OBJETIVOS:

Demostrar el efecto que tiene la temperatura en la accin enzimtica de

la amilasa salival.
Demostrar el efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival.
MARCO TERICO:
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan
reacciones qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: una
enzima hace que una reaccin qumica que es energticamente posible, pero
que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir,
transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas
reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos,
las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi
todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas
tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimticas.
Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos
vivos. Son indispensables en la transduccin de seales y en procesos de
regulacin, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. Tambin son
capaces de producir movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar
ATP para generar la contraccin muscular o el movimiento de vesculas por
medio del citoesqueleto. Otro tipo de ATP asas en la membrana celular son las
bombas de iones implicadas en procesos de transporte activo. Adems, las
enzimas tambin estn implicadas en funciones mucho ms exticas, como la
produccin de luz por la luciferasa en las lucirnagas. Los virus tambin
pueden contener enzimas implicadas en la infeccin celular, como es el caso
de la integrasa del virus HIV y de la transcriptasa inversa, o en la liberacin
viral, como la neuraminidasa del virus de la gripe.
Tipos de enzima:
xido-reductasas: estas enzimas estn vinculadas con las reducciones y
oxidaciones biolgicas que intervienen en los procesos de fermentacin y de

respiracin. Estas son esenciales en ciertas cadenas metablicas como por

ejemplo la escisin enzimtica de la glucosa y en la produccin de ATP.
Transferasas: estas enzimas son las encargadas de catalizar la transferencia
de una porcin de molcula a otra. Adems, estas enzimas son las que actan
sobre distintos sustratos, transfiriendo glucosilo, sulfat, amina, aldehdo, entre
otros grupos.
Hidrolasas: estas enzimas actan sobre las molculas de protoplasma, tales
como las de grasas, de glicgeno y de protenas. El acto de catalizar es
realizado en la escisin de los enlaces de los tomos de nitrgeno y carbono o
bien, de carbono y oxgeno. Al mismo tiempo se adquiere la hidrlisis de las
molculas de agua de la que devienen las molculas de hidrgeno y oxidrilo,
que se unen a las molculas resultantes de la ruptura de enlaces de las
molculas mencionadas. Dentro de estas enzimas se encuentran protenas
como la quimiotripsina, la tripsina y la pepsina que son esenciales en la
digestin ya que son las que hidrolizan enlaces estricos, glucosdicos y
ppticos.
Isomerasas: estas son las que actan sobre ciertas sustancias a las que
transforman en otras ismeras, lo que significa que tienen la misma frmula
emprica pero un desarrollo diferente.
Liasas: estas enzimas son las que actan sobre los enlaces entre los tomos
de carbono, carbono y oxgeno, carbono y azufre o carbono y nitrgeno,
escindindolos.
Factores que afectan la actividad enzimtica

Efectos del pH
La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es
mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye
bruscamente. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza
proteica, al igual que otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad
si el pH vara ms all de unos lmites estrechos. De ah la conocida

importancia biolgica de los sistemas tampn. En la mayor parte de los casos

el pH ptimo est prximo a la neutralidad, en consonancia con el pH
intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo muy diverso segn sea el pH
del medio en el que habitualmente actan.
Efectos de la temperatura
Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de
las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La
variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es diferente de unos
enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de activacin de la
reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras
reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un
brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica.
Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima
cuando se alcanza dicha temperatura. Si representamos grficamente la
variacin de la actividad de los enzimas en funcin de la temperatura da la
impresin de que existe una temperatura "ptima" anloga al pH ptimo
estudiado anteriormente; hay que resaltar que esa aparente temperatura
ptima no es ms que el resultado de dos procesos contrapuestos: 1) el
incremento habitual de la velocidad de reaccin con la temperatura y 2) la
desnaturalizacin trmica del enzima.

CONCLUSIONES
Se demostr los cambios que puede sufrir la actividad enzimtica a
causa de la variacin de pH y los cambios de temperatura.
La temperatura incrementa la cintica de la reaccin enzimtica, es decir
aumenta la velocidad de reaccin pero solo hasta el punto en el cual, por
accin de la misma temperatura, se inactiva la enzima.

BIBLIOGRAFA
Asbun Wady, Ph.D., 1972,
R.D.

Bioqumica experimental. Santo Domingo

 Brito,Franklin y Monz Antonio,1979, Qumica Orgnica. Santo Domingo

R.D.
Casanova, Jos. .2006, Elementos de Qumica Orgnica, Cuaderno de
trabajo. Santo Domingo. ED universitaria _UASD,. Pgs. 40-43.
Celsi, Santiago-Iacobucci, Alberto. Qumica elemental moderna
orgnica. Buenos Aires, Argentina, 1964,. ED Kapelius. Pgs. 235-237.
Diccionario de Medicina Ocano Mosby. St. Louis, Estados Unidos. ED
Grupo Ocano. Pg. 804.
De los Santos, Aminta, 1997, Qumica. Secretaria de Estado De
Educacin R.D.

CUESTIONARIO:
1. Cal es la importancia del Km?
En un estudio de cintica de enzimas se mide la actividad enzimtica en
trminos de producto formado por minuto, a distintas concentraciones de
sustrato. Si la actividad es graficada en trminos de la concentracin inicial del
sustrato versus el producto generado en un lapso de tiempo, la curva generada
es una hiprbole rectangular. La ecuacin que describe todos los puntos en
esa lnea viene dada por v. Esta ecuacin expresa la velocidad para la reaccin
de un solo sustrato catalizada enzimticamente y se conoce como la ecuacin
de Michaelis-Menten.

2. Qu efectos produce las altas temperaturas sobre las enzimas?

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas:
por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las
reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al
ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por
el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama
temperatura ptima (Figura de la derecha). Por encima de esta temperatura, el
aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado
por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la
actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

3. Cmo se clasifican las enzimas?

xido-reductasas: estas enzimas estn vinculadas con las reducciones y
oxidaciones biolgicas que intervienen en los procesos de fermentacin y de
respiracin. Estas son esenciales en ciertas cadenas metablicas como por
ejemplo la escisin enzimtica de la glucosa y en la produccin de ATP.
Transferasas: estas enzimas son las encargadas de catalizar la transferencia
de una porcin de molcula a otra. Adems, estas enzimas son las que actan

sobre distintos sustratos, transfiriendo glucosilo, sulfat, amina, aldehdo, entre

otros grupos.
Hidrolasas: estas enzimas actan sobre las molculas de protoplasma, tales
como las de grasas, de glicgeno y de protenas. El acto de catalizar es
realizado en la escisin de los enlaces de los tomos de nitrgeno y carbono o
bien, de carbono y oxgeno. Al mismo tiempo se adquiere la hidrlisis de las
molculas de agua de la que devienen las molculas de hidrgeno y oxidrilo,
que se unen a las molculas resultantes de la ruptura de enlaces de las
molculas mencionadas. Dentro de estas enzimas se encuentran protenas
como la quimiotripsina, la tripsina y la pepsina que son esenciales en la
digestin ya que son las que hidrolizan enlaces estricos, glucosdicos y
ppticos.
Isomerasas: estas son las que actan sobre ciertas sustancias a las que
transforman en otras ismeras, lo que significa que tienen la misma frmula
emprica pero un desarrollo diferente.
Liasas: estas enzimas son las que actan sobre los enlaces entre los tomos
de carbono, carbono y oxgeno, carbono y azufre o carbono y nitrgeno,
escindindolos.

4. A que se le llama zimgenos e isoenzimas?

Un zimgeno o proenzima es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no
cataliza ninguna reaccin como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de
un cambio bioqumico en su estructura que le lleve a conformar un centro
activo donde pueda realizar la catlisis. En ese momento, el zimgeno pasa a
ser una enzima activa. El cambio bioqumico suele ocurrir en un lisosoma,
donde una parte especfica de la enzima precursora se escinde del resto para
activarla. La cadena de aminocidos que se libera por la activacin se llama
pptido de activacin. Las modificaciones que sufren los zimgenos son
irreversibles, por lo que para poder detener las reacciones que llevan a cabo es
necesario un inhibidor de la enzima a la que dan lugar.

Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de

aminocidos, pero que catalizan la misma reaccin qumica. Estas enzimas
suelen mostrar diferentes parmetros cinticos, o propiedades de regulacin
diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo
para satisfacer las necesidades particulares de un determinado tejido o etapa
del desarrollo. En bioqumica, las isoenzimas son isoformas de las enzimas. En
muchos casos, son codificadas por genes homlogos que han divergido con el
tiempo. Aunque de forma estricta, las aloenzimas representan enzimas de
diferentes alelos de un mismo gen y las isoenzimas representan enzimas de
diferentes genes cuyos productos catalizan la misma reaccin, los dos trminos
se suelen usar indistintamente.
5. Que son cofactores y menciones ejemplos
Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa
molecular, necesario para la accin de una enzima. El cofactor se une a una
estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-cofactor
recibe el nombre de holoenzima.
Aquellos cofactores que estn covalentemente unidos a la apoenzima son
denominados grupos prostticos, ya sean orgnicos o inorgnicos.
Los cofactores son bsicamente de dos tipos, iones metlicos y molculas
orgnicas, denominadas coenzimas.
Ejemplos:

Tiamina pirofosfato.
Biocitina
Coenzima A
Cobre
Magnesio
Manganeso

EXPERIMENTO A
EFECTO

DE

LA

CONCENTRACIN

DE

LA

ENZIMA,

DE

LA

TEMPERATURA Y DEL ION CLORO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA

AMILASA SALIVAL
1. Preparar los siguientes tubos:
Tubos No.

II

III

IV

VI

VII-C

Solucin almidn 1%

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

Buffer phosphate pH 6.6

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

Solucin salina (NaCl 1%)

2.8 ml

2.6 ml

2.4 ml

2.2 ml ---

Agua destilada

---

---

---

---

2.2 ml 2.2 ml

2.2 ml ---

---

1)Colocar los tubos I al V en un bao de agua a 37C, durante 5 minutos. El tubo

VI servir de comparacin para ver el efecto de la temperatura sobre la accin
enzimtica por lo que se deja a temperatura ambiente.

2)Agregar la solucin de enzima:

Tubos No.

II

III

IV

VI

VII-C

Solucin amilasa

0.4 ml

0.8 ml

1.2 ml

1.6

1.6

1.6

ml

ml

ml

---

3) Colocar nuevamente los tubos I al V en bao de agua a 37C durante 20

minutos, el tubo VI se mantiene a temperatura ambiente.
4) Luego hacer el control final de la reaccin con el reactivo de yodo, de la
siguiente manera:
Tubos No.

II

III

IV

VI

VII-C

HCl 0.05 N

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5

0.5

0.5

0.5 ml

ml

ml

ml

0.5

0.5

0.5

ml

ml

ml

de los tubos de reaccin 0.5 ml

correspondientes agregar
Solucin yodada

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

5) Mezclar y dejar en reposo por 10 minutos.

6) Leer las absorbancia al espectrofotmetro a 650 nm.
7) La diferencia de las absorbancia entre los tubos nos indicar la actividad
enzimtica para cada tubo.
8) Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimtica en el eje Y vs
concentracin de la enzima [E] en el eje X.