
en la germinacin.

Cuadro 1. Comportamiento de embriones somticos y cigticos de mandarina Cleopatra desnudos y

encapsulados en perlas de alginato (diferencias estadsticas para p<0.05)

Embriones Forma Germinacin (%) Conversin (%)

Cigticos Desnudos 100.0 100.0
Encapsulados 100.0 93.3
Somticos Desnudos 93.3 93.3
Encapsulados 100.0 100.0
EE (%) 0.077 0.104

Se ha sealado la importancia del cido glutmico y la arginina en las funciones

metablicas de las semillas de los ctricos. Garca-Agustn y Primo-Millo (1990), sealan que en
la primera fase de la germinacin ocurre la hidrlisis de las protenas a aminocidos, los cuales
son transportados e incorporados al embrin para su desarrollo. Estos aminocidos pueden ser
usados en los procesos de sntesis enzimtica durante el crecimiento del embrin (Beevers y
Guernsey, 1986). La sacarosa puede jugar dos papeles en el cultivo in vitro: como fuente
carbonada o como agente osmtico, y es crucial para los procesos iniciales de desarrollo del
embrin (Kitto y Janick, 1985b). Por otra parte, el cido giberlico es conocido por su efecto en
los eventos que tienen lugar durante la germinacin de las semillas, fundamentalmente
asociado con las fases iniciales que desencadenan el proceso (Gray, 1989).
De los resultados se evidencia que el suministro de nutrimentos aportados por el
endospermo favoreci los procesos de germinacin y conversin de los embriones de mandarina
Cleopatra, lo que indica que los aminocidos incorporados, as como el porcentaje de sacarosa y
los niveles de cido giberlico se suministraron en las proporciones adecuadas para que
pudieran llevarse a cabo los eventos conducentes al desarrollo de los embriones, especialmente
los somticos. Quedara probar en el futuro su efectividad en otros cultivares de ctricos y otras
especies de plantas para dar solucin a uno de los aspectos bsicos de la semilla artificial: la
composicin del endospermo artificial que garantice los eventos iniciales del desarrollo de la
nueva planta.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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