FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

MICROBIOLOGA AGRCOLA

CURSADO 2017

INFORME DE TRABAJO PRCTICO N 2:Crecimiento

microbiano

COMISIN N 1:
Benedetti Laureano
Gonzlez Mercedes
Pilatti Susana
 Microbiologa Agrcola 2017
Comisin 1

INTRODUCCIN
Las poblaciones microbianas exponen un patrn de crecimiento cuando son inoculados
en un medio de cultivo, como el agar nutritivo. Este patrn est divido en 4 fases:
Fase lag o de adaptacin o latencia: Cuando las clulas son transferidas de un medio a
otro, no hay inicialmente un incremento en su cantidad. Durante esta fase los
microorganismos se toman un tiempo para adaptarse a su nuevo ambiente fisicoqumico
sintetizando nuevas enzimas o componentes estructurales.
Fase Exponencial: En este punto las clulas se reproducen sin limitacin de sustancias
nutritivas a velocidad mxima y alteran el medio constantemente tomando los sustratos y
excretando los productos metabolizados. El crecimiento permanece constante durante
esta fase. La velocidad de crecimiento es independiente de la concentracin de sustrato
mientras exista sustrato en el medio.
Fase estacionaria: ocurre cuando se agota una sustancia nutritiva y el sustrato se ha
metabolizado, cuando se han formado sustancias txicas o ha ocurrido un cambio de
condiciones como pH, temperatura y concentracin de oxgeno disuelto. El crecimiento
celular se detiene y, en el caso en el que aun pueda estar ocurriendo crecimiento, este se
contrarresta por la rapidez de muerte o lisis celular.
Fase de muerte: En esta fase la reserva de energa de las clulas se ha acabado,
debido a condiciones de inanicin o como consecuencia del metabolismo de
mantenimiento de algunas clulas.

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Comisin 1

Saccharomyces cerevisiae es una levadura aerbica facultativa. La respiracin celular

siempre es ms eficaz en la produccin de ATP que la fermentacin, por lo que se obtiene
un mayor rendimiento de biomasa en aerobiosis que en anaerobiosis.
Este microorganismo es capaz de asimilar una gran variedad de monosacridos. Tambin
puede hidrolizar y consumir algunos carbohidratos mayores, como la sacarosa, maltosa,
rafinosa, maltotriosa y pectina, pero carece de las enzimas necesarias para utilizar la
lactosa, la glucosa y el almidn.
Adems de la fuente de carbono, la levadura requiere que el medio de cultivo tenga
fuentes apropiadas y suficientes de otros macronutrientes: N, O, H, S y P; de
micronutrientes: Na, K, Ca, Mg, Mn y Fe; de elementos traza y de vitaminas. Se ha
observado un mejor aprovechamiento del nitrgeno cuando sus fuentes son aminocidos
libres o pptidos pequeos, en comparacin con las protenas, porque las proteasas de la
levadura tienen actividad limitada.
La velocidad de consumo de sustrato limitante (fuente de carbono) est ligada
directamente a la velocidad de crecimiento de la levadura. Al entrar en la clula, el
sustrato tiene tres destinos: para funciones de mantenimiento, para crecimiento
microbiano y para la formacin de productos excretados.

OBJETIVO
El objetivo principal de cada metodologa de trabajo es el de evaluar el crecimiento de
diferentes cultivos microbianos mediante la confeccin y el anlisis de curvas de
crecimiento y familiarizarse con los principales procedimientos para su evaluacin.

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Comisin 1

METODOLOGA DE TRABAJO

PROBLEMAS

1) Cultivo por lote, discontinuo o batch

En este mtodo de cultivo se realiza un agregado de nutrientes, en un
determinado momento, para obtener una produccin mayor de clulas
bacterianas. En dicho mtodo las condiciones qumicas varan constantemente en
el tiempo.

CRECIMIENTO DEL CULTIVO BACTERIANO A

ABS. ABS.
TIEMPO DILUCION ABS. 1 ABS. 2
PROMEDIO FINAL
0 14 0,53 0,515 0,5225 2,09
1,2 14 0,818 0,837 0,8275 3,31
2,5 18 1,022 1,201 1,1115 8,892
5 120 0,838 0,998 0,918 18,36
7,5 140 0,932 0,957 0,9225 36,9
9 140 1,18 0,931 1,0555 42,22
11,5 1100 0,302 0,285 0,2935 29,35
12,5 1100 0,321 0,391 0,356 35,6
14,5 1100 0,334 0,354 0,344 34,4
18 1100 0,301 0,301 0,301 30,1
22 1100 0,301 0,289 0,295 29,5

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Comisin 1

Donde:

ABS. PROMEDIO: se calcula realizando un promedio entre ABS.1 y ABS.2

ABS. FINAL: una vez obtenido la ABS. PROMEDIO se multiplica por la
DILUCION para obtener el valor real de absorbancia.

45
40
35
Absorbancia (nm)

30
25
20
15
10
5
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tiempo (horas)

2) Si se utiliza un cultivo continuo o quimiostato, se mantiene el

crecimiento bacteriano en la fase de crecimiento exponencial.
Se busca mantener un mismo volumen aadiendo medio fresco a velocidad
constante, extrayendo simultneamente medio utilizado y clulas vivas. Se debe
mantener un equilibrio entre ambos procesos para evitar el lavado por exceso de
flujo o la muerte bacteriana por inanicin si se disminuye la velocidad del
mismo.Por lo tanto las curvas entre un mtodo continuo y uno discontinuo son
diferentes.

QUIMIOSTATO

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Comisin 1

TRABAJO DE LABORATORIO

UFC(Unidades Formadoras de Colonia)/ml

TRATAMIENTO COMISIN M1 M2 M3 M4 M5 M6
9 40 110 3800 8100 mnpc mnpc
AERBICO (con 3 150 90 7700 26400 mnpc mnpc
agitacin) 8 0 0 5800 15100 mnpc mnpc
PROMEDIO 95 100 5767 16533 mnpc mnpc
7 150 130 9000 mnpc mnpc mnpc
AERBICO (con 4 60 120 12500 31500 mnpc mnpc
agitacin) CON
5 70 80 2800 2905 298000 1280000
CILOHEXIMIDA
PROMEDIO 93 110 8100 17203 298000 1280000
2 1150 0 6300 0 28000 4120000
ANAERBICO (sin 1 20 0 1000 100 97000 1984000
agitacin) 6 0 0 0 0 0 0
PROMEDIO 585 0 3650 100 62500 3052000

ABSORBANCIA
TRATAMIENTO COMISIN M1 M2 M3 M4 M5 M6
9 0,217 0,229 0,242 0,225 0,800 0,818
AERBICO (con 3 0,258 0,277 0,272 0,298 0,314 0,898
agitacin) 8 0,384 0,408 0,398 0,379 0,943 0,642
PROMEDIO 0,286 0,305 0,304 0,301 0,686 0,786
7 0,405 0,307 0,705 0,659 0,741 0,685
AERBICO (con 4 0,316 0,355 0,803 0,744 0,994 0,922
agitacin) CON
5 0,313 0,295 0,279 0,300 0,825 0,844
CILOHEXIMIDA
PROMEDIO 0,345 0,319 0,596 0,568 0,853 0,817
2 0,909 0,872 0,873 0,884 0,997 3,516
ANAERBICO (sin 1 0,202 O,169 0,165 0,183 0,519 0,743
agitacin) 6 0,198 0,182 sin muestra sin muestra 0,340 0,358
PROMEDIO 0,200 0,176 0,165 0,183 0,430 0,551

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Comisin 1

TRATAMIENTO M1 M2 M3 M4 M5 M6
AERBICO (con UFC /ml 95 100 5767 16533 mnpc mnpc
agitacin) ABSORBANCIA 0,286 0,305 0,304 0,301 0,686 0,786

18000 0.900

16000 0.800
14000
0.700
12000
0.600
10000

8000 0.500 UFC /ml

6000 0.400 ABSORBANCIA

4000
0.300
2000
0.200
0
0 1 2 3 4 5 6 7 0.100
-2000

-4000 0.000

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Comisin 1

TRATAMIENTO M1 M2 M3 M4 M5 M6
AERBICO (con UFC /ml 93 110 8100 17203 298000 1280000
agitacin) CON
CILOHEXIMIDA ABSORBANCIA 0,345 0,319 0,596 0,568 0,853 0,817

1400000 1.000

0.900
1200000
0.800
1000000
0.700
800000
0.600
UFC /ml
600000 0.500
ABSORBANCIA
0.400
400000
0.300
200000
0.200
0
0.100
0 1 2 3 4 5 6 7
-200000 0.000

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Comisin 1

TRATAMIENTO M1 M2 M3 M4 M5 M6
ANAERBICO (sin UFC /ml 585 0 3650 100 62500 3052000
agitacin) ABSORBANCIA 0,200 0,176 0,165 0,183 0,430 0,551

3500000 0.600

3000000
0.500
2500000
0.400
2000000

UFC /ml
1500000 0.300
ABSORBANCIA

1000000
0.200
500000
0.100
0
0 1 2 3 4 5 6 7
-500000 0.000

MARTES MIERCOLES JUEVES

10:00 15:00 10:00 15:00 10:00 15:00

M1 M2 M3 M4 M5 M6
TIEMPO EN HORAS
0 5 24 29 48 53
ACUMULADAS

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Comisin 1

DISCUSIN Y CONCLUSIN

En cuanto a las tcnicas implementadas se dice que tanto las realizadas con el fin de la
incubacin, para hacer recuento de viables (UFC) y el recuento directo por turbidimetra,
presentaron complicaciones en cuanto al uso de elementos y respecto a los resultados
expuestos en los diferentes grupos.

Al medir con el espectrofotmetro las muestras de la comisin 1, se pudo observar una

disminucin de la absorbancia (se valora el total entre organismos vivos y muertos) entre
la primera y la segunda. No se puede explicar porqu hubo una disminucin de
organismos, debido a que si estos mueren igual deberan verse reflejados en los
resultados de la absorbancia. Sin embargo se podra atribuir a resultados imperfectos o
mediciones incorrectas. A partir de la segunda muestra se puede considerar que los
organismos no disminuyeron y comenzaron a multiplicarse, alcanzando la fase
exponencial a partir de la muestra 4 a la 6. Si hubiera ms muestras y ms mediciones de
absorbancia de ellas, se podra haber determinado la finalizacin de la fase exponencial y
el comienzo de la fase estacionaria.

En cuanto al conteo de unidades formadoras de colonia, en la comisin 1, se pudo

observar en las cajas de Petri aislamientos deficientes, ya sea por contaminacin o por
muy poco o nulo crecimiento de colonias de las bacterias en estudio. En las ltimas dos
cajas de Petri, con diluciones del orden 1/100, se observ un mejor desarrollo de las
colonias respecto a las anteriores, teniendo en el ltimo cultivo un exceso de poblacin,
que podra ser atribuido a una incorrecta dilucin, pero que concuerda con el crecimiento
reflejado en el resultado de la absorbancia de la muestra 6.

Respecto al crecimiento de la levadura en los 3 distintos tratamientos se puede

determinar:
o En el tratamiento aerbico la fase exponencial comenz a partir aproximadamente el
da mircoles (segundo da de incubacin) a la tarde.
o En el tratamiento aerbico con cicloheximida, la fase exponencial se presenta en dos
momentos de la incubacin, intercalados con dos mesetas con una leve pendiente
negativa. A partir de la segunda muestra se observa el comienzo de la fase
exponencial y luego se repite en la muestra nmero 4. Las mesetas se presentan entre
las muestras 1 y 2, 3 y 4, y 5 y 6.
o En el tratamiento anaerbico (sin agitacin), la fase exponencial comienza el da
mircoles a la tarde al igual que en el tratamiento aerbico sin cicloheximida.

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Comisin 1

Vale aclarar que para el anlisis se tuvo en cuenta los resultados de absorbancia y no los
de las unidades formadoras de colonia, al menos en los primeros dos tratamientos, ya
que se observaron que los resultados no fueron aceptables, debido a falta de ellos,
contaminaciones, etc.

En el tratamiento n 1, en presencia de oxgeno, y en el tratamiento n 3, en ausencia de

oxgeno, la poblacin de levadura comenz a crecer exponencialmente en el mismo
momento, dado que este tipo de microorganismo eucariota tiene la capacidad de
desarrollarse en presencia y ausencia de oxgeno.

En el tratamiento n 2 se produjo un crecimiento poblacional a pesar de la presencia de

ciloheximida. Esta sustancia inhibe la sntesis de protenas en los eucariotas. Teniendo en
cuenta la funcin de la cicloheximida no se puede atribuir a una causa, el crecimiento de
la poblacin en este tratamiento.

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