conservacin in vitro

Conservacin in vitro de Recursos Genticos Vegetales:

Constituye parte esencial de la estrategia general para la
conservacin y el intercambio de recursos fitogenticos a
nivel mundial. Es una alternativa para la preservacin de
material vegetal con fines investigativos, para la propagacin
masiva de plantas, lo cual ha permitido el fomento y
desarrollo de bancos de germoplasma in vitro que han
tributado a la comunidad cientfica y al mantenimiento de una
importante biodiversidad.
Historia
La conservacin de germoplasma vegetal como actividad
cientfica fue propuesta en los aos 70 del siglo XX con el
objetivo de prevenir la erosin gentica y mejorar la
productividad agrcola de muchas especies a partir de la
conservacin de diferentes especies y genes de inters.
Existen dos estrategias bsicas para la conservacin de
germoplasma vegetal, la conservacin in situ y la
conservacin ex situ.
En la conservacin in situ las especies se mantienen en su
hbitat natural, generalmente en parques nacionales,
reservas biolgicas y reservas ecolgicas. Mientras que, en la
conservacin ex situ las especies se preservan fuera de su
hbitat natural, en bancos de semillas botnicas, bancos de
plantas en campo o en bancos de plantas in vitro.
Los bancos de semillas botnicas resultan de gran utilidad en
especies que se propagan sexualmente y cuyas semillas se
mantienen viables durante un largo perodo de
almacenamiento, pero no deben aplicarse para conservar
especies de plantas con semillas botnicas de corta
supervivencia, ni pueden emplearse en caso de trabajar con
plantas autoincompatibles, o plantas de propagacin
vegetativa obligada. En estos casos, la diversidad gentica de
estas especies se puede conservar mediante bancos de
plantas en campo o mediante tcnicas de conservacin in
vitro.
Los bancos en condiciones de campo tienen como limitante
que se necesitan grandes extensiones de tierra, los costos por
mantenimientos asociados a las labores agrotcnicas son
altos, se hace necesario controlar plagas y enfermedades y
adems son vulnerables a los desastres climticos. Es por ello,
que el desarrollo de nuevas tcnicas de conservacin, han
permitido preservar mejor los recursos genticos importantes
para muchos pases.
Avances
En particular, los avances alcanzados en el cultivo in vitro en
diferentes especies vegetales dieron la posibilidad de
desarrollar nuevas alternativa para la conservacin ex situ, al
permitir disponer de suficientes individuos en perodos de
tiempo relativamente cortos y facilitar la manipulacin del
material vegetal al ser plantas con un desarrollo fisiolgico
homogneo. Desde entonces, la conservacin in vitro de
germoplasma vegetal constituy una herramienta de trabajo
que apoy la conservacin de semillas botnicas y la
conservacin en campo, ya que permiti tener duplicados
seguros de aquellos genotipos de particular inters.
Esta va de conservacin puede efectuarse a travs de dos
mtodos: el crecimiento mnimo y la crioconservacin.
El mtodo basado en el crecimiento mnimo es el ms
generalizado, se basa en modificar las condiciones ptimas de
cultivo, para disminuir la velocidad de crecimiento normal de
la especie objeto de estudio, con lo cual se reduce la
frecuencia de transferencia de las plantas a medio de cultivo
fresco.
Importancia
La conservacin in vitro de germoplasma vegetal ofrece la
posibilidad de almacenar un elevado nmero y variedad de
muestras en un rea reducida y facilita el acceso a ellas para
su evaluacin. Sus condiciones aspticas garantizan mayor
sanidad de las muestras y en consecuencia permiten
incrementar el intercambio de materiales vegetales sanos.
El principal objetivo de los bancos de germoplasma in vitro es
conservar las especies que presentan semillas botnicas de
corta y poca viabilidad, cultivos de propagacin vegetativa o
clonal, o que son altamente heterocigticos y requieren ser
propagados vegetativamente para conservar su integridad
gentica. Tambin se han incluido races y tubrculos de corta
vida en el proceso de almacenamiento, como Solanum
tuberosum L. (papa), Ipomoea batata L. (boniato) y Manihot
esculenta Crantz (yuca).

Bancos de germoplasma in vitro

Son sitios para la conservacin de los recursos genticos en
condiciones controladas de laboratorio y que involucran
diversas tcnicas de cultivo y almacenamiento in vitro. En los
mismos se busca maximizar la diversidad de ejemplares
recolectados de poblaciones en campo o en su centro de
origen. La unidad de coleccin que se mantiene en
condiciones controladas puede ser la semilla botnica o
explantes vegetativos, dependiendo principalmente del hbito
de crecimiento de la especie.
Para proveer a los explantes y semillas las condiciones
adecuadas de almacenamiento in vitro se han desarrollado
tcnicas que permiten mantener una alta diversidad en
espacios reducidos, en condiciones aspticas y a salvo de los
riesgos ambientales que podran provocar su prdida. Por
ejemplo, embriones y cotiledones de Arachis retusa fueron
conservados in vitro para superar los problemas de baja
viabilidad en el almacenamiento de la semilla sexual, debido
al alto contenido lipdico.
Adems, con el cultivo in vitro se facilita el intercambio de
material gentico, ya que muestras pequeas pueden ser
enviadas en condiciones aspticas, incluso a pases con
regulaciones fitosanitarias muy estrictas.

Tipos de almacenamiento in vitro

El almacenamiento in vitro se puede clasificar, segn su
duracin, en "almacenamiento por corto plazo" (conocido en
ingls como "short-term storage") cuyo objetivo es reducir la
velocidad de crecimiento del material vegetal, por lo que
generalmente se utilizan tcnicas que fomenten el
crecimiento reducido, y "almacenamiento por largo plazo"
("long-term storage"), donde se utiliza la crioconservacin que
garantiza la conservacin in vitro por perodos prolongados de
tiempo.
El mtodo de crecimiento mnimo ha sido ampliamente
utilizado en la prctica para la conservacin de germoplasma,
existen varios ejemplos de su aplicacin en la creacin de
bancos in vitro. Entre otros, se pueden mencionar los casos de
Saccharum sp. (caa de azcar), yuca y papa. Este mtodo
constituye una de las principales variantes que puede
garantizar el xito de un programa de conservacin, debido a
que es relativamente sencillo y puede ser establecido con
facilidad con el equipamiento que normalmente existe en un
laboratorio de cultivo de tejidos.
Este mtodo es conocido tambin como crecimiento reducido
pues como se ha explicado se basa en la disminucin de la
divisin celular y el metabolismo de la planta. Tiene como
objetivos incrementar la longevidad in vitro de los cultivos sin
que se produzcan cambios genticos, por tanto, no hay una
detencin total de los procesos celulares sino una disminucin
en la velocidad conque ocurren los mismos y as se reduce la
frecuencia de transferencia de las plantas a medio de cultivo
fresco.
La modificacin en la composicin de los medios de cultivo es
una forma de limitar el crecimiento, por ejemplo, el
crecimiento in vitro de plantas de yuca disminuy
proporcionalmente con el contenido de nitrgeno total del
medio de cultivo; concentraciones por debajo de 10mM, en
trmino de nmero de tallos y nudos por tallos resultaron
perjudiciales.
Se ha conservado, con calidad y durante seis meses sin
realizar subcultivos, plantas in vitro de caa de azcar, con la
reduccin de las sales propuestas por Murashige y Skoog
(1962) entre 25 y 50% de su concentracin normal.
Otra opcin puede ser el aumento de la concentracin
osmtica del medio de cultivo, la limitacin del crecimiento
por este efecto se debe a la reduccin de la adsorcin de agua
y nutrientes del medio de cultivo. La sacarosa como es
altamente metabolizable, puede actuar como agente
osmtico en concentraciones elevadas. Otros agentes
osmticos no metabolizables, como el manitol y el sorbitol,
son ms efectivos en la limitacin del crecimiento, porque
interactan con el contenido de sacarosa y la temperatura de
conservacin.
La intensidad y calidad de la luz, son otros factores
importantes en el control de la velocidad de crecimiento,
especialmente en su interaccin con la temperatura, que
como ya se ha expresado, es otro de los factores ms
utilizados en la conservacin mediante el mtodo de
crecimiento mnimo.
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