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19Ene2003
Resumen
La tecnologa de DNA recombinante es un procedimiento de ingeniera gentica que se viene usando desde hace algunos
aos y en la actualidad tiene una amplia variedad de aplicaciones. Esta tcnica se basa en la insercin de DNA forneo al
genoma de una clula hospedadora, para que sta lo exprese como si fuese suyo. Este proceso se realiza mediante el uso
de enzimas de restriccin, vectores de clonacin y hospedadores (procariotas o eucariotas), y consiste en aislar un
fragmento de DNA con genes de inters para el investigador e introducirlo en un vector, el cual se encarga de llevarlo al
hospedero para que ocurra recombinacin.
En la actualidad se producen alimentos transgnicos y biomolculas con esta tecnologa, la cual tambin ha abierto nuevas
perspectivas en el campo de la medicina, la gentica, la bioremediacin y la industria.
Palabras clave: DNA, recombinacin, enzimas, ciclo celular, replicacin, virus, plsmidos.
Abstract
The recombinant DNA technology is an genetic engineering procedure that is using now since few years ago, and today
has a lot of applications. This procedure is based in the insertion of a fragment of foreign DNA into the host cell genome,
and the host cell express this piece of DNA like the own genetic material. The restriction enzymes are fundamental to the
development of this procedure, also the cloning vectors and hosts (prokaryotes and eukaryotes) are required. The foreign
DNA fragment with genes useful to the researcher is isolated, introduced into a vector and carried out to the host for the
recombination.
Today we could produce transgenic aliments and biomolculas with this technology, that also opened new perspectives to
the medicine, genetics, bioremediation and industrial fields.
Key words: DNA, recombination, enzymes, cellular cycle, replication, virus, plasmid.
Introduccin
Uno de los ms grandes avances de la ciencia contempornea ha sido el desarrollo de la ingeniera gentica y la
biotecnologa. Por medio de estas dos disciplinas muy relacionadas entre s se ha logrado manipular genticamente a
los individuos con el fin de propiciarles nuevas caractersticas.
La tecnologa del DNA recombinante es una tcnica que ha permitido introducir material gentico forneo en un
individuo, y hacer que ste organismo incorpore dicho material a su genoma y lo exprese como si fuera suyo (Bohinski
1991, Greene Rao 1999). Esta tecnologa desarroll a partir del descubrimiento de las enzimas de restriccin (Griffiths et
al. 1998, Klug Cummings 1999) y su accin sobre los cidos nucleicos. Cuando se complement el estudio de las enzimas
de restriccin con la micromanipulacin (conjunto de tcnicas que permiten inyectar y succionar porciones de una clula)
se desarroll esta nueva tecnologa, que ha abierto las puertas a un nuevo y amplio campo de accin a la gentica
molecular (Reina 2000).
El principio de la tecnologa de DNA recombinante se basa en la insercin de un fragmento de DNA forneo (Reina 2000)
en un hospedero de clonaje molecular (Silva 1999) por medio de un vector de clonaje, como ser un virus o un plsmido
(Moreira Mendes 1998). Una vez que el fragmento de DNA forneo se ha introducido en el hospedero, comienza el
proceso de clonaje molecular y la recombinacin, dando como resultado la expresin del gen o los genes introducidos en
un organismo diferente (Madigan et al. 1998).
En la actualidad existe una gran cantidad de aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante a todo nivel. Se aplica
esta tcnica para la produccin de vacunas (Klug Cummings 1999), para la produccin de protenas, aminocidos,
vitaminas y ribonucletidos (Hashimoto Ozaki 1999) y la produccin de curas genticas para algunas enfermedades
(Griffiths et al. 1998, Klug Cummings 1999), en el campo mdico.
La ingeniera gentica en plantas tambin ha provisto la mejora de ciertas especies hacindolas ms resistentes o
introduciendo ciertas caractersticas de otros individuos para mejorarlas (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Otra aplicacin de la tecnologa de DNA recombinante bastante reciente, es la produccin de microorganismos
transgnicos para procesos de bioremediacin de hidrocarburos (Keasling Bang 1998, Timmis Pieper 1999, Pieper
Reineke 2000; Coates Anderson 2000), metales pesados como el mercurio (Chen Wilson 1997, Sayler Ripp 2000). Las
tcnicas de bioremediacin permiten una descontaminacin de ambientes afectados por medio del uso de
microorganismos capaces de degradar ciertas sustancias, en muchos casos se han empleado organismos nativos del lugar
pero tambin se ha trabajado con numerosas cepas modificadas genticamente para amplificar su accin sobre los
contaminantes.
En esta revisin se vern los principios bsicos de la tecnologa de DNA recombnate y se analizarn las diferentes
aplicaciones actuales y potenciales de este proceso.
PRINCIPIOS DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE
Enzimas de restriccin: produccin de fragmentos de DNA para recombinacin
Las enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner Aber, Hamilton Smith y Daniel
Nathans (Stryer 1995). Estas son enzimas sumamente especficas que catalizan la hidrlisis de los enlaces fosfodister de
los cidos nucleicos (Bohinski 1991) y son capaces de cortar ambas hebras del DNA en lugares especficos, creando de
esta manera una serie de fragmentos (Stryer 1995). Se ha visto que ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) el DNA de
ciertos virus fagos infectivos, a menos que los cidos nucleicos presenten metilacin (adicin de grupos metilo) en
algunos residuos de adenina o citosina del sitio de corte.
La funcin de las enzimas de restriccin es la proteger al organismo de DNA extrao. Cuando una porcin de DNA
forneo ingresa a la clula, las enzimas de restriccin se encargan de degradarlo cortndolo en pequeos fragmentos,
siempre y cuando ste no est modificado (Smith Wood 1998).
Actualmente se conocen unas 200 enzimas de restriccin (las ms conocidas se muestran en la tabla 1), las cuales se
nombran de acuerdo al organismo del cual se extraen, como por ejemplo EcoRI y EcoRII, que se extraen de E. coli o
HaeIII que se extrae de Haemophilus aegyptius.
Tabla 1: Algunas de las principales enzimas de restriccin conocidas y su origen (en base a Griffiths et al. 1998).
Escherichia coli
EcoRII
Escherichia coli
HindII
Haemophilus influenzae
HindII
Haemophilus influenzae
HaeIII
Haemophilus aegyptius
HpaII
Haemophilus parainfluenzae
PstI
Providencia stuartii
SmaI
Serratia marcesens
BamI
Bacillus amyloliquefaciens
BglII
Bacillus globiggi
Las enzimas de restriccin trabajan nicamente sobre secuencias especficas de bases nitrogenadas, el lugar donde se
produce el corte se denomina sitio de restriccin y producen dos tipos de corte: (1) corte con extremos cohesivos y (2)
corte con extremos romos (ver Fig. 1) (Griffiths et al. 1998). Los extremos cohesivos dejan porciones lineales a ambos
lados del fragmento, es decir, quedan pequeas secuencias de bases sin aparear a cada lado, siendo stas complementarias
entre s, mientras que los extremos romos son aquellos en los que no queda una porcin lineal a ninguno de los lados. De
acuerdo a la especificidad de las enzimas de restriccin, se conocen dos tipos: las enzimas de tipo I cortan en un sitio
cercano al sitio de restriccin, a una distancia que vara aleatoriamente, y por ello no se suelen emplear para DNA
recombinante. Las de tipo II reconocen y cortan en la secuencia especfica, y son las ms empleadas en este tipo de
protocolos por su alta precisin. Las enzimas de restriccin de tipo III son similares a las de tipo II en cuanto a la
precisin del lugar de corte, pero se diferencian de stas en que slo cortan entre nucletidos del mismo tipo, por ejemplo
entre dos adeninas.
Otro mtodo para producir fragmentos pequeos de DNA para recombinacin consiste en emplear
ultrasonidos. Los ultrasonidos son capaces de romper al DNA cromosomal en pequeos fragmentos. A pesar
de ser un procedimiento muy sencillo, tiene la desventaja de producir fragmentos aleatorios y no permite
aislar genes con gran precisin (Mateos 2000), sin embargo son empleados por su facilidad de uso.
Algunas enzimas de restriccin como EcoRV encuentran el sitio de restriccin, por medio de un barrido a lo
largo del surco mayor del DNA y reconocen una secuencia palindrmica de seis nucletidos de longitud, en la
que se presenta una simetra rotacional binaria. Cuando la enzima de restriccin encuentra el sitio de corte, se
producen una serie de reordenamientos estructurales en el DNA y se produce un ajuste inducido en el cual el
DNA sufre una torsin de 50 grados. En este proceso se va haciendo un barrido muy rpido sobre la hebra de
DNA, leyendo grupos de seis nucletidos, hasta encontrar la secuencia diana. Esto comprueba el carcter
altamente especfico de las enzimas de restriccin (Stryer 1995).
Los puntos de corte de las enzimas de restriccin pueden ser empleados como marcadores para la elaboracin
de mapas de restriccin (Mateos 2000). Para elaborar un mapa de restriccin, se tien los fragmentos
resultantes de la lisis y se los separa mediante una electroforesis PAGE (Electroforesis en gel de
poliacrilamida) (Smith Wood 1998, Mateos 2000) y se establecen las distancias de migracin, siendo los
resultados muy especficos para cada molcula de DNA en estudio (Griffiths et al. 1998). Los extremos
cohesivos son los ms empleados en la construccin de DNA recombinante, puesto que al tener una porcin
lineal "pegajosa" es ms sencillo que se produzca la unin con el DNA del hospedero, por complementacin
de bases, dicha unin se produce por la intervencin de enzimas denominadas ligasas. Adicionalmente, la
enzima transferasa terminal puede ser usada para generar extremos cohesivos en un fragmento de DNA. A
pesar de ser ms difcil, tambin es posible realizar uniones de extremos romos, mediante la adicin de
conectores sintticos de DNA que actan a manera de extremos cohesivos (como el caso de la transferasa
terminal), sin embargo este procedimiento no es de mucha utilidad para realizar una clonacin directa de
DNA.
Existe otro tipo de enzimas de restriccin de doble funcin, denominadas endoexonucleasas, las cuales son
capaces tanto de aadir nucletidos como de removerlos de una hebra de DNA. Estas enzimas tambin son
muy especficas y reconocen secuencias exactas (Bohinski 1991, Stryer 1995) Fraser (1994), plantea que las
enzimas de restriccin del tipo endoexonucleasas pueden tener un papel fundamental en la reparacin del
DNA y/o en la muerte de clulas defectuosas, gracias a la especificidad de la enzima. Se han hecho numerosos
experimentos con endoexonucleasas aisladas de E. coli, Neurospora crassa, Aspergillus nidulans,
mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae, Drosophila melanogaster, clulas de mono y clulas leucmicas
de humano (Fraser 1994). Las potenciales aplicaciones en la medicina de estas enzimas podra llevar a curar
varias enfermedades, este aspecto se ver a detalle ms adelante.
Vectores de clonacin
Una vez que se han aislado los fragmentos de DNA de inters, por medio de enzimas, el siguiente paso es
unirlos a un vector de clonacin. Los vectores de clonacin permiten la unin de los fragmentos de DNA
extrao a su propio DNA por medio de sitios de restriccin compatibles, sin afectar su replicacin, por medio
de un proceso de recombinacin (Madigan et al. 1998, Moreira Mendes 1998, Klug Cummings 1999) El
vector es el vehculo que transporta el gen o genes de inters al hospedero, que normalmente es una bacteria o
una clula eucariota viva. Una vez dentro la clula, el vector se multiplica produciendo varias copias idnticas
del gen que transporta (Moreira Mendes 1998). Para que un vector sea utilizable en la tecnologa de DNA
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Fig. 2: Plsmido pBR322 con sus diferentes sitios de restriccin (tomado de Klug Cummings 1999).
Los plsmidos pueden dividirse en dos grupos: plsmidos conjugables y plsmidos no conjugables. Los
primeros promueven la conjugacin entre bacterias, pasando de una clula a otra, y confirindola nuevas
caractersticas codificadas en su genoma, los otros actan principalmente en procesos de transformacin. Los
plsmidos se clasifican en plsmidos de fertilidad, plsmidos de resistencia, plsmidos col, plsmidos
degradativos y plsmidos virulentos (Moreira Mendes 1998).
La utilizacin y el diseo de plsmidos para ingeniera gentica ha considerado que estos vectores contengan
un nmero limitado de sitios de restriccin (puesto que la posicin es importante), y adems que posean genes
de resistencia para varios antibiticos. El vector pBR322 fue uno de los primeros plsmidos usados para la
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Fig. 3 Pasos a seguir para la incorporacin de DNA forneo a un virus vector (Madigan et al. 1998).
Virus
En la actualidad existen muchos virus conocidos, sin embargo solamente se utilizan dos como vectores para el
trasporte de DNA extrao. Esto se debe a que no todos los virus renen las condiciones necesarias que
permitan insertar en su material gentico otros genes y transportarlos hasta el hospedero. En la actualidad se
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La insercin del DNA forneo, mediante el vector, se realiza generalmente por un proceso de transformacin.
Las clulas receptores crecen luego en una placa de cultivo, produciendo varias clulas genticamente
idnticas, llamadas clones, las cuales tienen incorporado el gen o genes que se desea expresar. En el proceso
de insercin del DNA forneo mediante el vector, no todos los intentos son exitosos, y alguna clulas no
reciben el material gentico extra, puesto que stas deben estar en un estado competente para poder recibir
DNA del medio externo, y la cantidad de clula, tiempo de duracin y condiciones del medio para que las
clulas entren en competencia depende de la clula y son caractersticas propias de cada especie. Estas clulas
deben ser aisladas de las recombinantes por medio del uso de medios selectivos, puesto que normalmente el
vector adems contiene ciertos genes para la resistencia a antibiticos, un medio selectivo con diferentes
antibiticos es una buena alternativa (Klug Cummings 1999).
Hospederos procariotas
El primer hospedero empleado para clonacin de DNA mediante esta tcnica, y el ms usado en la actualidad
es E. coli. Esta bacteria, es posiblemente la mejor conocida por los cientficos y se tiene gran cantidad de
informacin sobre su genoma y sus caractersticas fisiolgicas (Madigan et al. 1998, Smith Wood 1998). La
cepa K12 de E. coli constituye un hospedero bastante bueno, por cumplir las condiciones anteriormente
mencionadas. Sin embargo, E. coli en su forma nativa produce una retencin de protenas en el periplasma,
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Existen adems sistemas de microinyeccin biolgicos, como los virus, que inoculan su material gentico
dentro de la clula hospedadora, y es por ello que son muy usados como vectores.
Tcnicas de transfeccin
Estas tcnicas han sido desarrolladas especficamente para la introduccin de cidos nucleicos dentro de las
clulas, y han permito ampliar los conocimientos que se tenan sobre replicacin, regulacin gnica y el
funcionamiento de las clulas a nivel molecular, entre otras, que actualmente se aplican en el campo de la
gentica para la produccin de plantas y animales transgnicos (Cavener 1992; Kppeli Auberson 1998),
lneas celulares modificadas, y una de sus principales aplicaciones es la construccin de DNA recombinante.
La introduccin de una cadena de DNA recombinante en las que se ha situado una secuencia codificante, bajo
una secuencia de regulacin que se desea estudiar permite medir con facilidad las tasas de expresin gentica
en diferentes situaciones experimentales. Por otro lado, la introduccin de un plsmido con secuencias
codificante y reguladora permite la produccin de una protena deseada, en este caso se emplea a la clula
hospedadora como una "fbrica" para este producto (Reina 2000).
Para los dos casos vistos anteriormente puede ser importante la seleccin de las clulas que han recibido el
material gentico incorporado de las que no, para ello se puede realizar un cultivo en medio selectivo, puesto
que normalmente los plsmidos que se insertan incluyen tambin genes de resistencia a algunos antibiticos.
Las tcnicas de transfeccin se pueden dividir en tres grupos:
Mtodos qumicos:
son aquellos en los que se forman complejos para que la clulas sean capaces de aceptar o incorporar
una cierta molcula a su citoplasma, por medio del mecanismo normal de endocitosis. Para esta
finalidad se usan el fosfato de calcio, el DEAE dextrano y el mtodo de la lipofeccin, los dos
primeros se unen al DNA formando complejos asimilables por la clula, mientras que la lipofeccin
se basa en el recubrimiento de la molcula de DNA en un complejo de lpidos capaces de atravesar la
membrana.
Mtodos fsicos:
son aquellos en los que se produce una introduccin mecnica del DNA, como la microinyeccin (que se vio
anteriormente) o la electroporacin, que consiste en aplicar una carga elctrica al medio para forzar la apertura
de poros de membrana por donde penetran las sustancias.
Clonacin de DNA
Una vez que se ha realizado el proceso de transfeccin comienza la etapa de la clonacin de DNA dentro de la
clula hospedadora. Este proceso es diferente en procariotas que en eucariotas, y por ello se vern ambos
casos por separado.
Clonacin en procariotas: En las clulas procariotas como E. coli el proceso de clonacin de cidos nucleicos
se da una vez que se obtienen los organismos recombinantes, a partir de los cuales se obtienen clones por
simple divisin. Para ello se seleccionan las clulas que si recibieron el DNA forneo mediante el vector, y se
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Fig. 5: Tcnica de produccin de rplicas para aislar mutantes (Klug Cummings 1999).
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Fig. 6: Tcnica de amniocentesis, para detectar enfermedades genticas y realizar anlisis bioqumicos en el
feto (tomado de Klug Cummings 1999).
Las enfermedades que ms comnmente se detectar prenatalmente son la talasemia y la anemia de clulas
falciformes, porque de stas ya se sabe mucho y se tiene un conocimiento previo de dnde se ubican, y por
consiguiente es fcil aislar los fragmentos de DNA para producir el cultivo en un hospedero y determinar el
comportamiento que tendr esa seccin.
La deteccin de enfermedades genticas se ha revolucionado con la implementacin mdica de la tcnica de
nucletidos especficos y rastreo gentico (Klug Cummings 1999). Esta tcnica, cuya abreviatura es ASO,
utiliza en condiciones adecuadas, una sonda que se denomina oligonucletido especfico de alelo (de esta
frase se deriva la abreviatura ASO, en ingls) el cual hibridar slo con su secuencia complementaria y no con
otras secuencias, aunque stas varen slo en un nucletido. Para rastrear enfermedades como la anemia de
clulas falciformes, se utiliza esta tcnica combinada con anlisis de PCR, ya sea este tradicional o una
modificacin especfica, tal como un PCR de baja temperatura (Iakobashvili Lapidot 1999). En este mtodo se
produce una extraccin de DNA por lisis en los glbulos blancos de la sangre, y posteriormente este DNA es
desnaturalizado por calor. Luego se produce una amplificacin del gen en cuestin (para el caso de la anemia
falciforme, el gen de la bglobina, por ejemplo) mediante la tcnica de PCR. Se coloca una gota del DNA
amplificado en un filtro, y se hibridiza con un ASO, y luego se lee el resultado en los filtros, de haber
hibridacin la molcula resultante es demasiado grande para atravesar los poros del filtro.
Terapia gnica
El rastreo y caracterizacin de los genes que producen las enfermedades genticas desde un principio tuvo la
finalidad de ofrecer un tratamiento a estas enfermedades, de esto surge el concepto de terapia gnica, la cual
consiste en transferir alelos normales a un individuo enfermo para eliminar su problema. Ya se han hecho
varios experimentos en ratones y otros animales, en los cuales se ha logrado exitosamente restaurar el
funcionamiento normal de un alelo por la insercin de la cadena correcta mediante un vector. El que hayan
resultado exitosos los ensayos realizados en ratones abre la mente a creer que en unos aos ms este tipo de
terapia pueda ser usada para curar las cientos de enfermedades genticas de los humanos (Griffiths et al. 1998,
Klug Cummings 1999).
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La terapia gnica tiene ya una cierta historia, en un principio se aplicaba en humanos, inoculando al
organismo dosis significativas de la protena faltante o defectuosa, por ejemplo, se administraban fuertes dosis
de insulina a enfermos de diabetes, con la finalidad de que una elevada concentracin de la protena funcional
restaure la secuencia gentica. Desafortunadamente este tipo de terapia gnica no tuvo xito, y los estudios
derivados a investigar el o los mecanismos necesarios para el reemplazo de una secuencia defectuosa por una
normal, mediante el uso de vectores y tcnicas de DNA recombinante.
Este proceso todava est en fase experimental y an no hay datos sobre ensayos exitosos en humanos, todas
las prueba realizadas se han hecho en invertebrados como Drosophila y en mamferos pequeos como Mus
musculus. Si bien el proyecto genoma ya ha dado una versin preliminar de la secuencia de los 23
cromosomas humanos, y las tcnicas de transferencia de genes estn cada da ms avanzadas, todava resulta
difcil aislar genes especficos sanos en humanos, y ms difcil an el implantarlos en el sitio correcto, en un
organismo enfermo. El tamao y la complejidad del genoma hacen de sta una ardua tarea.
Lucha contra el cncer
Anualmente millones de personas mueren de cncer. Esta enfermedad ha sido extensamente estudiada por los
cientficos, pero an no se han podido dar curas para este mal, pues todava no se tiene claro cmo se origina
exactamente, y cules son los mecanismos que operan para su tratamiento. Hasta ahora se sabe que el cncer
es producto de una mutacin en un sitio importante del genoma, que ocasiona que las clulas se reproduzcan
sin control generando tumores y destruccin de tejidos. Se han hecho muchos estudios a nivel molecular y se
han lanzado cientos de hiptesis, pero todava no se tiene nada concreto que permita disear una cura.
Uno de los estudios ms interesantes al respecto se lo ha realizado aislando y estudiando los factores que
determinan la muerte celular, pero investigaciones recientes han mostrado que la solucin puede ser ms
simple todava, Fraser (1994) observ que en algunos organismos existen enzimas denominadas
endoexonucleasas aisladas de E. coli, que se encargan de la reparacin del DNA y la muerte celular. Esta
quiz sea la respuesta al cncer, puesto que esta enzima bifuncional es capaz de quitar o aadir nucletidos al
DNA para corregir errores, y si fuera posible introducir el gen que la codifica en las clulas cancerosas, se
abre la oportunidad de una reparacin in vivo de la secuencia mutada, y de esta manera detener e incluso tal
vez, revertir el efecto del cncer en uno o ms tejidos.
Si bien estas enzimas se han aislado inicialmente en E. coli y han sido ampliamente estudiadas por medio de
la tecnologa de DNA recombinante, y otros mtodos como el PCR, se ha encontrado evidencia que existen
enzimas parecidas a estas en Saccharomyces cerevisiae y se ha dejado abierta la posibilidad de que existan
algunas enzimas parecidas a estas en los mamferos.
Si llegara a concretarse un estudio al respecto y ste revelara la factibilidad de introducir el gen que codifica
las endoexonucleasas en clulas humanas, posiblemente la lucha contra el cncer habra encontrado un
remedio, y la solucin a este problema sera aplicar una terapia gnica de inclusin de DNA forneo para
reparar el material daado.
Aplicaciones forenses
La tecnologa de DNA recombinante ha pasado a ser un fuerte aliado de la medicina forense y la investigacin
criminal. Caractersticas genticas especficas estn siendo usadas como pruebas contundentes en cientos de
juicios hoy en da, puesto que basta una clula de donde se pueda aislar DNA para identificar a una persona,
con menos de un 1% de error. Esta tcnica se viene usando desde hace algunos aos para pruebas de
paternidad, problemas de inmigracin (para determinar razas) y como una huella molecular para identificar
criminales. No obstante, estos procedimientos han levantado fuertes crticas ticas, ya que en algunos casos
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Fig. 7: Tcnica de produccin de plantas transgnicas por medio de la formacin de callos con Agrobacterium
tumefaciens (Klug Cummings 1999).
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Quiz uno de los casos ms llamativos por su importancia, es el propuesto por Chen Wilson (1997) para la
construccin de cepas de E. coli modificadas capaces de bioremediar mercurio. Todava no se han encontrado
bacterias silvestres capaces de remediar contaminacin por este metal, pero si bacterias que pueden hacerlo
menos txico para el ambiente, cambindolo de forma a complejos orgnicos. Sin embargo, la posibilidad de
construccin de una cepa capaz de bioremediar este metal pesado, abre las puertas al tratamiento de reas
afectadas por la industria, en especial la minera, que vierte grandes cantidades de residuos con mercurio a
suelos y aguas.
Campo de aplicacin del DNA recombinante en la industria
En la actualidad existen muchas aplicaciones industriales para la tecnologa de DNA recombinante. Los
productos que se generan a partir de organismos recombinantes son muchos y tienen diferentes finalidades,
que van desde la industria vitcola hasta la produccin de medicamentos.
El microorganismo protagonista en la industria por DNA recombinante es la levadura Saccharomyces
cerevisiae, que al ser un organismo eucariota simple del cual se tiene ya un gran conocimiento, se facilita la
produccin de sustancias mediante su maquinaria biosinttica. Actualmente se usan cepas de levadura
modificadas para la produccin a gran escala de taumatina y quimosina (Smith Wood 1998). La taumatina es
una protena de origen vegetal, unas 200 veces ms dulce que la sacarosa y es usada comercialmente en
edulcorantes y como aditivo para muchos alimentos. La quimosina, tambin conocida como renina, es una
protena que se utiliza en grandes cantidades para la produccin de queso.
Otra aplicacin de levaduras modificadas genticamente est dada en la industria de los vinos
(PrezGonzlez et al. 1993). Se han construido cepas de levadura recombinante que expresen el gen de la b
(1,4)Endoglucanasa, una enzima que reacciona con los azcares del mosto, dndole al vino un aroma a
frutas ms intenso y agradable. Esta modificacin de la levadura del vino, favorece al proceso de micro
vinificacin, induciendo una fermentacin ms rpida del mosto, sin alterar la calidad y el sabor del vino. El
proceso de modificacin de esta cepa de levadura es complejo y requiere de equipo sofisticado (ver
PrezGonzlez et al. 1993 para mayor informacin), puesto que se debe asegurar el correcto funcionamiento
de la cepa ya que su aplicacin es de gran escala, y un error en la construccin de la cepa puede representar
prdidas millonarias para la industria, pero su correcta aplicacin tambin genera un movimiento econmico
significativo.
Como ya se vio en la parte de aplicaciones mdicas, las bacterias recombinantes se usan ampliamente para la
produccin de ciertos medicamentos y enzimas a gran escala. Este mtodo de produccin tambin ha
revolucionado la industria farmacutica, puesto que desde hace algunos aos que este mtodo ha reemplazado
la produccin tradicional de insulina, enzimas, hormonas y otros, lo cual ha llevado a una masificacin de su
uso y una considerable reduccin de costos. Si se compara el costo y rendimiento de la extraccin de
microlitros de hormona de crecimiento de cadveres, con los volmenes diarios que puede proveer un cultivo
de E. coli recombinante ya diferencia es abismal: gracias a la industrializacin mediante tecnologa de DNA
recombinante, millones de personas en el mundo pueden acceder ahora a tratamientos mdicos con este tipo
de protenas.
El campo de la investigacin gentica y la biologa en general, tambin se han visto favorecidas con la
produccin de gran escala y menor costo de protenas y enzimas necesarias para las investigaciones que se
realizan en los diferentes campos de estas ciencias.
Discusiones y conclusiones
La tecnologa de DNA recombinante es una tcnica de reciente aplicacin, que a tenido un gran impacto en la
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19992003 biologia.org
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