La proporcin de cada analito que permanece

en la fase mvil depende de su presin de

vapor

> PV < permanencia en FE < Tr

Punto de
Ebullicin del
analito

Temperatura

Presin de
Vapor
Caractersticas de la fase
Estacionaria (interacciones
FE- Analito)
Caractersticas de la
Fase Mvil
(Densidad y velocidad
de Flujo)

Variables involucradas en el proceso

cromatogrfico

Eficiencia de la
columna.
Separacin de los
Picos (resolucin)

(Ensanchamiento
de los picos W)

Eficiencia de la
fase estacionaria
(Posicin relativa
de los picos tr)

Diseo de la columna
Condiciones de corrida

HETP

Interacciones Analito FE

Relacin entre los

coeficientes de distribucin
de c / componente a una
Temp. dada

N = 5.54 [tr / W1/2]2

tr = distancia desde la inyeccin hasta el mximo del pico
(tiempo de retencin).
W1/2 = ancho del pico a la mitad de la altura.

Efecto de la Temperatura
Mezclas complejas separadas
ISOTERMICAMENTE:
TCOL BAJA:
- Componentes mas voltiles son
separados. Los menos voltiles tienen
tiempos de retencin altos y eluyen
picos ensanchados.

TCOL ALTA:
- Componentes mas voltiles no son
separados. Los menos voltiles
disminuyen su tiempo de retencin.

Efecto de la Temperatura
La Temperatura del horno puede ser variada linealmente para la separacin

Se consiguen buenas
separaciones de los
componentes en menor
tiempo

TEMPERAT
URA

Programa de temperatura:
TFIM
R

TINI
tFIM

tINI
TIEMPO

Efecto de la Temperatura
Corrida isotrmica
a 220C

Programa de T Inicial 50 C
a 20C/m hasta 220 C 2 min luego a 30C/m hasta 240 C 8 min.

Resolucin
Representa la separacin de los picos y es el resultado de la
eficiencia de la columna y de la fase estacionaria

R=

2d
W1 + W2

d = distancia entre los mximos de los picos

W = ancho de los picos en la lnea de base
Si R = 1 la separacin de los picos es de un 98%
Si R = 1.5 la separacin de los picos es de un 99.7%, se obtiene la
separacin a la lnea de base

Efecto de la Polaridad

24:1
24:0

22:0
22:1

20:0

20:1

19:0
18:0

17:0

16:1
16:0

12:0

18:3 - 18:2 - 18:1

14:0

23:0

Columna con Fase

estacionaria
de caractersticas
polares

Columna con Fase

estacionaria
de caractersticas
apolares

Efecto de la sobrecarga de la columna

Tiempo de retencin
tR

Interaccin analito / FE
Presin de vapor del analito
Condiciones operacionales

Si se fijan las condiciones operacionales, el tiempo de retencin

del analito es constante.
muestra

estandar

Mejora el
trmino C

Velocidad de flujo

Mejora el
trmino B

IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE
LOS PICOS DE LAS MUESTRAS
IDENTIFICACIN
Usando FID:
Con los datos de los estndares
(condiciones isotrmicas),
graficar log Tr en funcin del N
de t. C.
Identificar los picos del
cromatograma correspondiente
a corridas programadas, por
comparacin con los Tr de los
estndares con los tr de los
picos de las muestras.
Usando MS: se identifica con
espectros de librera.

CUANTIFICACIN
El rea% del compuesto i como
metilster, se expresa:
Ai

x 100

(Ai)
Con uso de estndar interno en
concentracin conocida.
Clculo de reas, comparando con
corridas de estndares de
concentracin conocida

Identificacin y confirmacin
ESPECTRO
DESCONOCIDO

comparacin

Lista con los posibles

compuestos con el
porcentaje de similtud

BIBLIOTECA DE
ESPECTROS

#
1

NOME
1-dodeceno

1-dodecanol

ciclododecano

2-dodeceno

5
6

FRM. %
C12H24 99
C12H26O 91
C12H24 91
C12H24 66

C11H22 35
8-metil-3-undeceno C12H24 32
1-undeceno

Muestra

TP 3
Tejido
animal

Tejido
vegetal

Hgado

Plasma

Folch

Bligh dyer
modificado

Germen

Prensado

Semilla
u hoja

Molienda

Metanolisis
Alcalina

Clarificacin

GLC

MTODOS DE LISIS Y EXTRACCIN CELULAR.

HOMOGENIZACIN
VIGOROSOS

MODERADOS/SUAVES

Permite obtener biomolculas.

Permite obtener organelas.

Con equipamiento o reactivos.

Necesario una BUENA ELECCIN

DE CLEARENCE.

Prensado
Molienda
Ultrasonido
Homogenizacin con cuchillas

Homogenizacin mecnica
manual
Lisis por smosis

Tratamiento enzimtico
Solventes orgnicos

Extraccin por
solventes

La extraccin, que se
puede definir como la
transferencia de una
sustancia X desde una
"fase lquida A" a otra
"fase lquida B",
inmiscible con la anterior.

TP 4
Ventajas:
Concentracin del analito en un
volumen menor de solvente
Manejo de condiciones de
separacin: pH, temperatura

Desventajas:
Consumo de mucha cantidad de
solventes
Semiemulsin
Extraccin incompleta
Proceso lento

Mtodo QuEChERS
(Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe)
Desarrollado por el USDA y las Ag. Regul. Aliment. Europeas

El procedimiento consiste en
2 simples etapas:
Extraccin

Clean up

Diagrama de la combinacin
cromatgrafo gaseoso - espectrmetro de masas