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En tkminus
en un laboratorio
argentino*
procedimientos terapbticos
avEtncBs en ia investigacin
b&ica 8fi biociencias,
est& contribuyendo
a su
decisivos en 81 conocimieflto de ioS mecanismos
vez a hacer progresos
intimos de las enf8rm8dad8S
y del funcionamiento
del cuerpo humano.
Todo esto abre nuevos hOrizont8S en la industria farmackitica.
Para empezar, la actividad de IyD que el sector lleva a Cabo en fa bsqueda
de
rwevas drogas tiende a asentarse sobre un nuevo paradigma tecnol6gico
-el diseo racional de molkutas-,
que pasa a describirse brevemente en
8studiOS
han destacado
al proceso
de IyD en la
de descubrimiento
los
crecientes
industria farmac&tica
de
riesgos
y costos
en ios @irnos
l
El contenido de este capitulo reproduce sn Lo esencial el estudio de los
autores publicado por CEPAL: Biotecnalogb e industria farmac4utica. Desarrollo
y producci6n de interfern natural y recombinante en un faboratorio argentino,
Documento de Trabajo nQ 30, Buenos Aires, noviembre de 1388. Queremos
destacar la contribucibn de Mauricio Seigelchifer, biblogo que ha participado
wtivamante en ia elaboracibn del presente estudio, particularmente en tos pasajes
Nu8StfO
egredeoimiento tambibn va dirigido a
descriptivos de la teMologia.
Marcela Argelles -presldente de Sidus-, a Alberto Waz director de Biusldus-, a.sl
oomo 8 los invastigadores ds dicho laboratorio por su #l&Oracibn.
IA
responsabilidad poc lo equl expresado es enteramente de los autores, no estando
comprometidas las personas o instituciones mencionadas.
98
8&s,
1370.
J.J., Modern Drug Rwearch, en Th econumics of dmg innowtiot~, op.
di., lm9.
99
1.2. fvuevos
productos,
nuevos procesos
101
lO.ooO
milon=
farmachk0
d8 dbtares,
o s8 c8rca d8 un 10% det mercado
total. Esta situacin PU48 t8n8r un 8fetiO dasestructurante
8n 8t 68Cbr,
p8f0,
sobre Wdo, itirodw
nU8Va6 8Xig8flChS
de competttividad:
ta rwcesidad
de que tas firmas w dtien
de una capacidad
de
innovacin
biotecnotbgica
puede
ser d8ciSiva
para preservar
y ganar
postciones
8n et msrcado.
las transformaciones
tecnot6&as
que afectan
a esta industria
forman
parte det Conjunto
de innOVaciOn8S
biotecnol6gicas
pr8s8nt8s
8n bU8na
part8 de ta producci6n
indrrstrial
y agrcola
-8n particular
8n tas industriaS
qumica,
petroqumica,
farma&tica
y agroatirrwntaria
Y como ta dfusi6n
16gica de ta biotecnologia,
por Su universalidad,
8s transectoriat,
uno de sus
impaCtOS mhs importantes
podda #r ta int8rpenMracin
entre SBctorBs de
atividad
actUalnwH8
independientes.
Esto stgntfica ta posibilidad,
entre
otras, de qus firmas ajsnas at swtor
farrnackko
proyacten
entrar 8n ta
actividad
a trav6S de programas
d8 1yD en biotecnotogfa.
Compafias
qumicas
como MonSanto
y Du Pont ya han emprendido
ssfu8nos
de te
importantes
no ~610 en sanidad
veg8tat
sino tambi6n
8n drogas
y
diagn&ticoS
para salud humana,
to que ilustra et tipo de ataqua
lateral
qU8 deber8
afronfar
el sector.
De todos modos, Bsa sinergia puede favorecer a esas firmas 8610 en tas
primeras
etapas de ta 1yD (obtenc&
de capas, ferm8ntaci6n...),
pero no
farmaculbgicos, farmacotknicqa
y pruebas
en tas 8tapas finales (-udios
ClnicaS).
Ademhs,
ta industria
farmac&tica
ostenta
un tradicional
dinamismo
tecnot6gico.
Y 8s, precisam8nte,
en ta medida en qua tos
dwrottos
biotecnol6gicos
aparecen
como una pfoiongacin
de la
inuestigacibn
bsica en biociencias
-8n gene&,
orientadas
hacia aplicacianes 8n et campo de fa ~a!ud- que ta industria
farmac&tica
viene tiderando
ta innovaci6n
biotecnotlbgica
ESta Situacibn
Wfga
d Sector Ventajas
conSid8rabteS,
dado que tas diferencias
8n ta capacidad
de innovacin
deben
jugar un rol determinante
en ta evotuctn
det proceso
de int8rpenaracin
d8 ramas.
Esto parece corroborars
8n ta fuerte intervencin
d8 grupas
qumicos
y fafmack&os
(Sandez, Ciba-Geigy,
Pfizef, Upjohn,
Rhbne-~outsnc,
etc.) en ta industria
de semillas,
s8ctor que hasta tos aiios
setenta no estaba muy concentrado
nt internacionatizado.
Este fen6meno
puede
entenderse,
por un lado, como
ta exptataci6n
d8 una sinwgia
aplicada
a h faimacia y la
8xiSt8nt8
9Mr8 ta nV8StgaCin biotecnol6gtca
aplicable
a semillas,
parttcutarmenta
8n campos
como
microbiologa,
virobgla gsn&ica, biologa molecular, etc.; un daro ejemplo
es ta
t8onoioga
de cu&ivo c8tular,
que sirve tanto para et mejoramkntu
y ta
micropropagacidn
de plantas corno para ta produc&n
de Sustancias
de
tnter& farmac&ico.
Pero, por otro tado, las plantas oonstirmn
una hrenta
de materia prima asenciat en ta tndutiria
farma&iti%
Sa ha estimado
que
un 40?4 de ta pfoduocin
del sector deriva de mt8rial vegetal (en rubros
coma antibi&kos
y laxantes
esa proporci6n
asciende
at %%) y ms d8t
25% d8 tos principios
activos
utilizados
aaatment8
corno
agentas
terap8tiicos
en satud humana
derivan
da organismos
v8getat8$.2
103
104
of Jechnology
(interferon), Recomtex en la Universidad del Estado de
Michigan (diagnostico prenatal), Sunstar en la Microbiological Biochemistry
ReS8arCh Foundation (vacunas), ICI en la Universidad de Leicester, Hoechst
en el Massachusetts General Hospital, etc&era.8
con el Dr.
en
V.l. Evofucih
de los precios
de enzimas
de restricci&P
Empresa
Enzima
iBI
36/87
Eco
Hjnd
Sma
Taq
RI
ll!
J
i
0,35
1
7,14
5,s
NE Biolabs
BRL
l_l___l_r_______________L_______________83184
86
87
86/87
&8/89
0,20
1
17,50
9,09
0,20
0,35
8,77
t,75
0,20
0,35
8,77
1,?5
0,42
0,52
7,14
3133
0,31
0,40
5,08
2,32
y SUS nombres
completos
Research
Laborsfories.
son:
Internattional
Biolechnologies
Fuet?te: Elakraci6n
pro@e SObt8 la base de datos obtenidos
de los cai&gos
anuales
de las empresas
mencionad&%
Los precios
se expresan
en d&tes/lOO
unidades
y san tos mks bajos ofrecidos
por cadda
empresa
par& la enzima
correspondiente.
110
producci6n fue luego asegurada por la Cruz Roja Finlandesa); all se ssguia
un metodo puesto a punto por el Dr. Cantell que utilizaba los leucocitos de
la sangre de donantes sanos. SS haba comenzad0 a trabajar en la
pmducci6n de interferbn en 1963 y en 1980 se ileg6 a obtener un m&ximo
de 50 millones de unidades (250 pg de interfern} a partir de 1 litro de
whivo. Se podian producir entonces unas 250.000 millones de unidades
(aproximadamente i gramo) por ano, usando 45.oQo litros de sangre (0 sea
unos 1OO.ooOdadores). Se consideraba que esa produccin anual (1
gramo de nterferbn) alcanzaba para tratar 1OO.ooOcasos de infecciones
virales bwrignas, pero ~610 2.ooO pacientes con enfermedades virales
&nicas y apenas S# tr;utami8ntOS 8xpBrimWtakS
de procesos cancerosus. En 19B0, 1 gramo de interfer6n producido y purificado por las
,thkxs
clh&as costaba 5 millones de alares se@n la Ameritan Cm-ser
Socity; otras estimaciones situaban ese precio entre 5 y 50 millones de
d6Iares.
En 1980 Francia se convirtk3 8n el segundo productor mundial de
int8rfern leucocitario. El kMituto Pasteur Production, junto con el Centro
Nacional d8 Transfusi6n de Sangre (su abastecedor d8 glbulos blanccrs),
dasarrollb una tecnologia que la permitid pasar a produtir unos lCMI.oa)
millones de ui ariual8S.
En EE.UU., algunos laboratorios pblicos y privados comenzaron a
producir intwfern leucocftario: Warner Lambert/Parke Davis, Interferon
Scienc8s;
y en Japn, Geen Cross y la Yamanouchi Pharmaceutical
Company.
Pero fa t6cnice de producci6n de dicha protena presentaba ciertos
in~~eni8r1t8~:
por Un lado, como ioS ieucocitOs Mmates no p~ed8n
mantenerse como linea de cultivo se Itegaba r&pidamenta a techos de
producci&; por otro, la pureza mxima del producto final era insufitiente
y SB obtana 817 realidad una mezcla de inteiferones.
Se intentaron
entontxs otros caminos.
EI Instituto M&ieux de Frantia ue6 una unidad de producci& de
interferbn a partir de tuitivos de leucocitos
provenientes d8 i sangre da
enfermos afecrtios de leucemia mieloide cr&tica; la puriftcaci6n s8 basaba
813 81 amp480 de anticuerpos monoclonales.
En 1980, la Wellcome Foundation Limted de Gran 5retGta desarroll una
t%#ologh para pfoduccibn de intsrfer6n kucocitario a partir de linfocitos
humanos transformados por el virus E8V. Esta tecnologfa -que permite la
multiplicaci6n lencultivo de las c6lulas linfobl&ka& fue luego utilizada por
la Sumitomo Chemical (Jap&) y por Hoechst (Ai8mania).
El interfern fibrobl&stico (beta) se obtiene a partir da fibroMastoe
(muhiptibles
en cultivo) provenientes de tejidos fetales o de prepucios de
individuos circuncisos. Esta tecnica fue desarrollada sobre todo por sl
laboratorio ingik Searle, qU8 ruego S8 asoci con 81 k&fatoriO Mochida
para producir y comercializar en Japn este tipo de intefern, que tambik
elabwan las empr8sas Hayashibara 6iOCh8mica! Laborakxiw y Toray de
ese psis y ios laboratorios Ftow Genera! (a partir de un.m&odo desarrollado por el Massachusetts k%titute of Technology), Collaborative Research
y Key Intwferon de EE.UU. En Europa, adem&s de Ssarle, lo produwn
Hoechst, Kabi Vitrum AB, el Instituto M&ieux y Sanofi (Francia), la
Universidad de Lovaina (5#gica), Boferon (Alemania &cid8ntal) y Sereno
(Italia).
111
y produccin
de interfern
recombinante
2. Argentina:
nacional y biotecnologa
114
fue comprendiendo
117
2,3. Produccih
de intetierbn
leucocitario
del proceso
de produccin
en Sidus
y esfuerzos aciaptativos
leuco&&o
en
pasos, sucinta-
119
122
especiafes
de mantenimiento),
hasta largos plazos en los tiempos
de
instalacin y reparacin del equipo importado.
biolgica
Otro inconveniente
que frecuentemente
afecta a la produtin
-que trabaja con organismos
vivos- es el de fa deficiencia de los servicios
elctricas y de otros nsumos bsicos, como el agua y el gas. Par ejemplo,
fas eventuales interrupciones
en fa provisi6n de electricidad o simplemente
el hecho de contar con una refrigeradora
preparada
para funcianar
con
220 V constantes
-condiciones
que aqui son aleatoriasexponen
af
a accidentes que pueden provocar la pkdida de los microorlaboratorio
ganismos
de fas Mulas
animafes o de fos virus, 5 por fo menos una
perdida de sus propiedades
bioldgicas.
Esta vulnerabilidad
extrema de fo
biolgico frente a la variabilidad
de fos insumos normalmente
ffeva a los
focales a buscar prevenir dichos inconvenientes,
fo que supone
laboratorios
inversiones suplementarias
en infraestructura
5 equipos.
Asi Biosidus, en
su nueva pfanta, ha creido necesario disponer de tres congeladores,
das
de etfos conectadas
a fneas elctricas distintas y un tercero conectado
a
un generador
propio.
123
Cuadro
V.2. Evolucin
produccih
Ao
Sangre trata+
(auffy-00ats)
Produccin
(Unidades internacionales)
1982
6uox10
1983
1.825 x 10
1984
1985
1986
1987
4.200
9.208
14.325 x 10
8.951
8.649
15.217 x 10
12.185 x lOe
La mechda
se&nentacin,
corresponde
de cada
Fuente: Elaborado
sobre
Productividad
(Unidades/B.C.)
0,3 x10
0,5 x10
0,7 x10*
1,56 x10
1,70 x10
1,40 xlos
2.940 x 10
SI aproximadamente
bufiyxoat
se obtiene
ia base
de intoormacih
medio
litro de
una concentracin
proporcionada
de
sangre
final
de dadores
nor~~~ales.
de leucocitos
de 10 ctt:ml.
Por
por Biosidus.
124
reales de demanda.
En 1988, ante ta inmnencia del lanzamiento al
mercado del interfer6n en forma inyectable, se plantea la necesidad de
elevar sustancialmente ia producei&
(hay que tener en cuenta que tas Ul
de un ge! antivira! se cuenian en decenas de miles, mientras que en ef caso
del inyectable para oncologa se cuentan en millones).
2.3.5. Algunas limitaciones en la produccih
de intetferh leucocitario y la
bsqueda de caminas alternativos de produccin de interfer6n
En principio, el abastecimiento
de sangre -dei que depende inevitablemente la produccin de interfer6n a partir de leucocitos puesto que
estas c6lutas no se multiplican en cultivo- no constitua una restriccicin en
la capacidad de producci&,
porque el mercado toca1 de antivirales -al que
se destinaba con exclusividad et interFer6n de Biosidus hasta 1989 es
retativamenta pequeo. Para no sucede lo mismo con oncologa, donde
las ventas del producto de Schering-Plough llegan actualmente a rondar las
5.000 millones de unidades mensuales.
En 1988 Eiiosidus comenz a
aumentar la provisin de sangre con Ia mira puesta en ese mercado; pero,
de todos modos, SB podian anticipar dificultades ligadas a la recoleccin.
Es que en Argentina -a diferencia de paises como Francia o Cuba-, no hay
ningn tipo de plan nacional de sangre, la donacibn voluntaria es limitada
y cualquier utiiizaci&I masiva de este recurso se torna problem&ttica.
Otra dificultad inherente a la obtencibn de interfer6n a partir de leucocitos
-apenas compensada por la alta actividad especfica de ta mokula
y su
alto valor unitario- es el costo del proceso que debe tratar varias decenas
de miles de litros de sangre para obtener un gramo de interfer6n puro.
Finalmente, el origen sanguineo del interfer6n exige poner en prctica
mltiples y caros controles y puede plantear cuestiones de confiabilidad
dificiles de contrarrestar.
Teniendo en cuenta todos esos elementos, Biosidus decidi
buscar
caminos alternativos (0 complementarios):
por un fado, la produccin de
interferbn a partir de linfobtastos; por el otro, y fundamentalmente,
una
fuerte apuesta por el d8sarrOllo y dominio de una tcnica muy potente
como la ingenieria gentica.
Con respecto a ta primera alternativa -que sigue siendo una via natural
como la del interfer6n kucocitariose trata de la mencionada tcnica
utilizada por la Burroughs Wellcome (Inglaterra) que posee la ventaja de
emplear clulas humanas inmortales y capaces de multiplicarse en cultivo.
Eliosidus compr6 en EE.UU. la lnea celular correspondiente
a un precio
aproximado de 2.ooO dlares y desarrofl6 la produccin por este mtodo
El paso a una escala mayor no est exento de
a pequea escala.
problemas (requiere el dominio de la fermentacibn masiva de cSiMas,
tecnoiogia que actualmente estA en plena difusi6n mundial), pero la firma
par8ce retenerlo como alternativa potencial.
Tomando como referencia las dos grandes etapas del proceso de
obtencidn de interfern Isucocitario (producci6n y purificaci6n), las alternativas tecnol6gicas mencionadas significan una modkaci6n
completa de
la primera fase y sblo parcial de la segunda. La via del ADN recombinante
implica disponer de una cepa bacteriana a la que se ha dotado de la
capacidad de producir interfern en grandes cantidades, fermentar, extraer
125
126
3. El tierferdn
dr ingenierf
su economu
3.1. Estudio
de
del gen
Cuando se encara esta tarea el interfern ya haba sido descrito por tos
grupos de punta a nivei internacional; su secuencia se conocia y se habia
publicado.
Esto fue determinante
porque permiti elaborar para el
aislamiento una estrategia sencilla y muy distinta de la que haban tenido
que seguir los grupos pioneros.
Inicialmente, los grupos d8 avanzada solo sabian de la actividad antiviral
det interf&n,
pero ignoraban su secuencia: la nica conexin conocida
entre el gen y la proteina era una actividad biolbgica detectada,
Por lo
tanto, para aislar un gen tuvieron que cortar el ADN, clonarlo en un
plksmido y realizar un trabajoso screening hasta obtener un plsmido con
cierta actividad antivirat. Recin entonces supieron que tenia un fragmento
que contenia muy posiblemente
el gen de interfern; a partir de alli
pudieron aislarlo y obtener su secuencia. Este penoso trabajo de seieccin
-en las condiciones tkcnicas de fines de los setenta- insumi6 varios aos
y mucho dinero.
El equipo de Biosidus en cambia, como ya conoca la secuencia, pudo
seguir un Ftinerario ms corto: sintetiz6 una pequea parte de la secuencia
para utilizarla como sonda (detector), consigui6 una biblioteca de genes
humanos (pedazos de ADN clonados en plsmdos, donde hay una gran
diversidad de clones que representa el total de genoma) yr utilizando
aquella sonda, pudo reconocer directamente la existencia del gen (que
qued entonces aislado).
Hay que aclarar que este prOc8dimientO se emplea corrientemente
cuando se trata de aislar un gen cuya secuencia se conoce de antemano,
128
129
@iimiz&cin
de la exprwsi6n
sobre ei desarrollo
032
m el d8sarruh
Es intereSante ahora intentar cuantificar los tiempos y recursos empleados en las distintas fases del desarrollo, ya que puede servir para estimar
aproximadamente
el orden de tiempo, de recursos humanos y de inversi6n
necesarios para llevar adelante localmente un proyecto de produccin de
proteinas por ADN recombinante.
El tiempo se puede calcular dascomponi6ndolo
por etapas sucesivas: a)
montaje del tabwatorio y de tknicas bsicas: un ao; b) aislamiento dei
gen: un ano; c) expresi6n: dos aos; d) optimiraci6n de la expresi6n: dos
aos.
Hasta aqu contabilizamos seis aos de trabajo en total. Ese tiempo
puede dividirse, por un lado, en cuatro a?ios de trabajo de un equipo por
el que circularon cuatro personas dir8ctam8nt8 afectadas al desarrollo del
interferdn alfa recombinante:
dos bioqumicos
dodorados,
con cierta
experiencia previa (uno de ellos emigra al cabo de dos ahos de comenzar
la experiencia) y dos tknics
(uno de ellos tambin deja el proyecto af
cabo de dos aos).
Por otro lado, se estima que ei desarrollo de las faS= de fermentacin
y purificacin habr insumido dos aios de trabajo de una bi&oga, dos
bioqumicos y tres t8cnicOS. Aqu no s8 toma en cuenta la experiencia en
purificacM
del interfern natural acumulada anteriorman% y que ohiamente acortb mucho el tiempo de desarrollo de la purificacin
del
recombinante.
Ms alt de esta estimaci6n de tiempos y personal involucrados (que, de
Mas maneras, es ~610 aproximada, ya que la dedicacin al proyecto del
personal mencionado
no fue exclusiva), resulta muy probl8mtim
una
contabiliracibn
de detalle de fox gastos en infraestructura,
equipos,
insumos, etc., qu8 correspondieron
especficamente
af d8SarrO1lO del
proyecto de interferbn alfa 2 recombinante.
Parece m&i sensato hacer una
estimacin partiendo del gasto global de la firma: s se considera qua al
laboratorio de biologa molecular absorbe un tercio de los gastos corrientes
(salarios e insumos varios) y un quinto de la infraestructura y equipos dis-
133
de interfern
recombinante
global
del proceso
innovativo
en Biasidus
y el posrergado
autofinanciamiento
137
decir unos 1oO.ooOd6lares. Se considera que Argentina representa hoy uno de tos
principales mercados del producto de Schering-Plough.
25 Es el caso dsl herpes genital, para el cual no habia tratamientos indicados.
28 Es cierto por lo lem&s que en el pas no SB realizan verdaderas pruebas
clinicas que establezcan la eficiencia y no toxicidad de las nuevas drogas -y .el
interfer6n no es una excep&n-,tomAndose
como referencias habititantes las
pruebas clinicas realizadas en los paises industrializados.
Sin embargo, para el
tratamiento de patologlas inexistentes hoy en aquellos paises -como el Chagas o
la lepra-, una utilizaci8n eventual de interfarbn (gamma) deb8r8 pasar por una
corroboracibn experimental previa realizada in situ.
138
del mtodo de purificaci6n de este ltimo al primero dio buenos y sorprendentes resultados. Asimismo, luego se pudo volcar toda la experiencia
acumulada en purificacin en el proyecto del recombinante.
Algo similar s8 puede obsarvar en ingeniera genatica, donde el proyecto
troncal de interfern alfa recombinante fructifica en desarrollos posteriores,
como los de interferon gamma recombinanta
y diagnsticos,
y los
proyectos de IL 2 recombinante e insulina recombinante.
El proyecto de insulina es en principio un emprendimiento conjunto con
Biobras (Brasil), con quien Sidus form un joinf-ventire.
En Biosidus se
esth llevando adelante el desarrollo de! clon; la puesta a punto de la fase
fermentattiva ta asumiria la firma brasilea, que dispone de una importante
planta de fermentaci6n.
El acuerdo tambihn contempla la transferencia a
Biobras de la cepa desarrollada por Biosidus para producir interferbn.
Entonces, en protenas se han planteado modelos que tienen garantizada
su llegada al mercado: la molkula
ya fue descubierta, se conocen sus
aplicaciones terap&ticas,
ya est en 81 mercado y hay una difusin de la
informaci6n tecnolgica necesaria para su producci6n. Como ya se indic,
ello ti8ne que ver con la necesaria minimizaci6n de los riesgos (costos) de
desarrollo.
Las posibilidades de fracaso y los costos son bastante m$s
grandes cuando se intenta clonar por primera vez una proteina ya
conocida; y esas posibilidades serian aun mayores si de lo que s8 tratara
fuera de ctonar una protena cuyas aplicaciones terap8uticas no estuvieran
claramente definidas.
En el kea de diagnsticos -donde los mercados son ms pequeos- los
costos de desarrotlo son relativamente menores. Ademas, al no ser drogas
de administracin clinica, no estn suj8tas a las exigencias y controles del
aparato regulatorio pblico y su colocacin en el mercado 8s ms sencilla
y rpida (el riesgo, por lo tanto, disminuye).
Aqui Biosidus ha encarado
proyectos de punta ms originales y que, por ende, implican un grado de
incertidumbre con respecto a su llegada al mercado.
Los desarrollos en este campo estkn dirigidos a dos tipos de diagnsticos: unos detectan el pat6geno @robes) y otros el anticuerpo. El objetivo
es producir a bajo costo diagn6sticos extremadamente
rApidas.
En la primera direcci6n, SB estaba trabajando sobre el modelo de
papiloma (virus genital considerado responsable de la mayor parte de la
patologa cervical, incluidos los carcinomas), hepatitis 8, enfermedades
respiratorias (Iocalizacibn 8 identificacin rApida de virus que, como el
adenovirus, causan ese tipo de enfermedades), diarreas infantiles, lepra,
tuberculosis, control sanitario de alimantos (salmonella y clostriditrm), etc,
En el segundo enfoque, ya habia algunos modelos desarrollados (hepatitis
B, Chagas, adenovirus, papiloma).
AdemAs de protenas recombinantes y diagnsticos, el laboratorio de
ingeniera gentica tiene una actividad secundaria de control de las pruebas
ctinicas -en particular de interfern- a travs de procesos moleculares. Por
ejemplo, logr6 desarrollarse un test que permite la detecci6n del virus del
papiloma y el control in vivo del grado de ataque del interfern a dicho
virus.
Queda claro, entonces, que 8n eI campo de la ingeniera genkica la
fertilizaci6n va m& allA de una lnea especifica de trabajo. En el sector
salud, s8 aplica a la produccibn y purificacibn de distintas pruteinas de
140
4.3.
Formacin
empresaria
de recursos humanos:
y papel del Estadc
situacih
universitaria,
politica
142
2~ Este es un caso en el cual se ponen en valor tas rekciones de los invastigadores de Biosdus con el medio acadbmiro.
revistasespecializadas,consultas con profesionales de distintas especialidase busc el asesorades, etc. Por ejemplo, para hacer las hreas est&iles
miento de fabricantes locales de equipos de flujo laminar. Como resultado
de ese trabajo, se debi generar un krrow-how ingenieril considerable que,
eventualmente, podrA valorizarse en nuevos emprendimientos
en el campo
de la producci6n
biolgica,
hecho que constituya una exterrPalidad
potencial no desdefiable en este desarrollo.
En el nuevo edificio, la superficie disponible para labkatorios se ampli
enormemente
con respecto a la situaci6n anterior, al tiempo que se
mutiplicaron las necesidades de equipamiento al aumentar Ia autonoma
de cada laboratorio.
Se considera que la capacidad de producci6n de
interfer6n leucocitario aumentb cuatro veces.
El costo de construccion del inmueble fue de 1.7OO.ooO dlares, mientras
que
la nueva inversin
en equipOS
ascendi6 a 600.000 dblarss; y contabilizando los equipos previamente disponibles, la inversin total en ese
rubro rondaba el mill& de dolares.%
4.5. Puntualizaciones
finales
actualmente
se encuentran:
bacteria recombinante,
fermentacM
de la misma y purifrcaci6n de la
protein a.
Ahora bien, aunque se trate de un desarrollo imitativo -en 81sentido de
que se intent repetir caminos ya transitados por los grupos de punta a
nivel mundial-, no debe perderse de vista el hecho de que constituye la
primera apticacion en el pas a escala industria! de la tecnologa de ADN
recombinante.
El acceso a esta tecnologia estrat6gica fue posible bajo chtas condiciones que parmiten entender que e! clonado y producr=i6n de una
proteina recombinante
se baya podido encarar en el psis no mucho
despu&
del desarrollo original y a un costo abordable por una firma
mediana local:
l Se contb
con modelos desarrollados previamente en e! exterior. La
informaci6n general sobre estos desarroltos de punta -que permiri6 avanzar
rclpidamente, a menor costo y minimizando riesgos- circula con relativa
facilidad y sn demasiado retardo; esta circunstancia responde, entre otras
cosas, al hecho de que buena parte de los grupos que los protagonizan
pertenecen a la esfera pblica o tienen relacibn estrecha con ella. No se
trato, por 10 tanto, de avanz%f en la frontera, sino de aprovechar tempranamente informaci6n de grupos que estSn trabajando en ella, para lo que
fue necesario abrir distintos canales de acceso a 8sa informacitrn:
suscripcidn a publicacionas cientificas, asistencia a congresos, 8tcht8fa.
l Biosidus
pudo beneficiarse de algunos servicios externos importantes,
prestados de manera informal por investigadores
que trabajan en eI
exterior, gracias al funcionamiento
mismo del sistema cisntifico a escala
mundial (que favorece et intercambio
entre los distintos grupos de
investigacion) y a que los investigadores de Biosidus provienen del sistema
cientfico-thcnico,
Esta informacin, incorporada en material biol6gico y
transferida a bajo costo, permiti6 resolver problemas
que hubieran
demandado mayor tiempo y equipos de los que el laboratorio local no
disponia.
l La
at%cu!acidn de una estrategia eficaz y selectiva, capaz de complementar los desarrollos llevados a cabo localmente con aportes ex6genos
sin por ello resignar et control de la inteligencia global* del proceso,
depende de la propia consistencia centifica-t&nica
del grupo de inves
tigadores que protagoniza el emprendimiento.
Y s8 ha visto que algunos
de ellos tienen nivel doctoral, siguieron formaciones
efl ef exterior y
realizaron experiencias previas en et sistema cientificot6cnico
local. El
desempeo
del grupo requiere tambien, obviamente,
de cierta disponibilidad de equipos, insumos, literatura, acceso a congresos, etc., todo
lo cuat supone un financiamiento sostenido a pkdida que no debe ser
minimizado.
l A pesar
de ta accesibilidad de los costos, la inversin es significativa
por lo cual resulta imprescindibk
plantearse 81tema de la -Ia
requerida
para amortizar dicha inversin de un modo adecuado. En es8 sentido, la
diversificacin de proyectos en Biosidus puede intefpretarse como una
necesidad de valorizar la inversi6n realizada y de disminuir costos unitarios,
aprovechando
Ias mltiples externalidades generadas en los desarrollos
iniciales.
*
5. Anexos
de ADN recombinante
catalticos
5.7.2. El clonado
de un gen
Clonar un gen significa aislarlo de su wntexto celular natural e introducirlo en el ADN de otro organismo vivo. Este nuevo gen, como parte
integrante de la informacin gen&ica de la chla receptora, se multiplicar
con ella. Y en ciertas condiciones -generalmente esto no ocurre automtiticamente- ese nuevo gen ser tambih expresado por la c&ula receptora,
es decir, traducido en la protena para la cual codifica. De esta manera, la
&ula receptora adquirir una propiedad que antes no posea.
Haca ~610 unus 15 aos ,el donado de un gen pareca ut6pico. Es que
cada clula humana contiene un genoma de un metro de largo, compuesto
de, por lo menos, 1 .ooO.o1K) de genes diferentes que tienen un tamao
menor que un micrn. Los genes abarcan entonces tan ~610 un 10% del
genoma; el 90% restante esti constituido por tramos que no codifican para
ninguna proteina.
Desde hace algunos decenios se sabe tima aislar el ADN, rompiendo
las membranas
celulares mediante aplicacin de tratamientos
fsicoqumicos.
Pero lo que hizo efectivamente posible el donado de genes
fueron dos descubrimientos
esenciales.
A mediados de la dkada pasada se descubrieron unas enzimas capaces
de rewnocer secuencias especficas en al ADN y cortarlo en ese punto;
son las llamadas enzimas de reWicci6n que, en tanto *tijeras biolgicas,
se transformaron en poco tiempo en una de las armas principales de la
ingeniera gen6ttica. Utitizando las enzimas de restriccin es posible -por
ejemplo- cortar un ADN en dos sitios especificos, aislar el fragmenta y
luego unirlo a otro ADN distinto, previamente cortado en un punto, con la
ayuda de otra enzima, la ligasa, que es capaz de unir dos pedazos de
ADN.
El segundo descubrimiento
importante es que eI fenmeno de la resistencia de ciertas bacterias a los antibiticos se debe a la presencia -en
determinadas cepas bacterianas- de pequeas molkutas de ADN circular
cerrado Itamadas pl&midc~,
que se autorreplican en las bacterias. Asi se
lleg a disponer de plkmidos
naturales adaptados para usarlos como
vectores de clonaje, 8s decir, como vehiculos transmkores de Ia informacion (codificada por un gen) desde un organismo dado a una bacteria.
Para ello se forma un nuevo pl&mido que contiene, adems de su ADN
origina{, un ADN de otro origen. Por lo tanto, se dice que este nuevo
pkmido
est& formado por ADN recombinan&.
Este pltrsmido puede ser
introducido
en una bacteria apropiada y, cuando dicha bacteria se
reproduzca, todas las bacterias originadas llevaran el pltismido recombinante formando un don,, Se dce por esto que el gen (o ADN) que ROS
interesaba est clonado.
51.3. Herramientas
y metodologas:
su evolucin
149
en un vedar de expresibn
que
El donado del gen ,-que comprende los cuatro primeros pasos mencionados- fue tradicionalmente
la fas8 ms ardua.
Los genes a ctonar pueden provenir de un banco de ADN genmico
va a
(donde cada fragmento del ADN total -incorporado a un pkmidoparar a una bacteria distinta), pero genera!menta se utiliza ADN copia
(ADNc). Este se obtiene utilizando como molde ARNm -obtenido de un
tipo de c4iula que est& sintetizando activamente la pro&tna buscada. Una
vez logrado eso, es posible (como en el primer caso) introducir este ADNc
en un pthmido y hacer crecer bacterias con el pkmido
recombinante.
Et problema es encontrar -en uno u otro banco- al menos un clon que
contenga e! gen buscado, es decir, que contenga la informac& capaz de
dirigir Ia sntesis de la protena. T6ngase en cuenta que el nmero total de
genes es del orden de 1 .ooQ.ooQ y que lo que se desea es identificar uno
solo. Se ha evaluado que para tener una seguridad (99%) de encontrar un
gen humano determinado en un banco genbmico es necesario examinar
13W.ooO colonias! Un banco de ADNc contiene unas 1 .ooO veces menos
clones que el banco genbmico, pero la deteccin del buen clon tambik
representa un trabajo muy arduo para los investigadores.
Se Comprende que sea necesario disponer d8 un medio eficaz y fiable
para detectar sin ambigedades entre todo ese conjunto eI clon buscado.
Tradicionalmente
se han utilizado varios m&odos, cuyo empleo depende
fundamentalm8nt8
de la informacibn disponible sobre el gen: una sonda
capaz de reconocer e hibridarse con el gen COrreSpondi8nt8, anticuerpos
contra la proteina buscada, deteccin por la actividad de la protena,
etaera.
t-iay que entender que esas pruebas pueden repetirse cientos d8 veces
antas de dar con el buen clon. Es as que el gen del interfer6n pudo ser
clonado por inv8stigadores
de la sociedad Biogen 8n forma de ADN
complementario
luego de un trabajo de dos aos. Para ello fue neoesario
examinar m&s de lO.ooO Clones bacterianos por mhdos
que detectaban
la actividad antiviral del interferbn.
Hasta principios de los aos ochenta, la identificaci6n d8 los genes
clonados se haca nicamente por los m&odos
anteriormente
mencionados.
Pero ahora se Cuenta con una nueva via d8 d8Wci6n
-la
sintesis de. oiigonucle&idos
y el empleo de este material como sonda
(pro&+,
que permite dr&sticas economias en los tiempos nscgsarios para
el chado
de un gen.
Esta estrategia simplificadora ~610 fue posible cuando se pudo disponer
de medios wcndgicos
que permitieron:
1) tener la capacidad
de
secuenciar al menos una parte d8 una proteina; y 2) sintetizar el ADN
correspondiente
(que codifica para esa proteina).
La posibilidad de
sewenciar no 8s un h8cho reciente. Pero esas dos etapas se hacen hoy
con ayuda de m&quinas totalmente automticas. Por un lado, los qumicos
da protenas permitieron la puesta a punto de un microsecuenciadof
capaz de detsrminar la secuencia d8 los aminokidos
de una cantidad
infima de protena Por otro lado, desde hace pocos aos se dispone de
un sintetizador de ADN, es decir, un equipo que hace la sintesis qumica
de cualquier
150
secuencia
oligom&ica
programe.
* se
de nfetfertjn recombnante
en Bogen
151
constitua
2) Ese
insertado
introdujo
32 Recordemos
que el gen no se traduce directamente
8n proteina, sino que
pfh?WrO 8s cxpiado en ARN mensajero que 8s eSpeCifcO y CMIpkmE?ntafio
d8l
gen- y que, recih entoncw, ese ARN se traduce en protelna.
152