10/05/2015

Identificacin de las
Enfermedades Infecciosas:
Coloraciones, Pruebas, y
Antibiograma
Valeska Stempliuk
Taller Pre-Congreso de las Infecciones Asociadas a
la Atencin en Salud (IAAS)
Nothing to disclose

Objetivos de la
presentacin

Flujo para identificacin y

antibiograma - microbiologa
48/72 horas

24 horas

Discutir los antibiogramas mnimos que deben ser

realizados en laboratorios clnicos hospitalarios
Discutir las pruebas rpidas para identificacin de
los principales microorganismos de importancia
epidemiolgica en el ambiente hospitalario
Discutir la validez del uso de estas pruebas para la
vigilancia activa de MDRO

ReLAVRA antibiograma mnimo

Enterobacterias
Antibitico

Ampicilina
Amoxicilina-Acido
clavulnico
Acido nalidxico

Pseudomonas aeruginosa
Antibiticos
Amikacina

Potencia

Sigla

Protocolo
ampliado

Protocolo
reducido

30g

AMK

Potencia

Sigla

Protocolo
ampliado

10 g

AMP

Protocol
o
reducido
X

20/10g

AMC

NAL

30g

CEP

Cefotaxima

30g

CTX

Cefoxitina

30g

FOX

30g

Ciprofloxacina
Cotrimoxazol

Aztreonam

30g

ATM

Ceftazidima

30g

CAZ

Nitrofurantona

Cefoperazona

75g

CFP

Cefepime

30g

FEP

Piperacilina/Tazobacta
m
Gentamicina

30g

FOX

Ciprofloxacina

5g

CIP

Clindamicina

2g

CLI

Cotrimoxazol

1,25/23,75g

SXT

Doxiciciclina

30g

DOX

Eritromicina

15g

ERI

Gentamicina

10g

NIT

100/10g

TZP

10 g

GEN

Amicacina

30 g

AKN

Imipenem

10 g

IPM

Imipenem

10g

IPM

Meropenem

10 g

MEM

Meropenem

10g

MEM

Colistin

10 g

COL*

Piperacilina

100g

PIP

Cefepime

30 g

FEP

PEN

COL

10 U

10g

Penicilina

CIP

1Colistn

Protocolo
reducido
X

CIP

GEN

Protocolo
ampliado
X

SXT

5g

OXA

CAZ

10g

TZP

Sigla

1g

5g

Gentamicina

100/10g

Potencia

Oxacilina

1,25/23,75
g
300g

Ciprofloxacina

Piperacilina/Tazobacta
m

Antibitico

Cefoxitina

30g

Cefalotina

Ceftazidima

ReLAVRA antibiograma mnimo

Staphylococcus aureus y Staphylococcus spp. coagulasa negativa

GEN

Rifampicina

5g

RIF

Teicoplanina

30g

TEC

Tetraciclina

30g

TCY

Vancomicina

30g

VAN

Novobiocina

5g

NOV

Minociclina

30g

MNO

Cloranfenicol

30g

CHL

Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium y Enterococcus spp.

Potencia

Sigla

Protocolo
ampliado

Protocolo
reducido

Ampicilina

10g

AMP

Gentamicina

Antibitico

120g

GEH

Estreptomicina

300g

STH

Teicoplanina

30g

TEC

Vancomicina

30g

VAN

Acinetobacter baumanii
Antibitico

Potencia

Sigla

Protocolo
ampliado

Protocolo
reducido

Ampicilina/Sulbacta
m

10/10g

SAM

Amikacina

30g

AMK

Ceftazidima

30g

CAZ

Ciprofloxacina
Cotrimoxazol
1Colistn

5g

CIP

1,25/23,75g

SXT

10g

COL

Doxiciclina

30g

DOX

Gentamicina

10g

GEN

Imipenem

10g

IPM

Meropenem

10g

MEM

100/10g

TZP

Tetraciclina

30g

TCY

Cefepime

30g

FEP

100g

PIP

Piperacilina/Tazobac
tam

Piperacilina

10/05/2015

Pruebas rpidas para deteccin

de organismos multirresitentes
Principales MDRO en el ambiente
hospitalario
o S. aureus resistente a meticilina
o Enterococcus resistente vancomicina
o Bacilos gramnegativos No fermentadores resistentes a
cabapenmicos
o KPC
o NDM
o Otros
o Enterobacterias resistente a carbapenmicos
o KPC
o NDM
o ESBL

Enterobacterias
E. coli y K. pneumoniae
Ceftazidima R y/o Cefotaxima R = ESBL
o 48hs + 24

Imipenem R y/o Meropenem R = NDM o KPC

o 48 hs + 24

P. aeruginosa y A. baumannii
Imipenem R y/o Meropenem R = Carbapenemasas
u otros no enzimticos

Mtodo convencional
18 - 24 horas cultivo primario identificacin y
antibiograma
Enterococcus faecium o E. faecalis resistente a
Vancomicina
o Vancomicina R (48horas)

S. aureus resistente a meticilina

o Cefoxitina R (48horas)

Mtodos colorimtricos y
selectivos
Cromo agar
Molcula llamada cromgeno posee dos partes,
una especfica para la enzima que se quiere
detectar y la segunda que cuando liberada
produce color (cromforo)
La deteccin de un producto (enzima o pH) que
evidencia la resistencia o cambio de metabolismo

o 48 hs + 24

Mtodos selectivos
colorimtricos
Cromo agar
18-24 horas de inculo inicial para el resultado final
C. difficile
MRSA
Enterococcus
Especie
o Enterobacterias
Especie y mecanismo de resistencia
o
o
o
o

Prueba rpida de ltex

Partculas de ltex sensibilizadas con anticuerpos
monoclonales 18-24 horas del inculo inicial
o Test 10 min

S. aureus (MRSA) anticuerpos para PBP2

C. difficile Toxina A y B

10/05/2015

Enzimticos - ELISA
ELISA, independiente del sistema de deteccin
requiere la inmovilizacin de antgeno o anticuerpo
a una superficie
Marcador enzimtico combinado con el sustrato
que es apropiado para el medio de lectura
Colorimtrico
Fluorescencia
Luminiscente
24 a 48 horas

Colorimtrico
El producto final de la reaccin absorbe luz en la
frecuencia de la luz visible
La densidad ptica generalmente es proporcional
a la cantidad de substrato

o C. difficile toxina A y B

Fluorescentes
Son simplemente una variacin del mtodo
colorimtrico ELISA
Cuando es excitado por la luz de un determinado
tamao de onda, la enzima convierte al sustrato en
un producto fluorescente
La unidad de fluorescencia relativa (fotones
emitidos de la luz) que se detecta, es proporcional
a la cantidad del analito que se est midiendo
Es slo un poco ms sensible que el mtodo
colorimtrico. Pero amplan el espectro de lectura,
ms opciones de substratos

Inmuno-cromatogrficos
Fijacin de anticuerpos en membrana, flujo
unidireccional de antgeno (toxina)
o C. difficile (GDH)- glutamate dehydrogenase
o Rotavirus
o Carbapenemasa

Luminiscentes
Inmunoensayos luminiscentes, son variaciones de la
ELISA estndar.
Una enzima convierte el substrato en producto que
emite luz - Muy sensibles
Bioluminiscencia compuesto bioluminiscente
Quimioluminiscencia- reaccin qumica
Fotoluminiscencia - fluorescencia

Moleculares
Gene Xpert Mycobacterium tuberculosis complex
y mutaciones para resistencia a rifampicina OMS
recomendacin
o Tuberculosis 2-4 horas

10/05/2015

PCR en tiempo real

PCR

Especie/Gene
especfico
Mayormente
usado para
MRSA y C.
difficile

Especie/Gene
especfico
Mayormente
usado para
MRSA y C.
difficile

Resumen de las pruebas

tiempo para el resultado de las pruebas
Cromo - agar

Ltex

Resultados:
Descolonizacin universal fue la estrategia menos costosa y ms
efectiva comparando con las otras, excepto precaucin de contacto
universal + decolonizacin, y precaucin de contacto universal + bao
con chlorhexidina gluconate.

Elisa,
Cromatografico

Moleculares:
PCR
Real time PCR
Gene expert

toma

12

18

24
aislamiento

30

36

Valor de uso de pruebas rpidas

Vigilancia activa de MDRO

42

48

72 h
Identificacin
fenotpica
Antibiograma

Si la prevalencia de colonizacin por MRSA disminuye del 12 al 5 %,

la vigilancia activa + la descolonizacin selectiva se torna la estrategia
menos costosa.

mecanismos de
resistencia:
NDM
KPC
ESBL

Valor de uso de pruebas rpidas

Vigilancia activa de MDRO

Resultados: En las condiciones estudiadas (7.5% prevalencia de MRSA), los costos de la deteccin
universal de MRSA y de precaucin de contacto superan los beneficios proyectados generados
mediante la prevencin de las infecciones relacionadas con MRSA, resultando en costos
econmicos de $104.000 por 10.000 admisiones (IC del 95%, $ 83,000- $ 126,000).

10/05/2015

Valor de uso de pruebas rpidas

Vigilancia activa de MDRO

Gracias
Preguntas?
Sugerencias?
Comentarios?

Resultado: La incidencia de infeccin por K.

pneumoniae RC aument 6,42 veces desde el
primer trimestre de 2006 hasta mayo del 2007. En
2006, de los 120 pacientes cuyos resultados de los
cultivos microbiolgicos clnicos fueron positivos
para K. pneumoniae CR, 67 (56%) desarrollaron
una infeccin nosocomial. La colonizacin medida
durante la intervencin fue 9%.
De los 390 pacientes con colonizacin o infeccin
por K. pneumoniae CR, 204 (52%) fueron
identificadas mediante screening. Hubo un total de
12.391 das de las precauciones de contacto, y de
stos, 4.713 (38%) se aadieron como resultado
de la vigilancia activa.

Dr. Valeska Stempliuk

stempliv@paho.org