PRACTICA N2

COLORACIONES

1. FUNDAMENTO:

La coloracin es un proceso mediante el cual se tie una bacteria o partes de

ella.

COLORANTE: Compuesto qumico formado por 2 grupos estructurales.

CROMOFORO: Propiedad de color

AUXOCROMO: Capacidad de disociacin y lo hace incoloro.
Ambos grupos estn unidos aun anillo bencnico.

a) COLORANTES NATURALES: De plantas y animales. Ej.: carmn

(cochinilla).
b) COLORANTES ARTIFICIALES: Son cancergenos.

COLORANTES ACIDOS: Tienen afinidad por la porcin bsica de la

clula. Por ejemplo: eosina, fucsina, saprafina, etc. Tie al
citoplasma.

COLORANTES BASICOS: Tienen afinidad por la porcin acida de la

clula. Por ejemplo: azul de metileno, cristal violeta, violeta de
genciana, hematoxilina, etc. Tie al ncleo (ADN).

COLORANTES NEUTROS: Combina la propiedad de cido y

bsico. Por ejemplo: Eosinato de azul de metileno.

COLORANTES INDIFERENTES: No se disuelve en el agua pero si

lo hace en el alcohol. Por ejemplo: sudan III, negro de sudan B, etc.
PASOS PARA REALIZAR UNA COLORACION:

Extensin de la muestra.
Fijacin.
Tincin.
LSO (lavar, secar y observar).

1. Lavar y secar perfectamente los portaobjetos.

2. Someter la lmina a la llama del mechero hasta que se seque la muestra
y se pegue a la lmina.
3. Coloracin segn tcnica.
4. Lavar con chorro de agua corriente, se seca al ambiente y observar la
inmersin. Para observar la inmersin tienes que aumentar una gota de
aceite inmersin y usar el objetivo de 100x y estos dos deben hacer
contacto.

A) COLORACION SIMPLE:

1. FUNDAMENTO:
Se basa en el empleo de un solo colorante que reacciona con la clula
bacteriana y nos permite ver la morfologa de las bacterias. Esta
coloracin no tiene intereses clnicos solamente didcticos.
2. OBJETIVO:
Observar la morfologa bacteriana.
Aprender las tcnicas de preparacin del frotis, de fijacin y coloracin
ms utilizadas.

3. MATERIALES:

Laminas portaobjeto.
Cultivo bacteriano.
Asa de Kolle.
Azul de metileno.
Agua destilada.
Mechero.
Microscopio.

4. PROCEDIMIENTO:
1. Proceder a la extensin y fijacin de la muestra en estudio.
2. Agregar gotas de azul de metileno por espacio de 2 minutos.
3. Lavar a chorro de agua corriente, secar al ambiente y
observar la inmersin.
4. No se usa lamina portaobjeto se usa aceite de inmersin.

B) COLORACION DE GRAM:

1. FUNDAMENTO:

La diferencia qumica y estructural de la pared celular de las bacterias

nos permite distinguir 2 grandes grupos de bacterias en la naturaleza.
Las bacterias que aceptan el colorante cristal violeta y quedan teidos
de color azul violeta se denominaran Gram (+) mientras que las
bacterias tienen afinidad por la safranina y quedan teidos de color rojo
se denominaran Gram (-).

2. OBJETIVO:
1. Diferenciar las bacterias Gram positivas (+) de las Gram negativas (-).
2. Diferenciar si un cultivo es puro o mixto.
3. Determinar la reaccin Gram positivas (+) y Gram negativas (-) de
bacterias.
3. MATERIALES:

Lamina portaobjeto.
Asa de Kolle.
Colorante (Cristal violeta,
safranina).

Reactivos (Lugol, alcohol

acetona).
Cultivos bacterianos.
Portalaminas.
Mechero.
Microscopio.


4. PROCEDIMIENTO:

1. Proceder a la extensin y fijacin de la muestra en estudio.

2. Agregar cristal violeta por espacio de un minuto. Lavar con agua
corriente.
3. Agregar lugol por espacio de un minuto. Lavar con agua corriente.
4. Decolorar con alcohol acetona, hasta que nos desprenda colorante,
lavar con agua corriente.
5. Agregar safranina por espacio de 30 segundos, hasta que actue como
colorante de contraste.
6. Lavar con chorro de agua corriente, se seca al ambiente y se observa la
inmersin.

RESULTADOS

MICROORGAN
ISMO

MORFOL
OGA

Bacilo.

GRAM

GRFICO

Escherichia
coli

Negati
vo.


Salmonella
typhi

Bacilo.

Negati
vo.

Coccus
agrupad
os en
racimos.

Positiv
o.

MORFOL
OGA

Cocos
esfricos
.

Positiv
a.

Staphylococ
cus aureus

MICROORGAN
ISMO

Streptococcus
pyogenes

GRAM

GRFICO

Bacillus
cereus

Bacilo.

Positiv
o.

Bacilo.

Negati
vo.

Pseudomona
aeruginosa

MICROORGAN
ISMO

MORFOL
OGA

GRAM

GRFICO

Neisseria
gonorrhoeae

Diplococ
o.

Negati
vo.

Gardnerella
vaginalis

Bacilo.

Negati
vo.