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Los mtodos actuales para lograr la modificacin dirigida de una regin de un DNA son
muy numerosos y variados.
1.1.
1.2.
Se trata de una herramienta muy potente y verstil para la modificacin puntual del
ADN, que permite la incorporacin de prcticamente cualquier cambio que se desee
sobre una pieza clonada de DNA. El principio de la tcnica consiste en el empleo de un
oligonucletido portador de la modificacin deseada, que resulta elongado al actuar
como cebador para la lectura de una hebra molde por parte de DNA polimerasa; existen
dos versiones de esta estrategia:
-
1.3.
1.4.
no existen todas las cepas supresoras necesarias para lograr la sustitucin del codn
mbar por los 20 aminocidos posibles.
1.5.
1.6.
1.7.
MUTAGENESIS AL AZAR
Una forma rpida de aislar mutantes, eso s, siempre que se pueda disponer de algn
mtodo de seleccin. Una de sus aplicaciones ms atractivas es la construccin de
una coleccin de protenas mutantes que permita la evolucin de sus relaciones
estructura-funcin.
1.8.
Aunque son ya muchas las enzimas en las que se han estudiado los efectos de la
mutagenesis sobre su estructura y funcionalidad, posiblemente es la subtilisina una de
las que con mayor empeo se ha mutagenizado. Las razones de esto hay que
buscarlas en el hecho de que se trata de una enzima de gran inters industrial puesto
que se encuentra como aditivo en muchos detergentes. Las subtilisinas son protenas
homologas de unos 27.500Da producidas por distintos microorganismos que
pertenecen a la familia de las serin-proteasas y presentan una estructura constituida
por un solo dominio.
Se puede decir que s que se trata de una casa paradigmtico para realizar estudios
de mutagensis no solo desde el punto de vista de la investigacin bsica, sino tambin
con fines comerciales. Muchos de los estudios de mutagenesis se han encaminado a
mejorar la estabilidad para su uso en los detergentes desde varios puntos de vista,
como por ejemplo la resistencia a la oxidacin, a la inactivacin trmica y a los lcalis.