Materiales

Nombre
Cultivo de 24 horas de Staphylococcus aureus
Cultivo de 24 horas de Streptococcus ssp
Cultivo de 24 horas de Escherichia Coli
Cultivo de 24 horas de Bacillus ssp
Plato Petri con agar sangre
Plato Petri con agar nutritivo
Plato Petri con agar MacConkey
Plato Petri con agar XLD
Plato Petri con agar EMB
Plato Petri con agar citrato
Asa bacteriolgica
Mechero
Marcador permanente
Fase Experimental
Siembre todas las muestras en los distintos tipos de agares siguiendo las
indicaciones de la profesora.

Rotule con la fecha, indicando el nombre e incubar a 37C por 24-48

horas.

Luego de 24 horas observar y anotar los resultados.

Discusin

Agar EMB

FRMULA
Peptona......................................................10.0g
Lactosa........................................................5.0g
Sacarosa.....................................................5.0g
Fosfato dipotsico ......................................2.0g
Eosina..........................................................0.4g

Azul de metileno..........................................0.065g
Agar ............................................................13.5g
Agua purificada...........................................1000ml
pH final: 7.2 0.2
Es un medio selectivo que permite el crecimiento de bacilos gramnegativos,
principalmente de la Familia Enterobacteriaceae, inhibiendo el crecimiento de las
bacterias Gram positivas. Tambin es un medio diferencial ya que nos permite
saber por la coloracin de las colonias si los microorganismos que crecen
fermentan lactosa o sacarosa. Si las bacterias fermentan lactosa o sacarosa,
acidifican el medio y la eosina vira dando lugar a la aparicin de colonias oscuras,
de color rosado a verde brillante (Ej.: Escherichia, Klebsiella, Enterobacterias). Las
bacterias que no fermentan ni lactosa ni sacarosa originan colonias claras o
transparentes (Ej.: Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas). Es nutritivo por
la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano y el agar es el
agente solidificante.
Apariencia del Agar

Figura# . Agar EMB

Interpretacin de los resultados

Microorganismo
Escherichia Coli
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis
Salmonella
Shigella
Pseudomonas
Enterococcus

Caracterstica de las colonias

Negro azuladas con un verde metlico
Mucosas con centro oscuro
incoloras
Incoloras
incoloras
incoloras
incoloras

Resultados de laboratorio

Aqu observamos una hermosa Escherichia Coli, presenta un color verdoso

metlico y con un centro negro, eso nos indica que es lactosa positiva.

Agar XLD

Formula
Xilosa. 3,75g
L- Lisina. 5,0g
Lactosa. 7,5g
Sacarosa. 7,5g
Cloruro de Sodio.....5,0g
Extracto de Levadura 3,0 g
Rojo Fenol.. 0,08 g
Desoxicolato de Sodio 2,5 g
Tiosulfato de Sodio.. 6,8 g
Citrato Frrico de Amonio 0,8 g
Agar... 15,0 g
Agua destilada 1000 mL
pH final: 7.4 0.2
El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo diferencial,
utilizado para el aislamiento y diferenciacin de patgenos entricos Gram
negativos especialmente de Salmonella y Shigella. Contiene extracto de levadura
como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio como
agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos Gram positivos.
La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prcticamente todos los
entricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciacin de
dicha especie. La lisina se incluye para permitir la diferenciacin del grupo

Salmonella de los organismos no patgenos, dado que, sin lisina, la Salmonella

fermentara rpidamente la xilosa y se distinguira de las especies no patgenas.
Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la
enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita
la reaccin de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes
positivos a la lisina, se aaden lactosa y sacarosa para producir cido en exceso.
El medio tambin tiene la capacidad de detectar la produccin de H 2S, a travs del
sistema indicador tiosulfato de sodio y citrato frrico amonio. Cuando el
microorganismo produce H2S se observan colonias con el centro negro. Los
microorganismos no patgenos productores de H 2S no descarboxilan la lisina;
cuando estn presentes estos microorganismos la reaccin cida producida por la
utilizacin de los carbohidratos previene el ennegrecimiento de las colonias.
Apariencia del Agar

Figura# . Agar XLD

Interpretacin de los resultados

Microorganismo
Escherichia Coli
Klebsiella
Proteus mirabilis
Salmonella (+) a H2S
Shigella, Salmonella (-) a
H2S
Pseudomonas

Caractersticas de las colonias

Colonias de color amarillas
Colonias mucosas de color amarillas
De rojo a amarillo, algunas con centros de color negro
De rojo a amarillo con centro de color negro
Colonias de color rojas
Colonias de color rojas

Resultados del laboratorio

Aqu observamos bacterias productoras de cido sulfhdrico, por la presencia de

un centro negro. Puede ser una Salmonella o algn Proteus.

Agar MacConkey

Formula
Peptona.17,0g
Pluripeptona...3,0g
Lactosa. 10,0g
Mezcla de sales biliares1,5g
Cloruro de sodio.5,0g
Agar13,5g
Rojo neutro0,03g
Cristal violeta..0,001g
pH final: 7.1 0.2
Es un medio selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
bacilos Gram negativo fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se utiliza
con frecuencia para el aislamiento de coliformes. En el medio de cultivo, las
peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de
la flora de Gram positiva. La fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor
de la colonia, esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro),
dando colonias de color rosadas, por otro lado los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Apariencia del agar

Figura# . Agar MacConkey

Interpretacin de los resultados

Microorganismo
Escherichia Coli
Klebsiella pneumoniae
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Proteus mirabilis
Enterococcus faecalis

Caractersticas de las colonias

Colonias rojas con halo turbio
Rosadas mucosas
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Diminutas, incoloras, opacas

Resultados del laboratorio

Aqu observamos unas lindas bacterias fermentadoras de lactosa ya que

presentan un color rosa, por su aspecto mucoso podemos decir que es una
klebsiella.

Cuestionario
1. Coloque un signo (+) en la casilla si hay crecimiento y uno (-) si no hay
crecimiento de la diferentes bacterias.
Tipo de agar
Agar
Nutritivo (A)
Agar sangre
(B)
Agar
MacConkey
(C)
Agar
XLD
(D)

Staphylococc
us aureus
+

Streptococcu
s ssp
+

Escherichi
a Coli
+

Bacillu
s ssp
+

Pseudomona
s aeruginosa
+

2. Descripcin de los medios de cultivos de acuerdo a su utilidad metablica

para los microorganismos, segn el cuadro anexo.
1. A: Es un medio nutritivo, solo para el crecimiento de microorganismos poco
exigentes nutricionalmente hablando.
2. B: Es un medio enriquecido y diferencial, para el crecimiento de todos los
microorganismos y diferencia los hemolticos de los no hemolticos.
3. C: Es un medio selectivo y diferencial, para el crecimiento de bacilos Gram
negativos y diferencia los microorganismos lactosa positivos de los negativos.
4. D: Es un medio selectivo y diferencial, para el crecimiento de salmonellas y
shigellas y diferencia las que produce cido sulfhdrico de las que no.
3. Indique en cul de los medios hay mayor crecimiento bacteriano y
porque?
En el Agar Sangre hay mayor crecimiento ya que es un medio enriquecido
nutricionalmente hablando, con la adicin de sangre, el medio es til para el
aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente
exigentes.
4. En cul de los medios creci mejor los microorganismos Gram positivos
y por qu?
Tanto el agar sangre como
el nutritivo va a presentar crecimiento de
microorganismos Gram positivos, ya que son medios con alto grado de nutrientes

y adems que no presentan sustancias o componentes inhibidores del crecimiento

de bacterias Gram positivas.