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com/doc/8426681/Medios-de-Cultivo

Preparacin de los Medios de Cultivo Deshidratados

Por regla general los ingredientes de los medios de cultivo se disuelven por agitacin y
calentando ligera-mente en agua destilada. Los medios que contienen agente gelificante
se suelen hervir durante 1 minuto para conseguir su disolucin. Aunque en la
mayor parte de los medios hay que calentar, hay que evitar sobrecalentamientos
innecesarios. Algunos medios presentan turbidez inevitable o preci-pitados, por ejemplo la
Base de Caldo Tetrationato. Al distribuir el medio debe hacerse de forma uniforme,
para que el precipitado quede bien repartido. Posteriormente a la disolucin se
procede a la esterilizacin del medio. En algunos casos existen componentes lbiles
que no pueden aadirse en el medio de cultivo deshidratado y que ser necesario
su esterilizacin por separado y una posterior incorporacin de forma asptica para
obtener el medio completo. El pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricacin a
los valores descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la calidad del agua que
se utiliza en su hidratacin, la utilizacin de medios no recientes etc., pueden
modificar este parmetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera
necesario. En algunos casos se puede ajustar el pH despus de la esterilizacin de forma
asptica y utilizan-do soluciones cidas (cido Clorhdrico) o bsicas (Sodio
Hidrxido) estriles. En los medios slidos la medida se hace a 45-50C (el agar todava
no ha gelificado) mientras que en los lquidos se hace a temperatura ambiente. Los medios
cidos (pH<5) pueden presentar malas gelificaciones debido a la posible hidrlisis del
Agar con la temperatura. Son medios que no es aconsejable refundirlos, y si es
imprescindible, es aconsejable aadirles agar. El mtodo ms comnmente utilizado para la

esterilizacin es el Autoclavado. Sin embargo, hay ingre-dientes en algunos medios

que no mantienen sus propiedades si se someten a altas temperaturas. Para ellos
existen diferentes procesos de esterilizacin que estn descritos en el apartado de
preparacin de cada uno de ellos en este manual.
Esterilizacin
En la etiqueta del producto se indican las condiciones de esterilizacin. De todas
formas se describen unas pautas de carcter general.
Autoclavado:
Exposicin durante 15 minutos a121C. Con este tratamiento mueren las
clulas v e g e t a t i v a s y l a s e n d o s p o r a s b a c t e r i a n a s . S i n embargo, los
medios que contienen hidratos de carbono, deben esterilizarse a
temperaturas no superiores a los 116-118C, para prevenir su descomposicin y la posible formacin de compuestos txicos que inhiban
el crecimiento bacteriano.
Filtracin:
Es el medio ms habitual cuando existen productos lbiles. Habitualmente el producto a
esterilizar se filtra a travs de una membrana de acetato de celulosa o nitrocelulosa de un poro
de 0,22 m. Las soluciones de antibiticos, las de carbohidratos, las vitaminas, etc., se
suelen esterilizar por este mtodo y aadir al medio de cultivo ya esterilizado, cuando ste est
a temperatura no superior a los 45-50C.
Tindalizacin:
Exposicin a 100C durante 30 minutos. Con este tratamiento mueren las clulas
vegetativas, pero no las endosporas. Cuando el medio esta fro, se incuba bajo
condiciones de germinacin delas endosporas, y si ello ocurre, se repite el trata-miento

trmico. El aparato utilizado en este tipo de esterilizacin es el Arnold. Existen otros

procesos de esterilizacin pero los que hemos descrito son los ms habitualmente
utilizados.
Precauciones con algunos Ingredientes
Algunos medios contienen productos txicos. Se deben tomar las medidas de seguridad
necesarias al manipular estos productos. Algunos de estos compuestos son la Fucsina
bsica y cida, la Pararrosanilina, la Azida Sdica, el Sodio Selenito, etc.