UN I V E R S I D A D D E A N T I O Q U I A

FACULTAD DE INGENIERA

DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA

BIOLOGA PARA INGENIEROS

TALLER
LABORATORIO BIOLOGIA PARA INGENIEROS
ENZIMAS
1. A partir de los mecanismos indicados en la Figura A, deduzca las expresiones cinticas para
uno de los 3 tipos de inhibicin.
Figura 1. Mecanismos de inhibicin enzimtica.

Emplear como base la deduccin de la expresin de MICHAELIS-MENTEN

DEDUCCION ECUACION MICHAELIS_MENTEN

Para llegar a la descripcin de la actividad enzimtica en funcin de la concentracin de
sustrato descrita por Michaelis-Menten se tuvieron que realizar algunas consideraciones,
debido a que existen v arios pasos intermedios de la reaccin, todos reversibles y a que la
velocidad de formacin de cada una de las especies involucradas depende no solo de su
concentracin sino tambin de las constantes de velocidad (k 1, k-1, k2, k-2, kp, k-p) y que se
encuentran en la siguiente reaccin.

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Las simplificaciones y suposiciones para obtener la curva matemtica que mejor se ajusta a los
datos experimentales fueron las siguientes:
Suponer que hay un complejo central (ES), esto es que ES se rompe directamente en E + P.

Simplificndose la reaccin a dos pasos:

Paso 1. Formacin de ES que depende de:
La velocidad de formacin

La velocidad de disociacin
Paso 2. Formacin de productos que depende de:
La velocidad de formacin

v1=k1[S] [E]
v-1=k-1[ES]
vp=kp[ES]

La velocidad de disociacin

v-p=k-p[E] [P]
Asumir que la reaccin reversa (PS) es despreciable. La reaccin es termodinmicamente
factible y podemos establecer condiciones experimentales que minimicen la reaccin reversa,
por ejemplo aadiendo una enzima que convierta P en otra especie como Q y que est no
reaccione con nuestra enzima. O bien podemos medir la velocidad de reaccin a tiempos muy
cortos en donde la reaccin reversa es insignificante. Lo anterior nos simplifica la reaccin:

De tal forma que la velocidad a tiempos cortos correspondera a la velocidad inicial de reaccin
y quedara expresada como sigue:

Pero para formar el producto debemos considerar que tan rpido se rompe el complejo ES,
quedando descrito en los dos siguientes pasos:

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Paso 1. En la formacin del complejo ES debemos considerar:

[E]total= [E] + [ES]

entonces

[E]= [E]total-[ES]
V formacin ES = k1 [S] [E]

sustituyendo E en la ecuacin de velocidad de formacin de ES resulta:

V formacin ES = k1 [S] ([E] total -[ES])

Paso 2. Ruptura del complejo ES:

Velocidad de ruptura ES = v-1+vp

Sustituyendo las velocidades

Velocidad de ruptura ES = k-1[ES] +kp[ES]

Suposicin del estado estacionario de Briggs Haldane.

En el estado estacionario la concentracin del complejo ES se mantiene pequea y constante.

En el modelo cintico del estado estacionario, hay un intervalo de tiempo durante la catlisis
enzimtica en el que la concentracin del complejo ES es constante (Figura A.1), por lo tanto
la velocidad de formacin del complejo ES es igual al de su disociacin:

Despejando [ES]

Re-arreglando

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Si regresamos a la ecuacin de velocidad inicial

obtenemos lo siguiente:

y sustituimos ES,

Por ltimo si se considera que la [S] >> [E] (Figura A.1) la interaccin de S con E para formar
ES no afecta significativamente la [S]. La enzima est saturada de sustrato y

Entonces podemos definir la velocidad mxima de la enzima o Vmax como:

Si sustituimos en la ecuacin de velocidad inicial tendramos que:

Agrupando las constantes:

Sustituyendo Km en la ecuacin de velocidad inicial se obtiene la ecuacin de MichaelisMenten:

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2. Defina Actividad Enzimtica, Actividad Enzimtica especifica, sus unidades y las

ecuaciones requeridas para su clculo.
3. Una disolucin al 2% de sacarosa se digiere a pH 5 con 25 g de invertasa. La velocidad
inicial mxima de liberacin de productos reductores fue de 29 mg/min. Calcular la
actividad especfica de la preparacin enzimtica (expresada como desaparicin de
sustrato). (Pm de sacarosa: 342,2; Pm de glucosa: 180).
4. Cules son los mecanismos de accin de las enzimas y como se modifica segn el tipo de
inhibicin.
5. Con los resultados experimentales que se exponen a continuacin, obtenidos del estudio de
la cintica del estado estacionario de una enzima que cataliza una etapa del metabolismo de
la glucosa, en ausencia y presencia de un frmaco que acta como inhibidor:
[S] (mM)
2.50
3.35
5.00
10.00
20.00

Velocidad (mM/min)
Sin inhibidor Con inhibidor
3.44
1.96
4.08
2.34
5.26
2.94
6.66
3.92
8.34
4.76

a. Calcule: Vmx con y sin inhibidor, KM con y sin inhibidor

b. Qu tipo de inhibidor es?

6. En el siguiente experimento con la enzima fosfatasa cida de semillas de trigo

germinadas se vari la concentracin de la enzima en cubeta a dos concentraciones
de sustrato y se obtuvieron los resultados siguientes:
[enz] (l)

[Sustrato]
0.1 mM

[Sustrato]
10 mM

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Vel
(nmol/min)

Vel
(nmol/min)

1.920

6.307

10

4.059

13.169

15

5.956

19.145

20

7.766

25.694

25

9.479

32.282

30

11.844

37.882

a. Como varia la velocidad de la reaccin en funcin de la cantidad de enzima

aadida?
b. Qu pasa si dividimos la velocidad registrada por la cantidad de enzima
aadida al ensayo?
c. Utilizando la ecuacin de Michelis-Menten explique sus respuestas a las
preguntas anteriores?
7. Se utiliza alfa-amilasa de malta para la hidrolisis de almidon. Se determin
experimentalmente la dependencia de la velocidad inicial de reaccin respecto de la
temperatura. Los resultados obtenidos, medidos a unas determinadas
concentraciones de almidn y enzima se muestran a continuacin:
Temperatura (C)
20
30
40
60

Velocidad de produccin de glucosa

(mmolm-3s-1)
0.31
0.66
1.20
6.33

A partir de los datos experimentales, determine las constantes de la ecuacin de Arrhenius.

Se propone llevar a cabo la reaccin a una temperatura relativamente elevada con el fin de
reducir la viscosidad. Simular los valores de velocidad de reaccin a 55 C y comparar con
los valores velocidad obtenidos a 25 C.
Ecuacin de Arrhenius:
Ed

v =A e RT

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Ed

Constante de Arrhenius
Energa de activacin

Constante de los gases ideales

Temperatura