LABILIDAD TRMICA DE LAS ENZIMAS

Figura 1. Hidrolisis del almidn

Prueba de Yodo:
La prueba del yodo es una reaccin qumica usada para determinar la
presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos. Una solucin de
yodo - diyodo disuelto en una solucin acuosa de yoduro de potasio -
reacciona con almidn produciendo un color prpura profundo.
Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a
partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en la solucin de un
reactivo llamado Lugol. La amilosa, el componente del almidn de cadena
lineal, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo, formando un
color azul oscuro a negro. La amilopectina,1 el componente del almidn de
cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de
yodo son incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y
amarillo. Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas
de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta
prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio
de color constituyendo una evidencia experimental ampliamente utilizada.
Figura 2. Vista esquemtica de una hlice de amilosa, con iones I3
embebidos
(lo que esta en ingles dice la hlice de amilasa con el monmero de glucosa)

-Los resultados obtenidos para los

tubos de ensayo 2 y 3 para la
enzima nativa amilasa a
temperaturas entre los 37 a 0C
respectivamente fueron los
esperados (incoloro) ya que la
temperatura ptima para la
actividad de la amilasa se sita en
un rango de 36 a 41C, siendo su
temperatura optima a los 37C
(temperatura aproximada del
cuerpo humano). Al bajar la
temperatura de la amilasa (0C)
tiende a disminuir su actividad
pero no causa desnaturalizacin o
desactivacin de esta, por tal
motivo la amilasa puede realizar la
hidrolisis del almidn,
estructuralmente se visualiza en la (ver figura 1) y no tener ninguna
reaccin con el lugol ya que esta disolucin sirve para identificar
polisacridos como los almidones, glucgeno y ciertas dextrinas (ver figura
2), formando un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por
presentar distintos colores segn las ramificaciones que presente la
molcula de polisacrido por tanto el lugol no reacciona con azcares
simples como la glucosa o la fructosa productos de la hidrolisis del almidn.
La amilasa al ser una protena, a partir de cierta temperatura, se empieza a
desnaturalizar por el calor, tal como debi suceder con el tubo de ensayo 1
(ver texto de tabla 1), en donde la enzima, se desnaturaliz a causa de la
alta temperatura, perdi su actividad y no hidroliz el sustrato.
Al no hidrolizar el sustrato, el resultado final de la prueba es una coloracin
azul intenso. Este color se produce debido a que el Lugol reacciona con el
almidn que se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la
molcula de almidn (ver literatura de figura 2).
Siendo los resultados esperados acorde a la literatura.
INFLUENCIA DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS
Esta prueba se utiliza para detectar el efecto del PH sobre la enzima
hidrolasa (amilasa salival) o -amilasa (Nombre alternativos: 1,4--D-
glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa).
Las amilasas de la saliva son enzimas dependientes de calcio,
completamente afuncionales en ausencia de iones de calcio. Actan a lo
largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos,
descomponindolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que puede
actuar en cualquier punto de la cadena es ms rpida que la -amilasa. En
los animales es una enzima digestiva mayor y su pH ptimo est entre 6,7 y
7,2 con inactivacin a Ph 4, pero resistente a oh bsico entre 9,7 a 11,9.
FIGURA 3.

(Yeison en la flecha en la parte de arriba pones PH que 4 no se te olvide la

rayita de abajo esa significa menor o igual que).
-Los resultados obtenidos para los tubos de ensayo 2 y 3 para la enzima
nativa amilasa a temperaturas de 37C fueron los esperados (incoloro) ya
que el ph ptimo para la actividad de la amilasa se sita en un rango de 6,7
y en algunos casos hasta 11,9 (rango en el cual se encontraba los tubos con
ph de 6,8 a 9 respectivamente), Las enzimas tienen un pH ptimo o un
intervalo de pH en el que su actividad es mxima. A valores inferiores o
valores superiores de pH > 11,9 la actividad disminuye hasta llegar a la
desnaturalizacin de la enzima (ver figura 3). Esto no es sorprendente dado
que algunas cadenas laterales de aminocidos pueden actuar como cidos o
bases dbiles que desarrollan funciones crticas en el sitio activo de la
enzima, que dependen de su mantenimiento en un cierto estado de
ionizacin. Por otra parte las cadenas laterales ionizadas de la protena
pueden jugar un papel esencial en las interacciones que mantienen la
estructura de la protena.
Los resultados evidenciados en el tubo de ensayo 1 muestran que aun PH de
4 (acido) hace que la enzima no lleve a cabo la hidrolisis del yodo causando
un color azul claro o violeta (ver figura 2). Este resultado indica una prueba
positiva para el lugol. Esto quiere decir que la enzima no hidroliza
completamente al almidn por el efecto que produce el pH, de lo contrario
el resultado final sera incoloro, es decir, negativo para el lugol. De esta
manera puede decirse que la enzima trabaja mejor a un pH bsico.

Conclusiones
-Se comprob la accin hidroltica de la amilasa salival y se concluye que la
misma posee una gran capacidad catalizadora al hidrolizar polisacridos
como el almidn y el glucgeno, en monmeros ms sencillos como los
azucares (dextrina, maltosa y glucosa)
-Se comprob la visualizacin de la desnaturalizacin de la enzima (amilasa
salival), mediante la accin de la temperatura alta y pH (cidos) y bsicos >
11,9 , teniendo en cuenta como que la temperatura y el ph son un factor
importante y decisivo al momento en que las enzimas cumplen sus
funciones, ya que si la misma no se considera dentro de un proceso
metablico dentro del laboratorio, no se pueden obtener los resultados
esperados por el mal funcionamiento del enzima.
-la amilasa salival es una hidrolasa, esto quiere decir que descompondr por
hidrlisis enlaces 1-4 del componente -Amilasa al digerir el almidn para
formar azcares simples a diferencia de las dems amilasas como -amilasa
de naturaleza oxidorreductasa (REDOX) y la -amilasa la cual puede romper
los enlaces glicosdicos (1-6).

Preguntas complementarias.
9.4 La amilasa salival, es una enzima hidrolasa que tiene la funcin de
catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -
amilasa al digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples
(dextrinas, maltosa,glucosa)
La sacarasa o invertasa (sacarosa--D-glucohidrolasa; EC 3.2.1.48) cataliza
la hidrlisis de sacarosa y de maltosa. La sacarosa, comnmente conocida
como azcar de caa, es un disacrido formado por una molcula de -D-
glucosa y por otra de -D-fructosa unidas por un enlace glicosdico 1-2.
Cuando se hidroliza este enlace, se obtiene una mezcla equimolar de
glucosa y fructosa.
9.3 La amilasa, es una enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la
reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -amilasa al digerir
los sustratos glucgeno y el almidn para formar azcares simples.
Actuar sobre los sustratos maltosa y desxtrina
-La sacarasa, conocida tambin como invertasa, es una enzima que
convierte el sustrato sacarosa (azcar comn) en glucosa y fructosa. Est
presente en el intestino delgado, en el borde del cepillo de las vellosidades
intestinales.
Acta sobre Los sustratos fructosa y glucosa maltasa.

Bibliografa
-Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia
clnica; MacFaddin. Jean F; Editorial medica panamericana 3 edicin;
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-Nutricin clnica y gastroenterologa peditrica; Lozano Guerrero Rafael;
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- Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica; Mora Quesada
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-https://es.scribd.com/doc/217124224/ENZIMAS-LABORATORIO-1-docx
-https://es.wikipedia.org/wiki/Sacarasa
-https://es.wikipedia.org/wiki/Amilasa
-https://es.wikipedia.org/wiki/Lugol
- https://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_del_yodo
-https://www.clubensayos.com/Ciencia/Laboratorio-De-Amilasa-
Salibal/667314.html
-https://www.clubensayos.com/Ciencia/Laboratorio-Numero-7/2200258.html
-http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm
-http://black-star-eslovan.blogspot.com.co/2010/11/accion-de-la-amilasa-
sobre-el-almidon.html
https://docs.google.com/document/d/1LdKVFCw2WUAaSfd4VxLAPoUmpS04V
iBbxvhKhfRMY5g/edit#