I.

INTRODUCCIN

El estudio de la actividad enzimtica tiene importancia en ciencia

bsica, bioqumica y biotecnologa. As mismo, la presencia de distintas isoenzimas
y su actividad enzimtica diferencial puede ser empleada como marcador
bioqumico de normalidad o anormalidad (diagnstico de enfermedades). Las
enzimas son protenas (con la excepcin de los RNA catalticos) producidos por los
seres vivos que catalizan con gran eficacia las reacciones biolgicas, actuando de
forma especfica y regulada. Las anteriores propiedades hacen que las enzimas se
puedan aplicar, de forma muy eficaz, a procesos industriales tales como la
obtencin de frmacos, procesado de alimentos y en analtica. La cintica
enzimtica es la parte de la enzimologa que estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas enzimticamente y el efecto que diferentes factores fsico-qumicos
sobre dicha velocidad.

1.1.

OBJETIVOS

Medir la actividad de la enzima per oxidasa de hoja de verbena sp. En

diferentes condiciones de

Determinar experimentalmente la concentracin del agua oxigenada,

atreves de la titulacin con permanganato de potasio,KMnO4, de
normalidad aproximado, a 0.1 N.

Comparar los resultados obtenidos y discutirlos.

II.

REVISION DE LITERATURA

2.1 Temperatura
La elevacin de la temperatura incrementa la velocidad de una
reaccin catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reaccin aumenta
cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energa cintica de la
energa de las molculas reactantes.
Sin embargo, al final, la energa cintica de la enzima excede a la
barrera energtica para romper los enlaces dbiles de hidrogeno que conservan su
estructura secundaria y terciaria.
A esta temperatura predomina la desnaturalizacin con prdida
precipitada de la actividad cataltica. Por tanto las enzimas muestran una
temperatura ptima de accin. Los lmites de actividad para la mayor parte de las
enzimas tiene lugar entre los 10C y 50C; la temperatura ptima para las enzimas
en el cuerpo se hall alrededor de 37C.
El factor por el cual un proceso biolgico aumenta para un incremento
de temperatura de 10C es el coeficiente de temperatura o Q10. El Q10 para la
mayor parte de las enzimas vara entre 1.5 y 3. (Principios de Bioqumica, McGraw
Hill, 1989.MICROSOFT EXCEL 2002 (10.2614.2625).

2.2 pH
La intensidad mxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH
ptimo, con rpida disminucin de la actividad a cada lado de este valor de pH. La
actividad ptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.
El pH ptimo de una enzima puede guardar relacin con cierta carga
elctrica de la superficie, o con condiciones ptimas para la fijacin de la enzima a
su sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrogeno, las enzimas los unen a sus
molculas y ante un dficit los ceden.
Este cambio tiene una doble consecuencia sobre la molcula. Como
todas las protenas, las enzimas desempean su funcin por los residuos de

aminocidos; algunos confieren a su superficie una distribucin de cargas

elctricas.
Cuando la concentracin de iones hidrogeno es muy baja en
comparacin con la concentracin optima, la molcula los cede desapareciendo
cargas positivas o apareciendo cargas negativas en su superficie. Ante una
concentracin elevada de iones hidrogeno, algunos se fijan a la molcula
desapareciendo cargas (-) o poniendo cargas (+) que no existan.
As mismo al cambiar las cargas elctricas en los residuos de
aminocidos se alteran los lazos de unin dentro de la molcula variando su
acomodo tridimensional con recuperacin de la actividad de la enzima.
A esta temperatura predomina la desnaturalizacin con prdida
precipitada de la actividad cataltica. Por tanto las enzimas muestran una
temperatura ptima de accin. Los lmites de actividad para la mayor parte de las
enzimas tiene lugar entre los 10C y 50C; la temperatura ptimapara las enzimas
en el cuerpo se hall alrededor de 37C.

2.3 PEROXIDASA
Pertenece a la subclase de enzima oxidoreductasas que catalizan la
accin de sustratos orgnicos con perxido de hidrogeno, quedando reducida en
agua. Estas enzimas son protenas homo que se hallan frecuentemente en plantas
y ocasionalmente en vegetales. Las peroxidasas son enzimas que catalizan la
siguiente reaccin:

La reaccin importante de las peroxidasas es la es la anterior, sin

embargo existen 3 tipos de reacciones en las que puede intervenir reacciones
peroxidativas, oxidativas o hidroxilativas. Para la reaccin peroxidativa se requiere
un perxido orgnico o de agua. El nmero de compuestos que pueden ser
aceptores de hidrgeno para algunas peroxidasa es pequeo. Los compuestos
donadores de hidrgeno pueden ser fenoles, aminas y otros compuestos orgnicos.

El mecanismo de la reaccin se basa en la formacin de complejos de enzimadonador de hidrgeno y dos pasos de oxidacin univalente.
2.4. Actividad enzimtica
Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser protenas
de actuar como catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural
ms estable que las dems conformaciones posibles. As, cambios en la
conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. Los factores
que influyen de manera ms directa sobre la actividad de una enzima son:
- Ph
- Temperatura
- Cofactores
(https://www.academia.edu/7135676/EFECTO_DEL_PH_Y_TEMPE
RATURA_SOBRE_LA_ACTIVIDAD_DE_LA_CATALASA)

III.

3.1.

MATERIALES Y METODOS

Materiales por mesa:

Por mesa: hojas de verbena sp. Mortero y piln, 5 pipetas de 5 ml, 3
Erlenmeyer 250 ml, agua destilada en piceta, una bureta de 50 ml, 20 ml
cido sulfrico concentrado, 200. Un ml de solucin de permanganato de
potasio 0.1M (preparar al momento), 70 ml de perxido de hidrgeno 0.1
M.

3.2.

PROCEDIMIENTO

Medir 10 ml d perxido de hidrogeno 0.1 M en cada tubo de ensayo.

Pesar un gramo de hoja de verbena sp. Cinco veces y molerlos por
separado hasta obtener una pasta vegetal.
Colocar en las diferentes condiciones de temperatura, dejar T el T0 como
testigo sin enzima.
Agregar la pasta vegetal (enzimas) y esperar 30 min.
Inmediatamente despus, filtrar u obtener 5 ml de sobrenadante de los
tratamientos TI hasta el T4.
Y titular segn el procedimiento descrito ms abajo.

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

CON ENZIMA
Titulacin
Volumen y
concentracin
inicia de H2O2
T0
T1
T2
T3

10 ml a 0.1
10 ml a 0.1
10 ml a 0.1
10 ml a 0.1

Temperatura

hoja molida
de verbena

Vol.
Gasto
KMnO4

Vol.
Gasto
KMnO4

T. ambiente
T. 4
Tempe.60
tempe.100

1 gramos
1 gramos
1 gramos
1 gramos

3.6 ml
2.5 ml
2.75 ml
4.7 ml

10 ml
8.6 ml
28.6 ml
3 ml

M
M
M
M

SIN ENZIMA
Titulacin
Volumen y
concentracin
inicia de H2O2
T0
T1
T2
T3

10 ml a 0.1
10 ml a 0.1
10 ml a 0.1
10 ml a 0.1

M
M
M
M

Temperatura

hoja
molida
de verbena

Vol.
Gasto
KMnO4

Vol.
Gasto
KMnO4

T. ambiente
Tempe. 4
Tempe.60
tempe.100

0 gramos
1 gramos
1 gramos
1 gramos

6 ml
6 ml
6 ml
6 ml

35.5ml
25 ml
25.7 ml

Valoracin del H2O2

Preparar la bureta limpindola, llenndola con la solucin de KMnO4 0.1M
hasta el punto de enrase. Asegurar de que la llave no pierda y secar la parte
exterior de la bureta.
En un Erlenmeyer de 250 ml, se aade 0.5 ml de la solucin de agua
oxigenada y a continuacin 1 ml de cido sulfrico conc. Se agita con
cuidado para mezclar.
Aadir la solucin de KMnO4 gota a gota sobre la solucin de H2O2.

 Agitando continuamente el Erlenmeyer despus de cada adicin hasta

observar la aparicin de un color violario persistente, momento en el cual
se habr terminado la valoracin.
Anotar el volumen de KMnO4 consumido, leyendo el menisco con la bureta
a la altura de los ojos.
Obtener la cantidad de perxido restante en la solucin y hallar
proporcionalmente la cantidad de moles de H2O2 catalizados por la
enzima.

V.

CONCLUSIONES

Se realiz correctamente la medicin de la actividad de la enzima per

oxidasa de la hoja de verbena sp. Llegando a la conclusin de que en
diferentes condiciones de pH La velocidad de una reaccin catalizada por
una enzima se incrementa al aumentar la temperatura a la cual se lleva a
cabo la reaccin.
La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimticas
porque acelera o retarda la accin de las enzimas.

VI.

RECOMENDACIN

Se recomienda conseguir los materiales adecuados para la prctica que se

va a realizar.
Se recomienda seguir el procedimiento adecuado en el desarrollo de la
prctica y de esa forma evitar errores.

VII.

CUESTIONARIO

a) qu otros factores influyen en la actividad enzimtica?

Concentracin de sustrato.

Concentracin de enzima.

Inhibidores.

Factores alostricos.

b) Qu otras enzimas son importantes para los seres vivos ? ag una

lista de 20, indicando sus sustratos y sus productos

FUENTE

ENZIMA
Cuajo
Animal
Tripsina
Pepsina
Amilasa malteada
Vegetal
Papana
Koji
Proteasa de bacilo
Amiloglucosidasa
-Amilasa de bacilos
Microbiano Glucosa isomerasa
Cuajo microbiano
-Amilasa fngica
Pectinasa
Proteasa fngica

VIII.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

Bioqumica, McGraw Hill Interamericana, 2. Ed., Espaa, 1998.

Principios de Bioqumica, McGraw Hill, 1989.MICROSOFT EXCEL

2002 (10.2614.2625))