Toxicocintica - Biotransformacin -2015

TOXICOCINTICA: BIOTRANSFORMACIN
A lo largo de su evolucin, los organismos vivos han estado expuestos de forma continua a un
nmero creciente de sustancias qumicas extraas presentes en su entorno y susceptibles de
acceder a su interior de modo accidental (xenobiticos). Para salvaguardarse del libre acceso de
estos compuestos, los organismos vivos interponen una serie de barreras de naturaleza fsica o
biolgica. No obstante, un nmero indeterminado de los mismos es capaz de superar dichos
mecanismos de proteccin y contactar con las clulas y tejidos produciendo efectos de diversa
ndole. Estos compuestos pueden acceder a nuestro organismo mediante ingestin, inhalacin,
por va parenteral o a travs de la piel. Como no son utilizados como nutrientes, no se incorporan
a las rutas bioqumicas del metabolismo intermediario y no son degradadas a travs de estas vas
metablicas. Se trata en general, de compuestos de naturaleza lipoflica por lo que pueden
atravesar con relativa facilidad las membranas biolgicas, acceder al interior de las clulas y unirse
a estructuras celulares de carcter lipoflico. Al mismo tiempo, su eliminacin del organismo es
dificultosa, dado que la excrecin de compuestos no voltiles se realiza a travs de fluidos de
naturaleza acuosa, principalmente orina.
Ante esta situacin, los organismos vivos han desarrollado sistemas metablicos alternativos para
acelerar la eliminacin de estos compuestos. Se trata de una serie de enzimas no integradas en las
vas del metabolismo energtico o intermediario del organismo y cuyos sustratos son los
xenobiticos. Su funcin es la de convertir los xenobiticos en molculas ms polares, ms
hidrosolubles y, por lo tanto, ms fcilmente excretables. El papel de estas enzimas es clave para
la supervivencia celular. De no existir tales vas metablicas, una vez en el interior del organismo
los xenobiticos tenderan a acumularse alterando el equilibrio celular y provocando alteraciones
funcionales e incluso la muerte celular.
Al conjunto de procesos enzimticos a los que se ven sometidos los xenobiticos en el organismo
tendientes, en general a su neutralizacin y eliminacin se les conoce como reacciones de
biotransformacin o de metabolizacin de xenobiticos. Tradicionalmente estos procesos se han
agrupado en dos fases o etapas. En la fase 1 los xenobiticos son modificados mediante
reacciones de oxidacin, reduccin o hidrlisis y convertidos en productos ms hidrosolubles
gracias a la aparicin de nuevos grupos funcionales de carcter polar (hidroxilo, amino, carboxilo).
En la fase 2 los xenobiticos, o los metabolitos generados por las reacciones de la fase 1, se
combinan con molculas endgenas de carcter polar para formar productos de conjugacin que
son rpidamente excretados.
Biotransformaciones en la fase I
Consisten fundamentalmente en reacciones de oxidacin, reduccin e hidrlisis, catalizadas por
diferentes enzimas que aunque son ms abundantes en el hgado, se hallan repartidas por todo el
organismo y presentan especial actividad en algunas localizaciones.

Reacciones de oxidacin: las ms importantes biotransformaciones que experimentan los

txicos se basan en reacciones de oxidorreduccin. Estos procesos bioqumicos oxidativos son
catalizados por tres grupos principales de enzimas: deshidrogenasas (ej. oxidacin de etanol a
acetaldehdo, y la de metanol a formaldehdo), oxidasas (catalizan oxidaciones en las que el
oxgeno es el aceptor de electrones y resulta reducido a agua, o bien transformado en
perxido de hidrgeno o en radical superxido), oxigenasas catalizan la incorporacin de
oxgeno al sustrato; entre ellas se encuentran las: monooxigenasas , tambin denominadas
oxidasas de funcin mixta porque del oxgeno molecular llevan un tomo para formar agua y
otro al sustrato, originando grupos alcohol y epxido (los epxidos son muy txicos y

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cancergenos, por su gran reactividad con protenas y ADN). El citocromo P-450 es sin duda el
miembro ms destacado de este grupo de enzimas y el principal responsable del metabolismo
oxidativo de los xenobiticos. El P-450 es una hemoprotena que contiene un tomo de hierro
en estado reducido por mol y que es capaz de combinarse en su forma reducida con el CO,
para dar una banda de absorcin caracterstica a 450 nm, de la cual deriva su nombre. No se
trata de una nica enzima, sino que en realidad es una familia de hemoprotenas presentes en
numerosas especies, desde bacterias a mamferos, y de las que ya se han identificados ms de
2000 isoformas diferentes. Todos los P450s conocidos se nombran siguiendo un criterio comn
y se agrupan en familias y subfamilias en funcin de la similitud en la secuencia del ADN que
los codifica. Las familias 1, 2 y 3 estn constituidas por enzimas encargadas de la
biotransformacin de xenobiticos, mientras que el resto de familias incluyen P-450s que
intervienen en la biosntesis y el metabolismo de compuestos endgenos. Una de las
caractersticas ms significativa de los P-450s que metabolizan xenobiticos es su baja
especificidad, lo que permite que sean capaces de metabolizar un nmero casi ilimitado de
sustratos, principalmente a travs de reacciones de oxidacin, pero tambin de reduccin e
hidrlisis. Las oxidaciones catalizadas por el P-450 son reacciones de monooxigenaacin
dependientes de NADPH y para las que utiliza oxgeno molecular. Como consecuencia de estas
reacciones el P-450 acelera la eliminacin del organismo de gran nmero de frmacos y
compuestos txicos, pero tambin es el responsable de la activacin de toxinas o
precarcingenos. En el hombre, los P-450s estn ampliamente distribuidos por todo el
organismo, si bien el hgado es el rgano con mayor expresin de estas enzimas. Su expresin
est regulada por factores genticos, fisiopatolgicos (regulacin hormonal, enfermedades) o
ambientales (factores nutricionales, induccin, inhibicin). Por esta causa, sus niveles
hepticos varan extraordinariamente entre los diferentes individuos, lo que justifica las
notables diferencias que, en ocasiones, se observan en el metabolismo de frmacos y
xenobiticos y, en ltima instancia, la variabilidad en la respuesta farmacolgica o la diferente
susceptibilidad a la accin de txicos o carcingenos.

Reacciones de reduccin: son catalizadas por reductasas microsmicas y citoslicas y por las
bacterias intestinales. Existen nitrorreducciones capaces de llevar sucesivamente grupos nitro
a nitroso y a amina. Tambin por reduccin se eliminan tomos de halgeno.

Reacciones de hidrlisis: la hidrlisis de numerosos steres, amidas y compuestos sustituidos

es realizadas por hidrolasas o esterasas.

Biotransformaciones en la fase II:

Consisten en reacciones de conjugacin en las que grupos reactivos (oxhidrilo, amino, carboxilo,
epxido, halogenuro, etc.) del xenobitico o sus metabolitos (productos de la Fase I) se unen a
sustancias endgenas para originar compuestos ms fcilmente eliminables por la orina o bilis. Los
compuestos endgenos son iones cidos como el glucuronato, glutatin, sulfato, acetato y
aminocidos. Tambin requieren la participacin de enzimas transferasas (glucuroniltransferasas,
sulfotransferasas, y sulfuroniltransferasas, glutamiltransferasa, glutatin S-transferasas, etc.).

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Figura 1: Ciclo cataltico del citocromo P-450

Localizacin de las reacciones de biotransformacin de sustancias extraas al organismo
El hgado es el rgano con ms capacidad para la biotransformacin de sustancias extraas al
organismo y resulta fcil imaginar por qu, puesto que tiene una posicin estratgica en relacin a
la entrada de estas por el tracto gastrointestinal. Proporciones mucho menores de esta actividad,
se encuentran en otros rganos como: intestino, rin, pulmn, adrenales, testculos, ovarios,
placenta, etc. La capacidad heptica para biotransformar txicos reside fundamentalmente en las
clulas epiteliales. A su vez, intracelularmente, existe una localizacin preferida de cada uno de los
procesos de biotransformacin descritos. Por ejemplo, la mayor parte de las reacciones
correspondientes a la etapa I, se verifican en el retculo endoplsmico, tanto en su componente
rugoso como en el liso, pero con cierto predominio en este ltimo.
Una fraccin menor de esos procesos puede verificarse en la membrana externa de la envoltura
nuclear. La localizacin intracelular de las enzimas que catalizan los procesos en la etapa II, es ms
heterognea, por ejemplo, la glucuronil transferasa y la epxido hidratasa estn localizadas en el
retculo endoplsmico. En cambio, las enzimas que catalizan la formacin de la fosfoadenosina
fosfosulfato (PAPS), as como las sulfoquinasas que permiten la reaccin de ste con los fenoles
estn en el citoplasma. Otro tanto ocurre con la enzima que metila fenoles y con la que conduce a
la formacin de cidos mercaptricos.

Figura 2: Participacin relativa de diferentes enzimas de fase I en el metabolismo de xenobiticos

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Factores que modifican la intensidad de los procesos de biotransformacin de sustancias

extraas al organismo por la oxidasa de funcin mixta P-450 dependiente
Este es uno de los aspectos de ms importancia para el mdico, el toxiclogo o el farmaclogo,
puesto que permite comprender la complejidad y variabilidad de la respuesta biolgica frente a
sustancias extraas. En la figura se resumen algunos de los factores que afectan a las
biotransformaciones de sustancias extraas al organismo, mediadas por el sistema P-450
dependiente.
lnhibidores
Inductores
Especie
Cepa (raza)
lndividuales
Edad
Sexo
Dieta
Ayuno
Hora del da
poca del ao

Embarazo
Estrs
Hipofisectoma
Adrenalectoma
Tiroidectoma
Diabetes
Castracin
Hepatitis
Cirrosis
lctericia obstructiva
Hepatomas

Resulta evidente, que todo factor que modifique el contenido o el tipo de P-450, la actividad de la
P-450 reductasa o los niveles de NADPH, tendra efecto sobre la biotransformacin de sustancias
extraas al organismo y, por ende, sobre la duracin y la intensidad de sus acciones biolgicas. Lo
particular de este sistema enzimtico es que, debido a su falta de especificidad, gran cantidad de
sustratos pueden competir por los sitios activos y as alterar sus respectivas biotransformaciones.
Existen compuestos como el CCI4, la alilisopropilacetamida y otros que in vivo destruyen al P-450 y
as disminuyen la intensidad de los procesos que ste cataliza. Un efecto similar, puede ser
logrado con inhibidores de la sntesis del hemo como el 3-amino-1,2,4-triazol o el cloruro de
cobalto. Es posible disminuir el proceso global de hidroxilacin de la P-450 reductasa con
sustancias como de la cistamina.
Otra caracterstica nica de este sistema P-450 dependiente que biotransforma xenobiticos, es la
facilidad con que es inducido. Han sido descritas cientos de sustancias qumicas que son capaces
de estimular la actividad de este sistema enzimtico. Algunas de ellas son frmacos (hipnticos,
sedantes, gases anestsicos, estimulantes del SNC, anticonvulsivantes, tranquilizantes,
antipsicticos, hipoglicmicos, alcaloides, hormonas, esteroides, etc.). Otros son txicos o
compuestos presentes en el ambiente; por ejemplo, plaguicidas, hidrocarburos policclicos
provenientes de procesos de combustin (entre ellos el humo del cigarrillo), herbicidas, aditivos
alimentarios, etc.
Algunos de estos compuestos tienen efecto bifsico, actuando como inhibidores en etapas
tempranas de la exposicin y luego como inductores por exposicin repetida. Los inductores
aumentan siempre el contenido de P-450 heptico y algunos tambin la actividad de la P-450
reductasa. No todos los inductores aumentan el contenido de la misma isoenzima del P-450, por
ejemplo el 3-metilcolantreno y la tetraclorodibenzodioxina inducen la forma denominada P-448.
El proceso de induccin involucra tanto un aumento de la sntesis como una disminucin de la
degradacin proteica. La proporcin en que cada uno de estos factores participa en la induccin
vara con cada compuesto. Estos procesos suelen ir acompaados de efectos en el turnover
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(recambio) del RNA y de los fosfolpidos y a su vez por proliferacin del retculo endoplsmico liso
de las clulas epiteliales hepticas. Las diferencias existentes para biotransformar xenobiticos
entre las distintas especies son tanto cualitativas como cuantitativas. Las cualitativas conciernen
fundamentalmente a las reacciones de conjugacin de la Fase II. Las diferencias existentes en los
procesos de Fase I son usualmente cuantitativas, o sea, en el contenido de P-450 y de P-450
reductasa. Otro tanto sucede con las variaciones observadas de una cepa a otra de una misma
especie. Ellas suelen ser de dos a tres veces de diferencia para el caso de ratas o ratones, pero ha
llegado a ser de hasta veinte veces en el caso de cepas de conejo.
Las diferencias individuales pueden ser muy grandes y, como era de esperar, fcilmente
observables en el hombre. Ellas han sido verificadas para el metabolismo de anticoagulantes como
el warfarin y el dicumarol, as como para frmacos como la fenilbutazona, la antipirina o la
difenilhidantona. Estas variaciones tambin se deben a factores cuantitativos. El sexo tambin
puede ser variable para la biotransformacin de xenobiticos, por lo menos as ocurre en la rata.
No se ha observado una diferencia equivalente en otras especies. La rata macho tiene mayor
capacidad para la biotransformacin y ello parece deberse a una mayor afinidad a los sustratos
por su P-450.
La edad es otra variable importante. Gran cantidad de estudios evidenciaron que los fetos y recin
nacidos de distintas especies animales tienen menor capacidad para biotransformar xenobiticos y
que ella aumenta rpidamente despus del nacimiento. Esto parece deberse a una diferencia en
los contenidos de P-450 y P-450 reductasa. Relativamente el feto humano tiene ms capacidad
metablica para xenobiticos que el equivalente de los animales, siendo su P-450 un 60-70% y su
P-450 reductasa un 30% del de los adultos. Existe tambin un decaimiento en los contenidos de P450 y P-450 reductasa en la vejez.
El desbalance hormonal influye profundamente sobre la capacidad para biotransformar
xenobiticos, tal como lo revela la experimentacin animal. Tal es el caso de animales con
alteraciones hormonales (adrenalectomizados, tiroidectomizados, hipofisectomizados) o con
diabetes inducida qumicamente (aloxnica). En ellos, el metabolismo de muchos sustratos est
muy disminuido. En la rata, estos efectos dependen del sexo.
Las hormonas modulan, ya sea el contenido de P-450 o la actividad de la P-450 reductasa o la
afinidad del P-450 por su sustrato. Visto este importante rol hormonal, no es de extraar que la
capacidad para metabolizar xenobiticos cambie con la hora del da, debido al ritmo circadiano
existente en los niveles de corticosterona o que se vea afectada por el estrs, el embarazo o el
ayuno.
La capacidad para biotransformar xenobiticos puede alterarse con la dieta, por ejemplo, dietas
pobres en protenas y altas en hidratos de carbono y grasa la disminuyen, en tanto que las dietas
ricas en protenas la aumentan. Tambin resulta fcil comprender que si el hgado es el lugar
fundamental para la biotransformacin de xenobiticos, que esa capacidad est resentida en el
caso de dao celular heptico producido, ya sea por txicos o por virus. En la ictericia obstructiva y
en los cnceres hepticos, tambin hay disminucin de esta actividad. En cambio, esto no ocurre
en la cirrosis con los procesos de la Fase I, aunque s con los de la Fase II.
En resumen, el conocimiento de la qumica biolgica de los procesos de biotransformacin de
xenobiticos, nos proporcionar una comprensin racional de los procesos que dan origen y
permiten el tratamiento de las enfermedades.

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Formacin de especies qumicas reactivas durante la biotransformacin de txicos

Frecuentemente sucede, como resultado del proceso de biotransformacin de una sustancia
txica, que los productos (metabolitos) de esas reacciones qumicas son ms activos (ej. txicos)
que el compuesto original que se absorbi. Se conocen una gran cantidad de sustancias que en
realidad deben su toxicidad (aguda o crnica) a los productos (relacionados directamente con su
estructura qumica o no) que generan durante su biotransformacin. Estas especies qumicas
tienen como caracterstica comn una mayor reactividad hacia molculas blanco, existentes en las
clulas, lo que provoca interacciones deletreas, responsables primarias de una cascada de
eventos que se expresarn finalmente como un cuadro de intoxicacin. Los efectos txicos
entonces no son ms que una consecuencia de esas reacciones qumicas indeseables.
Desde el punto de vista estrictamente qumico, un factor comn a estas especies reactivas es su
marcada electrofilicidad, consecuencia de su propia deficiencia en electrones. Esta naturaleza
electroflica es la fuerza impulsora para su reactividad hacia sitios moleculares ricos en electrones,
existentes en abundancia en muchas macromolculas celulares. En efecto, en las molculas
ctricas para la vida celular, como enzimas, otras protenas, cidos nucleicos, etc., predominan los
sitios nucleoflicos (o ricos en electrones) como lo son tomos de nitrgeno, de azufre y de
oxgeno. Es la abundancia de este tipo de lugares vulnerables lo que hace que aquellos
metabolitos de naturaleza electroflica tengan una relevancia mayor en la toxicidad de una
sustancia.
La reactividad de estas especies est determinada por su estabilidad qumica. Un parmetro para
evaluarla es la vida media, que no es ms que una expresin del tiempo que demora en disminuir
su concentracin a la mitad, en un medio determinado. Este tiempo ser inversamente
proporcional a su estabilidad y reactividad. Una consecuencia muy importante, porque afecta a la
magnitud del dao primario en un proceso txico, es que la probabilidad de interactuar con
blancos celulares distantes decrece con la reactividad. Una especie muy reactiva (de vida media
pequea, ej. un radical libre) no puede viajar muy lejos sin chocar antes con alguna molcula
blanco que le ofrezca compensar esa deficiencia electrnica que posee. Por el contrario, una
especie ms estable puede, eventualmente, salir de la clula donde se form y viajar por el
torrente sanguneo para ejercer su accin deletrea en un sitio distante al de su generacin. No
olvidemos sin embargo que, en ltima instancia es el medio biolgico en particular lo que
condicionar la ocurrencia de una reaccin qumica irreversible con este tipo de especies, y ms
an, lo que determinar la magnitud de sus consecuencias.
Podemos clasificar a los metabolitos reactivos en funcin de su estabilidad qumica (vida media)
como:
1. De vida ultracorta: estas especies nunca llegan a viajar en forma libre mucho ms all del sitio
(generalmente uno enzimtico) donde se generaron. Muchas veces es la propia enzima la primera
molcula afectada, dando lugar a un suicidio enzimtico (la generacin es especies reactivas de
ese tipo se inhibe por destruccin de la capacidad de biotransformacin involucrada). Son
ejemplos de este tipo los radicales libres y los iones positivos (ej. carbonio).
2. De vida corta: En este caso las probabilidades para interactuar estn restringidas a la clula
donde se producen. Su reactividad no les permitira viajar a clulas vecinas ni mucho ms lejos. Los
epxidos son un buen ejemplo de este tipo.
3. De vida larga: Su estabilidad qumica les otorga una vida media suficientemente larga como
para salir al torrente sanguneo y llegar a rganos y tejidos distantes, donde eventualmente
pueden reaccionar. Los aldehdos pueden verse en esta categora.
Dra. Alejandra Camargo

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Bibliografa
CASCALES ANGOSTO, M. y GOMEZ LECHON, M. 2004. Monografa N XIV: Citocromo P-450.
Instituto de Espaa. Real Academia Nacional de Farmacia.
CASTRO, G. et al. 2003. Apuntes del curso: Conceptos Fundamentales de Toxicologa I CEITOXCITEFA-CONICET.
REPETTO, M. 1997. Toxicologa Fundamental. Ed. Diaz de Santos. Pgs.405.

Dra. Alejandra Camargo