Universidad De Oriente

Ncleo De Sucre
Escuela De Ciencias
Departamento De Qumica
Bioqumica (010-4614)

TEMA I:
AMINOCIDOS Y PROTENAS

Realizado por:
Prof. Oscar Crescente
Emily Martnez
C.I.: 22628480
Seccin 01

Cuman, febrero de 2016

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 Propiedades generales de las protenas y los aminocidos

1. Reaccin de biuret

Equipos y reactivos:

Solucin al 10% de hidrxido de sodio (NaOH)

Mezcla al 2% de: Aminocidos, gelatina y albmina
Solucin de tetraoxosulfato (IV) de cobre (penta-hidratado) (CuSO 25H2O) al 2%
En un tubo de ensayo se agregaron 5 gotas de la muestra a analizar, 10 gotas de NaOH al

10% y 5 gotas de la solucin de CuSO25H2O al 2%.

Luego se observ el cambio de color ocurrido de cada muestra para realizar las

respectivas conclusiones.
Esta prueba tambin se efectu para las soluciones de gelatina, albmina y una mezcla de

varios aminocidos.

2. Dilisis de una protena

Equipos y reactivos:

Clara de huevo
Celofn
Agitador magntico
Solucin saturada de tetraoxosulfato (IV) de amonio {(NH 4)2SO4}
Reactivo de Nessler

La solucin de albmina se prepar filtrando la clara de huevo a travs de una gasa.

Del filtrado se tom 10 ml y se mezclaron con 50 ml de agua destilada agitando

constantemente.

Con una hoja de celofn se prepar una bolsa a la que se le aadi 20 ml de la solucin de
la clara de huevo y 5 gotas de la solucin saturada de tetraoxosulfato (IV) de amonio.

La bolsa se introdujo en un beaker el cual contena agua destilada.

Se ajust la bolsa de manera que los niveles de los lquidos quedaran igual dentro y fuera
de la misma.

Este equipo se mantuvo en agitacin durante media hora.

Ya transcurrido los 30 minutos se verific la presencia de iones amonio en el agua del

beaker y en la bolsa de celofn, agregando 2 gotas del reactivo de Nessler.

Adems se realiz la prueba de biuret al lquido dentro y fuera de la bolsa.

 3. Prueba de cistena

Equipos y reactivos:

Soluciones al 2% de gelatina y albmina

Solucin al 10% de hidrxido de sodio (NaOH)
Solucin al 1% de bis[trioxonitrato(V)] de plomo {Pb(NO 3)2}

10 gotas de cada una de las soluciones de las protenas se agregaron a dos tubos de
ensayo, respectivamente.

A cada tubo de ensayo se le aadi 10 gotas de la solucin de hidrxido de sodio y 2 gotas

de bis[trioxonitrato(V)] de plomo.

Se calent los tubos durante 5 minutos con agua hirviendo y se observaron los cambios
ocurridos.

4. Reaccin xantoproteica

Equipos y reactivos:

Soluciones al 0,1% de asparagina, serina, fenilalanina, tirosina y triptfano

Solucin al 10% de hidrxido de sodio (NaOH)
cido ntrico (HNO3) concentrado

A cada una de las soluciones de los aminocidos, colocados en tubos de ensayo, se le

aadieron 5 gotas de HNO3.

Luego se calentaron durante 5 minutos a bao de Mara y se le agreg 25 gotas de NaOH

a cada uno de los tubos.

Se observaron los cambios ocurridos.

Determinacin del punto isoelctrico de un aminocido por titulacin potenciomtrica

Equipos y reactivos:

pH-metro
Glicina 1 mol/l
cido clorhdrico (HCl) concentrado para ajustar a pH ~ 1
Hidrxido de sodio (NaOH) 2,5 mol/l

Se ajust el pH=2 a una solucin de 40 ml de glicina 1 M, aadiendo gotas de HCl

concentrado.

La solucin en medio cido de la glicina se titul con NaOH 2,5 M hasta un pH 12, midiendo
el pH en intervalos de 0,5 ml.
 Con los datos obtenidos se grafic el pH en funcin de los ml de NaOH, para determinar el
punto isoelctrico de la glicina y observar el estado inico de la glicina en cada regin de la
curva.
 RESULTADOS Y DISCUSIN

Tabla #1. Anlisis cualitativo de la reaccin de biuret para verificar la presencia de protenas
o aminocidos.

FRMULA FRMULA COLORACI PROTEN AMINOCID

MUESTRAS
MOLECULAR ESTRUTURAL N A O

Glicina (Gly) C2H5NO2 Azul X

Asparagina
C4H8N2O3 Morado X
(Asn)

Leucina
C6H13NO2 Azul X
(Leu)

Cistena
C3H7NO2S Azul X
(Cys)

Fenilalanina
C9H11NO2 Azul X
(Phe)

Albmina --- Violeta X

Gelatina --- Violeta X

Mezcla de
--- --- Morado X
aminocidos

En la tabla se muestra los resultados obtenidos de la prueba de biuret que consiste en la

identificacin de protenas. La reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin
entre los iones Cu2+, en medio alcalino , y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que
forma parte de los enlaces peptdicos. Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin que
depende de la naturaleza de las protenas.
 La reaccin del biuret no es una reaccin especfica para protenas. Eso hace que un
resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar los
resultados falsos positivos.

Un resultado negativo de la reaccin del biuret sobre una muestra problema no

necesariamente indica la ausencia de protenas, ya que puede ocurrir, que no existan protenas o
pptidos en la muestra, que existan una o ms sustancias interferentes en la muestra que impidan
que se produzca la reaccin provocando un resultado falso negativo y que existan pptidos, pero a
una concentracin inferior al lmite de sensibilidad del mtodo.

Tabla #2. Dilisis de una protena, prueba cualitativa para verificar la presencia de iones
amonio.

OBSERVACIONES
TIPO DE ENSAYO
Dentro de la bolsa de celofn Fuera de la bolsa de celofn
Nessler Coloracin amarilla Coloracin amarilla un poco ms oscura
Biuret Precipitado azul claro Lquido incoloro

La dilisis es un fenmeno que permite que las molculas grandes y las molculas
pequeas de una disolucin puedan separarse por difusin selectiva a travs de una membrana
semipermeable. Esta membrana, llamada dializadora, presenta un tamao de poro que permite el
paso de las sustancias pequeas, pero no el de las molculas grandes.

Para verificar la presencia de los iones amonio en el agua del beaker y dentro de la bolsa
de celofn se utiliz el reactivo de Nessler el cual dio una prueba positiva a los iones amonio, ya
que se torn de una coloracin amarilla, dando como resultado que los iones amonios pudieron
difundirse a travs de la bolsa de celofn.

Con la prueba de biuret se determin que las macromolculas de la protena no atraves la

membrana semipermeable (papel de celofn) debido, a que no se observ ningn color en el agua
del beaker.
Tabla #3. Anlisis cualitativo de la prueba de cistena para determinar la presencia de enlace
disulfuro en protenas.

PROTEN Presencia de enlace

OBSERVACIONES
A disulfuro
Lquido incoloro con pequeas trazas de precipitado
Gelatina No
blanco
Albmina Precipitado negro Si

Cuando los aminocidos y las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en
medio fuertemente alcalinos, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede
detectarse por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de
plomo.
La albmina por ser rica en azufre da una prueba positiva a realizarse este ensayo.

Tabla #4. Anlisis cualitativo de la reaccin xantoproteica para la deteccin de grupos

aromticos en los grupos R de los aminocidos.

FRMULA FRMULA COLORACI

MUESTRAS OBSERVACIONES
MOLECULAR ESTRUTURAL N
No se observaron
Asparagina cambios en la coloracin
C4H8N2O3 Incolora
(Asn) del lquido

Glicina (Gly) C2H5NO2 Incolora

Fenilalanina C9H11NO2 Incolora

(Phe)
 Leucina
C6H13NO2 Incolora
(Leu)

Cistena
C3H7NO2S Incolora
(Cys)

Los aminocidos, que contienen un ncleo aromtico forman nitroderivados de color

amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las sales de estos derivados son de
color naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un
lcali, se torna color amarillo oscuro.

En esta prueba la fenilalanina deba de dar positiva a la reaccin xantoproteica por

poseer un grupo aromtico, pero no ocurri, porque la fenilalanina es ms difcil de nitrar, para lo
cual requerira cido sulfrico como catalizador.

Tabla #5. Titulacin potenciomtrica de la glicina 1 M con hidrxido de sodio 2,5 M

VNaOH
gastado pH
(ml)
0 2
0,2 2,05
0,9 2,14
1,5 2,18
2 2,23
2,5 2,29
3 2,33
3,5 2,38
4 2,43
4,5 2,48
5 2,53
5,5 2,58
6 2,63
6,5 2,77
7 2,77
7,5 2,83
8 2,91
9 3,07
10 3,29
10,5 3,51
11 3,73
11,5 4,17
12 7,5
12,5 8,14
13 8,41
 13,5 8,58
14 8,72
14,5 8,83
15 8,93
15,5 9,01
16 9,09
16,5 9,18
17 9,22
18 9,33
19 9,46
20 9,55
21 9,64
22 9,73
23 9,84
24 9,92
25 10,04
26 10,14
27 10,25
28 10,41
29 10,6
30 10,87
31 11,55
32 11,86
33 12,02
pKa1 2,91
pKa2 9,18
PI 6,04
PI
6,00
(terico)
%Error 0,67%

Los aminocidos por tener al menos un grupo cido y un grupo amino pueden
considerarse como anfolitos, es decir, sustancias que pueden comportarse como cidos o como
bases.
La concentracin relativa de estas especies depende del pH de la solucin. Todos los
aminocidos poseen un punto en el que se comportan como una sal neutra. En este punto la carga
neta del aminocido es nula ya que los dos grupos disociables tienen su carga de signo contrario y
compensada. Este punto recibe el nombre de punto isoelctrico.

La valoracin potenciomtrica de glicina protonada, con hidrxido sdico da lugar a una

curva, pH frente al volumen de valorante, caractersticas de un cido diprtido.
 La curva caracterstica de esta titulacin explica, que en el momento inicial la solucin slo
contena glicina totalmente protonada, que vario poco a poco el valor del pH por la adicin de
valorante, hasta el momento en el cual se produjo el salto brusco en el pH, donde se alcanz el
primer punto de inflexin correspondiente a la titulacin del primer protn de la glicina, donde se
encuentra la glicina de la forma in hbrido, que es ligeramente modificada y visualizada por el
ligero cambio de pH apreciable, correspondiente al segundo punto de inflexin donde se da la
valoracin del segundo protn de la glicina y donde se alcanza la forma aninica, lo cual es el final
de la titulacin.

Grfica 1