AMONIO-L3K

Nmeros de catlogo:

233-10

Presentaciones:

2 x 20 mL + 1 x 15 mL

USO
Para la determinacin cuantitativa in vitro de amonio en plasma.
PRECAUCION
S24/25: Evitar el contacto con la piel y ojos.
REACTIVOS
Reactivo Amonio-L3K: solucin que contiene un amortiguador (pH 8.0 a 25C), 10 mmol/L de
-cetoglutarato, al menos 6 KU/L de GLDH (microbiano), 0.2 mmol/L de NADPH anlogo, estabilizadores
y un conservador.
Estndar de Amonio: 1 x 15 mL de una solucin de sulfato de amonio, (amonio) 294 mol/L (5.0 g/mL).
RESUMEN DE LA PRUEBA
El amonio circulante en personas normales es relativamente bajo, a pesar del hecho de que el amonio se
produce continuamente a partir de la dieta y del metabolismo de los aminocidos. Las determinaciones sricas
de amonio se han utilizado en el diagnstico de coma asociado con disfuncin heptica causada por cirrosis
y neoplasmas. La determinacin de amonio es muy til en el diagnstico y pronstico de Sndrome de Reye.
El anlisis de amonio en sangre siempre ha sido un proceso tedioso y que consume mucho tiempo. Los anlisis
de amonio por lo general se han basado en dos enfoques: la difusin del amonio desde un medio alcalino con
atrapamiento en cido (1) o la separacin del amonio de una muestra utilizando una resina de intercambio
inico (2).
El anlisis de DCL es un mtodo enzimtico (3) que no requiere de la preparacin de la muestra y emplea
glutamato deshidrogenasa y un anlogo de NADPH estabilizado (4) que es fcil de usar y aplicable en
analizadores de rutina.
PRINCIPIO
GLDH
-Cetoglutarato + NH4+ + Cofactor reducido L-glutamato + cofactor + H2O
El amonio reacciona con el -cetoglutarato y el cofactor reducido para formar L-glutamato y el cofactor. La
reaccin es catalizada por la glutamato deshidrogenasa. La disminucin en absorbancia debida a la oxidacin
del cofactor reducido puede medirse a 340 nm o 380 nm, y es proporcional a la concentracin de amonio.
PREPARACION DEL REACTIVO
Listos para su uso.
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO
Los reactivos incluidos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas y almacenados
a 2-8C.
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DETERIORO DEL REACTIVO

La solucin del reactivo debe ser clara. La turbidez indica deterioro.
EQUIPO Y MATERIALES
Materiales proporcionados
Se proporcionan los reactivos para la determinacin de amonio.
Materiales requeridos
Espectrofotmetro o analizador capaz de leer la absorbancia con exactitud a 340 o 380 nm.
RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA
Plasma fresco, claro, no bemolizado, con EDTA o heparinizado (no utilizar heparina con amonio) La exactitud
de la determinacin de amonio depende en gran medida de la recoleccin de la muestra. El suero no es una
muestra aceptable.
Se recomienda recolectar el plasma de una vena sin estasis en un tubo al vaco con EDTA o heparina (no
heparina con amonio). Libere el vaco residual inmediatamente, coloque la muestra en hielo y procselo en el
laboratorio tan pronto como sea posible. Separe el plasma de la muestra sin dilacin. No use muestras
hemolizadas. El anlisis de amonio debe llevarse a cabo antes de 30 minutos. Las muestras para amonio
pueden almacenarse bien cerradas hasta por 2 horas a 2-8C o por 24 horas a -20C. (5)
LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
Evite la contaminacin por amonio del ambiente del laboratorio. Los metales pesados interferirn en la reaccin
al inhibir la GLDH.
Se evaluaron las interferencias para este mtodo de amonio debidas a ictericia, lipemia y hemlisis en un
analizador Hitachi 911 utilizando un criterio de importancia de variancia >10% a partir del control.
No se encontr interferencia importante por ictericia a concentraciones de bilirrubina de 0-684 mol/L (0-40
mg/dL) en una muestra de amonio con 167 mol/L (2.8 g/mL).
Se analizaron las concentraciones de intralpidos de 0-1000 mg/dL [0-33.87 mmol/L (0-3000 mg/dL) de
triglicridos] con resultados aceptables a niveles de 250 mg/dL de intralpidos [8.46 mmol/L (750 mg/dL)
de triglicridos] en una muestra de amonio con 154 mol/L (2.6 g/mL).
No se encontr interferencia importante por cido ascrbico a concentraciones de ste a partir de 0-3000 g/dL
en una muestra de amonio con 147 mol/L (2.5 g/mL). Las concentraciones plasmticas de piruvato de hasta
0.75 mmol/L (6.6 mg/dL) no causaron interferencia.
No deben utilizarse muestras bemolizadas ya que los eritrocitos contienen cantidades ms grandes de amonio
que las encontradas en el plasma (5). Puede consultar un resumen de la influencia de las drogas en las
pruebas de laboratorio clnico consultando a Young, D.S. (6).
PROCEDIMIENTO
Condiciones
Siga las instrucciones indicadas para la adaptacin de la tcnica a analizadores automatizados especficos o
contacte al servicio tcnico de DCL para determinar los parmetros especficos del instrumento.
Analizador automatizado
Longitud de onda
(Primaria) .....................................340 nm o 380 nm
(Secundaria).................................660 nm
Temperatura .......................................37C
Paso de luz .........................................Depende del instrumento
Tipo de reaccin .................................Punto final
Tiempo de reaccin ............................10 min
Volumen de muestra...........................20 L
Volumen de reactivo ...........................230 L
Volumen total ......................................250 L
Relacin muestra/reactivo ..................1:11
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CALIBRACION
Se incluyen un estndar de amonio y debe usarse conforme a las instrucciones para calibrar el procedimiento.
CONTROL DE CALIDAD
Se deben analizar dos niveles de control segn se requiera. Los resultados debern caer dentro de 2
desviaciones estndar del valor establecido.
CALCULOS
El analizador calcular la concentracin de amonio en cada muestra.
VALORES DE REFERENCIA (7)
12-47 mol/L (0.20-0.80 g/mL)
Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
normal para el rea donde est localizado.
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO
Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL procedimientos automatizados en
un Hitachi 911, a menos que se indique los contrario.
Resultados
Las concentraciones de amonio se expresan en mol/L (g/mL). Para convertir g/mL a mol/L, multiplique por
58.71.
Estudio de recuperacin
Se agreg amonio a un grupo de plasmas humanos para aumentar la concentracin de amonio en 10.6 mol/L
(0.18 g/mL) y 27.0 mol/L (0.46 g/mL). La recuperacin del amonio agregado promedi 102%.
Rango de Linealidad (NCCLS EP6-P)
La linealidad del procedimiento descrito es de 1175 mol/L (20 g/mL). El lmite inferior de deteccin del
procedimiento descrito es de 5.8 mol/L (0.1 g/mL). Estos datos aportaron resultados en un rango reportable
de 5.8-1175.0 mol/L (0.1-20.0 g/mL).
Estudios de Precisin (NCCLS EP5-T2)
Los datos fueron recopilados de 3 estndares acuosos en 40 corridas durante 20 das.
Nivel
mol/L

DE Total
g/dL

mol/L

g/dL

CV Total
%

DE dentro de la corrida
mol/L

g/dL

CV dentro de
la corrida
%

48.01

0.819

3.76

0.064

7.9

2.64

0.045

5.6

125.23

2.133

4.40

0.075

3.5

2.64

0.045

2.1

337.29

5.745

5.81

0.099

1.7

2.58

0.044

0.8

Exactitud (NCCLS EP9-P)

Se hizo una comparacin del desempeo de este mtodo (y) en un HItachi 911 con el de un mtodo similar
para amonio en un Cobas Mira. Las muestras de plasma de 40 pacientes oscilaron de 11.1-811.4 mol/L (0.1913.82 g/mL) dando un coeficiente de correlacin fue de 0.9990. El anlisis de regresin lineal dio la siguiente
ecuacin:
Este mtodo = 0.95 (mtodo similar de amonio) 0.8 mol/L (-0.01 g/mL)
Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL aplicando procedimientos
automatizados
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DESECHO
Diluya con grandes volmenes de agua, deseche en el sistema de drenaje conforme a las regulaciones
federales, provinciales, estatales y locales.
REFERENCIAS
1. Conway, E.J., Biochem J. 29:27 (1935).
2. Kingsley, G.R., and Tager H.S., Standard Methods of Clinical Chemistry 6:115, Washington D.C. 1970,
American Assoc. of Clinical Chemistry.
3. Ratcliff, C.R,, and Hall, F.F. Selected Methods of Clinical Chemistry 9:85, Edited by Willard R. Faulkner
and Samual Meites, American Association for Clinical Chemistry, Washington D.C. (1982). U.S. Patent
No. 5,801,006.
4. Tietz, N.W., Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W.B. Saunders, Philadelphia, PA (1999).
5. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Washington, Third Edition,
(1990).
L3K es una marca registrada de Diagnostic Chemicals Limited.

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