Marco terico.

Toda actividad vital, y de hecho la vida misma, depende de la

capacidad de las membranas celulares de selectivamente permitir y
promover la transferencia de algunas sustancias dentro o fuera as
previniendo que otras sustancias entren o dejen la clula.
Las molculas de agua pasan a travs de las membranas celulares
por osmosis con relativa facilidad. Los animales mantienen un perfil
favorable de solutos y soluciones en sus lquidos corporales
intracelulares y extracelulares sobre todo por medio de los tejidos
epiteliales que forman la barrera contra el medio externo. Cada grupo
de animales utiliza diferentes combinaciones de tejidos para controlar
el equilibrio inico e hdrico.
El equilibrio inico e hdrico es regulado por los tejidos renales (tejido
del rin o de tipo renal) al igual que por los tejidos epiteliales
extrarrenales, como las branquias, la piel y la mucosa digestiva, los
organismos tienen que enfrentar tres problemas; regulacin osmtica,
inica y eliminacin de nitrgeno, en animales simples se realiza
principalmente a nivel celular como las esponjas, pero en animales
complejos como los ostectios la regulacin es a travs de tejidos
especializados. El agua dulce es pobre en iones y los animales deben
obtener los iones esenciales del agua y alimentos, mientras hacen
frente a una entrada constante de agua. La mayora de los animales
vertebrados son osmorreguladores y mantienen una osmolaridad muy
por debajo que la del agua marina circundante. Los vertebrados e
invertebrados de agua dulce son osmorreguladores y mantienen la
presin osmtica interna muy por encima de la del agua. La
regulacin de los perfiles inicos de los compartimentos de lquido
extracelular disminuye la carga depositada sobre cada una de las
clulas. (1)

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Resultados:

ERITROCITOS DE MAMIFERO (ratn, izquierda) Y PEZ

NaCl: 150 mOsM 0.6% NaCl 200 mOsM

Normal
0.9% NaCl 300 mOsM

Normal/Hem

Lisis Normal/Hem
NaCl: 150 mOsM

Normal Normal
NaCl: 300 mOsM
NaCl: 300 mOsM

Crenacin Normal
NaCl: 600 mOsM

NaCl: 600 mOsM

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Resultados:
ERITROCITOS DE MAMFERO (humano, izquierda) Y AVE (derecha)

NaCl: 150 mOsM0.9% NaCl 300 mOsM

NaCl: 150 mOsM 0.9% NaCl 300 mOsM

Normal Normal

Hemlisis Normal/Heml

Normal Normal
NaCl: 300 mOsM

NaCl: 300 mOsM

Crenacin Disminucin
en volumen
NaCl: 600 mOsM

NaCl: 600 mOsM

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Resultados:
ERITROCITOS DE MAMFERO (humano, izquierda) Y ANFIBIO (sapo,

NaCl: 150 mOsM0.9% NaCl 300 mOsM

NaCl: 150 mOsM 0.9% NaCl 300 mOsM

Normal Normal

Hemlisis Normal/Heml

Normal Normal
NaCl: 300 mOsM

NaCl: 300 mOsM

Crenacin Disminucin
en volumen
NaCl: 600 mOsM

NaCl: 600 mOsM

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 Tabla de resultados obtenidos al enfrentar eritrocitos de
humano, ratn, ave, anfibio y pez (dulciacucola) a diferentes
concentraciones en sales de NaCl

Concentra Mamfero Pez

cin de
Anfibio Ave (dulciacucol
NaCl
Humano Ratn a)
(m OsM)
Hemolisis/No Hemli Normal/Hem Normal/Hem Norm/Heml
150
rmal sis lisis lisis isis
Normal/Crena Normal/Cren
300 Normal Normal Normal
cin acin
Crenaci Disminucin
600 Crenacin Crenacin Normal
n en volumen

*0.9% Normal Normal - Normal -

Norm/Heml
*0.6% - - Normal -
isis
*0.9% y *0.6% concentracin en porcentaje equivalente a 3oo mOsM y
2oo mOsM respectivamente.

Discusin de resultados.
En cuanto a los resultados de mamferos en este caso ratn se
pueden evidenciar diferentes modificaciones observables al
microscopio sobre todo a nivel del volumen y forma celular, en un
primer caso las paredes de la membrana sufren deformaciones
dndole a la clula un aspecto irregular esto ocurre cuando se somete
a medios hipertnicos en este caso a 1,8% NaCl 600 mOsM, las
clulas pierden su forma normal bicncava, sufriendo colapso (que
conduce a crenacin) debido a la eflujo osmtica rpida de agua (1).
Con respecto al eritrocito mamfero una solucin de NaCl al
0,9% 300 mOsM se dice que es isotnica: cuando los glbulos
residen en un medio tal, el intracelular y fluidos extracelulares estn
en equilibrio osmtico a travs de la membrana celular, y no hay
afluencia neta o flujo de salida de agua. (1) Esto se evidencia al
microscopio pues se observan clulas sin ninguna variacin en su
forma bicncava lo que muestra que no hubo ingreso de agua en su
interior.
Por otro lado, en un hipotnico medio ambiente por ejemplo,
0,45% de NaCl 150 mOsM o agua destilada), se produce una
afluencia de agua: las clulas se hinchan, se interrumpe la integridad
de sus membranas, lo que permite el escape de hemoglobina
(hemlisis) que se disuelve en el medio externo evidencindose en la
imagen clulas con un aspecto hinchado y esfrico y otras lisadas
perdiendo forma regular.
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 Un aspecto interesante en los resultados es la variacin de
resultados dentro de un mismo campo visual con las mismas
condiciones de tiempo y concentracin de sales; es decir que los
eritrocitos muestran por ejemplo, a condiciones de 600 mOsM sufren
crenacin en su mayora, pero no todos, lo mismo ocurre en las otras
condiciones de concentracin, esto se podra deberse a que
susceptibilidad a la hemlisis o crenacin de los eritrocitos no es
uniforme , y el nmero de clulas que experimentan hemlisis o
crenacin depende del grado de concentracin del medio
extracelular.(1)
En cuanto al tiempo de hemolisis un estudio revela que la
hemlisis post hipertnico es proporcional tanto a la duracin de la
exposicin a la hipertonicidad y a la concentracin hipertnica, en
este caso en un primer paso se aument la concentracin de medio
intracelular para ampliar la variacin de diferencias de concentracin
al enfrentar al eritrocito humano a una concentracin isotnica y
hacer ms evidente los resultados (2), en tanto, es de esperar que al
disminuir las concentraciones disueltas de sales en el medio externo
encontremos un rango de tiempo de hemolisis cada vez ms corto, ya
que a clula se encuentra cada vez ms en condiciones estresantes
haciendo corto el tiempo de supervivencia.
Con respecto a los peces de agua dulce se debe de tener
presente ciertos aspectos; debido a que las clulas animales no
pueden bombear agua de forma
activa. La regulacin osmtica requiere el movimiento de solutos a
travs de las membranas para alterar as los gradientes osmticos,
tambin se debe de considerar regulacin inica controla la
composicin inica de los lquidos corporales a travs de iones que
constituyen solutos importantes y por consiguiente son relevantes en
las estrategias osmorreguladoras. (3) por lo tanto, las membranas
juegan un papel muy importante en la regulacin del gradiente
osmtico por tal motivo es necesario hacer una anlisis a nivel
molecular para observar su influencia frente a las variaciones de
concentracin de solutos, adems para este caso tomar en
consideracin los tipos de solutos utilizados ( iones de Cl- y Na+) y su
afinidad por los medios intracelular o extracelular, y por ltimo se
debe de tener en cuenta en tipo celular utilizadas en la prueba
(eritrocitos), no se encuentran en un ambiente natural (in vivo), por lo
tanto sern ms susceptibles a cambios en su medio.
Los animales acuticos especialmente los de agua dulce deben
lidiar con concentraciones ambientales de solutos muy bajas (<10
mOsM), para esto adoptan estrategias como la capacidad de
osmorregulacin e ionorregulacin, para mantener concentraciones
superiores en el ambiente interno, como en los ostectios con una

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osmoralidad de plasma aproximada de 350 mOsM, siendo
hiperosmotico a su medio externo. (3)
Como las clulas no se encuentran protegidas por tejidos
especializados en un organismo que puedan regular su ambiente, lo
que se analiza aqu es capacidad netamente celular para la
ionorregulacin y osmorregulacin.
Teniendo en cuenta que uno de los solutos utilizados fue el
sodio, se debe de analizar las molculas que participan en este
mecanismo de intercambio, sin dejar de lado la influencia de potasio
como complemento intercambiador.
Los estudios realizados con la bomba Na + K+ ATPasa sealan
que la naturaleza general del sitio activo de la enzima es conservativa
en todo el reino animal. Sin embargo, la afinidad de la enzima por el
sustrato (Km) parece diferir entre los organismos dependiendo del
origen de las especies y del sistema de transporte. (4) Entonces se
puede observar la gran influencia que ejerce la afinidad enzimtica de
las ATPasas.
Existe una clara correlacin entre la afinidad de la enzima y la
concentracin de Na+ en el medio, por esta razn la baja afinidad del
sistema de transporte de Na+ en organismos marinos est
relacionado con la alta salinidad ambiental en la que ellos viven, y de
igual manera la alta afinidad de la enzima por el sustrato es
observado en organismos de agua dulce en donde la baja
concentracin de Na+ como determinante de la funcin cataltica de
la ATPasa (4).
La fragilidad osmtica del eritrocito no es ms que un concepto
que refleja la susceptibilidad de los glbulos rojos para hemolizarse,
cuando son expuestos a soluciones salinas de tipo hipotnicas. Los
eritrocitos de distintas especies de animales, presentan distintas
fragilidades (5).
Los eritrocitos de humanos pueden ser colocados en soluciones
salinas al 0,6% sin que lleguen a hemolizarse. La clula aumenta de
volumen, pero la membrana celular no llega a romperse y por lo tanto
no habr hemlisis. La hemlisis suele comenzar con soluciones de
cloruro de sodio comprendidas entre 0,42% y 0,48% 150mOsM (6).
Esto explica los resultados obtenidos, donde se observa a una
concentracin de 150mOsM (medio hipotnico), clulas hinchadas y
algunas hemolizadas. La hemlisis es casi total entre soluciones de
0,32% y 0,38%.
Eritrocitos colocados en una solucin de NaCl al 0,9% 300
mOsM no sufrir cambios en su volumen celular, ya que no hay
gradiente osmtico entre la solucin y el contenido intracelular. As, la
solucin de NaCl al 0,9% es isotnica respecto al contenido
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intracelular, se observa los eritrocitos en su forma natural, bicncava
anucleada.
Por otro lado, la crenacin es el fenmeno donde la clula se
somete a una solucin hipertnica (600mOsM). Esta, al estar en una
solucin con gran cantidad de soluto, tiende a liberar su agua y la
destruccin de la clula se produce por deshidratacin. Es por ello
que se observan clulas constreidas (7).
Respecto a los resultados obtenidos en la muestra de sangre de
las aves a 0.9%, se observa que los eritrocitos aviares maduros son
ovalados, nucleados y de mayor tamao que los mamferos, esto les
permite transportar mayor capacidad de oxgeno que interacta con
el sistema respiratorio aviar, alta eficiencia de intercambio.
Los glbulos rojos de pollo tienen mayor capacidad para
soportar el estrs causado por el ambiente hipotnico antes de que
las clulas experimentaran hemlisis total (8). Es por ello que en un
medio de 150mOsM se observan clulas normales en mayor cantidad
en comparacin con la del mamfero presentando mayor resistencia a
lisarse, otras hinchadas (aumento en volumen) y algunas lisadas, en
menor cantidad.
En un medio hepertnico de 600mOsm las clulas del ave se
observan ovaladas, esto debido a la deshidratacin que presentan. En
comparacin con los eritrocitos humanos no se observan clulas
constreidas, solo una disminucin en el volumen celular. Este es
explicado por el gran volumen que presenta.
En lo que respecta a anfibios, se puede esperar que la fragilidad
osmtica de eritrocitos debera ser ms bajo en estos animales
debido a que son acuticos y sus clulas rojas sanguneas podran
estar ms expuestos a soluciones hipotnicas (9). De hecho, la mayor
resistencia osmtica en eritrocitos se encontr en una rana (Rana
catesbeiana) seguido por una salamandra tigre (Ambystoma
tigrinum).
La exposicin de los eritrocitos a mayor gradiente osmtica se
da con mucha ms probabilidad en vertebrados ectotrmicos
acuticos o semiacuticos, tales como los anfibios y algunos reptiles
que pasan el invierno sumergidos en el agua, que en vertebrados
endotrmicos debido a la absorcin de agua por medio de la piel.
Muchos anfibios tienen una piel que es altamente permeable y
absorben el agua directamente de su piel por medio de manchas
plvicas (10).

Conclusiones:

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 Finalmente se puede concluir que, debido a esta afinidad de las
ATPasas por las sales de sodio en caso de peces de agua dulce y por
tanto a sus clulas, puedes tener ms tolerancia a cambios de
concentracin de sodio permitiendo soportar mayores
concentraciones de sales de sodio por su alta afinidad por estar
adaptados a captarlos ms eficientemente en comparacin con
mamferos, pero esto tambin puede tener cierta desventaja por
ejemplo a enfrentarlo a 200 mOsM o a 300 mOsM se observa que las
celular empiezan a lisarse esto puede explicarse debido a que al
absorber Na+ crean una mayor diferencia de concentracin
intracelular y extracelular, lo que concuerda con los resultados pues
se observa que a 600 mOsM an se mantiene integral sin sufrir
crenacin, y a la vez en caso de mamfero (ratn) se puede observar
que a dicha concentracin sufre crenacin lo que muestra la baja
afinidad de sus ATPasa por sales de Na+, lo cual constituye la
diferencia ms importante encontrada al comparar estos dos
organismos.
Los glbulos rojos nucleados tienen menor fragilidad osmtica
en comparacin con los glbulos rojos no nucleados. Como la adicin,
la vida y el tamao del eritrocito podran desempear un papel
importante en la fragilidad osmtica de los glbulos rojos. (11)
El volumen de eritrocitos desempea un papel significativo en la
resistencia osmtica de los eritrocitos.

Referencias:
1. Red cell fragility - Osmotic hemolysis [Internet].
Medicine.mcgill.ca. 2017 [cited 15 April 2017]. Available from:
https://www.medicine.mcgill.ca/physio/vlab/bloodlab/eryfrag1_n.
htm
2. Zade-Oppen A. Posthypertonic Hemolysis in Sodium Chloride
Systems. Acta Physiologica Scandinavica. 1968; 73(3):341-364.
3. Moyes C, Schulte P. Principios de fisiologa animal. 1st ed.
Madrid: Pearson / Addison Wesley; 2007.
4. Pascual Jimnez C. Adaptaciones fisiolgicas de los animales
acuticos (principalmente los peces y crustceos) frente a los
estresores fsicos, qumicos, geolgicos y biolgicos en sistemas
marinos y dulceacucolas.
5. Ganong, W. Fisiologa Mdica. XVII Edicin en espaol. Editorial
Manual Moderno. Captulo 1. 2000.

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6. Best-Taylor. Fisiologa Mdica. XIII Edicin. Editorial Interamericana.
Captulos 1 al 4. Pg. 15-72. 2003.
7. Kirk, K. Membran transport in the Malaria-infected erithrocyte. Review.
Physiological Review. Vol. 81 (2): 495-529. 2001.
8. Comparison of erythrocyte osmotic fragility among amphibians,
reptiles, birds and mammals. KEVIN J. ALDRICH, DAVID K.
SAUNDERS, LYNNETTE M. SIEVERT AND GREG SIEVERT
9. HEMOLYSIS OF THE ERYTHROCYTES OF AMPHIBIA HARRY A.
CHARIPPER From the Department of Biology, New York University
10.ENERGY FLOW IN BIOLOGICAL SYSTEMS. Available from:
http://www.acad.carleton.edu/curricular/BIOL/classes/bio126/Do
cuments/Lab_4.pdf
11.Kevin J. A., David K. S., Lynette M. S., Greg S.(2006) Comparison of
erythrocyte osmotic fragility among amphibians, reptiles, birds and
mammals. Transactions of the Kansas Academy of Science,
109(3):149-158.

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