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FACULTAD DE QUMICA
ndice
Presentacin
Introduccin
Objetivos generales
16
22
28
33
42
48
57
65
Referencia bibliogrfica
66
Pictogramas:
Evaluacin
Anlisis y
discusin de
resultados
Conclusiones
y sugerencias
Cuestionarios
Actividades
de sntesis
Referencias
bibliogrficas
Presentacin
Introduccin
Objetivos generales:
a. Integrar los conocimientos de la biologa, bioqumica y microbiologa para
comprender la importancia de los microorganismos en todo ser vivo.
b. Conocer y utilizar adecuadamente el equipo y el material usado en Biologa,
Bioqumica y Microbiologa para aplicarlas en diversos procesos biolgicos.
c. Interpretar y discutir los resultados de los experimentos biolgicos para comprender
las variables que intervienen en un proceso.
Reglamento de laboratorio
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Para el acceso al laboratorio el alumno deber tener puesta la bata blanca y limpia.
Se les permitir entrar al laboratorio solo a los alumnos que cuenten con el material
y equipo solicitado en cada prctica.
La tolerancia para ingresar al laboratorio ser diez minutos despus de la hora
referida en los horarios.
Los objetos personales de los alumnos deben ser guardados en los cajones de las
mesas de trabajo
Antes de iniciar la prctica debern limpiar la mesa de trabajo con solucin de benzal
al 5 % y al trmino de la practica realizar el mismo procedimiento.
No est permitido: comer, beber y en general se recomienda tener cuidado personal
en el manejo del material biolgico
Es importante mantener orden, respeto y compaerismo dentro del laboratorio.
El material contaminado debe ser tratado de acuerdo a las normas establecidos en el
manual de higiene y seguridad de la Facultad de Qumica
Todo el material como: algodones, papeles, sellos, etc. Deber ser depositado en los
botes destinados para este uso. Mantener escrupulosamente limpio todas las
reas de trabajo.
Cualquier contingencia que se presente durante la prctica se deber avisar al
profesor inmediatamente.
El material biolgico (cultivo de microorganismos y material contaminado) debe
esterilizarse y ser depositado en el lugar indicado.
Despus de su uso los colorantes deben ser evaporados y los residuos depositarlos
en contenedores especficos.
Es importante mantener los microscopios limpios (limpiar las lentes con papel seda), e
informar al profesor si observa alguna descompostura o desajuste al iniciar, durante o
al finalizar la prctica.
Al concluir las actividades en el laboratorio es importante lavarse las manos con
abundante agua y jabn.
Todo material que se rompa o extravi deber ser recuperado por el grupo.
Prctica No. 1
USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
Objetivo: Identificar las partes fundamentales del microscopio, para que los alumnos
aprendan a manipularlo adecuadamente empleando preparaciones fijas de
microorganismos.
Duracin de la prctica: 3 hr.
Introduccin:
Un microscopio puede definirse como un instrumento ptico formado por una o varias
lentes cuyo propsito es amplificar y resolver la imagen de objetos pequeos. Existen dos
tipos de microscopios:
Simple: Es una sola lente biconvexa con la cual se permite observar multitud de
objetos microscpicos.
Los secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la
preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento
que producen, la abertura numrica y otros datos. El nmero de objetivos vara con
el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos ms frecuentemente
utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X.
El de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para
observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro
entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto
con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1OOX y se distingue
por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.
Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revlver.
Candida albicans
Microscopio de fluorescencia
X 1000
Leptospira spp.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyeccin. Para
variar los aumentos en el microscopio electrnico basta variar la distancia focal de la lente
proyectora.
Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse la imagen
del microscopio electrnico en una pantalla fluorescente, la cual posee una superficie
impregnada con fsforo o sulfuro de zinc. La imagen obtenida en esta pantalla puede
fotografiarse
El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran
daarlo. Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien
cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio.
Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se
puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro,
parafina, etc. Que hayan cado sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe
emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de
laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los
dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta
trabajoso eliminarlas.
11
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con ter y
luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite de cedro que queda
sobre la lente frontal del objetivo de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de
finalizada la observacin. Para ello se puede pasar el papel "limpia lentes" impregnado
con una gota de xilol.
Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y
bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que
tropiece con alguno de los de mayos aumento. Gurdese en lugares secos, para evitar
que la humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias
qumicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.
Material:
Microscopio compuesto de campo claro ordinario.
Aceite de inmersin.
Preparaciones teidas de microorganismos.
Papel para limpieza de lentes.
Lpices de colores
Manejo del microscopio:
Si el material a observar es relativamente grande (100 micras) quizs baste con el objetivo
10X o seco dbil para observarse. En cambio si es ms pequeo se usar el lente objetivo
40X o seco fuerte o el objetivo 100X o de inmersin.
1. Encienda la lmpara del microscopio y cierre el diafragma de iris.
2. Coloque la preparacin sobre la platina centrndolo sobre el orifico de la misma.
3. Empleando el tornillo macromtrico eleve la platina hasta el tope, si el microscopio
no cuenta con este, observe lentamente para evitar que la lente entre en contacto
directo con la preparacin.
4. Usando el objetivo 10X localice al objetivo por ver con el tornillo macromtrico.
Cuando sea parcialmente visible enfoque con el micromtrico.
5. Ajuste la fuente de luz y mueva el tornillo del condensador hasta que el aillo del
diafragma se observe con la mayor nitidez posible.
6. Girando el revlver coloque el objetivo 40X, enfoque ligeramente con el tornillo
micromtrico.
7. Dando un semigiro con el revlver coloque una gota de aceite de inmersin sobre la
preparacin. Enseguida gira el revlver hasta que el objetivo 100X quede en su
lugar.
8. Incremente la iluminacin abriendo el diafragma o elevando el condensador, al
mismo tiempo enfoque con el tornillo micromtrico.
12
Resultados:
13
Anlisis y discusin:
Conclusiones y sugerencias:
14
Cuestionario:
1.
2.
Qu significa las cuatro inscripciones que tiene cada uno de los objetivos?
3.
Actividades de sntesis:
1.
2.
3.
4.
15
Prctica No. 2
OBSERVACIN MICROSCPICA DE CLULA HUMANA, VEGETAL Y MICROBIANA
Clula animal
Clula vegetal
Clula microbiana
Las figuras muestran un ejemplo de la morfologa celular
16
Con relacin a vegetal son tres las caractersticas que marcan una diferencia con respecto
a la animal: la presencia de cloroplastos, de grandes vacuolas y de una pared celular que
protege la membrana. La pared celular de las vegetales es rgida, lo que determina las
formas geomtricas que se encuentran en los tejidos vegetales, como el hexagonal
observado en las clulas de la cubierta de las cebollas.
Para el caso de las clulas microbianas dependiendo del grupo de que se trate esta
conformado para algunos por una red de microfibrilla de N Acetil murmico, N Acetil
glucosalina y un tetrapptido, Qutina, alginatos, Glucanas entre otros y algunos presentan
estructuras especializadas como los flagelos, cilios y fimbrias.
Material
Microscopio
Pipetas
Hisopo de algodn
Abatelenguas
Gotero con cristal violeta
Cuchilla
Portaobjetos y cubreobjetos
Descripcin de la prctica:
Observacin de clulas animales y clulas microbianas
Con un abatelenguas empujar la lengua y con el hisopo de algodn estril se hace un
raspado en un rea determinada de la boca.
Realizar una extensin de la muestra sobre un portaobjetos
Teir con cristal violeta durante un minuto, dejar secar y observar al microscopio con el
objetivo 10X, 40X y 100X
Observacin de clulas vegetales
Con el uso de una cuchilla y unas pinzas, aislar una parte de la epidermis correspondiente
a la zona cncava de la tercera o cuarta escama de la cebolla y colocarla extendida en un
portaobjetos, colocar un cubreobjetos y observar al microscopio ptico con el objetivo 10X
y 40X.
Con el objetivo de menor aumento (10X), se examinar la preparacin entera, observando
que est formada por clulas alargadas que encierran el ncleo.
Cloroplastos
En un portaobjetos colocar una gota de agua estancada, colocar un cubreobjetos. Observa
al microscopio con el objetivo 10X y 40X. Identificar la forma y tamao de los cloroplastos
estos pueden ser variables, pudiendo ser acintados, estrellados, etc.
17
Cromoplastos
Colocar sobre un portaobjetos una pequea porcin de la parte pulposa del tomate, cubrir
con un cubreobjetos. Observa al microscopio con el objetivo 10X y 40X. Identificar las
clulas separadas unas de otras, aprecindose en el citoplasma una serie de grnulos
rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. Tambin se puede ver el ncleo
redondeado, y en las zonas poco alteradas grandes vacuolas incoloras.
Leucoplastos
Se toma una porcin de tubrculo de papa y se raspa con la punta de la lanceta. Se
deposita el raspado sobre un portaobjeto y se aade una gota de agua y otra de lugol. Se
coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio con los objetivos de 10X y 40X.
El reactivo lugol, acta como fijador y le proporciona contraste (agente qumico que
destruye las clulas sin modificar su estructura) y colorea algunos tejidos vegetales
(celulsicos, lignificados y suberificados).
Los grnulos de almidn se tien de color azul-violeta intenso por el yodo. Se pueden
observar las capas de crecimiento excntricas, que presentan los grnulos de almidn
alrededor de un punto central o "hilo".
Evaluacin:
18
Resultados:
Anlisis y discusin:
19
Conclusiones y sugerencias:
Cuestionario:
1.
Cules son las principales diferencias estructurales entre la clula animal, vegetal y
microbiana?
2.
3.
Actividades de sntesis:
20
1.
2.
3.
4.
5.
21
Prctica No. 3
PROPIEDADES DE CARBOHIDRATOS
las grandes plantas y en los rboles, la celulosa, estructura fibrosa construida de glucosa,
cumple la doble funcin de carga y soporte. La celulosa es de origen vegetal
principalmente, sin embargo algunos invertebrados tienen celulosa en sus cubiertas
protectoras. El polisacrido estructural ms abundante en los animales es la quitina.
b)precursores
Los carbohidratos son precursores de ciertos lpidos, protenas y dos factores vitamnicos,
el cido ascrbico (vitamina C) y el inositol.
c) seales de reconocimiento (como la matriz extracelular)
Los carbohidratos intervienen en complejos procesos de reconocimiento celular, en la
aglutinacin, coagulacin y reconocimiento de hormonas.
Materiales:
Agua destilada
Miel
Piloncillo
Azucar de mesa
NaCl
Almidn
Solucin de Yodo
Vaso precipitado de 100mL
Mechero.
Agitadores
1L
200 g
1 pieza
200 g
40 g
100 g
un gotero
5
Descripcin de la prctica:
Solubilidad.
b)
En un vaso de precipitado preparar una solucin con cuatro cucharadas de sal de mesa.
Etiquetar tres vasos de precipitado. Azcar sal, Piloncillo Sal y Almidn sal. Colocar a
cada vaso la solucin salina.
c)
Hidrlisis de polisacridos
24
Resultados:
25
Anlisis y discusin:
Conclusiones y sugerencias:
26
Cuestionario:
Actividades de sntesis:
1.
2.
3.
4.
27
Prctica No. 4
PROPIEDADES DE PROTENAS
Matraces de 150 ml
Huevo crudo
Frascos Gerber
Blanqueador
cido actico
Agitadores
cido ctrico
Lupa
30
Resultados:
Anlisis y discusin:
31
Conclusiones y sugerencias:
Cuestionario:
1.
Cul es la importancia que tienen las protenas y describa los factores que las
alteran?
2.
3.
Actividad de sntesis:
32
1.
2.
3.
4.
33
Prctica No. 5
ESTERILIZACIN Y SANITIZACIN
Calor Seco
Calor Hmedo.
La esterilizacin con calor hmedo (vapor de agua) es mucho ms rpida y eficaz que el
calor seco debido a que las molculas de agua desnaturalizan las protenas de forma
34
irreversible mediante rotura de las uniones H entre los grupos peptdicos a temperaturas
relativamente bajas.
a. Autoclave: horno a presin, consiste en una cmara en la que el aire puede ser
sustituido por vapor de agua sometida a presin. Se opera a 121 C y 1 atm. de
presin durante 20 minutos. De esta forma se consigue destruir todas las formas
vegetativas y esporas. Se utiliza para esterilizar todo material resistente a esa
temperatura y es muy utilizado para la esterilizacin de medios de cultivos
Radiaciones
a. Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por cidos nucleicos
causando daos genticos alterando las bases. Se utiliza en la preparacin de
vacunas, cabinas de seguridad biolgica, lugares de trabajo como mesadas de
laboratorios, etc.
b. Radiaciones ionizantes: actan lesionando cidos nucleicos. Se utiliza sobre todo
en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirrgicos, guantes, jeringas,
etc.
b. Agentes Qumicos.
Los agentes qumicos como el xido de etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan
con gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nucleicos y protenas
alquilando estos radicales esenciales.
a)
xido de etileno.
Formol o formaldehdo.
Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma
gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin hospitalaria y en la industria
farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas altamente
contaminadas que una vez tratadas deben airearse.
Desinfectantes y antispticos.
1. Compuestos inorgnicos.
La actividad de los compuestos derivados de metales pesados (como plata, mercurio,
etc.,) se debe a la formacin de sales que se disocian con dificultad de los grupos
sulfidrilos de las protenas.
Se inactivan en presencia de materia orgnica. El cloro y derivados son agentes oxidantes
muy usados en la potabilizacin del agua en forma de cloro gaseoso en grandes
establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para descartar material biolgico
(sangre, suero, etc.)
La cloramina es un antisptico menos potente que el hipoclorito, de accin ms lenta pero
mejor tolerada en la aplicacin tpica.
2.
Compuestos orgnicos.
a. Alcoholes: Actan desnaturalizando protenas. Su accin es rpida pero se
evaporan con facilidad. El alcohol etlico se utiliza en antisepsia a una
concentracin del 70%, a esta concentracin se reduce ms la tensin superficial
de la clula bacteriana facilitando el proceso de desnaturalizacin.
b. Fenoles: Actan precipitando protenas. El hexaclorofeno y el fenol no se emplean
por su toxicidad. Otros derivados fenlicos son los cresoles, los que unidos a
jabones originan compuestos estables.
c. Clorohexidina: Es un derivado fenlico que acta alterando la permeabilidad de la
membrana celular bacteriana. Tiene inactivacin rpida y es bien tolerado por la
piel. Se emplea mucho en hospitales en el lavado de la superficie cutnea en forma
de solucin (acuosa o alcohlica) o asociada a detergentes no inicos.
d. Detergentes anionicos; Actan desorganizando las membranas citoplasmticas.
Tienen escaso poder bacteriosttico. Se pueden mejorar combinndolos con
desinfectantes u otras sustancias tensoactivas como laurilsulfato.
36
Descripcin de la prctica:
Esterilizacin calor seco
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
20 minutos
40 minutos
60 minutos
Rotule una serie de cuatro tubos de la siguiente forma: 0, 20, 40, y 60 min. con
caldo nutritivo no estril, y otra serie con caldo nutritivo estril.
Adicionar una serie de tubos un volumen de 3.0 ml de caldo nutritivo sin
esterilizar e incubar a 37oC durante 24 48 hrs.
Adicionar a la otra serie de tubos un volumen de 3.0 ml de caldo nutritivo estril e
incubar a 37oC durante 24 48 Hrs.
37
5.
6.
7.
38
4. Seleccione una segunda rea del piso de 4 cm. frote con un algodn que
contenga fenol al 5%.
5. Despus de que la superficie del piso se haya secado, frtela con un hisopo
previamente humedecido con solucin salina.
6. Transfiera el producto del frote a toda la superficie de la caja Petri que marco
con problema de desinfeccin
Evaluacin:
Calor hmedo
Agar nutritivo estril
Calor seco
Tiempo de esterilizacin
Tiempo
0
20
40
60
39
Anlisis y discusin:
40
Desinfeccin
Conclusiones y sugerencias:
Cuestionario:
1)
2)
3)
Actividad de sntesis:
1.
2.
3.
4.
42
Prctica No. 6
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
El grupo de microorganismos
Su complejidad qumica
El estado fsico
La aplicacin
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones ambientales como son: la temperatura, el grado de
humedad y la presin de oxgeno adecuado, as como, un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
Tipos de medios de cultivo
Por su estado:
a. Medios lquidos
43
Por su composicin:
Por su funcin
44
Material:
Matraces Erlenmeyer de 250 ml
Probeta
Pipeta de 10 ml estril
Mechero Fisher
Esptula
Gradilla
Balanza granataria
Autoclave
Tripie metlico
45
Tela de asbesto
46
Resultados:
Anlisis y discusin:
Conclusiones y sugerencias:
47
Cuestionario:
1.
2.
3.
Actividad de sntesis:
Referencias bibliogrficas:
1.
2.
3.
49
Prctica No. 7
TCNICAS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVO PURO
50
51
Morfologa colonial
La morfologa bacteriana macroscpica, se basa en las caractersticas de crecimiento de
las colonias en un medio de cultivo determinado.
a. En medios slidos en placas (con agar)
52
d. En gelatina
53
Material:
Tubos de 16 X 150 con tapn de rosca Mechero Fisher
Bao Mara a 45 C
Cajas Petri
Pipetas de 1 y 10 ml estril
Agar nutritivo
Agar de Salmonella - Shigella
Agar de sal y manitol
Muestras biolgicas:
Tierra
Agua de pozo
Agua de estanque
Tierra
Agua de canal
Agua de lluvia
Agua de estanque
Descripcin de la prctica:
Tomar 10 g o mL de muestra problema y preparar una serie de diluciones de la siguiente
manera: a 90ml de sol., salina estril aadir la muestra y agitar (dilucin 10 -1) de esta
dilucin transferir 1.0ml a otro tubo con 9.0 mL de sol., salina agitar y continuar de esta
manera hasta obtener una dilucin 10-4.
Aislamiento de bacterias.
1. Mtodo de dilucin y vaciado en placa.
a)
De las 2 ltimas diluciones transferir 1mL a una caja petri estril (realizar por
duplicado)
54
d)
Puntiforme
Circular
Irregular
4) Elevacin
Plana
Elevada
Convexa
Pulvinada
Umbonada
Enteros
Filamentoso
Irregular
Resultados:
Colonia 1
( bacterias)
Colonia 2
( bacterias)
Colonia 3
( hongos)
Tamao
Color
Forma
Elevacin
Superficie
Aspecto
Bordes
Luz reflejada
Luz transmitida
Consistencia
56
Anlisis y discusin:
Conclusiones y sugerencias:
Cuestionario:
1.
2.
57
3.
Actividad de sntesis:
1.
2.
3.
58
Prctica No 8
TCNICAS DE COLORACIN DE MICROORGANISMOS
Tinciones diferenciales
Objetivo: Realizar las diferentes tcnicas de coloracin e identificar las estructuras y
morfologas bacterianas y diferenciar microscpicamente las bacterias Gram positivas de
las Gram negativas.
Duracin de la prctica: 6 hr.
Introduccin:
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad
especfica por los materiales celulares. Muchos de ellos son utilizados con frecuencia y
son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los
polisacridos cidos. Ejemplos de los catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y
la safranina. Otros son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con
los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo congo. Otro grupo de ellos son
sustancias liposolubles; los representantes de este grupo se combinan con los materiales
lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o
depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.
Algunos pigmentos teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra
sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo, esta sustancia se le denomina
mordiente un ejemplo es el cido tnco, ste se combina con un constituyente celular y lo
altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.
Preparacin de un frotis
Extensin: Sobre un portaobjeto limpio y seco se coloca una gota del cultivo y
realizar una extensin mediante giros circulares
Secado: dejar secar al aire
Fijacin: Pasar el portaobjetos sobre la flama del mechero
Tincin: Seguir la tcnica
59
Tincin Simple
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien con la
misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
Tincin Diferencial
Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en
funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin
qumica.
Los ejemplos clsicos seran la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen
Tincin Gram.
Las bacterias Gram positivas y negativas tien de forma distinta debido a las diferencias
constitutivas en la estructura de sus paredes celulares, se habla de microorganismos
Gram-positivos cuando aparecen teidos de color azul-violeta y negativos cuando se
visualizan de color rojo-rosado.
Gram positivo
Gram negativo
La pared de la clula bacteriana sirve para dar tamao y forma al organismo as como
prevenir la lisis osmtica. El material que le confiere la rigidez es el peptidoglicano. Las
Gram-positivas es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano y
de cido teicoico (80%-90%). Con relacin a las clulas Gram-negativa su capa es
mucho ms delgada, adems est rodeada por una membrana exterior compuesta de
fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la
clula Gram-negativa es peptidoglicano.
Las paredes de las bacterias Gram-positivas contienen menos aminocidos que la Gramnegativa; el contenido graso es mucho ms elevado en la Gram-negativa que en las
Gram-positivas. Este hecho se ha propuesto como explicacin del mecanismo de la
reaccin al gram.
60
Cocos
61
Divisin a lo largo de
dos planos: Ttradas
Irregularmente Estafilococos
Bacilos
Forma de
vara: Bacilos
Cadenas de bacilos:
Estreptobacilos
Asa de platino
Mechero Fisher
Algodn
Portaobjetos
Bao mara
Cubreobjetos
Lpices de colores
Soluciones:
Tincin de Gram
Cristal violeta
Lugol
Etanol - Acetona
Safranina
62
Descripcin de la prctica:
Tincin simple
1.
2.
3.
4.
Con el cultivo de Bacillus subtilis haga un frote con forme le indique el profesor
Cubra el frote con colorante cristal violeta y dejar actuar un minuto
Lave con agua destilada y dejar secar al aire
Observar al microscopio y registrar sus resultados con ilustraciones
Mtodo de Gram
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Siguiendo las indicaciones del profesor, coloca una gota de agua destilada en el
porta objetos
Toma con el asa de platino los diferentes cultivos y suspenderlos en la gota de
agua extendindolos sobre una superficie de 1.5 a 2.0 cm.
Dejar secar el aire los diferentes frotes
Fijar los frotes al calor, pasando los portaobjetos tres veces sobre la flama del
mechero Fisher, por la cara contraria de aquella en que se encuentra el frote.
Tenga cuidado de no calentar en exceso.
Coloca la preparacin sobre el puente de tincin y cubrir el frote con solucin
colorante de cristal violeta
Dejar actuar el colorante por 1 minuto
Lavar con agua destilada y dejar escurrir los frotes
Cubrir con solucin de lugol y dejar actuar por 1 minuto
Lavar con agua destilada y dejar escurrir bien los frotis
dejarlo con etanol - acetona nicamente 0 segundos
Lavar rpidamente y suavemente con agua destilada y escurrir bien la
preparacin
Cubrir con solucin colorante de safranina y dejar actuar por 1minuto
Lavar rpidamente y suavemente con agua destilada y escurrir bien los frotes
Dejar secar al aire y observar al microscopio
Registrar los resultados obtenidos con ilustraciones
Evaluacin:
63
Resultados:
Tincin simple
Tincin de Gram
Anlisis y discusin
64
Conclusiones y sugerencias:
Cuestionario:
1.
2.
3.
65
Actividad de sntesis:
1.
2.
3.
4.
66
Prctica No. 9
PROYECTO DE INVESTIGACIN
Biocombustibles
Biodegradacin de pesticidas
Biodegradacin de Hidrocarburos
Edulcorantes
Enzimas de origen microbiana
Hormonas
Lixiviacin
_________________________
__________________________
67
Referencias bibliogrficas:
68