"DETECCIN CONJUNTA DE VIRUS HEPATITIS C

(ANTGENO CORE Y ANTICUERPOS ANTI-HCV).

ES UNA ALTERNATIVA VLIDA A LA
BSQUEDA DE RNA VIRAL"?

Octubre 2011

OBJETIVOS PRESENTACIN
Antecedentes.
Revisar caractersticas y epidemiologa del
virus de la hepatitis C.
Mtodos de diagnstico actuales y sus
desventajas.
Revisin de la literatura sobre ensayos para la
deteccin antgeno core del virus hepatitis C.

Introduccin

Histricamente, el anlisis para la deteccin de HCV en las donaciones de

sangre se ha basado en la utilizacin de inmunoensayos para detectar
anticuerpos contra el virus (HCV-Ab).

Desde la introduccin de los test para la deteccin de HCV-Ab por primera

vez en 1989, la mejora del rendimiento de las pruebas ha permitido reducir
drsticamente el riesgo de transmisin del HCV por componentes
sanguneos, mediante la reduccin del perodo de ventana desde 82,2 hasta
66 das posterior a la infeccin.

El riesgo de transmisin de HCV en el periodo de ventana

preseroconversin, se ha estimado 1/103.000 (1991-1993) en EEUU y
1/222.000 (1993-1995) en Francia.

Laperche et al. (2005) Transfusion 45:1965-1972.

Introduccin
Para reducir el riesgo residual se han introducido y recomendado
nuevos mtodos de deteccin que incluyen pruebas de cido
nucleicos (NAT) para el RNA del HCV.

Sin embargo, su implementacin se ve dificultada por los altos

costos que involucra la introduccin de metodologas moleculares
(equipamiento, capacitacin), posibilidad de contaminacin y
requerir un procesamiento previo que aumenta los tiempos de
ejecucin.
Slo los pases desarrollados han podido implementar estas mejoras
y es que se estima que la prevencin de una infeccin de HCV por
NAT costara alrededor de 1,2 millones de euros.
Laperche et al. (2005) Transfusion 45:1965-1972.

Introduccin
Esto ha llevado a la bsqueda de alternativas a los NAT para
los pases en desarrollo, que permitan detectar ms
precozmente las infecciones por HCV (en el periodo
preseroconversin) lo que traera una mayor seguridad para los
pacientes receptores de hemocomponentes y con una mejor
relacin costo-efectiva.

PREVALENCIA GLOBAL DE HEPATITIS C

El HCV es un problema de salud global y la WHO estima que
al menos 170 millones de personas estn infectadas (3% de la
poblacin).

HISTORIA
Las pruebas diagnsticas para detectar el HBV
comenzaron a utilizarse en 1965 y para el virus
A en 1973. Su uso evidenci que haba hepatitis
producidas por virus que no eran A ni B, las
que representaban aproximadamente dos tercios
de las hepatitis postransfusionales.
La inoculacin de un chimpanc con sangre de
un
paciente
con
hepatitis
crnica
postransfusional NoA, NoB, permiti el
desarrollo, a su vez, de una enfermedad
heptica crnica en el animal.
He et al., J. Infect. Dis. 156, 636 (1987).

HISTORIA
En 1989, utilizando tcnicas de biologa molecular, fue
identificado finalmente el principal agente productor de
hepatitis NoA, NoB postransfusional, el que se aisl, clon y
caracteriz, denominndosele virus C de la hepatitis (HCV).

Choo et al. Science 1989; 244: 359-62.

HCV
Virus envuelto, familia flaviviridae.

RNA monocatenario (+): 9.6 Mbp.

Seis genotipos mayores, > 80 subtipos.
Genoma codifica para 3 protenas
estructurales y 7 no-estructurales.

HCV: GENES y PRODUCTOS TRADUCIDOS

HCV: TRANSMISIN
Agujas contaminadas:
Uso de drogas inyectables: >90% de las nuevas infecciones
en EE.UU.
Procedimientos mdicos riesgosos: mundo en desarrollo.

Transfusin / transplante de rgano antes de 1992.

Perinatal: <5%, 15-20% con VIH.

Cintica Marcadores HCV

Seme et al. (2005) J Clin Virol 32:92-101

HCV-Ac EIA
La primera generacin HCV EIA detectaba slo anticuerpos
contra la regin no estructural 4 (NS4) con el antgeno
recombinante c100-3.

Los tests de segunda generacin incorporaron antgenos

adicionales de la regin del core (c22-3), la regin NS3 (c33c)
y una parte de c100-3 (5-1-1) de la regin NS4 puede ser
usada.
Los ensayos de tercera generacin actuales incluyen un
antgeno adicional de la regin NS5 y una reconfiguracin de
los antgenos del core y NS3.

Desventajas Tcnicas Actuales

Los ensayos Anti-HCV tienen diferentes desventajas:
carencia de sensibilidad de deteccin en los periodos
ventana de 45 a 68 das despus de la infeccin,
incapacidad de distinguir entre infeccin aguda (activa,
virmica), pasada (recuperada) y persistente (crnica), y
la posibilidad de obtener falsos negativos con muestras de
pacientes inmunocomprometidos.

Desventajas Tcnicas Actuales

Los ensayos immunoblot recombinantes, tambin
tienen desventajas, tales como difcil realizacin, un
alto porcentaje de resultados indeterminados y un alto
costo. Por lo que no suelen ser usados en pases en
desarrollo o como rutina.
Los ensayos HCV RNA son un mtodo confiable,
pero necesitan la implementacin tcnica necesaria,
existe el riesgo de contaminacin, requieren de
tiempo y son costosos para su aplcacin a gran escala.

Antgeno Core HCV (HCVcAg)

Se desarrolla un EIA para HCVcAg, se

compara contra AMPLICOR HCV test.
5.125 sujetos sanos y 550 con hepatitis B
fueron negativos para el HCVcAg.
HCVcAg (+) 57/73 individuos (78.1%)
con test anti-HCV (+), HCV-RNA (+)
59/73 (80.8%) con AMPLICOR HCV.
Las concentrations de HCVcAg y HCV
RNA se correlacionaron (P < 0.001).
En paneles de seroconversin el HCV Ag
fue detectado en fases tempranas de la
infeccin, cuando an no se producan Ac
anti-HCV.

Aoyagi et al. (1999) J Clin Microbiol 37(6): 1802-1808

Se compara la performance del test

HCVcAg con la deteccin de HCV-RNA
durante el periodo de preconversin.
6 HCV-Ab (-) y HCV RNA (+) de 6
donantes y 135 muestras seriadas de 28
pacientes en HD, recolectadas en
promedio 90 das antes de la deteccin de
HCV-Ab fueron testeadas para ELISA
HCVcAg y PCR.
5/6 donantes fueron (+) para HCV Ag. El
donante HCV Ag (-) tena la carga viral
ms baja.

Courouc et al. (2000) Transfusion 40:1198-1202.

En los pacientes en HD, las

primeras 43 muestras fueron
HCV-RNA (-).

De los 92 restantes, 81 (88%)

fueron (+) para HCVcAg.

La primera muestra HCVcAg

(+) desde la deteccin de RNA
viral fue estimada en 2.0 das,
mientras que para HCV-Ab fue
de 50.8 das.

HCV Ag permite la deteccin

de la infeccin por HCV 1.5
meses antes que el screening de
HCV-Ab y en promedio slo 2
das despus de la PCR
cuantitativa para HCV-RNA.

Courouc et al. (2000) Transfusion 40:1198-1202.

Se evala un ensayo prototipo para la

deteccin serolgica del HCVcAg de
muestras en fase temprana infeccin por
HCV.
Muestras seriadas de 24 individuos
seroconvirtiendo: anti-HCV, HCVRNA y HCVcAg.
HCVcAg fue detectado al mismo tiempo
que HCV-RNA en 83% (20/24) de los
casos.
El tiempo promedio para la deteccin fue
1 da posterior a HCV-RNA (+).
En total, el 87% HCV-RNA (+) eran
HCVcAg detectables.
Peterson et al. (2000) Vox Sang;78:8085

 Comparacin de un EIA quimioluminiscente con Ac

monoclonal (PRISM) para la deteccin de HCVcAg contra
RT-PCR para HCV-RNA.
310 pacientes con hepatitis C aguda o crnica y 132 controles
HCV Ab (-)
HCVcAg mostr una S: 97% y E: 100% en 75 pacientes con
hepatitis C crnica y 132 controles en comparacin a PCR.
HCVcAg fue (+) en 16/17 (94%) pacientes con hepatitis C
aguda al inicio de su sintomatologa.
167 anti-HCV (+), 129 (77%) HCV-RNA (+) y HCVcAg (+)
en 126/129.
Takana et al. (2000) Hepatology 32: 388-393

Takana et al. (2000) Hepatology 32: 388-393

 EIA de micropartculas quimioluminiscente (PRISM HCV) para la

deteccin de HCVcAg, testeado en poblacin de donantes de
sangre y paneles de seroconversin.
HCVcAg mostr una E:99.9% en 1.004 donantes testeados.
La S fue determinada comparando HCVcAg con la seroconversin
HCV AbAssay y la deteccin de HCV-RNA por PCR.

15 paneles: 69/70 muestras HCV Ab (-) y/o HCV-RNA (+) se

detect HCVcAg (S: 98.6%).
Se estim una reduccin en el periodo de ventana para la deteccin
de donantes potencialmente contagiosos de 32,7 das.
Muerhoff et al. (2000) Transfusion;42:349-356.

Muerhoff et al. (2000) Transfusion;42:349-356.

EIA HCVcAg (Ortho HCV) evaluado en donantes y paneles comerciales.

1964 muestras individuos bajo riesgo, slo 1(7) fue repetidamente reactiva,
siendo HCV-RNA (-). E:99,95%.
7 paneles: HCVcAg apareci 23-46 das antes que HCV-Ab (3G).

Widell et al. (2002) Transfusion Medicine 12: 107-113

41 muestras de plasma de 18
donantes plasmafresis durante el
periodo ventana preseroconversin
de infeccin HCV, testeados para
HCV-Ab, HCV-RNA y HCVcAg
(Ortho).

Niveles de HCV-RNA entre 5.4

102 y 3.4 107 IU por mL.
HCVcAg fue detectado en 11/18
donantes al mismo tiempo que
RNA viral.

Grant et al. (2002) Transfusion 42:1032-1036.

494 muestras secuenciales de 52 donantes regulares de plasma con HCVAb (-). Testeados con PCR y ELISA para HCVcAg, durante la fase de
preconversin infeccin HCV.
Deteccin concordante de HCV-RNA y HCVcAg en 218 muestras y nodeteccin concordante en 185, dando un 81,6% concordancia entre las 494
muestras.
91/494 (18.4%) muestras discordantes, 65/91 con bajas concentraciones de
RNA (300 and 100,000 IU por mL) y 26/91 con menos de 300 IU por mL
(limite de q-PCR).

Nbling et al. (2002) Transfusion 42:1037-1045.

Nbling et al. (2002) Transfusion 42:1037-1045.

Se evala EIA con disociacin complejo (trak-C, Ortho Clinical

Diagnostics), comparado con HCVcAg ELISA (1G).
9 HCV RNA (+) HCV-Ab (-) donantes y 23 pacientes en HD que
seroconviriteron HCV (81 muestras secuenciales , 23 HCV-RNA (-) y 58
(+) HCV-RNA (+)).
9/9 HCVcAg (+) por trak-C y 6/8 (+) HCVcAg ELISA 1G.
23/23 HCV-RNA (-) fueron negativas para ambos mtodos.
46/57 HCV-RNA (+) fueron positivas por ELISA 1G (80.7%) y 57/58
(98.2%) fueron HCVcAg (+) por track-C.
El retraso promedio en la deteccin de la infeccin por HCV entre trak-C y
la aparicin de HVC-Ab, entre HCV-RNA y trak-C, y entre trak-C y
HCVcAg ELISA 1G fue 58.2, 0.24 y 3.33 das respectivamente.

Laperche et al. (2003) Transfusion 43:958962.

Laperche et al. (2003) Transfusion 43:958962.

Se un nuevo mtodo que detecta simultneamente HCVcAg y HCV-Ab

(Monolisa HCV antigen-antibody Ultra, Bio-Rad) como alternativa a los
NAT para el diagnstico de la infeccin por HCV durante el periodo
ventana en donantes de sangre.
107 muestras secuenciales de 10 paneles seroconversin (81 en fase pre y
26 post).
31/44 muestras HCV-RNA (+) durante el periodo pre, fueron
HCVcAg/HCV-Ab (+) (70.5%).
Promedio das retraso deteccin infeccin HCV fue 5,1 das.
El test Monolisa llev a una reduccin del periodo ventana de 26,8 das (072).
Todas las muestras post fueron (+) para Monolisa.
La E fue determinada en 2503 dadores, estimandose en un 99,88%
Laperche et al. (2005) Transfusion 45:1965-1972.

Laperche et al. (2005) Transfusion 45:1965-1972.

Monolisa HCV Ag/Ab ULTRA; Bio-Rad, comparado con HCV-Ab,

HCVcAg y HCV-RNA.
12 dadores de sangre HCV-RNA y HCVcAg (+) pero HCV-Ab (-) y 23
pacientes en HD que seroconvirtieron durante el seguimiento (83 muestras
pre / 108 post)
6/12donantes fueron HCV Ag/Ab (+) y en los pacientes HD 24/24 de los
HCV-RNA (-) fueron negativos y 23/59 HCV-RNA (+) fueron HCV
Ag/Ab (+) (39%).
HCV Ag/Ab detect infeccin HCV 21,6 das antes que los test para HCVAb, pero menos que HCV-RNA (30,3 d) o HCVcAg (27,9 d).

Laperche et al. (2005) J Clin Microbiol 43(8):3877-3883

Se revisan 56 estudios publicados hasta

Septiembre 2004, determinndose que los
ensayos para HCVcAg poseen una
performance similar a los NAT:
Detectan infeccin por HCV 40-50 das antes
que los screeninigs de HCV-Ab de 3G.
El HCVcAg tiene una cintica similar a la del
HCV-RNA (cercana) y permitira el
monitoreo clnico, independiente del genotipo,
de la terapia del paciente (recuentos altos),
aunque no permite determinar trmino de
terapia.

Seme et al. (2005) J Clin Virol 32:92-101

18 paneles seroconversin HCV fueron

testeados para HCV-Ab, HCVcAg y
HCV-RNA. Individualmente y en pools
de 3, 6 y 12.
Deteccin de HCVcAg individualmente y
en pools de 3 y 6 muestras, precedi
significativamente la deteccin de HCVAb (63, 53 y 46 das), S disminuye en la
medida que aumenta tamao pool.
Screening para HCVcAg en pools de 6
muestras podra ser considerada eficiente
y costo-efectiva alternativa a los NAT en
dadores de sangre.

Beer et al. (2006) Transfusion 46:1822-1828.

Se evalu determinacin simultnea de anticuerpos y antgeno del HCV

(Monolisa HCV Ag/Ab ULTRA;
BioRad, Marnes la Coquette, France).
Se estudiaron 7 paneles (75 muestras) de seroconversin, 1.360 sueros con
solicitud de determinacin de HCV-Ab y 333 sueros de 183 pacientes en
HD.
1.360 sueros: 74 HCV-Ab (+) y 77 HCVAg/Ab (+).
325/333 muestras de pacientes HD dieron resultados coincidentes, 308 ()
y 17 (+). 7 (+) dieron resultado HCVAg/Ab (+) y HCV-Ab (-)
Paneles de seroconversin: 43/75 (+) para HCVAg/Ab; 18/75 HCV-Ab (+),
consiguiendo una reduccin del perodo ventana de hasta 72 das.

Alados et al. (2007) Enferm Infecc Microbiol 25(3):172-176

HCVcAg, Abbott para la plataforma

ARCHITECT. Se estudi correlacin
contra HCV-RNA.

Grupo de pacientes HCV diagnosticados

no tratados.

HCVcAg mostr buena correlacin con

HCV-RNA en 118 muestras independiente
del genotipo viral. (r = 0.75). 9/10
pacientes mostr una buena correlacin en
el estudio longitudinal.

Mederacke et al. (2009) J Clin Virol 46:210-215

Evaluacin Abbott ARCHITECT HCV

Ag test y su utilidad en el screening de
infecciones por HCV en pacientes en HD.
98 muestras de pacientes infectados para
estudiar correlacin.
2752 muestras de pacientes HCV-Ab (-).
Correlacin significativa entre HCVcAg y
HCV-Ab (r= 0.9041, p < 0.0001)
independiente de genotipo y subtipo.
E: 99,2% considerando HCV-RNA como
referencia.
Los dos pacientes HCV-Ab (-) que fueron
HCV-RNA (+) tambin fueron HCVcAg
(+).
Miedouge et al. (2010) J Clin Virol 48:18-21

Miedouge et al. (2010) J Clin Virol 48:18-21

385 muestras clnicas. Abbott ARCHITECT HCV Ag test mostr una E.

100%, con CV 3.6 a 8.0% (iE) y 4.7 a 9.5% (IE).
La sensibilidad analtica fue fmol AgCore/L, lo que equivale a 500 a 3,000
IU de HCV RNA/mL.
Linearidad comprobada entre 10 - 20,000 fmol/L.
Redujo periodo de deteccin de 4 a 16 das (paneles).

Ross et al. (2010) J Clin Microbiol 48(4):1161-1168

Evaluacin ARCHITECT HCV Ag assay (Abbott Laboratories, USA).

109 sueros de pacientes infectados por HCV y 20 sueros de donantes sanos.
S: 97,2% (106/109), sin FP (E:100%) ni reactividad cruzada.
CVs: 3.0% (iE), 2.5% (IE) y 3.0% (ID).
Correlacin con HCV-RNA (r=0.940).
Linealidad 6 - 17,114 fmol/L (r=0.999).

Songet al. (2010) Korean J Lab Med 30:654-9

Se evalu Abbott ARCHITECT HCV Ag contra Roche Cobas TaqMan en

282 muestras clnicas.
Correlacin significativa (r= 0.9464).

Park et al. (2010) J Clin Microbiol 48(6):2253-2256

212 muestras. Se evalu Abbott Architect HCVcAg, HCV-Ab y HCVRNA

S: 96.3 %, E: 100 %, VPP: 100 %, y VPN: 89.7 %.
Niveles HCVcAg mostraron buena correlacin con HCV-RNA (r=0.907).

Kelsi et al. (2011) J Clin Microbiol (ahead on print 21 September 2011)

Evaluacin Abbott ARCHITECT HCV Ag assay.

3000 sueros de diferentes poblaciones, se compar resultados HCVcAg,
HCV-Ab y HCV-RNA.
HCVcAg mostr E: 100%, CV < 10%.
Sensibilidad analtica de3 fmol/L que corresponde a 7001100 IU/mL de
HCV-RNA.
Se identificaron casos HCVcAg (+) en sujetos xon diferente grado de
detrioro inmunolgico que eran HCV-Ac (-): 2/361 HD (0.6%) y 7/97
(7.2%) entre receptores de transplantes.

Medici et al. (2011) J Clin Virol 51:260-265

Consideraciones Finales
La deteccin de HCVcAg resulta una buena alternativa para la
deteccin de infeccin por HCV, ya que reduce
considerablemente el periodo de ventana caracterstico de los
ensayos para HCV-Ab y est ampliamente respaldada.
ARCHITECT HCV Ag test es una metodologa confiable,
altamente especfica y con buenos parmetros de desempeo
analtico, permitiendo un alto flujo de trabajo.
La implementacin de esta metodologa, si bien no sustituye a
los NAT, complementa a HCV-Ab y en conjunto son una
alternativa vlida a la incorporacin de los NAT donde no
existen las plataformas y/o los recursos para implementarlas.