Practica de Laboratorio

Universidad Nacional Del Callao
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y ALIMENTOS
PRACTICA DE LABORATORIO N2
MANEJO Y APLICACIONES DEL FOTOCOLIMETRO MERSK SQ -118
I.- INTRODUCCION
La colorimetra es una de las tcnicas empleadas con mayor asiduidad en los

laboratorios de Bioqumica. Esta tcnica suministra informacin
cualitativa y cuantitativa sobre sustancias en disolucin. El colormetro es un
instrumento diseado para dirigir un haz de luz paralela
monocromtica a travs de una muestra lquida y medir la
intensidad del haz luminoso emergente.
Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin

en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra
que deseamos determinar no posee color por si misma; en tal caso es preciso
llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a
sustancias coloreada con la muestra que interesa estudiar (skoog,A.YJ.JLeary
.1994)
La colorimetra y foto colorimetra no son en realidad tcnicas distintas y la

diferencia estriba en el tipo de instrumental empleado, de forma que se
denomina colormetro a aquellos aparatos en los que la longitud de onda con
la que vamos a trabajar se selecciona por medio de medio de filtros pticos;
en los fotocolormetros o espectrofotmetros la longitud de onda se selecciona
mediante dispositivos monocromadores.
El espectro de un elemento determinado es absolutamente caracterstico de

ese elemento. Sin embargo, elementos distintos producen en ocasiones lneas
que estn muy juntas, lo que lleva a posibles errores. Por tanto, la comparacin
del espectro completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su
identificacin.
Los espectros situados ms all de la regin ultravioleta (rayos X y rayos

gamma) se estudian mediante detectores de ionizacin adecuados. Los
espectros de estos rayos gamma sirven para identificar cantidades minsculas
de determinados elementos qumicos en la muestra. Por ejemplo, averiguar si
una muestra de sal contiene el elemento yodo.
La colorimetra y Fotocolorimetra no son en realidad tcnicas distintas; son

procedimientos de anlisis qumico basado en la intensidad de color de las
disoluciones. La intensidad del color de un lquido coloreado contenido en un
tubo de vidrio depende del espesor de la disolucin (altura de la columna de
lquido) y de la concentracin de la sustancia colorante en la disolucin.
II.- FUNDAMENTO TERICO

Espectrofotometra de absorcin, se fundamenta en las leyes de Beer y de

Lambert:
La ley de Lambert dice: " Cuando un rayo de luz monocromtico (de una nica
longitud de onda) pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad
disminuye exponencialmente al aumentar la longitud del medio absorbente:
I=Io.e-k.l "
La ley de Beer dice: " Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de
un medio absorbente su intensidad disminuye a medida que aumenta la
concentracin: I= Io e-e.c "
La unin de ambas leyes nos da la ley de Lambert-Beer: I= Io e-e. c.l
El fotocolormetro lo que determina es la absorbencia o densidad ptica, que

es: A= Log Io/I=ec.l.
El Fotocolormetro:
Es un instrumento usado en la
qumica para determinar la
concentracin de sustancias
disueltas en lquidos o slidos
mientras sean transparentes a la
luz visible, ultravioleta o infrarroja,
midiendo y comparando colores.
El aparato consta de un sistema

lumnico para iluminar las muestras
y se mide con un sistema
electrnico la cantidad de luz que
pasa.
Los colormetros se basan en el principio de que la absorbencia de una

sustancia es proporcional a su concentracin, y es por eso que las
sustancias ms concentradas muestran una lectura ms elevada de
absorbencia.
Puede ser con simple o doble haz, en el momento de hacer la prctica, los
instrumentos de un solo haz, por lo general operan de manera manual mientras
que los instrumentos de doble haz poseen un registro automtico de los
espectros de absorcin.
Espectrmetro antiguo Espectrmetro moderno
Partes de un fotocolormetro general:
Fuente de energa radiante: Debe producir un haz de radiacin, cuya potencia

sea suficiente para facilitar la deteccin y meditacin.
Pueden ser tres tipos de fuentes de luz:
a. Lmpara de filamento de tungsteno
b. Lmpara de Hidrogeno o deuterio
c. lmpara incandescente de Nernst
Monocromador: Instrumento ptico que se encarga de separar de una fuente

de radiacin, un haz de luz de elevada pureza espectral. est compuesto por
rendijas y un elemento dispersor.
Todos los monocromadores cuentan con una ranura de entrada, lente o

espejo colimador para producir
un haz de radiacin paralelo, un
prisma o red de difraccin como
elemento dispersado, y un
elemento de enfoque que
proyecta una serie de imgenes
rectangulares de la ranura de entrada sobre una superficie plana.
Recipiente para la muestra: Para la mayora de tcnicas

espectrofotomtricas, se requieren recipientes para colocar las muestras.
Pueden ser cubetas que tienen una forma

paraleleppedo con dos tipos de caras
paralelas: Transparentes y opacas. Donde la
forma correcta de sostenerlo es por la parte
opaca y evitar contacto con la parte
transparente ya que el instrumento de
medicin podra tomar una mancha como
parte de la muestra.
En algunos instrumentos ms baratos se

utilizan tubos de ensayo como recipiente de
muestras, lo comn es que tengan 1 cm de dimetro.
Detector: Cuenta con dos componentes:
a. Fototubo: Es un tubo vacio con una ventana transparente que contiene

un par de electrodos en los que se mantiene un potencial. La superficie
del electrn negativo es fotosensible; esto quiere decir que cuando el
electrodo se irradia con fotones, los electrones son expulsados en su
superficie.
Los electrones se aceleran por la diferencia de potencial, llegan al

electrodo positivo y se establece una corriente de circuito.
a. Tempopar: Es un detector de infrarrojo, se unen dos metales diferentes

en dos puntos, se desarrollara un potencial si las dos uniones se
encuentran a diferente temperatura.
De esta forma, la deteccin infrarroja se basa en el calentamiento de

una de las uniones por medio de la radiacin infrarroja.
Amplificador y lectura
III.- OBJETIVOS
Analizar los principios de la tcnica del fotocolormetro
Calibracin y manejo del fotocolormetro MERK SQ- 118
Determinacin del espectro de absorcin y determinacin de la concentracin

de una muestra problema.
Determinacin de metales pesados en muestras liquidas (Inka cola y Guarana)
IV.- EQUIPOS Y MATERIALES
a) EQUIPOS:
Fotocolormetro
b) MATERIALES:
Tubos de ensayo y gradilla
Propipeta
Pipeta
Pisceta
c) REACTIVOS:
Muestras
Gaseosa guarana en lata (original y bamba)
Gaseosa inka kola de vidrio (original y bamba)

V.- PROCEDIMIENTO
1) Damos un reconocimiento y nombramos las partes del fotocolormetro para
el uso correcto de este y as poder desarrollar la clase.
2) Ya sabiendo cmo usar el fotocolormetro aprendemos como ingresar y

aplicar los mtodos en el fotocolormetro.
3) Segn las muestras que tengamos, aplicaremos un mtodo para poder

reconocer la sustancia que corresponde al mtodo aplicado.
4) Para el caso de tener envases de lata aplicaremos primordialmente los

mtodos: nquel (109), aluminio (002), entre otros. Ya con los otros envases
aplicaremos mtodos que pueden ser
Nombre del mtodo Cromo (Cr) contaminantes muy dainos o
comnmente encontrados debido a la
Numero de artculo 14756 procedencia: cadmio (115), plomo
Margen de (114), etc.
0.10 3.0
medicin
Unidad mg/L Cr 5) Ya sabiendo todo lo anterior solo
damos el desarrollo de la clase y
Tiempo de reaccin 5 + 0min aplicamos distintos mtodos tales
10 mn como: urea (125), nquel (109),
Cubierta S.I
Rectangular aluminio (002), D.Q.O. (028), cromo
Longitud de onda 550 nm (025), cianuro (031), silicio (092),
cadmio (115), plomo (114).
Calibracin con S.I Factor
Evaluacin con S.I Lineal VI.- RESULTADOS

Factor 1.299 Parmetros de fotocolormetros
Cromo:
Nombre del mtodo Cadmio(Cd)
Numero de artculo 14834

Margen de medicin 0.025-1.600
Unidad mg/L Cd
Cadmio:
Tiempo de reaccin 5 + 0min
Cubierta S.I 16mn Redonda
Longitud de onda 525 nm
Evaluacin con S.I Lineal
Factor 0.54
Zinc:
Nombre del mtodo Zinc (Zn)
Margen de medicin 0.05 2.50

Unidad mg/L Zn
Cubierta S.I 10mn

Rectangular
Calibracin con S.I Si Factor
Evaluacin con S.I Si Lineal
Factor 1.315
Nombre del mtodo Aluminio (Al)
Margen de medicin 0.20 - 1.50 Aluminio:

Unidad mg/L Al
Cubierta S.I 10mn Redonda

Factor 0.54
Nquel:
Nombre del mtodo Niquel (Ni)
Margen de medicin 0.20 5.00
Unidad mg/L Ni
Tiempo de reaccin 1 + 5min VII.-
Cubierta S.I 20mn Rectangular

CONCLUSIONES
El conocer el
Factor 2.439
adecuado uso del
fotocolormetro permiti obtener en el laboratorio resultados con alta calidad
analtica en las mediciones emitidas por este.
Se determin la longitud de onda, margen de medicin, factor, etc. De las
soluciones coloreadas.
Se observ gracias al fotocolormetro que algunas muestras tenan elementos
dainos para la salud.
Se identific que el equipo presenta una adecuada precisin y exactitud
determinando que las mediciones realizadas en este puedan ser confiables.
VIII.- RECOMENDACIONES
No consumir las muestras recepcionadas para la sesin de laboratorio.

Verificar que los tubos de ensayo (Cubetas) encajen en la ranura del
espectrocolormetro.
Aprender y estudiar el funcionamiento del espetrocolormetro.
Anotar los cdigos de operacin de los diferentes elementos que disponemos a
analizar.
Rotular los respectivos tubos de ensayos (Cubetas) de acuerdo con la muestra
correspondiente.
Tener el respectivo cuidado a la hora de operar con el equipo de laboratorio.
IX.- CUESTIONARIO
1) Defina: auxocromo, espectro IR, filtro de berkefeldt, monofiltracion, diafiltracion
AUXOCROMO:
Por definicin un auxocromo es un grupo funcional

que no absorbe por s solo en la regin del ultravioleta
pero que tiene los efectos de desplazar picos de los
cromfobos hacia longitudes de onda larga adems
de aumentar sus intensidades.
Muchos de estos grupos o radicales, son cidos y

bases que originan colorantes cidos y bsicos, y que
fijan eficazmente el colorante. Un ejemplo lo podemos
encontrar en el ion diazonio que es un cromfobo
fuerte generado por una base.
ESPECTRO IR:
La radiacin infrarroja es un tipo de radiacin

electromagntica y trmica de mayor longitud
de onda que la luz visible, pero menor de la de
las microondas, por lo tanto tiene menor
frecuencia que la luz visible pero mayor que la
microondas, la radiacin infrarroja es emitida
por cualquier cuerpo cuya temperatura supere el 0 absoluto.
Los infrarrojos son clasificados, de acuerdo a su longitud de onda de este

modo:
Infrarrojo cercano ( de 800nm a 2500nm)

Infrarrojo medio (de 2.5m a 50 m)
Infrarrojo lejano (de 50 m a 1000 m)
Entonces el espectro infrarrojo vendra a ser el elemento visible emitido por la

radiacin infrarroja emitida por un cuerpo visible debido a la temperatura del
elemento que supera el 0 absoluto.
FILTRO DE BERKEFELDT:
Es un filtro de agua hecho de tierra diatomeas que

fue inventado en Alemania en el ao 1891 y
distribuida en el reino unido, Berkefeld fue el nombre
del dueo de una mina en Hanover, Alemania, donde
el material cermico era conseguido.
El Berkefled es un buen filtro de agua bacteriano

utilizado en laboratorios de microbiologa. Consiste
en dos cilindros hechos de metal o de plstico
ubicados uno sobre el otro, el que se encuentra
arriba se llena de agua impura; en el fondo del primer cilindro hay hoyos
tapados con filtros de porcelana, el agua ingresa a los filtros por accin de la
gravedad y luego pasa al segundo cilindro.
Algunos tipos de filtros son de ncleo de carbn para que acte como
absorbente desodorizante, tambin pueden estar impregnados con plata para
evitar el crecimiento de bacterias. Otros tipos, dependiendo en su grado de
porosidad, tambin pueden remover ciertos hongos microscpicos y materia
particular.
Dependiendo del dimetro de los poros en el material

cermico:
V (Viel): Poros ms toscos

N (Normal): Poros de tamao intermedio
W (Wenig): Poros finos
MONOFILTRACION:
La monofiltracin es una tcnica usada

principalmente para la separacin de dos valorados
iones, y los grandes mono valorados iones como los
metales pesados. Esta tcnica puede ser vista como
una vasta osmosis inversa de membrana.
Porque la monofiltracion usa menos finas membranas, la presin introducida de

el sistema NF es generalmente menor comparado con con los sistemas de
osmosis inversa. Tambin la velocidad de la suciedad es menor comparado con
los sistemas de osmosis inversa.
Las aplicaciones para los sistemas de MF
Ablandamiento
Separacin especifica de metales pesados por proceso de chorro para la

reutilizacin del agua.
Reduccin de contenidos de sales de la ligera agua salobre.
La tpica realizacin de membrana para los sistemas de MF son del 50% de

NaCl de separacin y 90% (o ms) para el CaSO4
Hay dos tipos de membranas:
o Membranas de espiral, de peor calidad pero ms sensitivas con la

polucin
o Tubular/ membranas de paja, las ms usadas membranas vistas, los
costes y el efecto, no deberan fcilmente ser contaminada.
Las superficies del filtro determinan la capacidad del filtro. Las
membranas en espiral tienen la mayor superficie de rea en general y es
adems el ms barato en uso. La superficie de rea desde las
membranas tubulares/paja es menor en general.
La pre purificacin de la alimentacin del agua tiene una influencia de la
actuacin de la instalacin. La necesidad de la pre purificacin depende
de la alimentacin de la calidad del agua.
Instalacin de pre limpieza tienen las siguientes ventajas
o Larga vida
o Larga produccin de la instalacin es posible
o Manejo simple
Adems de la pre limpieza, una dosis qumica puede ser cogida para prevenir
la escala, precipitacin en la superficie para la membrana.
Un sistema de membrana consiste en algunos compuestos bsicos.
Bomba de alimentacin
Elementos de membranas compilados en las vasijas de presin.
Tuberas
Sistemas de limpieza
DIAFILTRACION:
Es un tipo de filtracin en la que consiste en adicionar

agua a la alimentacin con el fin de facilitar el permeado
de algunos componentes a travs de la membrana
(principalmente lactosa y minerales).
Se utiliza en para filtrar diversos productos consumibles,

por ejemplo en la purificacin de xilooligosacridos y en la
industria lctea para la elaboracin de productos de leche
"sin hidratos de carbono", utilizados en los mercados
emergentes de productos de dieta.
2) De qu resulta la absorbancia de una solucin y de una sustancia pura?
La absorbancia de una solucin y de una sustancia pura est definida por La

Ley de Lambert y Beer expresa que la absorbancia de una solucin es
directamente proporcional al camino recorrido por la radiacin electromagntica
y a la concentracin de la solucin.
A = abc
A: absorbancia
a : Absortividad especfica de cada soluto
b : Distancia recorrida por el haz de luz en cm
c : Concentracin de la solucin
La absortividad es la constante de proporcionalidad que nos permite igualar la

ecuacin, sus unidades dependern de b y c, ya que la absorbancia no tiene
unidades; si b est en centmetros y c en moles por litro, la absortividad estar
en litros / mol centmetro y se denomina coeficiente de absorcin molar (E).
Requerimientos para poder aplicar la Ley: - La medicin del % de T es
realizada con luz monocromtica - La medicin del % de T es realizada a una
regin de absorcin del componente a estudiar. - La referencia es elegida de tal
manera que C=0 cuando T= 100% o A= 0% - La naturaleza de la solucin debe
ser tal que su transmisin responda a variaciones de C.
3) Haga un cuadro indicando la longitud de onda y el color que corresponde a

la misma?
Longitud Longitud de
de Onda Onda (A)
()
LUZ Menor a 4 Menor a
ULTRAVIOLETA(UV) 4000
VIOLETA 0.46 4600
AZUL 0.50 5000
LUZ VISIBLE VERDE 0.56 5600
AMARILL 0.59 5900
O
AMBAR 0,61 6100
ROJO 0.66 6600
LUZ INFRARROJA Mayor a Mayor a
(IR) o.7 7000
4) Cules con las ventajas y desventajas de la aplicacin de los mtodos

fotomtricos?
VENTAJAS:
Posibilidad de integracin.
Campo amplio: Medida simultnea de muchos objetos celestes.
Registro permanente.
Rango espectral ampliado
DESVENTAJAS:
Detector no lineal.
Formato no digital.
5) Qu equipos se utilizan en los mtodos fotomtricos? Explique cmo

funcionan.
Medidor fotomtrico mono funcin para cloro serie HI 967xx

El medidor fotomtrico de cloro es ideal para la medicin diaria del contenido
del cloro. El medidor fotomtrico de cloro es de fcil manejo y le muestra el
contenido de cloro en pocos segundos. La seleccin del medidor fotomtrico de
cloro depende bsicamente del rango de medicin del cloro. El medidor
fotomtrico determina, adems del contenido de cloro libre, tambin el
contenido de cloro total en agua, como por ejemplo, en piscinas o baos
termales
Medidor fotomtrico mono funcin para nitrato HI 96728

El medidor fotomtrico est indicado para medir por ejemplo el nitrato de las
aguas de la industria cervecera o de fuentes y manantiales. Los nitratos de las
aguas provienen sobre todo de deshechos de plantas y animales que contienen
nitrgeno. La toxicidad primaria del nitrato es escasa, pero se puede llegar a
formar nitrito txico. Es especialmente peligroso para nios pequeos.
En la industria cervecera se mide el nitrato porque su alta concentracin influye

negativamente en la fermentacin de la levadura. En el agua de fuentes y
manantiales no tratadas pueden medirse contenidos de nitrato con un mximo

de 20 mg/l. Los valores que se encuentren por encima pueden ocasionar
contaminacin para la agricultura. Como puede ver, el medidor fotomtrico para
nitrato tiene muchas aplicaciones.
Medidor fotomtrico multifuncin HI 83200

El medidor fotomtrico multifuncin HI 83200 no deja casi ningn parmetro de
anlisis del agua sin analizar. El medidor fotomtrico multifuncin ha sido
concebido para el control diario en laboratorio de los 45 parmetros del agua
ms importantes. Este medidor fotomtrico multifuncin se alimenta por batera
(porttil) o por la red a 230 V.
Analizador de oxgeno (O2) HI 96732

El analizador de oxgeno (O2) utiliza un mtodo de medicin colorimtrico. Este
analizador de oxigeno (O2) ofrece dos ventajas: que las mediciones se realizan
de forma muy sencilla y que requiere un mantenimiento mnimo. Al ser
compacto y preciso, el analizador de oxigeno (O2) es ideal para aplicaciones
mviles, as como para el uso en el laboratorio.

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MANEJO Y APLICACIONES DEL FOTOCOLIMETRO MERSK SQ -118

La colorimetra es una de las tcnicas empleadas con mayor asiduidad en los

Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin

La colorimetra y foto colorimetra no son en realidad tcnicas distintas y la

El espectro de un elemento determinado es absolutamente caracterstico de

Los espectros situados ms all de la regin ultravioleta (rayos X y rayos

La colorimetra y Fotocolorimetra no son en realidad tcnicas distintas; son

II.- FUNDAMENTO TERICO

Espectrofotometra de absorcin, se fundamenta en las leyes de Beer y de

La unin de ambas leyes nos da la ley de Lambert-Beer: I= Io e-e. c.l

El fotocolormetro lo que determina es la absorbencia o densidad ptica, que

El aparato consta de un sistema

Los colormetros se basan en el principio de que la absorbencia de una

Espectrmetro antiguo Espectrmetro moderno

Partes de un fotocolormetro general:

Fuente de energa radiante: Debe producir un haz de radiacin, cuya potencia

Pueden ser tres tipos de fuentes de luz:

a. Lmpara de filamento de tungsteno

b. Lmpara de Hidrogeno o deuterio

c. lmpara incandescente de Nernst

Monocromador: Instrumento ptico que se encarga de separar de una fuente

Todos los monocromadores cuentan con una ranura de entrada, lente o

Recipiente para la muestra: Para la mayora de tcnicas

Pueden ser cubetas que tienen una forma

En algunos instrumentos ms baratos se

Detector: Cuenta con dos componentes:

a. Fototubo: Es un tubo vacio con una ventana transparente que contiene

Los electrones se aceleran por la diferencia de potencial, llegan al

a. Tempopar: Es un detector de infrarrojo, se unen dos metales diferentes

De esta forma, la deteccin infrarroja se basa en el calentamiento de

Analizar los principios de la tcnica del fotocolormetro

Calibracin y manejo del fotocolormetro MERK SQ- 118

Determinacin del espectro de absorcin y determinacin de la concentracin

Determinacin de metales pesados en muestras liquidas (Inka cola y Guarana)

IV.- EQUIPOS Y MATERIALES

Tubos de ensayo y gradilla

Gaseosa guarana en lata (original y bamba)

Gaseosa inka kola de vidrio (original y bamba)

2) Ya sabiendo cmo usar el fotocolormetro aprendemos como ingresar y

3) Segn las muestras que tengamos, aplicaremos un mtodo para poder

4) Para el caso de tener envases de lata aplicaremos primordialmente los

Evaluacin con S.I Lineal VI.- RESULTADOS

Nombre del mtodo Cadmio(Cd)

Numero de artculo 14834

Calibracin con S.I Factor

Evaluacin con S.I Lineal

Nombre del mtodo Zinc (Zn)

Numero de artculo 14832

Margen de medicin 0.05 2.50

Tiempo de reaccin 3 + 2min

Cubierta S.I 10mn

Calibracin con S.I Si Factor

Evaluacin con S.I Si Lineal

Nombre del mtodo Aluminio (Al)

Numero de artculo 14825

Margen de medicin 0.20 - 1.50 Aluminio:

Tiempo de reaccin 4 + 0min

Cubierta S.I 10mn Redonda

Longitud de onda 550 nm

Evaluacin con S.I Lineal

Nombre del mtodo Niquel (Ni)