AguilarMoscoso L PDF

Biblioteca Digital.
Oficina de Sistemas e Informatica - UNT
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
CA
TI
R MA
FO
IN
COMPARACIN DEL EFECTO INHIBITORIO IN VITRO DEL EXTRACTO
E
S
ETANLICO CON EL ACEITE ESENCIAL DE CYMBOP HIERBA LUISA SOBRE
MA
UNA CEPA DE CANDIDA ALBICANS

TE
TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

S
BACHILLER EN MEDICINA
SI
DE
AUTOR:
A
AGUILAR MOSCOSO, LUCERO AGUSTINA

IN
IC
ASESOR:
OF
MEJA DELGADO, ELVA
TRUJILLO PER
2013
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Per.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/
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AGRADECIMIENTOS
CA
A Dios por ser mi Padre, amparo y refugio, que en su infinita bondad inspir en m la
vocacin de servicio.
TI
MA
A mis padres Justiniano y Vilma por su amor, dedicacin y empeo.
R
A mis hermanos Laura, Jos y Omar por su cario, apoyo y comprensin.
FO
A mi asesora la Dra. Elva Meja Delgado por la confianza y ayuda que me ha
IN
brindado de forma incondicional. E
S
A todos mis profesores que guiaron mis pasos a lo largo de toda la carrera y me
MA
dieron con su ejemplo valiosas enseanzas.

S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
INDICE
I. INTRODUCCIN...5
1.1 Antecedentes..5
CA
1.2 Justificacin.....11
TI
1.3 Enunciado del problema......11
MA
1.4 Hiptesis......12
R
1.5 Objetivos......12
FO
II. MATERIALES Y MTODOS..13
IN
2.1 Material de estudio...13
E
S
2.2 Mtodos y tcnicas...14
MA
2.3 Definicin de variables operacionales.....15

TE
2.4 Diseo procedimental......16

S
2.5 Anlisis estadstico..........23

SI
2.6 tica.........23
DE
2.7 Diseo experimental.....24

A
III. RESULTADOS.....26
IN
IV. DISCUSIN......35
IC
OF
V. CONCLUSIONES.........39
VI. RECOMENDACIONES40
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS..41
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue comparar el efecto inhibitorio in vitro del extracto
etanlico con el aceite esencial de Cymbopogon citratus sobre una cepa de Candida
CA
albicans ensayando 13 repeticiones por cada concentracin al 5% (44mg/ml), 25%
TI
(222mg/ml), 50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) y 100% (886mg/ml) de aceite
MA
esencial y 5% (50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) y
R
100% (1000mg/ml) de extracto etanlico. Mediante la Prueba de Difusin en Discos
FO
o Kirby y Bauer se obtuvo con las cinco concentraciones del aceite esencial y slo al
IN
100% del extracto etanlico un efecto mximo (40mm); mientras que las otras
E
concentraciones del extracto etanlico presentaron menores halos inhibitorios pero
S
con incremento conforme al aumento de la concentracin; encontrndose diferencia
MA
significativa en este grupo. Con respecto a la Concentracin Inhibitoria Mnima

TE
(CIM), se encontr disminucin de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

S
conforme aumenta la concentracin. En el aceite esencial, a partir del 50% no se

SI
contabiliz UFC; mientras que el extracto etanlico inhibi a Candida albicans a la

DE
concentracin de 100%. Se concluye, que el extracto etanlico tiene menor efecto
inhibitorio in vitro sobre Candida albicans que el aceite esencial; y que la CIM del
A
IN
aceite es 50% (443mg/ml) y el extracto etanlico inhibe a Candida albicans slo al

IC
100% (1000mg/ml)
OF
Palabras clave: Cymbopogon citratus, Hierba luisa, Candida albicans, Halo de
inhibicin, Concentracin Mnima Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia
ABSTRACT
The aim of this study was to compare the in vitro inhibitory effect of the ethanol
extract with the essential oil of Cymbopogon citratus on a strain of Candida albicans
CA
tested 13 replicates for each concentration to 5 % ( 44mg/mL ), 25 % (222mg/ml) ,
TI
50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) and 100% (886mg/ml) essential oil and 5%
MA
(50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) and 100%
R
(1000mg/ml) ethanol extract. By Disk Diffusion o Kirby and Bauer test was obtained
FO
with the five concentrations of the essential oil and only 100% of the ethanol extract
IN
maximum effect (40mm), while the other concentrations of ethanol extract halos
E
showed lower growth inhibitory but under increased concentration; significant
S
difference was found in this group. Regarding the Minimum Inhibitory Concentration
MA
(MIC) found decreased colony forming units (CFU) with increasing concentration. In
TE
the essential oil, from 50% was not accounted UFC, while the ethanol extract
S
inhibited Candida albicans at a concentration of 100%. It is

SI
concluded that the ethanol extract has lower inhibitory effect on Candida albicans in
DE
vitro essential oil, and that oil CIM is 50% (443mg/ml) and ethanol extract inhibits
Candida albicans only 100% (1000 mg / ml)

A
IN
IC
OF
Keywords: Cymbopogon citratus, lemongrass, Candida albicans, Halo of inhibition,
Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Colony Forming Units (CFU)
I. INTRODUCCIN
1.1 Antecedentes:
Las infecciones oportunistas continan siendo una causa mayor de morbilidad y
CA
mortalidad en el mundo, presentndose con mayor frecuencia y gravedad en las
TI
inmunodeficiencias, siendo la ms prevalente actualmente el VIH- SIDA. Al inicio de
MA
la epidemia, la incidencia global de stas era muy alta, pero con la instauracin de la
R
Terapia Antirretroviral fue disminuyendo en gran manera; sin embargo, en pases
FO
con deficiencias econmicas y baja cobertura del programa, stos continan
IN
provocando problemas para su manejo.(1,2)
E
S
As mismo, existen otras condiciones que favorecen el desarrollo de estas infecciones
MA
como alteracin en la fagocitosis (lupus eritematoso sistmico, diabetes mellitus),

TE
granulocitopenia (citotxicos, radioterapia), inmunodepresin consecutiva al uso de

S
glucocorticoides, antibioticoterapia sistmica y quimioterapia, en especial en

SI
receptores de trasplantes; adems de anomalas en la inmunidad humoral (leucemia,

DE
mieloma).(3,4)
A
IN
Se conoce que las infecciones oportunistas son procesos infecciosos invasivos

IC
producidos por grmenes habitualmente no patgenos que se manifiestan en estados

OF
de baja inmunidad; siendo los ms frecuentes Pneumocystis jiroveci, Aspergillus spp,
Candida spp. Este ltimo, es la causa ms comn de infecciones fngicas en
pacientes inmunodeficientes, provocando infecciones que van desde trastornos
mucocutneos hasta enfermedades invasivas. Es frecuente tambin en
inmunocompetentes en edades extremas de la vida como lactantes y ancianos, adems
de gestantes. (2,3,4)
CA
TI
La candidiasis es producida por hongos del gnero Candida la cual incluye ms de
MA
150 especies, de las cuales, slo algunas son patgenas para los seres humanos como
R
C.albicans, C.krusei, C.parapsilosis, C. tropicalis, C. glabrata; destacando la primera
FO
por ser la ms frecuente. Estos microorganismos generalmente se encuentran en
IN
objetos inanimados, alimentos, animales y como comensales en humanos, ya que
forman parte de la flora normal, habitando en el tubo digestivo, aparato reproductor

E
S
femenino (mucosa vaginal) y piel periorificial. Normalmente conviven en equilibrio
MA
con otros microorganismos, pero se torna patgena al perderse ste y causa afeccin
local o sistmica.(3,4,5,6,7)
S TE
SI
El tratamiento convencional de la candidiasis se basa en uso de agentes antifngicos

DE
sistmicos y tpicos, siendo de eleccin los azoles por su efectividad; stos actan
inhibiendo la desmetilasa de 14-alfa-esterol, enzima del citocromo P450; impidiendo

A
la conversin del lanosterol a ergosterol, un componente vital de la membrana celular

IN
de los hongos.(6,7,8,9,10)
IC
OF
A pesar de su eficacia, en los ltimos aos, se ha aislado con mayor frecuencia, cepas
de levaduras con susceptibilidad disminuida o resistente a los antifngicos. La
resistencia puede ser clnica o in vitro, siendo la primera, consecuencia fundamental
del bajo nivel del frmaco en el tejido y/o sangre, debido a una interaccin entre
frmacos o al severo grado de inmunodepresin del paciente. La resistencia in vitro
CA
puede ser primaria, donde la levadura es naturalmente resistente o tambin puede ser
TI
secundaria, donde cepas susceptibles se transforman en organismos resistentes debido
MA
al contacto previo con el antimictico. En s, la resistencia antifngica depende de la
R
interaccin entre frmaco, hongo y paciente; siendo ms relevante ste ltimo.
FO
Los mecanismos de resistencia a los azoles propuestos son: disminucin de la
IN
permeabilidad de membrana citoplasmtica, sobreexpresin de enzimas y mutaciones
de compensacin.(11,12,13,14,15) E
S
MA
Adems de la resistencia, las interacciones y la toxicidad, especialmente heptica

TE
estn ocasionando fallas en la teraputica antimictica, lo que est fomentado la
bsqueda de nuevas alternativas entre productos naturales; habiendo los ltimos aos
S
SI
un considerable inters en el uso de extractos alcohlicos y aceites esenciales de

DE
plantas aromticas por su potente actividad antimicrobiana y antifngica.(15,16,17)

A
IN
Una planta muy estudiada es Cymbopogon citratus (C. citratus) conocida en nuestro
IC
pas como hierba luisa; sta pertenece a la familia Poaceae, considerada hierba
OF
perenne con hojas aromticas que alcanzan de 1 a 2 m de alto, originaria de la India,
pero adaptable a regiones tropicales como nuestro pas. Es reconocida como una
planta medicinal, siendo la infusin hecha de sus hojas popularmente utilizada como
antiespasmdico, antinflamatorio y analgsico.(18,19)
CA
Esta planta posee como metablico secundario el aceite esencial, el cual le sirve de
TI
defensa contra animales herbvoros y en particular contra plagas de insectos y hongos
MA
patgenos. La cantidad y calidad del aceite esencial estn en relacin con la calidad
R
de su cultivo determinada por factores genticos y ambientales. En C. citratus, el
FO
momento de la cosecha ejerce una considerable influencia; conocindose que las
IN
hojas nuevas, tiernas y cosechadas prematuramente dan un contenido bajo y fuera de
E
lo normal de monoterpenos y poca solubilidad. En diversos estudios se ha evaluado
S
las condiciones adecuadas para obtener un buen rendimiento del aceite esencial
MA
llegndose a la conclusin de que cosechar cuatro veces en el ao da un mayor

TE
rendimiento en masa vegetal con buenos contenidos de aceite esencial y de alta

S
calidad, siendo el rendimiento promedio del aceite esencial de 0.4 a 4% por cada
SI
100g de materia vegetal fresca.(19,20,21,22)

DE
La calidad del aceite est en relacin tambin a su composicin, destacando los

A
IN
monoterpenos oxigenados, siendo citral el de mayor cantidad (65-85%); a stos se les

IC
atribuye el efecto antibacteriano y antifngico contra dermatofitos y levaduras, el que

OF
ha sido estudiado por diversos investigadores.
Tangarife y col (2011), estudiaron la actividad contra C. albicans del aceite esencial y
extracto de plantas en Colombia, evaluando inhibicin de formacin de tubos
germinales en comparacin a azoles; adems de citotoxicidad. La mayor actividad se
CA
obtuvo con aceites de Piper bredemeyeri y el extracto de Morinda royoc; el
TI
C.citratus fue efectivo, pero en menor proporcin a los anteriores. Se concluy que
MA
las muestras activas inhibieron a C. albicans y no fueron citotxica.(23)
R
FO
Da Silva y col (2008) evaluaron el efecto in vitro del aceite esencial del C. citratus y
IN
citral, sobre hongos filamentosos no dermatofitos y levaduras usando discos de
difusin, demostrndose la potente accin del aceite contra levaduras especialmente

E
sobre C. albicans (dimetro del halo>40mm con 8ul de aceite esencial). (24)
S
MA
TE
Hammer col (1999) estudiaron a 52 plantas extrayendo aceites esenciales y extractos
y evaluando su actividad contra bacterias y hongos entre ellas aeromonas y C.

S
SI
albicans, utilizando mtodo de microdilucin; determinando que el aceite esencial de

DE
C. citratus, organo y laurel inhiban a todos los organismos siendo stos los ms
efectivos. Para C.albicans, el C. citratus presenta un 0.06% en CIM.(25)

A
IN
IC
Tyasi y Malik (2010) compararon la actividad del aceite esencial de C. citratus en

OF
fase lquida y vapor contra C. albicans determinando que la CIM de aceite esencial en
fase lquida (288 mg/l) fue mayor que en fase vapor (32,7 mg/l) y que exposicin de
4h es suficiente para causar 100% prdida en viabilidad de clulas de C. albicans.(26)
Guerra y col (2004) evaluaron la actividad inhibitoria in vitro del aceite esencial y
una crema de C. citratus sobre C.albicans, siendo la CIM del aceite de 0.16mg/ml y
la crema, 2.5mg/ml, concluyendo que el aceite tiene una notable actividad
CA
antifngica.(27)
TI
MA
Alzamora y col (2001) investigaron la actividad antimicrobiana de aceites esenciales
R
de plantas de Medicina Tradicional en Per, entre ellas C.citratus, y se evalu su
FO
eficacia frente a bacterias y hongos como C.abicans; hallando similar efecto entre
nistatina y C. citratus.(28)
IN
E
S
Con respecto al extracto etanlico de C. citratus, hay estudios que demuestran su
MA
actividad antiinflamatoria, por inhibicin en la produccin de citoquinas; en especial

TE
est relacionado con el factor de transcripcin NF-B. Tambin se le atribuye una gran
capacidad como antioxidante pues tiene un alto contenido de fenoles, entre los que
S
SI
destaca isoorientina, swertiajaponina e isoorientina 2-V-ramnsido. (29,30,31,32)

DE
Se conoce que los fenoles son compuestos simples que contienen un anillo fenlico
A
IN
sustituido y actan inhibiendo enzimticamente compuestos oxidados, mediante

IC
reacciones de grupos sulfihidrilos o por interaccin con protenas. Adems, stos

OF
tienen propiedades antispticas, por lo que se ha planteado una actividad
antibacteriana y antifngica. (33)
10
1.2 Justificacin:
La aparicin de especies patgenas con resistencia clnica e in vitro, las interacciones
farmacolgicas significativas, biodisponibilidad insuficiente y toxicidad de los
CA
antifngicos tradicionales, sobre todo en inmunodeprimidos con SIDA, quienes
TI
reciben numerosos frmacos, ha fomentado la bsqueda de nuevos alternativas entre
MA
productos naturales contra los patgenos oportunistas como C. albicans; y siendo
R
nuestro pas uno de los ms ricos en biodiversidad, es nuestro desafo vincular y
FO
convertir el conocimiento de los recursos biolgicos en compuestos o productos tiles
IN
en beneficio de nuestra sociedad.
E
S
Existen numerosas plantas utilizadas en la medicina alternativa pero no todas son
MA
avaladas cientficamente, por ello se propone determinar el efecto inhibidor de C.

TE
citratus hierba luisa para sobre una cepa de C. albicans comparando el aceite
S
esencial y el extracto etanlico, y conocer si este ltimo tiene efecto inhibitorio

SI
similar al aceite esencial, considerando que su obtencin es ms sencilla, econmica

DE
y rpida que del aceite esencial.

A
IN
1.3 Enunciado del problema:

IC
Tiene efecto inhibitorio in vitro el extracto etanlico de forma similar al efecto del
OF
aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida
albicans?
11
1.4 Hiptesis:
El extracto etanlico tiene efecto inhibitorio in vitro similar al aceite esencial de
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans
CA
TI
1.5 Objetivos:
R MA
1.5.1 Objetivos Generales:
FO
Comparar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el aceite esencial del
IN
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans
E
S
1.5.2 Objetivos Especficos:
MA
- Determinar la concentracin inhibitoria mnima del aceite esencial de Cymbopogon

TE
citratus hierba luisa utilizando concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75%, 100% sobre
S
una cepa de Candida albicans

SI
- Determinar la concentracin inhibitoria mnima del extracto etanlico de Cymbopogon

DE
citratus hierba luisa utilizando concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75%, 100% sobre
A
una cepa de Candida albicans

IN
- Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba

IC
luisa utilizando el mtodo de difusin en disco sobre una cepa de Candida albicans
OF
- Determinar el efecto inhibitorio del extracto etanlico de Cymbopogon citratus hierba
luisa utilizando el mtodo de difusin en disco sobre una cepa de Candida albicans.
12
II. MATERIAL Y MTODOS
2.1 Material de estudio:
CA
1.1. Material biolgico:
TI
Cepa de Candida albicans ATCC 10231 obtenida del laboratorio MediMark R
MA
Europe que fue enviada al laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Medicina
R
de la Universidad Nacional de Trujillo
FO
IN
1.2. Material botnico:
E
S
Hojas frescas de Cymbopogon citratus (hierba luisa), recolectada por la maana del
MA
distrito de Usquil (1500 m.s.n.m.), provincia de Otuzco y departamento de La

TE
Libertad, durante el mes de mayo; y recibidas en el laboratorio de Farmacognosia
de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo

S
SI
donde se realiz la extraccin del aceite esencial y la obtencin del extracto etanlico.
DE
Un ejemplar completo de la planta se llev al Herbarium Truxillense (HUT) de la
Universidad Nacional de Trujillo para su identificacin y posterior verificacin

A
taxonmica, donde se encuentra registrado como Cymbopogon citratus (hierba luisa)

IN
IC
con nmero de depsito 0054392.

OF
13
2.2 Mtodos y tcnicas:
Tipo de Investigacin:
El presente trabajo presenta un Diseo experimental en bloques completamente al
CA
azar con una observacin por bloque en cada tratamiento
TI
MA
Muestra:
R
FO
Fue creada de acuerdo a los parmetros microbiolgicos experimentales revisados,
quedando constituida por 260 placas Petri.
IN
Clculo para el nmero de ensayos se har con la siguiente frmula:
E
S
MA
n = (Z /2 + Z )2 2S2
(x1 x2)2
S TE
Siendo n= el nmero de repeticiones a efectuar en cada investigacin

SI
Z /2 = 1.96 para = 0.05

DE
Z = 0.84 para = 0.20

A
S = 0.9 (x1 x2) valor asumido por no haber estudios previos

IN
IC
Se determin una muestra de 13 observaciones para cada concentracin.

OF
14
2.3 Definicin de variables operacionales:
Variable Indicador Tipo Escala
Variable independiente
CA
TI
Aceite esencial de Concentraciones al 5%, 25%, Cuantitativa Ordinal
Cymbopogon citratus 50%, 75%, 100% del aceite
MA
esencial
R
Extracto etanlico de Concentraciones al 5%, 25%,
FO
Cymbopogon citratus 50%, 75%, 100% del Cuantitativa Ordinal
extracto etanlico
IN
Variable dependiente
Dimetro E
del halo de Cuantitativa Ordinal
Efecto inhibitorio in inhibicin
S
MA
vitro sobre una cepa de

Candida albicans Unidades formadoras de Cuantitativa Ordinal
TE
colonias (UFC)
S
SI
Definiciones operacionales:
DE
Aceite esencial de C. citratus: lquido de color amarillo plido, con olor intenso a
A
limn, similar apariencia y consistencia de aceites grasos, voltil, no deja huella ni

IN
mancha grasosa, que se obtiene de la destilacin por arrastre de vapor de las hojas.
IC
OF
Extracto etanlico de C. citratus: lquido con olor caracterstico a limn, obtenido
por percolacin en contacto con etanol, seguida de la eliminacin de dicho solvente
por procedimiento fsico.
15
Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para detener la reproduccin del hongo en
condiciones experimentales. Resultado de medir el crecimiento del hongo mediante la
longitud del dimetro del halo de inhibicin (dimetro de disco = 6mm) en cada Placa
CA
Petri.
TI
Unidades Formadoras de Colonias (UFC): Crecimiento del hongo en forma de
MA
colonias, las que se encuentran esparcidas por toda la superficie de la placa.
R
Concentracin inhibitoria mnima: menor concentracin en la cual no se observaron
FO
UFC.
IN
2.4 Diseo procedimental:
E
S
MA
Preparacin de la muestra de Cymbopogon citratus (hierba luisa)

TE
Lavado de la muestra:
S
Luego de la seleccin, se procedi a lavar las hojas con agua corriente, seguido de
SI
una desinfeccin utilizando hipoclorito de sodio a una concentracin de 200ppm

DE
durante 5 minutos. Posteriormente se realiz un enjuague con agua destilada para
retirar residuos de hipoclorito.(34,35,36)

A
IN
Conservacin de la muestra:
IC
Las hojas se conservaron bajo sombra a una temperatura aproximada de 21oC, en

OF
los ambientes del laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y
Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, durante 1 da, luego se fraccion
trozos pequeos y se conserv en bolsas de papel kraft.(34,35,36)
16
Obtencin del aceite esencial:
Se realiz por el mtodo de destilacin por arrastre de vapor de agua
CA
(convencional). El aceite esencial fue extrado a partir de los trozos pequeos que se
TI
colocaron en un baln de fondo plano y se sometieron a una corriente de vapor de
MA
agua sobrecalentada; de esta manera se arrastr la esencia que posteriormente por
R
accin del refrigerante de bolas, fue condensada. El destilado se separ tomando en
FO
cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de densidades entre el agua y el
IN
aceite esencial, utilizando una pera de separacin de vidrio, se deshidrat las
impurezas de agua en el aceite esencial con sulfato de sodio anhidro, se filtr y luego
E
S
se guard en un frasco de vidrio color mbar (evita la descomposicin por la luz) y
MA
bajo refrigeracin a una temperatura de 4 oC.(34,35,36)

TE
Determinacin del rendimiento de aceite esencial:

S
SI
DE
La determinacin del porcentaje de rendimiento de aceite esencial (%RAE), se
realiz a escala laboratorio por el mtodo de arrastre por vapor de agua en un equipo
A
de destilacin de vidrio. A partir de 100 g de hojas de Cymbopogon citratus (hierba

IN
IC
luisa), se obtuvo un determinado volumen que fue medido con una probeta florentino.
OF
Por el mtodo gravimetra-volumtrico se determin el %RAE, aplicando la siguiente
frmula:(34,35,36)
17
%RAE = Vol. AE (mL)/ P.muestra (g) x 100
Donde:
CA
Vol. AE : Volumen del aceite esencial obtenido en mililitros.
TI
P.muestra: Peso de la muestra a destilar en gramos.
MA
%RAE = Vol. AE (mL)/ P.muestra (g) x 100
R
%RAE =0.0048 / 0.60 x 100 %RAE= 0.8
FO
El rendimiento del aceite esencial es de 0.8% por cada 100g de hojas de C.citratus.
IN
Diluciones del aceite esencial:
E
S
MA
Se obtuvo finalmente 2.6ml de aceite esencial, con una densidad de 0.8861 g/ml. Para
TE
la prueba de difusin en discos, se prepararon 5 diluciones utilizando etanol de

S
96oG.L. como diluyente, obtenindose, concentraciones de 5% (44mg/ml), 25%

SI
(222mg/ml), 50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) y 100% (886mg/ml).

DE
A
Preparacin del extracto etanlico:

IN
IC
Se prepar el extracto etanlico mediante el mtodo de percolacin. Se pes 250 g de

OF
las hojas previamente secadas y cortadas en pequeos trozos de C.citratus y se separ
en porciones equivalentes a 125 g, 75 g y 50 g de la muestra. Se coloc la porcin de
125g previamente humectada en el percolador y se macer con alcohol de 70GL por
18
48 horas. Se prosigui a percolar y se recogi 50 ml del extracto, los cuales se
separaron y se guardaron en un frasco de vidrio de color mbar. Se continu
recibiendo 5 porciones sucesivas del percolado de 75 mL cada una enumerada segn
CA
el orden que se recibe. Se coloc la segunda porcin equivalente a 75 g de la
TI
muestra en el percolador y se macer con las porciones de 75 mL del lote anterior
MA
por 48 horas. Se percol hasta obtener 75 mL y se guard en el frasco de vidrio de
R
color mbar. Se prosigui percolando 5 porciones de 50 mL de extracto, cada uno
FO
enumerado segn el orden que se recibe. Se coloc la tercera porcin equivalente a
IN
50 g y se macer por 48 horas con las porciones de extracto del lote anterior. Luego
se procedi a percolar hasta obtener 125 ml de extracto, los cuales se pasaron al

E
S
frasco de vidrio de color mbar. La cantidad final de extracto etanlico fue de 250 ml
MA
Este extracto se llev a secar en una cmara de secado al vaci a una presin
TE
reducida y a una temperatura de 30 C; luego se pes el residuo seco y se guard en
refrigeracin a 4 C en frasco de vidrio de color mbar estril.

S
SI
DE
Diluciones del extracto etanlico:

A
A partir de este residuo seco, se prepararon las concentraciones disueltas en etanol de

IN
IC
70 G.L, de 5%, 25%, 50%, 75% y 100%.

OF
Para la preparacin de la concentracin del 5% se aadi el residuo seco en una
proporcin de 5 g de residuo seco en 100 ml de etanol, determinando una
concentracin de 50 mg/ml, para la concentracin del 25 % se aadi 25 g de residuo
19
seco en 100 ml de etanol determinando una concentracin de 250 mg/ml, de 50%,
500 mg/ml de 75%, 750mg/ml y 100%, 1000 mg/ml.(34,35)
CA
Preparacin de cepa de Candida albicans:
TI
MA
La cepa se cultiv en tubos de ensayo con tapa rosca en medio agar Sabouraud
R
dextrosa 4% a 25C por 24 horas.
FO
IN
Sembrado:
E
S
Con un hisopo estril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado y a una
MA
distancia de 10cm de la llama de un mechero, se sembr en placas Petri contenido

TE
agar Sabouraud hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando
cada placa 30C por 10 veces aproximadamente. (37,38,39)

S
SI
DE
Determinar el efecto inhibitorio (prueba de susceptibilidad):

A
Luego de realizar el sembrado de la cepa de C. albicans ATCC 10231 en placas Petri

IN
IC
se realiz la prueba de susceptibilidad utilizando el mtodo de Kirby Bauer, difusin

OF
en discos, para lo cual se prepar discos de papel filtro estriles (dimetro 6mm) y se
les sumergi dentro de cada una de las concentraciones de aceite esencial y extracto
etanlico; y despus, con aguja estril fueron colocados sobre los cultivos de
20
C.albicans cepa ATCC 10231 en placas Petri, preparados previamente. Hubo dos
grupos controles, un control positivo con Clotrimazol solucin 1% y un control
negativo con solucin salina. Posteriormente las placas se incubaron a 35C durante
CA
24h. La siembra del microorganismo fue para cada concentracin de ambos grupos y
TI
los controles. Finalmente la lectura se llev a cabo a las 24 horas; y se midi los halos
MA
de inhibicin de cada una de las concentraciones incluyendo el rea del disco de
R
papel de filtro con una regla milimetrada procedindose de igual manera con ambos
FO
controles.(37,38,39)
IN
Determinar la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM): E
S
MA
La determinacin de la CIM se realiz por el mtodo de diluciones en tubos en donde

TE
se utiliza 10 tubos de ensayo para cada concentracin numerndose del 1 al 10. En el
nmero 1 se coloca la primera concentracin a trabajar, en el tubo N2, 0.2ml de la

S
SI
concentracin y 0.2ml de solucin salina; en tubo N3, 0.2ml de la dilucin anterior y

DE
0.2 ml solucin salina y as sucesivamente hasta el tubo 10. Luego se coloca 0.2ml
de la dilucin de la cepa (semejante al tubo N05 de Mac Farland que corresponde a

A
108 bacterias/m2) en cada uno de los 10 tubos, agitndolos para uniformizarlos.

IN
IC
Luego, los tubos son colocados en la estufa a 37C por 24 horas. Posteriormente, se
OF
siembra 0.1ml de solucin de cada uno de los tubos en 13 placas con agar Sabouraud
(repeticiones) utilizando el asa de Driglasky para dispersar la muestra, realizndose
dentro del dimetro de 10cm de la llama de un mechero. Las placas se colocan en la
21
estufa por 24 horas a 37C y luego se realiza el conteo de Unidades Formadoras de
Colonias (UFC), considerndose como CIM a la menor concentracin en la cual no se
observaron UFC.
CA
TI
Para el conteo, se emplea la siguiente frmula:
MA
UFC= N/4 x A x D
R
Donde
FO
N= nmero de colonias
IN
A=rea
D= dilucin E
S
Todo este procedimiento se debe realizar con cada una de las concentraciones de
MA
ambos grupos, tanto aceite esencial como extracto etanlico, adems del control
TE
positivo con Clotrimazol solucin 1% y negativo con solucin salina. Sin embargo,
antes de realizar este procedimiento se consider utilizar primero el mtodo de

S
SI
dilucin en tubos abreviado, con el cual se obtenga la menor concentracin que

DE
inhiba el crecimiento del hongo, y con sta, realizar el mtodo descrito al inicio, con
las 13 repeticiones para hallar la CIM. Para el mtodo de dilucin en tubos abreviado
A
se utiliz12 tubos de ensayo, 5 para cada concentracin del aceite esencial y 5 para el
IN
IC
extracto etanlico; se aadi 0.8 ml de cada concentracin (5%, 25%, 50%, 75%,
OF
100%), luego se realiz la inoculacin de 0,2 ml del cultivo de C.albicans (en
concentracin semejante al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland que corresponde a
108 bacterias/m2) en cada uno de los tubos correspondientes; el undcimo tubo
22
correspondi al control con Clotrimazol solucin al 1% aadindose 0.8 ml de este
frmaco y 0.2 ml del hongo; en el duodcimo tubo se realiz el control colocando
1ml de cultivo de C.albicans sin tratamiento. Los tubos fueron colocados en la estufa
CA
a 37C por 24 horas. Posteriormente, se determinaron las cuentas viables sembrando
TI
0.1ml de solucin de cada uno de los tubos en 13 placas con agar Sabouraud por cada
MA
concentracin y grupos controles, utilizando el asa de Driglasky para dispersar la
R
muestra. Las placas se colocaron en la estufa por 24 horas a 37C y luego se
FO
contabiliz las UFC, considerndose como CIM a la menor concentracin en la cual
IN
no se observaron UFC.
E
S
2.5 Anlisis estadstico e interpretacin de la informacin:
MA
TE
Los datos obtenidos fueron procesados de manera automatizada con el soporte del
paquete estadstico SPSS 15.0 y para analizar la informacin se construy tablas de

S
SI
frecuencias de entrada con sus valores absolutos. Para determinar el efecto inhibitorio
DE
de cada tipo de solucin se hizo un anlisis de varianza de un diseo completamente
aleatorizado, y a partir de este, se determin la conveniencia del uso de la prueba de

A
Duncan para comparaciones mltiples, ambos con un nivel de significancia del 95%.
IN
IC
2.6 tica:
OF
La investigacin se realiz considerando los principios de bioseguridad, prestando
atencin adecuada a factores que puedan daar el medio ambiente y se consider los
principios de la Declaracin de Helsinki en investigaciones in vitro.(40)

23
2.7 Diseo experimental
ACEITE ESENCIAL
44mg/ml 5% UFC
CA
n=13
TI
Halo de
MA
inhibicin
222mg/ml 25%
R
FO
UFC
n=13
IN
Halo de
443mg/ml 50%
E
inhibicin
S
MA
UFC
n=13
TE
Halo de
S
665mg/ml 75% inhibicin

SI
UFC
DE
n=13
Halo de
886mg/ml 100%
A
inhibicin
IN
UFC
IC
n=13
OF
Halo de
inhibicin
10mg/ml Clotrimazol 1% UFC

n=13
Halo de
24
inhibicin
EXTRACTO ETANLICO
50mg/ml 5% UFC
CA
n=13
TI
Halo de
MA
inhibicin
250mg/ml 25%
R
FO
UFC
n=13
IN
Halo de
500mg/ml 50%
E
inhibicin
S
MA
UFC
n=13
TE
750mg/ml 75% Halo de

S
inhibicin
SI
UFC
DE
n=13
A
Halo de
1000mg/m 100 inhibicin
IN
l %
IC
UFC
n=13
OF
Halo de
inhibicin
Solucin salina
UFC n=13
25
Halo de
inhibicin
III. RESULTADOS
Al analizar el efecto inhibitorio in vitro del aceite esencial y extracto etanlico del
CA
Cymbopogon citratus sobre Candida albicans, se presentan en la Tabla N1 los
TI
halos inhibitorios registrados en 13 repeticiones por cada una de las cinco
MA
concentraciones del extracto etanlico y el aceite esencial de C.citratus.
R
FO
En la Tabla N2 se muestra el anlisis de varianza de ambos grupos y se obtuvo
IN
como resultado que existe una diferencia estadstica altamente significativa del
E
dimetro del halo de inhibicin del crecimiento del C. albicans a las concentraciones
S
del extracto etanlico y aceite esencial de C. citratus aplicado.
MA
TE
En la Tabla N 3, se presenta los promedios del dimetro de halo de inhibicin de

S
crecimiento de C. albicans despus de la aplicacin de discos con extracto etanlico

SI
y aceite esencial de C.citratus a diferentes concentraciones, se realiz la Prueba de

DE
significancia de Duncan, que compar cada uno de los promedios de los halos,
demostrando que no existe diferencia significativa entre los dimetros promedios de

A
IN
los halos inhibitorios del extracto etanlico al 5 %, 25%, 50% y 75%; pero si existe
IC
diferencia significativa entre los dimetros promedios de los halos inhibitorios al

OF
5%,25%, 50% y 75% con 100%. En el grupo del aceite esencial no se encuentra
diferencia estadstica significativa entre las concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75% y
26
100%; encontrndose a su vez que no hay diferencia estadstica significativa con el
extracto etanlico al 100%. (p=0.05).
CA
En la Tabla N 4 se muestra las UFC registradas en las 13 repeticiones por cada
TI
concentracin de extracto etanlico y aceite esencial de C. citratus y el promedio de
MA
estas por concentracin.
R
FO
En la Tabla N 5, se presenta el anlisis de varianza, el cual determina que existe una
IN
diferencia estadstica altamente significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans
con el extracto etanlico y aceite esencial de C.citratus de acuerdo a la concentracin

E
S
aplicada. (p = 0.00).
MA
TE
En la Tabla N 6, se muestra los promedios del nmero de UFC de C. albicans
despus de la aplicacin del extracto etanlico y aceite esencial de C.citratus a cinco

S
SI
concentraciones cada uno; se realiz la Prueba de significancia de Duncan, que

DE
determin la existencia de grupos estadsticamente diferentes en cuanto a la actividad
inhibitoria del crecimiento de C. albicans: (p=0.05).

A
IN
IC
Existe diferencia significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans del extracto

OF
etanlico de C.citratus al 100% con el crecimiento de UFC del extracto etanlico a
5%, 25%, 50% y 75% de concentracin.
27
Existe diferencia significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans del aceite
esencial de C. citratus al 100%, 75% y 50% con el crecimiento de UFC del aceite
esencial al 25% y 5% de concentracin.
CA
TI
No hay diferencia estadstica significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans
MA
del extracto etanlico de C. citratus al 100% de concentracin con el crecimiento de
R
UFC del aceite esencial de C. citratus al 100%, 75% y 50%.
FO
IN
E
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
28
TABLA N 1: Dimetro de halo de inhibicin del aceite esencial y extracto
etanlico de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de
Candida albicans
CA
DIMETRO DEL HALO DE INHIBICIN (mm)
CONCENTRACIONES DE CONCENTRACIONES DE
TI
EXTRACTO ETANLICO DE ACEITE ESENCIAL DE
MA
N/C Cymbopogon citratus Cymbopogon citratus
R
5% 25% 50% 75% 100% 5% 25% 50% 75% 100% control
FO
1 6 7 9 9 40 40 40 40 40 40 0
IN
2 7 7 8 10 40 40 40 40 40 40 0
3 6 8 9 10 40E 40 40 40 40 40 0
4 7 7 8 10 40 40 40 40 40 40 0
S
5 6 7 8 10 40 40 40 40 40 40 0
MA
6 6 7 8 9 40 40 40 40 40 40 0
TE
7 6 7 8 10 40 40 40 40 40 40 0
8 6 8 8 10 40 40 40 40 40 40 0
S
9 6 7 8 10 40 40 40 40 40 40 0
SI
10 6 8 8 10 40 40 40 40 40 40 0
DE
11 6 7 9 10 40 40 40 40 40 40 0
12 6 7 8 9 40 40 40 40 40 40 0
A
13 6 8 9 10 40 40 40 40 40 40 0
IN
Prom
6.15 7.31 8.31 9.77 40* 40 40 40 40 40 0
IC
(mm.)
OF
* Alcanza nivel mximo en la evaluacin de todas las repeticiones.
Fuente: Datos obtenidos por la investigadora, ao 2013
N: nmero de repeticiones C: Cepa Candida albicans Control: alcohol 70 (etanol)

29
TABLA N 2: Anlisis de Varianza para evaluar los bloques (dimetros de halos
inhibitorios) y los tratamientos (actividad inhibitoria del extracto etanlico y
aceite esencial de Cymbopogon citratus)
CA
TI
MA
Origen de Grados Promedio Valor
las Suma de de de los crtico
R
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad para F
FO
Tratamiento 32271.38 9 3585.71 45110.54 0 1.96
Error 9.54 120 0.08
IN
Total 32280.92 129
E
S
MA

S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
30
TABLA N 3: Prueba de Duncan de comparacin del dimetro del halo de
inhibicin (mm) segn concentracin del extracto etanlico y del aceite esencial
de Cymbopogon citratus hierba luisa
CA
TI
MA
Concentraciones ni Grupos alfa = 0.05
1 2 3
R
E5% 13 6.15
FO
E25% 13 7.31
IN
E50% 13 8.31
13
E 9.77
E75%
S
E100% 13 40
MA
A5% 13 40
TE
A25% 13 40
S
A50% 13 40
SI
A75% 13 40
DE
A100% 13 40
A
IN

IC
OF
31
TABLA N 4: Efecto inhibitorio in vitro en UFC del extracto etanlico y del
aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre
una cepa de Candida albicans.
CA
TI
UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS DE Candida albicans
MA
CONCENTRACIONES DE CONCENTRACIONES DE
EXTRACTO ETANLICO DE ACEITE ESENCIAL DE
R
Cymbopogon citratus Cymbopogon citratus
FO
N/C 5% 25% 50% 75% 100% 5% 25% 50% 75% 100%
IN
1 16 10 14 12 0 2 0 0 0 0
2 8 12 12 10
E0 1 0 0 0 0
S
3 15 10 10 7 0 2 0 0 0 0
MA
4 10 10 11 10 0 0 0 0 0 0
5 16 14 14 8 0 2 1 0 0 0
TE
6 9 10 10 11 0 0 2 0 0 0
S
7 18 6 16 9 0 2 2 0 0 0
SI
8 14 10 9 10 0 0 0 0 0 0
DE
9 15 18 10 10 0 0 0 0 0 0
10 12 12 10 8 0 0 1 0 0 0
A
11 11 17 10 9 0 2 3 0 0 0
IN
12 14 16 10 10 0 1 1 0 0 0
IC
13 18 12 8 9 0 1 2 0 0 0
OF
Prom
UFC 13.54 12.08 11.08 9.46 0 1 0.92 0 0 0
32
TABLA N 5: Anlisis de Varianza para evaluar los bloques (UFC) y los
tratamientos (efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico y aceite esencial de
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans)
CA
TI
MA
Origen de Grados Promedio Valor
las Suma de de de los crtico
R
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad para F
FO
Tratamiento 4056.96 9 450.77 144.93 0.00 1.96
Error 373.23 120 3.11
IN
Total 4430.19 129
E
S
MA

S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
33
TABLA N 6: Prueba de Duncan de comparacin del efecto inhibitorio in vitro
en UFC segn concentracin del extracto etanlico y del aceite esencial de
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans.
CA
Concentraciones ni Grupos alfa = 0.05
TI
MA
1 2 3
E5% 13 13.5
R
E25% 13 12.1
FO
E50% 13 11.1
IN
E75% 13 9.5
E100% 13
E 0
S
A5% 13 1
MA
A25% 13 0.92
TE
A50% 13 0
S
A75% 13 0
SI
A100% 13 0
DE

A
IN
IC
OF
34
IV. DISCUSION
El tratamiento para la candidiasis constituye un reto en pacientes
inmunodeprimidos pues ha surgido resistencia a los azoles de manera gradual
durante terapias prolongadas y en la poblacin general, por el uso indiscriminado
CA
de los conocidos trifarmacos en cuyo composicin se encuentra antimicticos;
TI
siendo los mecanismos demostrados, cambios en la lanosterol demetilasa y en la
MA
D5-6 esterol desaturasa. Adems de la resistencia, la toxicidad heptica, las
R
interacciones farmacolgicas de antifngicos tradicionales, as como uso de
FO
drogas esteroides, cirugas y trasplantes que generan estados inmunodeficientes;
IN
est ocasionando fallas en la teraputica antimictica a diversos compuestos como
E
ketoconazol, fluconazol e incluso anfotericina B, lo que est fomentando la
S
bsqueda de nuevas alternativas entre productos naturales.(8,13,15)

MA
TE
Considerando que el Per presenta una gran variedad de plantas medicinales y

S
cuyo uso con fines curativos es una prctica ancestral, se ha motivado a

SI
profundizar en el estudio y conocimiento de las especies vegetales que tienen

DE
propiedades medicinales y desarrollar su experiencia en el empleo de las

A
sustancias que se extraen de ellas. La presente investigacin demostr el efecto

IN
inhibitorio in vitro del aceite esencial y extracto etanlico del Cymbopogon

IC
citratus frente a una cepa de Candida albicans .

OF
El aceite esencial de C. citratus gracias a su alta volatilidad y lipofilia puede
penetrar fcilmente y ejercer su efecto biolgico a nivel de la membrana celular,
donde altera su estructura provocando fugas y muerte celular, bloqueando
35
tambin la sntesis de membrana, inhibiendo la germinacin de esporas y la
respiracin celular. Existen varias investigaciones que avalan su eficacia como el
realizado por Irkin y col (2009) que utilizando el mtodo de difusin en disco
encontraron que 1ul/ml del aceite esencial de C. citratus tiene un halo de
CA
inhibicin de 15+ 2.1 mm para C. albicans.(18,19,36)
TI
MA
Taweechaisupapong y col (2012), investigaron el efecto antifngico in vitro del
R
aceite esencial de C.citratus contra C. albicans y C. krusei tanto en forma
FO
planctnica y biofilm, encontrando que posee actividad anti biopelcula, como
probable modulador de la colonizacin por cndida,(37)

IN
E
S
Al realizar la prueba de susceptibilidad con Difusin en discos se determin un

MA
promedio de halo inhibicin de 40mm a las cinco concentraciones de aceite

TE
esencial utilizados, similar efecto report Da Silva y col (2008) cuando analizaron
el efecto del aceite esencial en C.albicans. El efecto del aceite puede explicarse
S
SI
sobre la base de la composicin qumica que presenta, pues en l se encuentran

DE
altos niveles de monoterpenos oxigenados (78,2%) constituidos a su vez por
geranial (-citral) y neral (-citral). La accin del citral, mezcla de geranial y neral
A
IN
fueron estudiados por Moleyar y Narasimhan (1986) quienes encontraron una

IC
buena actividad sobre Aspergillus niger, Fusarium oxysporum y Penicillium

OF
digitatum. As tambin se determin que en la composicin de C.citratus hay
monoterpenos hidrocarburos (7.9%) como canfeno (1,5%) y limoneno (4,2%) que
poseen accin antimictica y se sugiere que lo hacen por difusin en la membrana
celular.(24,45,46,47)
36
Al evaluar la sensibilidad con el extracto etanlico de C. citratus se hall un
promedio del halo de inhibicin de 14.31mm, menor al del aceite; sin embargo,
conforme aumenta la concentracin, los halos de inhibicin son mayores, llegando
a tener efecto mximo al 100%, siendo segn esta prueba, la concentracin
CA
indicada para inhibir el crecimiento de C. albicans.
TI
MA
Orrego y Leyva (2008), Alvin (2012) y Montoya (2003) estudiaron al extracto
R
etanlico de C. citratus encontrando que los compuestos fenlicos mayoritarios y
FO
responsables de su actividad biolgica son: isoorientina, swertiajaponina e
IN
isoorientina 2-V-ramnsido. Los fenoles se caracterizan por su actividad biocida
ya que inducen una alteracin de la permeabilidad en la membrana citoplasmtica,

E
S
produciendo una progresiva salida de constituyentes intracelulares y con un

MA
aumento de su concentracin, provocan la lisis y destruccin microbiana.(31,32,44)

TE
Todas las concentraciones de aceite esencial utilizadas en el presente estudio

S
SI
tuvieron buen efecto inhibitorio pues creci menos de 30 UFC, siendo la actividad
DE
mayor a partir de la concentracin 50%; a partir del cual no se evidenci
crecimiento de UFC, considerndosele como la CIM. Adems, se determin que

A
IN
existe diferencia estadstica significativa entre la concentracin de 50% con las del
IC
5 % y 25%; demostrndose que el efecto inhibitorio vara de acuerdo a la

OF
concentracin aplicada. Con respecto al extracto etanlico, la concentracin
efectiva fue al 100% (1000mg/ml) mientras que las dems concentraciones, si
evidenciaron crecimiento del hongo, aunque disminuyen conforme aumenta la
37
concentracin. Adems todas estas presentaron diferencia estadstica significativa
entre ellas y con el extracto al 100%.
Considerando ambas pruebas, se demuestra que tanto aceite esencial como
CA
extracto etanlico son activos frente a C. albicans, siendo ms efectivo el aceite
TI
esencial, el cual desde una concentracin de 50% presenta buena actividad
MA
mientras que para el extracto etanlico se requiere usar una concentracin al
R
100%.
FO
IN
Los resultados obtenidos abre nuevas posibilidades en el campo de la
investigacin clnica como farmacolgica, constituyendo as una alternativa

E
S
natural, eficiente y de bajo costo para el tratamiento de infecciones oportunistas

MA
sobre todo en pacientes inmunodeficientes, considerndose la utilizacin del

TE
extracto etanlico como una buena alternativa a utilizar como antimictico tpico
en forma de solucin para infecciones mucocutneas en dermatologa, as como su

S
SI
uso por va oral, debindose demostrar su seguridad en seres humanos en

DE
posteriores estudios.
A
IN
IC
OF
38
V. CONCLUSIONES
Al analizar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico y aceite esencial de
Cymbopogon citratus se concluye que:
CA
La concentracin inhibitoria mnima del aceite esencial de Cymbopogon citratus
hierba luisa sobre Candida albicans es de 50% (443mg/ml)
TI
MA
A 100% (1000mg/ml) de concentracin del extracto etanlico de Cymbopogon
R
FO
citratus hierba luisa se inhibe el crecimiento de Candida albicans.
IN
El aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa tiene efecto inhibitorio in
E
vitro sobre Candida albicans, el cual es mayor cuando incrementa su
S
MA
concentracin.
TE
El extracto etanlico tiene menor efecto inhibitorio in vitro que el aceite esencial
S
de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre Candida albicans.

SI
DE
A
IN
IC
OF
39
VI. RECOMENDACIONES
Realizar estudios in vivo para valorar la efectividad y la toxicidad que puedan
proporcionar los componentes activos del aceite esencial y el extracto etanlico de
Cymbopogon citratus, as como la dosis teraputica para la poblacin humana.
CA
TI
Realizar otros estudios para ampliar el espectro de actividad antifngica y
MA
antibacteriana de Cymbopogon citratus tanto del aceite esencial como extracto
R
etanlico.
FO
IN
Realizar estudios in vitro e in vivo con el extracto acuoso de Cymbopogon citratus
E
para determinar su espectro de actividad, ya que es popularmente utilizado.
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
40
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana durante los primeros 6
meses de la terapia antirretroviral de gran actividad. Med Clin Barc [internet].
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47
CA
TI
R MA
ANEXOS
FO
IN
E
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
48
Preparacin de la muestra de Cymbopogon citratus (hierba luisa)
CA
Seleccin y lavado de hojas
TI
con agua corriente
R MA
FO
IN
E
S
MA
S TE
SI
DE
Se fraccion en trozos pequeos y se

conserv en bolsas de papel kraft
A
IN
IC
OF
49
Obtencin del
aceite esencial:
Destilacin por
arrastre de vapor
de agua
CA
TI
R MA
FO
IN
E
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
Obtencin del extracto etanlico

OF
Percolacin
50
Preparacin de cepa
de Candida albicans
CA
Agar Sabouraud
TI
R MA
FO
IN
E
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
Sembrado en Placas Petri

51
Determinacin del efecto inhibitorio (Prueba de Susceptibilidad por mtodo

de Difusin en Discos)
CA
TI
R MA
FO
IN
E
Embeber discos con cada concentracin
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
Colocar con aguja estril sobre cultivos de C.albicans en placas Petri
52
Comparacin de halos de inhibicin del crecimiento de C. albicans con

extracto etanlico y aceite esencial
CA
TI
R MA
FO
IN
Extracto etanlico 5% - Aceite esencial 5%
E
S
MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
Extracto etanlico 100% - Aceite esencial 100%
53
Determinacin de Concentracin inhibitoria Mnima (CIM)
CA
TI
R MA
FO
IN
E
S
Prueba de Dilucin en tubos

MA
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
Sembrar 0.1ml de solucin en cada uno de tubos en placas Petri
54
Placas Petri con 0 UFC de C. albicans con extracto etanlico al 100% y
aceite esencial al 50%
CA
TI
R MA
FO
IN
E
S
MA
Extracto etanlico 100%

UFC = 0
S TE
SI
DE
A
IN
IC
OF
Aceite esencial 50%

UFC= 0
55
ANEXO N1:
HOJA DE RECOLECCIN DE DATOS
Ttulo: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el
CA
albicans
Cepa: Candida albicans ATCC 10231
TI
MA
Medio de cultivo: Agar Sabouraud
Aceite esencial / Extracto etanlico de Cymbopogon citratus
R
FO
IN
CONCENTRACIN
E
5% 25% 50% 75% 100%
S
Medida 1 (mm)
MA
Medida 2 (mm)
TE
Medida 3 (mm)
Medida 4 (mm)
S
SI
Medida 5 (mm)
DE
Medida 6 (mm)
Medida 7(mm)
A
Medida 8 (mm)
IN
Medida 9 (mm)
IC
Medida 10(mm)
OF
Medida 11 (mm)
Medida 12 (mm)
Medida 13(mm)
56
HOJA DE RECOLECCIN DE DATOS
Ttulo: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el
albicans
CA
Cepa: Candida albicans ATCC 10231
TI
Medio de cultivo: Agar Sabouraud
MA
Aceite esencial /Extracto etanlico de Cymbopogon citratus
R
FO
CONCENTRACIN
5% 25% IN 50% 75% 100%

E
Medida 1 (UFC)
S
Medida 2 (UFC)
MA
Medida 3 (UFC)
TE
Medida 4 (UFC)
Medida 5 (UFC)
S
SI
Medida 6 (UFC)
DE
Medida 7(UFC)
Medida 8 (UFC)
A
Medida 9 (UFC)
IN
Medida 10(UFC)
IC
Medida 11 (UFC)
OF
Medida 12 (UFC)
Medida 13(UFC)
57
ANEXO N2
TABLA N7 Comparacin de los promedios de halos de inhibicin del
aceite esencial y el extracto etanlico de Cymbopogon citratus hierba
luisa, con el grupo control Clotrimazol solucin al 1%
CA
sobre una cepa de Candida albicans.
TI
R MA
Cymbopogon citratus hierba Grupo control
FO
luisa, positivo
Extracto
IN
Aceite
Clotrimazol
E
etanlico Esencial* solucin1%*
S
Media (mm) 14.31 40.00 40.00

MA
Desv.
TE
Estndar 15.82 0.00 0.00

S
SI
DE
*: Alcanza nivel mximo en la evaluacin de todas las repeticiones.

A
F = 151.3 p< 0.01

IN
IC

OF
58
ANEXO N3
TABLA N8: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro en UFC del
extracto etanlico y del aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa,
con el grupo control Clotrimazol solucin al 1% sobre una cepa de
CA
Candida albicans.
TI
R MA
Cymbopogon citratus hierba Grupo control
FO
luisa, positivo
Extracto
etanlico
IN
Aceite
Esencial* Clotrimazol sol. 1%*
E
Media
S
9.23 0.31 0.23

MA
Desv.
TE
5.38 0.73 0.44

Estndar
S
SI
DE
F= 35.25 p > 0.05

A
IN

IC
OF
59
ANEXO N4
EVALUACION DE LA TESIS
El Jurado deber:
CA
a. Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los
TI
siguientes items
MA
b. Anotar el calificativo final
R
FO
c. Firmar los tres miembros del jurado
IN
TESIS:.......................................................................................................................
E
....................................................................................................................................
S
MA
1. DE LAS GENERALIDADES :
TE
El Ttulo:...................................................................................................................
S
Tipo de Investigacin:..............................................................................................
SI
DE
A
2. DEL PLAN DE INVESTIGACIN :

IN
Antecedentes:............................................................................................................
IC
OF
Justificacin:.............................................................................................................
Problema:..................................................................................................................
Objetivos:..................................................................................................................
60
Hiptesis:...................................................................................................................
Diseo de Contrastacin:........................................................................................
Tamao Muestral:...................................................................................................
CA
Anlisis Estadstico:................................................................................................
TI
3. RESULTADOS:...................................................................................................
MA
4. DISCUSIN: ......................................................................................................
R
FO
5. CONCLUSIONES: ............................................................................................
IN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:............................................................
E
S
7. RESUMEN:.........................................................................................................
MA
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN: ..
TE
9. ORIGINALIDAD: ...............................................................................................
S
SI
10. SUSTENTACION
DE
10.1Formalidad:
A
.................................................................................................................
IN
10.2Exposicin:
IC
.................................................................................................................
OF
10.3Conocimiento del Tema
: ...............................................................................................................
61
CALIFICACIN:
CA
(Promedio de las 03 notas del Jurado)
TI
MA
JURADO: Nombre Cdigo del docente
R
FO
Firma
Presidente:
IN
Dr......................................................... ...
E
Grado Acadmico: ..
S
MA
TE
Secretario: Dr...................................................... ...

S
SI
Grado Acadmico: .
DE
A
Miembro: Dr. ....................................................

IN
IC
Grado Acadmico: .
OF
62
ANEXO N5
RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO
El Tesista deber responder en forma concreta a las observaciones del jurado a
CA
manuscrito en el espacio correspondiente:
TI
a. Fundamentando su discrepancia
MA
b. Si est de acuerdo con la observacin tambin registrarla.
R
FO
c. Firmar
IN
TESIS:......................................................................................................................
E
....................................................................................................................................
S
MA
3. DE LAS GENERALIDADES :
TE
El Ttulo:..................................................................................................................
S
Tipo de Investigacin:..............................................................................................
SI
DE
4. DEL PLAN DE INVESTIGACIN :

A
Antecedentes:...........................................................................................................
IN
Justificacin:............................................................................................................
IC
OF
Problema:.................................................................................................................
Objetivos:................................................................................................................
Hiptesis:..................................................................................................................
63
Diseo de Contrastacin:.......................................................................................
Tamao Muestral:...................................................................................................
Anlisis Estadstico:................................................................................................
CA
3. RESULTADOS:...................................................................................................
TI
4. DISCUSIN: ......................................................................................................
MA
5. CONCLUSIONES: ............................................................................................
R
FO
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:............................................................
IN
7. RESUMEN:..........................................................................................................
E
S
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN: .........................................

MA
9. ORIGINALIDAD: ..............................................................................................
TE
10. SUSTENTACION
S
SI
10.1 Formalidad............................................................................................
DE
10.2 Exposicin:.............................................................................................
A
10.3 Conocimiento del Tema:......................................................................

IN
IC
OF
.......................................................
Nombre
Firma
64

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

UNA CEPA DE CANDIDA ALBICANS

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

AGUILAR MOSCOSO, LUCERO AGUSTINA

MEJA DELGADO, ELVA

dieron con su ejemplo valiosas enseanzas.

2.3 Definicin de variables operacionales.....15

2.4 Diseo procedimental......16

2.5 Anlisis estadstico..........23

2.7 Diseo experimental.....24

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS..41

significativa en este grupo. Con respecto a la Concentracin Inhibitoria Mnima

(CIM), se encontr disminucin de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

conforme aumenta la concentracin. En el aceite esencial, a partir del 50% no se

contabiliz UFC; mientras que el extracto etanlico inhibi a Candida albicans a la

concentracin de 100%. Se concluye, que el extracto etanlico tiene menor efecto

aceite es 50% (443mg/ml) y el extracto etanlico inhibe a Candida albicans slo al

Palabras clave: Cymbopogon citratus, Hierba luisa, Candida albicans, Halo de

inhibicin, Concentracin Mnima Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia

inhibited Candida albicans at a concentration of 100%. It is

Candida albicans only 100% (1000 mg / ml)

Keywords: Cymbopogon citratus, lemongrass, Candida albicans, Halo of inhibition,

Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Colony Forming Units (CFU)

Las infecciones oportunistas continan siendo una causa mayor de morbilidad y

como alteracin en la fagocitosis (lupus eritematoso sistmico, diabetes mellitus),

granulocitopenia (citotxicos, radioterapia), inmunodepresin consecutiva al uso de

glucocorticoides, antibioticoterapia sistmica y quimioterapia, en especial en

receptores de trasplantes; adems de anomalas en la inmunidad humoral (leucemia,

Se conoce que las infecciones oportunistas son procesos infecciosos invasivos

producidos por grmenes habitualmente no patgenos que se manifiestan en estados

de baja inmunidad; siendo los ms frecuentes Pneumocystis jiroveci, Aspergillus spp,

Candida spp. Este ltimo, es la causa ms comn de infecciones fngicas en

pacientes inmunodeficientes, provocando infecciones que van desde trastornos

mucocutneos hasta enfermedades invasivas. Es frecuente tambin en

inmunocompetentes en edades extremas de la vida como lactantes y ancianos, adems

forman parte de la flora normal, habitando en el tubo digestivo, aparato reproductor

El tratamiento convencional de la candidiasis se basa en uso de agentes antifngicos

inhibiendo la desmetilasa de 14-alfa-esterol, enzima del citocromo P450; impidiendo

la conversin del lanosterol a ergosterol, un componente vital de la membrana celular

de levaduras con susceptibilidad disminuida o resistente a los antifngicos. La

resistencia puede ser clnica o in vitro, siendo la primera, consecuencia fundamental

frmacos o al severo grado de inmunodepresin del paciente. La resistencia in vitro

Adems de la resistencia, las interacciones y la toxicidad, especialmente heptica

estn ocasionando fallas en la teraputica antimictica, lo que est fomentado la

un considerable inters en el uso de extractos alcohlicos y aceites esenciales de

plantas aromticas por su potente actividad antimicrobiana y antifngica.(15,16,17)

perenne con hojas aromticas que alcanzan de 1 a 2 m de alto, originaria de la India,

antiespasmdico, antinflamatorio y analgsico.(18,19)

llegndose a la conclusin de que cosechar cuatro veces en el ao da un mayor

rendimiento en masa vegetal con buenos contenidos de aceite esencial y de alta

100g de materia vegetal fresca.(19,20,21,22)

La calidad del aceite est en relacin tambin a su composicin, destacando los

monoterpenos oxigenados, siendo citral el de mayor cantidad (65-85%); a stos se les

atribuye el efecto antibacteriano y antifngico contra dermatofitos y levaduras, el que

ha sido estudiado por diversos investigadores.

extracto de plantas en Colombia, evaluando inhibicin de formacin de tubos

germinales en comparacin a azoles; adems de citotoxicidad. La mayor actividad se

difusin, demostrndose la potente accin del aceite contra levaduras especialmente

Hammer col (1999) estudiaron a 52 plantas extrayendo aceites esenciales y extractos

y evaluando su actividad contra bacterias y hongos entre ellas aeromonas y C.

albicans, utilizando mtodo de microdilucin; determinando que el aceite esencial de