CITOTXICA (salmuera

CAMARN LETHALITY Bioensayo)

E INVESTIGACIN
ANTIOXIDANTE DE Barringtonia
acutangula (L.) "
Md. Asaduzzaman
1

1,

* Dr. Md. Sohel Rana, SM Raqibul Hasan

1
Nittananda Das

1,

Md. Monir Hossain 1,

Departamento de Farmacia, Universidad de Jahangirnagar, Savar, Dhaka 1342,

Bangladesh e-mail: <sohelrana.ju@gm un il.com >
Tel: +880001711987016;

ABSTRACTO
Acutangula Barringtonia (L.) Gaertn.(Familia: Barringtoniaceae), un medicamento pequea en rbol de
hoja perenne medio conocido como 'Hijal', se utiliza en la diarrea, la disentera, clicos, flatulencia,
refrigeracin, aperients expectorante, estimulante emticos, astringentes al intestino, antihelmntico,
bronquitis, dolor de madera, alucinaciones, debilidad seminal, gonorrea y muchas otras dolencias en las
zonas rurales de Bangladesh tambin se utiliza como medicina tradicional en otros pases. Pero hasta la
fecha, los intentos espordicos se han hecho para la validacin cientfica y metdica de estas afirmaciones
tradicionales. En Artemia letalidad del ensayo biolgico, todos los extractos producidos dosis efecto de
citotoxicidad dependiente de la salmuera nauplios de camarn con extracto de metanol de la hoja que
presenta una toxicidad que tiene mayor valor CL50 46.24 mg / ml de sulfato de vincristina, donde estndar
tena el valor CL50 de 0,69 g / ml. En el intento y antioxidante mediante la reduccin de los ensayos de
alimentacin y CUPRAC, mascota. Se encontraron extracto de ter de la hoja para exhibir poder reductor
moderado, pero dependiente de la concentracin, respectivamente.
Palabra clave: espordica; alucinaciones; IC50 valor; cido ascrbico, sulfato de vincristina
Introduccin
Barringtonia acutangula (L) Geartn se distribuye en todo el pas. Pero se encuentra principalmente en
Chittagong, Chittagong Hill Tracts, Tangail, Sylhet y Dhaka. (Ghani A., 2003) Barringtonia acutangula (L)
Geartn la planta seleccionada para el estudio actual, tiene vario uso etnofarmacolgica y una hierba
tuberosa a partir de (Familia: Barringtoniaceae). La familia de (Familia: Barringtoniaceae) tiene algunas
especies medicinales valiosas. Barringtonia acutangula es una especie olvidadas en el que se han realizado
muy pocas investigaciones cientficas. Sigue habiendo una posibilidad de que el extracto de la planta puede
poseer algunos compuestos bioactivos. El trabajo descrito en este artculo est dedicado a fitoqumico y
farmacolgicamente caracterizar diferentes partes de la planta se especifica que: (1) Identificar los grupos
de componentes qumicos presentes en las partes de las plantas (2) Racionalizar los usos tradicionales de la
planta seleccionada (3) Explorar las actividades posibles nuevos medicamentos de la misma planta
aquellos que no son tradicionalmente reclamado
Sin embargo, con el fin de desarrollar estas plantas medicinales como medicamentos, se deben hacer
primero intentos para identificar ciertamente los estudios preclnicos y en ellos deben llevarse a cabo para
establecer sus propiedades teraputicas anunciadas. Estos son muy importantes debido a que la actividad
biolgica de una planta o su preparacin ayudar en la determinacin de la diana teraputica de su
desarrollo. Dado que los componentes qumicos y acciones farmacolgicas de la mayora de estas plantas
son conocidos y ya que son de uso corriente en la medicina tradicional, la evaluacin clnica se pueden
emprender.

El presente estudio fue diseado para identificar los grupos de componentes qumicos que estn presentes
en los extractos crudos de Barringtonia acutangula (L) Gearth, as como para observar las actividades
farmacolgicas de los extractos de la planta.
El presente estudio fue diseado para identificar los grupos de componentes qumicos que estn presentes
en los extractos crudos de Barringtonia acutangula (L) Gearth as como para observar las actividades
farmacolgicas de los extractos de las partes de la planta de las hojas y de la corteza con el disolvente de
ter de petrleo y metanol.Pruebas de bioensayo de letalidad de gambas de salmuera para averiguar la
presencia de una sustancia qumica que tiene efectos citotxicos sobre la lnea celular.Ensayos de actividad
antioxidante para averiguar Rerducing potencia y CUPRAC Ensayo.

materiales

Anemia salina Leach.(Huevos salmuera), la sal del mar (NaCl)

Pequea tanque

Lmpara para atraer camarones

Pipetas (5, 10 ml) y Micropipeta (5-50nl), (10-100ul)

Los viales de vidrio, que magnifica vaso

Principio
Salmuera bioensayo de letalidad de gambas (Luo et al, 2000;.. Mclaughlin y col, 1998;. Meyer et al, 1982)
es un bioensayo rpida y completa de los compuestos bioactivos de origen natural y sinttico.Mediante este
mtodo, extractos de productos naturales, fracciones, as como los compuestos puros se pueden probar para
su bioactividad.El mtodo utiliza en la letalidad vivo en un simple organismo zoolgico (nauplios
salmuera) como un monitor conveniente para la deteccin y fraccionamiento en el descubrimiento de
nuevos productos naturales bioactivos.Toxicidad de salmuera est estrechamente correlacionada con 9KB
(carcinoma nasofarngeo humano) citotoxicidad (p = 0,036 y kappa = 0,56).ED 50 valores para
citotoxicidades son generalmente alrededor de un dcimo de los valores LC 50 encontr en el Salmuera
Camarn prueba. As, eso es posible a detectar y entonces monitor el fraccionamiento de citotxico, como
as como 3 PS (P 388) (in vivo de la leucemia murina) extractos activos utilizando el bioensayo de
salmuera letalidad (Alkofahi et al, 1988;. Mclaughlin et al, 1998;. Meyer et al., 1982).El ensayo de
camarn de salmuera tiene ventajas de ser rpidos (24 horas), de bajo costo, y simples (por ejemplo, no se
requieren tcnicas aspticas).Es fcilmente utiliza un gran nmero de organismos para la validacin
estadstica y no requiere ningn equipo especial y una cantidad relativamente pequea de la muestra (2-20
mg o menos).adems eso hace no exigir animal suero como es necesario para citotoxicidad (Mclaughlin et
Alabama., 1998).
Preparacin de agua de mar
38 sal de mar g (sin yodo) se pes, se disolvi en un litro de agua destilada y se filtr para obtener una
solucin clara.
La eclosin de Artemia
Artemia salina Leach (salmuera huevos de camarn) recogidos de las tiendas de animales se utiliz como
organismo de ensayo.El agua de mar fue tomada en los pequeos huevos de camarn del tanque y se
aadieron a un lado del tanque y luego este lado estaba cubierto. Dos das se les permiti salir del cascarn
los camarones y ser madurado como nauplios. de suministro de oxgeno constante se llev a cabo a travs
del tiempo de la eclosin. Los camarones nacidas son atrados por la luz (fototaxis) y as nauplios libre de
la cscara de huevo se recogi de la parte iluminada de la cisterna. Los nauplios se tom de la pecera con
una pipeta y se diluye en agua dulce clara mar para aumentar la visibilidad y 10 nauplios fue tomada
cuidadosamente por micropipeta.
Preparacin de soluciones de ensayo con las muestras de las plantas experimentales
se tomaron 32 mg de cada una de las muestras de prueba y se disolvieron en 200l de dimetil sulfxido
puro (DMSO) y, finalmente, se realiz el volumen a 20 ml con agua de mar. Por lo tanto la concentracin
de la solucin madre se 1600g / ml. A continuacin, la solucin fue diluida en serie para 800, 400, 200,
100, 50, 25, 12,5, 6,25 mg / ml con agua de mar. A continuacin, 2,5 ml de solucin de extracto de la
planta se aadi a 2,5 ml de agua de mar que contiene 10 nauplios:
Concentracin
(g / ml)

extracto de Solucin

El agua de mar
contiene 10 nauplios

El volumen final

800

2,5 ml (1600g / ml)

2,5 ml

5 ml

400
200

2,5 ml (800 microgramos / ml) 2,5 ml

2,5 ml (400 microgramos / ml) 2,5 ml

5 ml
5 ml

100

2,5 ml (200g / ml)

5 ml

2,5 ml

50

2,5 ml (100g / ml)

2,5 ml

5 ml

25
12.5

2,5 ml (50? G / ml)

2,5 ml (25g / ml)

2,5 ml
2,5 ml

5 ml
5 ml

6.25

2,5 ml (12.5g / ml)

2,5 ml

5 ml

Preparacin de grupo de control

Los grupos de control se utilizaron en el estudio de citotoxicidad para validar el mtodo de prueba y
asegurarse de que los resultados obtenidos fueron slo debido a la actividad del agente de ensayo y se
anularon los efectos de los otros factores posibles. Se utilizaron dos tipos de grupos de control
yo) Positivo controlar
ii) Negativo controlar

Preparacin del grupo de control positivo

Control positivo en un estudio de la citotoxicidad es un agente citotxico ampliamente aceptado y el
resultado del agente de ensayo se compara con el resultado obtenido para el control positivo. En el presente
estudio sulfato de vincristina se utiliz. Como vincristina es un alcaloide muy citotxica se evalu a muy
baja concentracin (10, 5, 1, 0,5, 0,25, 0,125 y
0,06 g / ml)
Preparacin del grupo de control negativo
Se aadieron 50 l de DMSO a cada uno de tres tubos de ensayo o pregrabadas que contienen 4,95 ml de
agua de mar artificial y 10 nauplios de camarn para su uso como grupos de control.Si el camarn de
salmuera en estos viales muestran una tasa de mortalidad rpida, entonces la prueba se considera como no
vlido como muri el nauplios debido a alguna razn que no sea la citotoxicidad de los compuestos.
El recuento de los nauplios
Despus de 24 horas, el tubo de ensayo se inspeccionaron usando una lupa sobre un fondo negro y el
nmero de nauplios sobrevivido en cada tubo fue contada. De estos datos, el porcentaje (%) de la letalidad
de los nauplios camarn de salmuera se calcul para cada concentracin. La mortalidad fue corregido
mediante la frmula de Abott (Abott WS, 1925)
P t = [(P o -P c) / (100-P

c)]

x 100

Donde, P o =
Observado
mortalidad P c =
mortalidad de
Control
La efectividad o la relacin concentracin-mortalidad del producto vegetal se expresa normalmente como
una concentracin letal media (LC50).Esto representa la concentracin de la sustancia qumica que
produce la muerte en la mitad de los sujetos de prueba despus de un cierto tiempo de exposicin y
determin por el mtodo de regresin lineal de la representacin grfica% de mortalidad frente al log de la
concentracin de corresponsal.
Resultado:
Todos los extractos fueron tambin objeto de Artemia bioensayo de letalidad para una posible accin
citotxica. En este estudio, se encontr que el extracto de metanol de la parte area como la ms txica a
salmuera nauplios de camarn, con LC 50 de 46,24 g / ml, mientras que el cncer de sulfato de vincristina
frmaco mostr LC50 valor de 0,699 g / ml.Por otra parte, todos los dems extractos mostraron moderada a
baja toxicidad (tabla 4.8). La alta toxicidad del extracto metanlico de la hoja probablemente atribuirse al
alcaloide que se confirm en el cribado fitoqumico. El orden en el que se redujo el potencial citotxico de
las muestras de ensayo fue la siguiente: Sulfato de Vincristina> TBP>> TBM> TLP> TLM (Tabla 1)

Tabla 1: CL

Muestra
de
prueba
TLM

TLP

TBM

TBP

VS

Concentracin
(g / ml)
12.5
25
50
100
200
400
800
12.5
25
50
100
200
400
800
200
400
800
12.5
25
50
100
200
400
800
12.5
25
50
100
200
400
800
0.06
0,125
0.25
0,5
1
5
10

de las diferentes fracciones Artemia bioensayo de letalidad

50

Entrar
Conc.

% Mortalidad

1.09691 40
1.39794 40
1.69897 50
2 60
2.30103 80
2.60206 100
2.90309 100
1.09691 10
1.39794 20
1.69897 20
2 60
2.30103 70
2.60206 70
2.90309 100
2.30103 80
2.60206 90
2.90309 90
1.09691 10
1.39794 10
1.69897 20
2 20
2.30103 20
2.60206 30
2.90309 80
1.09691 10
1.39794 10
1.69897 20
2 20
2.30103 20
2.60206 20
2.90309 100
-1,22185 10
-0,90309 20
-0,60206 30
-0,30103 40
0 50
0.69897 90
1 100

Mortalidad
corregida%

LC 50
(G / ml)

LC 90
(G / ml)

33.33
33.33
44.44
55.55
77.55
100
100
0
11.11
11.11
55.55
66.66
66.66
1000
77.77
88.88
88.88
0
0
11.11
11.11
11.11
22.22
77.77
0
0
11.11
11.11
11.11
11.11
100
0
11.11
22.22
33.33
44.44
88.88
100

46.24

363,07

105.93

598,41

509,95

5370.31

554,37

4677.35

0.0699

6.33

[VS = Sulfato de Vincristina]

Capacidad total Anioxidant
El mtodo fosfomolibdeno normalmente detecta antioxidantes tales como cido ascrbico, algunos
compuestos fenlicos, tocoferol -, y los carotenoides. El mtodo fosfomolibdeno se basa en la reduccin
de Mo (VI) a Mo (V) por el compuesto antioxidante y la posterior formacin de un complejo de fosfato
de verde / Mo (V) a pH cido .. En esencia, se cree que el molibdeno es ms fcil de ser reducido en la

reaccin de complejo y de transferencia de electrones se produce entre reductores y Mo (VI) y la

formacin de un complejo de fosfato de verde / Mo (V) con una absorcin mxima a 695 nm .
Preparacin de la solucin de reactivo
3,3 ml de H 2 SO 4 concentrado (98%), 0,381 g de fosfato de sodio (Na 3 PO 4.PM = 136,09 g) y 0,494 g de molibdato
de amonio (MW = 1.235,86 g) se recogieron en tres separados de 100 ml frascos volumtricos y los volmenes se ajustaron con agua destilada agua.

Preparacin de la solucin estndar

La solucin madre se prepar tomando 0.025 gm cido ascrbico y se disolvi en 5 ml de etanol cuya
concentracin era 5g / l. Las concentraciones experimentales de la solucin madre se prepararon de la
siguiente manera:
Concentraci
n (g / ml)

Solucin tomada
desde el almacn
solucin de (l)

200
100
50
25
5

80
-

Solucin
tomada de
otros
1 ml (200g / ml)
1 ml (100g / ml)
1 ml 50 / ml)
1 ml (25g / ml)

Ajuste el
volumen con
agua destilada
(l)
1920
1.92ml
1 ml
1 ml
4 ml

El
volumen
final
2,0 ml
2,0 ml
2,0 ml
2,0 ml
5,0 ml

Preparacin de solucin de extracto

0.25
gm de cada uno de los extractos de plantas se disolvieron en 5 ml de etanol para hacer que la
concentracin de cada solucin de 5g / l de extracto de la planta.Estas soluciones fueron considerados
como soluciones madre. La concentracin experimental de estas soluciones madre se prepar mediante el
siguiente manera:
Concentracin
(g / ml)
200

Solucin
tomado de
solucin madre
40 l

Solucin
tomada de
otros
-

Ajuste el
volumen con
agua destilada
(l))
960

El
volumen
final
1,0 ml

Procedimiento
experimental

300l de cada extractos de plantas o estndar de diferentes soluciones de

concentracin se tomaron en diferentes tubos de ensayo y se aadieron 3 ml de
solucin de reactivo en cada uno de la prueba tubos.
0

Los tubos de ensayo se incubaron a 95 C durante 90 minutos para completar la

reaccin.

Las absorbancias de las soluciones se midieron a 695 nm utilizando un

espectrofotmetro frente al blanco despus de enfriarse a la habitacin
temperatura.

Una solucin tpica en blanco contena 3 ml de solucin de reactivo y el volumen

apropiado (300l) del mismo disolvente utilizado para la muestra y se incubaron
en las mismas condiciones que el resto de la solucin de muestras.

La actividad antioxidante se expresa como el nmero de equivalentes de cido

ascrbico y se calcul por la siguiente frmula ecuacin
A = (cx V) / M, donde;
A = contenido total de compuestos antioxidantes, extractos de plantas mg / g, en cido
ascrbico Equivalente c = la concentracin de cido ascrbico establecida a partir de la
curva de calibracin, en mg / ml
V = volumen del extracto,
ml
P: peso de extracto vegetal crudo, gm

Discusin:
La letalidad de una muestra de ensayo en un simple organismo zoolgico tales como el camarn (Artemia
salina) ha sido utilizado por Meyer et al. (1982) en el camarn de salmuera ensayo de citotoxicidad
(BSCT).Es una herramienta muy til para detectar una amplia gama de compuestos qumicos para sus
diversas actividades biolgicas. Ha sido bien utilizado para detectar y fraccionamiento de planta
fisiolgicamente activa extrae tambin. Se ha demostrado que BSCT correlaciona razonablemente bien
con citotxica y otras propiedades biolgicas (Mclaughlin et al., 1991).El bioensayo camarn de salmuera
se ha establecido como un mtodo seguro, prctico y econmico para la determinacin de bioactividades
de compuesto sinttico (Almeida et al., 2002), as como productos vegetales (Meyer et al., 1982).La
correlacin significativa entre el ensayo de camarn de salmuera y en la inhibicin del crecimiento in
vitro de lneas celulares de tumores slidos humanos demostrados por el Instituto Nacional del Cncer
(NCI, EE.UU.) es significativo porque demuestra el valor de este bioensayo como una herramienta de
seleccin previa para la investigacin de frmacos antitumorales (Anderson et al., 1991).En la

evaluacin de la toxicidad de extractos de plantas de salmuera de letalidad de gambas

bioensayo LC 50 valores inferiores a 1,000 g / ml se consideran bioactivo (Meyer et al., 1982).El
camarn de salmuera letalidad del ensayo biolgico, tambin indica efectos antifngicos, efectos
plaguicidas, efectos teratognicos, toxicidad para el medio ambiente y muchos ms (Vanhaecke P. et. Al.,
1981).La Tabla 4.8 muestra la letalidad de los diferentes extractos de B. Acutangula a los
nauplios de camarn de salmuera.El grado de letalidad se muestra por la
extractivos se encontr que era directamente proporcional a la concentracin de los extractos que van
desde la concentracin ms baja (12,5 mg / ml) a la concentracin ms alta (800 mg / ml).Este incremento
dependiente de la concentracin en porcentaje de mortalidad de los nauplios de Artemia producido por el
B. Acutangula indica la presencia de principios citotxicos en estos extractos.tamizaje fitoqumico
preliminar revel la presencia de alcaloides y esteroides. As la accin citotxica observado puede ser
debido a la presencia de tales compuestos. Una vez ms, existen informes sobre el papel de alcaloides y
esteroides en la actividad citotxica de extractos de plantas (Dhar et al, 1973;.. Vijayan et al, 2004;.
Badami et al, 2003).Sin embargo, se conocen tambin compuestos fenlicos y flavonoides
para mostrar citotoxicidad en Hoechst 33258 fluorescencia ensayo por inhibiendo celular ADN
en un concentracinConclusin
Diferentes extractos crudos de Barringtonia acutangula (L.)Gaertn. Citotxicas fueron sometidos a
investigaciones fitoqumicas y farmacolgicas enrgicas para validar el uso tradicional y para averiguar
cualesquiera otras actividades teraputicas.La alta toxicidad ejercida por los extractos de B. acutangula en
salmuera bioensayo de letalidad de gambas sugiere principios bioactivos presentes en la planta.La hoja de
la planta exhibi potencial actividad antioxidante. Esta parte de la planta ejerce notable actividad
analgsica y anti-inflamatoria.