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PRACTICA

ACCION ENZIMATICA

I. INTRODUCCION.

Cuando se realizan reacciones qumicas a veces es necesario agregar sustancias que


aceleren o faciliten la reaccin, a estas sustancias se les llama catalizadores. Las
enzimas son protenas, tambin llamadas catalizadores biolgicos, porque son de
naturaleza orgnica, producidas por la clula para acelerar la velocidad de las
reacciones qumicas, quedando estas intactas al terminar estas reacciones.
Las enzimas actan sobre sustancias llamadas sustratos, que es la molcula que van a
transformar, son altamente especficas, variando su actividad con la modificacin del
pH, temperatura, concentraciones de enzima y sustrato; estas pueden ser inhibidas por
sustancias llamadas venenos enzimticos.

Durante esta prctica se tratar de poner de manifiesto alguno de los factores que
afectan la actividad enzimtica.

II. OBJETIVO.

Al finalizar el laboratorio cada estudiante ser capaz de interpretar los mecanismos


subyacentes de la accin enzimtica sobre sustratos especficos.

Al finalizar la prctica cada estudiante ser capaz de analizar los mecanismos subyacentes de
la actividad de la catalasa en tejido animal y vegetal.

III. MATERIAL.

3 Pinzas para sujetar tubos de ensayo


Solucin de almidn al 1%
Saliva*
Lugol enfrasco gotero
Reactivo de Benedict
1 Docena de tubos de ensayo, resistentes al calor
Pastillas de cuajo (renina)*
HCl al 10%
30 cc. de leche*
4 goteros
4 pipetas de 5 ml.
Guantes descartables*
Crayn graso o maskin tape*
Vidrio de reloj
1
Papa y rbano*
Agua oxigenada (Perxido de hidrgeno)
Trozo de hgado y rin de res*
Hojas de afeitar (dos)*

El material marcado con asterisco (*) lo aportan los estudiantes por grupo.

IV PROCEDIMIENTO.

A. ACCIN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDN

1. Rotule dos tubos con las letras A y B.


2. Agregue al tubo 1 ml de saliva. Y al tubo B 3 ml de saliva Caliente el tubo B
hasta ebullicin.
3. Rotule 4 tubos del nmero 1 al 4, agregndoles 3 ml de solucin de almidn al 1%.
4. Del tubo A extraiga una muestra, y agregue 5 gotas de el al tubo nmero 1, y 20
gotas al tubo nmero 2.

5. Del tubo B extraiga una muestra, y agregue 5 gotas al tubo nmero 3, y 20 gotas al
tubo nmero 4.
6. Despus de 5 minutos
7. Tome otros 4 tubos y enumrelos 5 al 8
Ahora tome 1 ml del tubo 1 y adicinelo al tubo No. 5
Tome 1 ml del tubo 2 y adicinelo al tubo No. 6
Tome 1 ml del tubo 3 y adicinelo al tubo No. 7
Tome 1 ml del tubo 4 y adicinelo al tubo No. 8

Realice pruebas de lugol a los tubos 1 al 4 (5 gotas de lugol) y observe saque


conclusiones y pruebas de benedict, a los tubos del nmero 5 al nmero 8 (adicione 1
ml de benedict y caliente a bao de Mara)

Observe, anote y analice sus resultados en el cuadro de reporte.

PRUEBA A LOS CINCO MINUTOS


NO. DE No. DE
Calidad de enzima LUGOL BENEDICT
TUBO TUBO
1 ACTIVA 5
2 6
3 INACTIVA 7
4 8

2
1. Por qu razn calienta la saliva del tubo B?
2. Porque se hace necesario esperar cinco minutos para observar el resultado?
3. Qu conclusiones pueden sacar cuando una prueba de Benedict y de Lugol son
Positivas?

B. ACCIN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDN

1. Rotule dos tubos con las letras A y B.


2. Agregue al tubo 1 ml de saliva. Y al tubo B 3 ml de saliva
Agregue a este tubo 10 ml de HCl.
3. Rotule 4 tubos del nmero 1 al 4, agregndoles 4 ml de solucin de almidn al 1%.
4. Del tubo A extraiga una muestra, y agregue 2 gotas de el al tubo nmero 1, y 10
gotas al tubo nmero 2.
5. Del tubo B extraiga una muestra, y agregue 2 gotas al tubo nmero 3, y 10 gotas al
tubo nmero 4.
6. Despus de 5 minutos
7. Tome otros 4 tubos y enumrelos 5 al 8
Ahora tome 1 ml del tubo 1 y adicinelo al tubo No. 5
Tome 1 ml del tubo 2 y adicinelo al tubo No. 6
Tome 1 ml del tubo 3 y adicinelo al tubo No. 7
Tome 1 ml del tubo 4 y adicinelo al tubo No. 8

Realice pruebas de lugol a los tubos 1 al 4 (5 gotas de lugol) y observe saque


conclusiones y pruebas de benedict, a los tubos del nmero 5 al nmero 8 (adicione 1
ml de benedict y caliente a bao de Mara)

7. Observe, anote y analice sus resultados en el cuadro de reporte.

PRUEBA A LOS CINCO MINUTOS


NO. DE No. DE
Calidad de enzima LUGOL BENEDICT
TUBO TUBO
1 ACTIVA 5
2 6
3 INACTIVA 7
4 8

1. Por qu razn le agrega HCl a la saliva del tubo B?


2. Porque se hace necesario esperar cinco minutos para observar el resultado?
3. qu conclusiones se pueden sacar cuando la prueba de Benedict y el Lugol son
positivos? Estos resultados pueden cambiar si el tiempo de incubacin se extendi?
Utilizando los resultados obtenidos, explique cmo la actividad de la amilasa es
influenciada por el PH y la temperatura.
3
ACCION DE LA RENINA SOBRE LA CASEINA DE LA LECHE

Accin de la Renina sobre la Casena de la Leche.

1. Disuelva de pastilla de cuajo (renina) en 25 ml de agua destilada.


2. Numere 3 tubos de ensayo (1,2 y 3).
3. En el tubo # 1 coloque 5 ml de leche.
4. En el tubo # 2 coloque 5 ml de leche ms 2 gotas de HCl al 10%.
5. Agregue 10 gotas de solucin de renina a cada tubo numerado.
6 En el tubo # 3 coloque 5 ml de leche y agregue 1ml de renina previamente calentada.
Observe anote y analice sus resultados.

TUBO No. DESCRIPCION DE OBSERVACIONES


1 (Leche + Renina)

2 (Leche + Renina + HCl)

1. (leche + Renina
calentada)

Explique los procesos ocurridos que llevaron a los resultados obtenidos.

Cul es la funcin del HCl en la reaccin?

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ACTIVIDAD DE CATALASA

El trmino peroxisoma fue introducido por De Duve para identificar cualquier microcuerpo que
presente la secuencia flavn oxidasa-catalasa.
Los peroxisomas son cuerpos delimitados por una membrana y contienen algunas enzimas.
Son abundantes en las clulas hepticas y en la de los tbulos renales, pero muy escasos o
ausentes en otros tipos de clulas.
Los peroxisomas contienen 3 enzimas que actan catalizando reacciones en las que se forma
perxido de hidrgeno y una enzima que constituye alrededor de 40% del total de enzimas del
peroxisoma, que degrada el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno gaseoso, recibiendo el
nombre de CATALASA.

Flavn oxidasa
R H2 + 02 R + H2O2

Catalasa
2H202 2H2O + O2 (gas)

PROCEDIMIENTO:

Para poder estimar la velocidad de reaccin considere una escala entre 0 y 5 (O = no


hay reaccin, 1 = muy lento, 5 = muy rpido). Registre los datos en una tabla.

A. Actividad de la Catalasa de Tejido Vegetal sobre Agua Oxigenada.

1. Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos cada uno en diferente vidrio de reloj. Agregue tres gotas de H 2O2.
Qu observa?

2. Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos cada uno en diferente vidrio de reloj. Agregue tres gotas HCl espere 1
minuto y 3 de H2O2. Qu ocurre en la actividad de la enzima?

3. Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos cada uno en diferente vidrio de reloj. Colquelos en el calentador hasta
cocinarlos espere 1 minuto y 3 de H2O2. Qu ocurre en la actividad de la enzima?

B. Actividad de la Catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada.

1. Hacer un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas de agua oxigenada.
Qu deduce?
5
2. Haga un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas de HCl, espere 1
minuto y agregue 3 ml de agua oxigenada. Qu sucede?

4. Haga un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean iguales,
colquelos sobre diferentes vidrios de reloj, Colquelos en el calentador hasta
cocinarlos espere 1 minuto y 3 de H2O2. Qu ocurre en la actividad de la enzima?

REPORTE DE LABORATORIO

TEJIDO/ESCALA O 1 2 3 4 5
Papa
Rbano
Hgado
Rin

V. INTERPRETACION DE RESULTADOS:

Cul es el tejido con mayor actividad y cul el que tiene menor actividad? Por qu se
forman burbujas?

Qu tienen en comn y en qu se diferencian?

Cuando es agregado a heridas produce burbujas. Qu indica esto?

En base a sus observaciones qu puede concluir acerca de cmo afecta a la actividad


enzimtica el tiempo, la concentracin y la temperatura?
Qu otros materiales se podran usar para esta prueba?

Explique porque en la gran mayora de especies de plantas y animales producen la


enzima catalasa?, cul es su funcin?

Qu relacin tiene la temperatura y el PH con la actividad enzimtica? Las enzimas


del estmago actan ptimamente a un PH de 2, Cmo afecta un PH mayor a 4 el
proceso de digestin?

Qu sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas (altas o


bajas)? Explique Qu efecto podra tener una fiebre alta prolongada en el
funcionamiento de las enzimas?

6
Qu otros mtodos se podran utilizar para explorar el funcionamiento de las enzimas
estudiadas en el laboratorio? Indique qu otras enzimas actan en nuestro cuerpo
humano

VI. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1. Qu es una enzima? Qu enzimas contiene el hgado? Cul es su funcin en


el metabolismo de los alimentos?
2. Cules son los componentes de la saliva? Y Cul es la funcin principal de la
amilasa?
3. La sacarosa es una molcula comn presente en muchos productos vegetales.
Con qu objeto es hidrolizada por las clulas?
4. la saliva hervida tiene el mismo efecto que la saliva natural, por qu?
5. Qu glndulas de nuestro cuerpo producen saliva?
6. Por qu debemos masticar bien los alimentos? Explique.
7. Qu cambios pueden sufrir, en relacin a la estructura qumica y el nmero
inicial de molculas, el sustrato y la enzima en una reaccin enzimtica?
8. Si usted hace reaccionar la amilasa con el almidn y espera hasta que termine la
reaccin. Cmo comprobara que la enzima no ha sufrido alteracin cataltica?
9. Indagar sobre: Enzimas, catalizadores, producto, sitio activo de una enzima,
complejo enzima sustrato, activadores, coenzimas, inhibidores competitivos,
inhibidores no competitivos, energa de activacin enzimtica.

VII. BIBLIOGRAFIA.

Avers J., Charlotte. Biologa Celular. 1. Edic. Mxico, Iberoamericana, 1989


CURTIS, Helena. BARNES, N. Sur. Et. Al. Biologa. Mxico: 2000. 1490 p.
Audesirk T. Audesirk T. Biologa. 4ta. Edic. Mxico, Prentice Hall. 1996.
Gerald Karp. Biologa Celular. 3era. . Edic., Mxico, MACGRAWHILL. 1998.