AFLATOXINAS EN MAZ: REPORTE DE CASO

EN LA COSTA ATLNTICA COLOMBIANA

Acua CA1, Daz GJ2 y Espitia ME3
Laboratorio de Micologa
Centro de Investigaciones Microbiolgicas
Universidad de los Andes
Laboratorio de Toxicologa
Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia
Universidad Nacional de Colombia

RESUMEN
Las aatoxinas son compuestos hepatotxicos producidos por algunas cepas de hongos del
gnero Aspergillus, principalmente A. avus y A. parasiticus, que generalmente contaminan
granos almacenados. Hasta ahora, la incidencia de aatoxinas en Colombia se haba reportado como moderada (10-30%), con niveles promedio alrededor de los 20 g/kg. En septiembre del ao 2001 se encontr una incidencia muy elevada (100%) y altos niveles de AFB1
(>100 g/kg) en la costa atlntica colombiana, principalmente en el municipio de Ceret
(Crdoba), no registrados previamente. El problema afect 50.000 hectreas de maz (Zea
mays) variedades blanco y amarillo. Un alto porcentaje involucr el hbrido DK 4004 y se
present una disminucin en la produccin cercana al 35%. Al analizar la micoora presente
en muestras de lotes de maz de esta cosecha se encontr una gran diversidad de especies
que incluyeron Asperguillus avus, A. niger, A. ochraceus, A. tamarii, A. fumigatus, Fusarium moliniforme, Rhizopus spp., y Penicillium spp. Las muestras fueron analizadas para
la determinacin de aatoxinas mediante cromatografa lquida de alta eciencia (HPLC),
dando como resultado elevados contenidos de aatoxinas. Adicionalmente se comprob la
toxigenicidad de las especies aisladas empleando sustratos y condiciones adecuadas para
la produccin de aatoxinas, ocratoxina A y fumonisinas. Los resultados de este estudio
demuestran la presencia de hongos micotoxignicos, presencia asociada a la formacin de
aatoxinas en campo.
Palabras claves: maz, aatoxinas, contaminacin, micotoxinas, Aspergillus spp.

AFLATOXINS IN CORN: CASE REPORT IN THE

COLOMBIAN ATLANTIC COAST.
ABSTRACT
Aatoxins are hepatotoxic compounds produced by some fungal strains from the genus
Aspergillus, and mainly A. fumigatus and A. parasiticus the commonly contaminate stored
grains. Until today, incidence ofaatoxins in Colombia was reported to be moderate (1030%), with levels ranging 20 g/kg. In september 2001, a 100% incidence was found in
Universidad de los Andes.
Universidad Nacional. gjdiazg@unal.edu.co
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Universidad Nacional.
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the Colombian North Atlantic Coast with high levels of AFBI (>100 g/kg), particularly
in Ceret, Cordoba, which were not registered previously. The problem affected 50.000 Ha
of corn (Zea mays) and a high percentage included the DK4004 variety that registered a
reduction in production close to 35%. Analysis of the crop revealed several fungal species
including A. avus, A. niger, A. ochraceus, A. tamarii, A. fumigatus, Fusarium moliniforme, Rhizopus spp., y Penicillium spp. Samples were also taken to detect aatoxins by High
Efciency Liquid Chromatography (HPLC), which showed high levels of this toxins. The
toxigenicity of these aatoxins was conrmed by culturing the isolated species and establishing appropriate culture conditions to produce Aatoxins, Ocratoxin A and fumonisin. The
results of this study conrm the presence of mycotoxigenic fungi associated with mycotoxin
production in the eld.
Keywords: corn, aatoxins, contamination, mycotoxins, Aspergillu spp.

INTRODUCCIN
Las aatoxinas (AF) son un grupo de
metabolitos heterocclicos sintetizados por
los hongos Aspegillus avus (Link), Aspergillus parasiticus (Speare) y Aspergillus
nomius. Estos hongos son constituyentes
normales de la micoora del suelo en reas
tropicales, subtropicales y templadas y sus
esporas pueden ser transportadas a travs
del aire. Entre sus cepas existe una amplia
variacin en cuanto a su habilidad para
producir toxinas. En algunos casos no se
detecta la produccin de stas, lo que indica
que el crecimiento del hongo no implica
necesariamente la formacin de aatoxinas
(Daz, 1996a).
La infestacin por hongos y la formacin
de toxinas se presenta en una gran diversidad de productos agrcolas, tanto a nivel de
campo como en reas de almacenamiento,
plantas de procesamiento y distribucin. La
contaminacin de los granos puede ocurrir
pre o postcosecha, por condiciones de estrs
de la planta o daos producidos por insectos,
que permiten la entrada de esporas de hongos y dan lugar a la produccin de aatoxinas (Smith and Moss, 1985; Daz, 1996a;
Sweeney, 1998).

Los hongos producen cuatro aatoxinas:

B1, B2, G1 y G2. La ms comn y ms txica
de todas es la AFB1. En humanos se le atribuye cncer heptico y en animales puede
ocasionar hepatotoxicosis, mutagnesis,
cncer y efectos adversos sobre los parmetros de produccin. Recientemente se report en Venezuela la muerte de ms de 500
mascotas (perros y gatos) por el consumo
de alimentos concentrados contaminados
con aatoxinas. La incidencia reportada de
aatoxinas en Colombia oscila normalmente entre el 9 y el 30%, con niveles promedio
cercanos a 20 g/kg y niveles mximos alrededor de 100 g/kg en muestras aisladas
(Cspedes y Daz, 1997; Daz et al., 2001).
Los niveles mximos de aatoxinas totales
(B1+B2+G1+G2) permisibles en Colombia en
alimentos humanos y animales oscilan entre
10 y 50 g/kg, dependiendo del sustrato especco (Daz, 1995).
En septiembre del ao 2001 se present una incidencia inusualmente elevada
de aatoxinas en la cosecha de maz del
municipio de Ceret, departamento de
Crdoba (Colombia). Todas las muestras
analizadas provenientes de esta cosecha

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se hallaron contaminadas con aatoxinas,

y los niveles de contaminacin resultaron
muy elevados (cercanos a 300 g/kg). El
objetivo del presente estudio fue reportar
los niveles de contaminacin encontrados,
analizar la micoora presente en las muestras tomadas y determinar el potencial
micotoxignico de esta micoora. Adicionalmente se busc identicar algunos factores determinantes de la alta incidencia
de aatoxinas en este brote.

MATERIALES Y MTODOS
Muestras
Un total de 11 muestras de maz cosechado fueron remitidas al Laboratorio de Toxicologa de la Facultad Medicina Veterinaria
y de Zootecnia de la Universidad Nacional
de Colombia (sede Bogot). Las muestras
fueron analizadas por cromatografa lquida
de alta eciencia (HPLC), segn la norma
tcnica ICONTEC NTC 1232. Se procesaron tambin una muestra de maz y una de
mazorca con crecimiento fngico visible. El
anlisis de la micoora se hizo mediante el
aislamiento y determinacin de especies de
Fusarium y Aspergillus. Las muestras, que
se homogenizaron y submuestrearon segn
recomendaciones del laboratorio de Microbiologa de Alimentos de la secretaria de Salud Pblica de Bogot (2001), se sembraron
por triplicado en agar papa dextrosa (PDA) y
agar extracto de malta (AM) y se incubaron
a 25C de 5 a 7 das. Al cabo de este tiempo
se observ el tipo de crecimiento microbiano, se identicaron microscpicamente los
gneros de inters, se realiz el conteo de
unidades formadoras de colonias (UFC) y se
efectu el aislamiento de cada uno de los gneros. Cuando se obtuvo crecimiento puro
de Fusarium y Aspergillus, se hizo cultivo
monosprico en Komada y Agar Czapek
(CZ). Una vez obtenido el hongo monosp-

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rico se procedi a hacer la identicacin de

la especie, segn los siguientes criterios:
Fusarium: de acuerdo al manual para
la identicacin de especies de Nelson,
Toussoun y Marasas (1983) se observ el
crecimiento en PDA y agar hojas de clavel
(CLA) y, junto con la correlacin de estas
observaciones, se determin la especie.
Aspergillus: segn la clave para identicacin de especies de Samson y Van
Reenen-Hoeskstra (1988) se observ el crecimiento en CZ, AM y, con la correlacin de
observaciones realizadas y reconocidas, se
determin la especie. Se observ adems la
produccin de un pigmento naranja caracterstico para especies del grupo A. avus-parasiticus en el agar diferencial Aspergillus
avus-parasiticus AFPA (Pitt, 1983), la
produccin de AF mediante uorescencia
azul en el medio de coco (Davis, 1987) y la
produccin de cido kojico en el medio de
Kinoshita (Ramrez, 1994).

Evaluacin de la toxigenicidad de las

cepas aisladas: en sustratos adecuados se
procedi a evaluar la toxigenicidad de las
cepas inoculando maz, sorgo y arroz con
105 conidias (suspensin hecha en agua
destilada estril con Tween 20 al 0,05%) de
cada hongo aislado. Luego se adicion agua
destilada estril hasta obtener la humedad
relativa necesaria para cada una y se estandarizaron el tiempo y la temperatura de
incubacin.
Deteccin y determinacin de micotoxinas: se procedi a realizar la extraccin
y determinacin cuantitativa de las micotoxinas de acuerdo con las tcnicas del Laboratorio de Toxicologa de la Universidad
Nacional de Colombia (Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia) utilizando
cromatografa en capa na (TLC) y cromatografa lquida de alta eciencia (HPLC).

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RESULTADOS
Los resultados obtenidos luego de analizar las muestras provenientes del municipio
de Ceret, departamento de Crdoba, durante el mes de septiembre de 2001 se muestran
en la gura 1.
Al analizar la micoora presente en las
muestras se encontraron los resultados que
se presentan en la tabla 1. Se determin la
diversidad fngica presente y se realiz un
conteo de UFC de colonias tpicas de Fusarium spp. y Aspergillus spp.
Tabla 1. Diversidad fngica en unidades formadoras de colonias
(UFC)/g.

Muestra

Fusarium

Aspergillus

Maz

Incontables

Incontables

14x10

22x10 3

Mazorca

Al identicar a nivel de especie los gneros aislados se encontraron las especies que
se muestran en la tabla 2.

Tabla 2. Especies halladas en las muestras de maz provenientes del

municipio de Ceret, departamento de Crdoba (Colombia).

Muestra

Fusarium

Aspergillus

Maz

F. moniliforme

A. flavus
A. niger

F. moniliforme

A. flavus
A. niger
A. tamarii
A. ochraceus
A. fumigatus

Mazorca

Al realizar las pruebas de toxigenicidad

(potencial produccin de micotoxinas por las
cepas aisladas) se encontr un gran potencial micotoxignico en las especies aisladas
reportadas previamente como toxignicas.
No se evalu la toxigenicidad de las cepas
de A. niger y A. tamarii aisladas, dado que
estas especies no han sido reportadas como
toxignicas. Estos resultados se resumen en
la tabla 3.

Figura 1. Concentracin de aflatoxinas B1, B2, G1 y G2 en muestras de maz de la cosecha de septiembre de 2001 del municipio de Ceret,
departamento de Crdoba (Colombia).

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Tabla 3. Potencial micotoxignico de las especies aisladas.

Cantidad producida (mg/kg)

Micotoxina

Especie

Fumonisinas
B1 y B2

F. moniliforme

FB1 712,5
FB2 186,8

Aflatoxina
B1 y B2

A. flavus

AFB1 142,0
AFB2 8,0

Acido oxlico

A. niger

Productora (sin
cuantificar)

Ocratoxina A

A. ochraceus
A. tamarii
A. fumigatus

No toxignica
No evaluada
No evaluada

DISCUSIN
Los resultados analticos (gura 1) demostraron una incidencia del 100% de contaminacin y niveles de aatoxina B1 entre
15,2 y 282,6 g/kg. Estos resultados contrastan con los obtenidos para AFB1 y AFB2
en diferentes sustratos, entre los meses de
septiembre de 2000 y septiembre de 2001,
en el Laboratorio de Toxicologa, perodo en
el que en ningn caso el nivel de aatoxina
B1 sobrepas los 80 g/kg y la incidencia
global de muestras positivas fue inferior al
30%. Estudios previos realizados en Colombia (Cspedes y Daz, 1997) no haban
registrado concentraciones superiores a 110
g/kg de AFB1 y el nivel de positividad en
muestras analizadas no sobrepasaba el 30%.
Luego de analizar las posibles causas de esta
inusual concentracin de aatoxinas presentada en el municipio de Ceret se determin
que los siguientes factores pudieron resultar
determinantes:
Factores ambientales. Durante el mes
de septiembre de 2001 se presentaron
precipitaciones de 378,3 mm, cuando
los promedios oscilaban entre 27,2 y
165,9 mm durante los meses anteriores.
Es importante anotar que las especies de
Aspergillus viven en el ambiente y sus
esporas son diseminadas por los vientos
y las lluvias.

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Fenotipo de hbridos utilizados. Presentaban pocas hojas de cobertura que

no conuyeron normalmente en el vrtice de la mazorca y dejaron una parte
expuesta al medio ambiente y a los patgenos. Adicionalmente, el fruto no se
inclin como siolgicamente sucede en
su maduracin (6-8), lo que permiti la
entrada de agua lluvia.
Plagas como el gusano bellotero o
cogollero del maz (Spodoptera frugiperda), que es endmico en la zona,
generaron condiciones favorables para el
establecimiento del hongo, ya que destruyen los granos, permiten la entrada de esporas de hongos y aumentan la humedad
por presencia de larvas.
Con respecto a la micoora presente en
los dos tipos de muestras evaluadas se
encontr la misma especie de Fusarium,
pero diversas especies de Aspergillus.
Adicionalmente, se hallaron colonias de
Rhizopus spp. y Penicillium spp. Tambin
se encontr que en las muestras de maz
coexistan especies de F. moliniforme,
A. avus y A. niger. Este hecho ratica
lo propuesto por Marn et al. (1998),
que describen este tipo de interaccin
y sealan que el F. moliniforme es ms
competitivo en presencia de A. avus y
A. Niger, pero que tambin cohabitan,
como se muestra en la tabla 2.
Los ensayos de toxigenicidad realizados
a las cepas aisladas demostraron su potencial toxignico. En los dos tipos de
muestras se aisl la misma especie de F.
moliniforme, que produjo fumonisinas B1
y B2. Este hallazgo llev a analizar una
muestra inicial de donde se aisl el hongo y se encontr que estaba contaminada
con fumonisina B1. La cepa de A. avus
aislada produjo grandes cantidades de
aatoxinas (ms de 1 g de AFB1 por kg de
sustrato) y una cepa de A. niger produjo
cido oxlico, compuesto potencialmente
nefrotxico.

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CONCLUSIONES
El presente reporte demuestra la ocurrencia natural de aatoxinas en el campo,
hecho inusual en este tipo de micotoxinas,
que preferencialmente se forman durante el
almacenamiento.
Los principales factores que condujeron
a este brote parecen ser una conjuncin de
hechos que incluyen la elevada pluviosidad,
la presencia de plagas y un fenotipo de maz
que se vio afectado por estos dos factores.
El anlisis micolgico permiti aislar
diferentes especies altamente micotoxignicas acompaadas de otras comunidades
fngicas. Este hecho indica que se debe
tener especial cuidado en el control de los
factores que pueden desencadenar contaminacin fngica en campo, debido a la
presencia normal de hongos potencialmente
toxignicos en la zona.

RECOMENDACIONES
Es primordial el secado del maz antes
de almacenarlo. Entre las tcnicas de secado
se encuentran: el secado en capas, secadores porttiles por tandas, secadores de ujo
continuo.
La proteccin del maz frente a los hongos y las micotoxinas debe estar encaminada a inhibir el crecimiento y la propagacin
de A. avus y A. parasiticus y a controlar
las aatoxinas despus de producidas. Esto
ltimo se puede llevar a cabo mediante la
adicin de adsorbentes especiales.
Para evitar la propagacin de esporas es
importante realizar controles con fungicidas
adecuados. El uso de inhibidores de crecimiento de hongos, como cidos orgnicos,
es indispensable en granos almacenados.
Para evitar los efectos txicos de las
aatoxinas formadas sobre los animales
pueden ser utilizados adsorbentes, como el
carbn activado, o algunos tipos de aluminosilicatos (Leeson et. al., 1995).

Es indispensable realizar monitoreos

permanentes para aatoxinas, con el n de
detectar niveles potencialmente peligrosos y
tomar medidas preventivas.
Se debe establecer un adecuado control
de plagas que no interera con la produccin
de maz.
Se aconseja seleccionar especies hbridas adaptadas a las condiciones de cada
regin.

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