UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA

PROYECTO DE INVESTIGACIN

EFECTO ANTIBACTERIANO INVITRO DEL EXTRACTO DE

PROPLEO FRENTE A CEPAS DE ESCHERICHIA COLI Y
STAPHYLOCCUS AUREUS.
AUTORA:

FLORES ROJAS KARLA EVELYN

ASESOR:
DR. MARCO ZRAARCE

TRUJILLO-PERU
2013

PROYECTO DE INVESTIGACIN
I.

DATOS GENERALES
1) GENERALIDADES:
I.1Ttulo
EFECTO ANTIBACTERIANO INVITRO DEL EXTRACTO DE
PROPLEO

FRENTE

CEPAS

DE

E.

COLI

STAPHYLOCCUS AUREUS.
I.2PERSONAL INVESTIGADOR:
1.2.1 Autores:
0218003-09 FLORES ROJAS KARLA EVELYN
1.2.2 Asesor: Dr. Marco Zrate Arce
2) Tipo de Investigacin :
a. Tipo de investigacin
i. Por el fin que persigue: APLICADA

ii. De

acuerdo

al

diseo

de

contrastacin:

EXPERIMENTAL
3) Localidad e Institucin donde se desarrollar el proyecto:
Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.
4) Departamento al que pertenece el proyecto: Departamento
de Ciencias Bsicas
5) Duracin del Proyecto: 4 meses
6) Fecha probable de inicio y trmino:
6.1
6.2

Inicio: 11 de agosto
Trmino: 29 de noviembre

7) Etapas de la Realizacin del Proyecto:

Etapas

Fecha

de Fecha

de Dedicacin

Inicio
Elaboraci
n

11

Trmino

hs/semana

de 8 de setiembre

10 horas

de 31 de octubre

15 horas

del agosto

Proyecto
Recolecci
n

y setiembre

organizaci
n

de

Datos
Anlisis de 1

de 14

Resultado

noviembre

s
Preparaci

15

de 15 horas

noviembre

de

del noviembre

29

noviembre

Informe

8) Recursos disponibles:
8.1

Recursos humanos:

a.

Personal investigador

b.

8.2

de 12 horas

Autores del proyecto.

Personal auxiliar

Asesor del proyecto

Estadstico.

Tcnicos del laboratorio

Material y Equipos:
Instrumentos :
- Placas de Petri
-Tubos de ensayo (13 x 100)

-Asa bacteriolgica
- Mechero
Materiales:
- Cepario del laboratorio de Microbiologa
-Agar ATS (Cuenta colonias)
-Caldo peptonado
-Extracto de propleo
-1 L de agua destilada
-1 L de alcohol
-Algodn
8.3

PRESUPUESTO
DESCRIPCIN

CANTIDAD

COSTO

BIENES
Material de trabajo
-Propleo

25.00

-Agar cuenta

300 ml

colonias(ATS)

1L
1L

75.00
4.00

-Agua destilada

4.00

-Alcohol

2.00

-Algodn
SUB TOTAL

110.00

Material de Impresin
-Impresin

10.00

SUB TOTAL

10.00

Pasajes y Gastos de

10.00

transporte

Sub total

10.00

TOTAL

130.00

*Algunos materiales no se consideraron dentro del presupuesto,

ya que sern brindados en el laboratorio de Microbiologa
9.Financiamiento:
9.1. Autofinanciamiento
Se desarrollar el proyecto en la Seccin de Microbiologa
Mdica de la Facultad de Medicina de la Universidad
Nacional de Trujillo con la financiacin del autor del
proyecto.

9.2. Financiamiento de la Universidad U.N.T

Instrumentos, materiales y equipos brindados por el
Departamento de Ciencias mdicas bsicas Seccin de
Microbiologa.

II.

PLAN DE INVESTIGACIN
1.1. INTRODUCCION
Gran parte de las civilizaciones antiguas, como la Inca, China,
Tibetana, Egipcia y Grecoromana empleaban los productos de abejas
en sus terapias milenarias, como recursos medicinales valiosos en la
cura o prevencin de enfermedades. Historias de estas civilizaciones
contienen innumerables menciones a estos productos, destacndose
el propleo, utilizado por su actividad antimicrobiana reconocida

como antisptico bucal y cicatrizante 1. En los ltimos aos se han

realizado

innumerables

investigaciones

acerca

de

productos

provenientes de las abejas y sus potenciales beneficios para la salud

humana, uno de estos productos es el propleo, con utilidad en
biologa y medicina 2.
Este es un producto usado por las abejas como cemento para tapar
las grietas en el interior de la colmena, para barnizar sus paredes y
dar mayor soporte a la estructura de los panales, as como tambin
para embalsamar enemigos naturales y cadveres cuando ocurre un
brote de enfermedades infecto contagiosas en la colonia. Diversos
autores han reportado la presencia en el propleo de compuestos
flavonoides, steres del cido cafico y cidos diterpnicos los cuales
son responsables de las propiedades bacteriostticas, bactericidas 3.
Originado de sustancias resinosas, gomosas y balsmicas, colectadas
por abejas melferas, de brotes y exudaciones de corteza, hojas y
otras partes de las plantas, a las cuales las abejas agregan
secreciones salivales y cera para la elaboracin final del propleo;
Centros de referencia internacional mediante sofistificados mtodos
analticos,

develaron

la

compleja

composicin

del

propleos,

describindose ms de 100 componentes que actan en sinergismo.

Los ms importantes son polifenoles, entre los que se destacan los
flavonoides 4. Sin embargo se compone tambin de un 50-55% de
resinas y blsamos, 30- 40% de cera de abeja, 5-10% de aceites
esenciales o voltiles, 5% de polen y 5% de materiales diversos
(orgnicos y minerales) 5. Esta composicin vara con las diferentes
regiones geogrficas y climticas; pero, sobre todo, segn las fuentes
vegetales.
Presenta

capacidad

antimicrobiana,

antiviral,

antiparasitaria,

antioxidante, entre otras 6.

En su actividad antomicrobiana es activo frente a Bacillus larvae, B.
subtilis, B. de Koch, Staphylococcous aureus, Streptomyces sobrinus,
S. mutans, S. cricetus, Saccharomyces cerevisiae, Escherichia coli,
Salmonella, Shigella, Giardia lambia, Bacteroides nodosos, Klebsiella

pneumoniae, incluso alguno (Streptococcus piogenes) resistente a los

antibiticos6
Una de las primeras propiedades antibacterianas constatadas,
mltiples estudios bacteriolgicos in vivo e in vitro confirmaron su
accin bacteriosttica y bactericida. Entre los investigadores pioneros
se destacan Kivalkina y Villanueva en Europa y Rojas en Cuba7.
En la Conferencia Internacional sobre: "Bee Products" realizada en TelAviv en 1996, Tsuguo Yamamoto present una sntesis sobre estudios
realizados del propleos en Japn. Refirindose a la capacidad
antibacteriana hizo referencia al trabajo de Nakano y col del
Hayashibara

Biochemical

Laboratories.

Demostraron

la

accin

antibacteriana de propleos de origen brasileo ante el Stafilococco

Aureus

Meticilino

Resistente

(SARM),

estableciendo

que

el

componente responsable es un derivado del cido cinmico, que

posee una potencia entre 100 y 400 veces superior a los dems
compuestos e incluso al propleos total 8.
Staphyococcus aureus ha sido reconocido a lo largo del tiempo como
uno de los patgenos humanos de mayor trascendencia clnica 9. Es
uno de los patgenos ms importantes que causa desde infecciones
superficiales de la piel hasta severas infecciones asociadas con una
alta mortalidad. Aproximadamente 60% de todas las infecciones
causadas por S. aureus en pacientes admitidos a unidades de
cuidados intensivos (UCI) son causadas por SARM 10.
En la actualidad segn datos del National Nosocomial Infection
Surveillance System (NNISS) de los Center of Disease Control 11,
constituye el principal microorganismo responsable de infecciones
nosocomiales en las Unidades de Cuidados Intensivos (UCIs), como la
bacteriemia primaria, neumona asociada a ventilacin mecnica o
infeccin de herida quirrgica. En la comunidad este patgeno
ocasiona un nmero importante de infecciones de gravedad variable,
con mayor frecuencia de la piel y de las partes blandas, aunque
tambin es responsable de infecciones de mayor gravedad, por
ejemplo osteoarticulares y endovasculares 12.

De gran trascendencia clnica ha sido el incremento observado en el

nmero de infecciones producidas por este microorganismo, tanto en
el hospital como en la comunidad, en las ltimas dcadas. En el
mbito hospitalario, este aumento ha discurrido paralelo a dos
factores: por un lado, al incremento en el uso de dispositivos
invasivos en la asistencia mdica de los pacientes, especialmente
catteres vasculares; por otro, la emergencia y posterior diseminacin
en los hospitales de cepas de SARM 13.
Las infecciones

producidas por S. aureus, tanto en la comunidad

como en los hospitales, comportan un importante coste econmico14.

Alrededor del 0.8% de los diagnsticos de alta en hospitales
estadounidenses durante el perodo 2000-2001, correspondieron a
infecciones por S. aureus. Se ha calculado que estas infecciones
prolongan entre dos y tres veces la estancia hospitalaria y multiplican
por cinco el riesgo de morir en el hospital, cuando se comparan con
pacientes ingresados con infecciones producidas por SARM (21%) fue
muy superior a la observada en infecciones producidas por S. aureus
sensible (8%)14.

La peor situacin clnica de los pacientes con

infecciones producidas por

SARM, ms que la resistencia a la

meticilina,

condicion

probablemente

tambin

un

peor

pronstico12.
Como vemos la infeccin por SAMR representa, adems de su
repercusin en la morbimortalidad de los pacientes, un impacto
importante para los hospitales. El espectro de antimicrobianos tiles
est prcticamente reducido a vancomicina, antibitico de alto costo
y cuya efectividad depende de resistencia desde otras bacterias ya
resistentes y que pueden transferrselos 15.
E.coli es el miembro ms frecuente e importante del gnero
Escherichia16 y aunque se le considera un microorganismo de flora
normal, posee tambin cepas que pueden ser patgenas y causar
dao produciendo diferentes cuadros clnicos, entre ellos diarrea 17 y
cuadros extraintestinales diversos 18.

E coli causa adems, dentro de los cuadros extraintestinales, ITU

caracterizado por contaminacin de la uretra

y vejiga y en ciertas

ocasiones del rin, esta causa de infeccin se debe principalmente a

la produccin de adhesinas y hemolisina HlyA; meningitis neonatal a
consecuencia del antgeno capsular K1; septicemia que proviene de
infecciones del aparato urinario o digestivo, esta sepsis es mortal en
pacientes cuya inmunidad est alterada19.
Actualmente
presentan

las cepas causantes de infecciones intestinales

elevados

porcentajes

de

resistencia

antibiticos

comnmente usados como ampicilina (85%), cotrimoxazol (79%),

tetraciclina (65%) y cido nalidxico (28%) 20.
1.2. ANTECENDENTES
La propiedad antibacteriana fue una de las primeras propiedades
constatadas, mltiples estudios bacteriolgicos in vivo e in vitro
confirmaron su accin bacteriosttica y bactericida.
Entre los investigadores pioneros se destacan Kivalkina y
Villanueva en Europa y Rojas en Cuba

6.7

Los principales

responsables de esta propiedad son los flavonoides galangina y

pinocembrina y derivados de los cidos benzoico, ferlico y
cafeico. El efecto antibacteriano se observa principalmente sobre
los grmenes gram positivos estafilococo dorado y estreptococo
beta hemoltico, pero numerosas bacterias gran negativas
tambin son sensibles entre las que se encuentran algunas cepas
de Piocinico y Proteus. En la clnica observamos que los
pacientes

que

presentan

heridas

sobreinfectadas,

tratados

localmente con propleos y un ATB sistmico, presentan mejor

evolucin que aquellos casos que solo se emplea cura plana y
ATB.
En la Conferencia Internacional sobre: "Bee Products" realizada
en Tel-Aviv en 1996, Tsuguo Yamamoto present una sntesis
sobre estudios realizados del propleos en Japn. Refirindose a

la capacidad antibacteriana hizo referencia al trabajo de Nakano

y col del Hayashibara Biochemical Laboratories. Demostraron la
accin antibacteriana de propleos de origen brasileo ante el
Stafilococco Aureus Meticilino resistente, estableciendo que el
componente responsable es un derivado del cido cinmico, que
poses una potencia entre 100 y 400 veces superior a los dems
compuestos e incluso al propleos total

Esta informacin es significativa y alienta que se debe avanzar

en

estudios

determinar

que
para

permitan
que

establecer

resulten

ms

perfiles
tiles

qumicos

los

propleos

caracterizados.
Itoh y col. del Instituto de Investigacin Zenyaku Kogyo Co

evalu la capacidad
antimiocrobiana de diferentes propleos ante el Helicobacter
pylori. Existe un cmulo de evidencia que atribuye a esta
bacteria la gnesis de la gastritis, lcera gastroduodenal e
incluso el cncer gstrico. Una muestra de origen Argentino
demostr poseer la mayor capacidad ante esta bacteria, siendo
el principal responsable los flavonoides: pinocembrina en primer
lugar y luego la galangina y la crisina. Esto tiene una enorme
trascendencia teraputica para encarar la erradicacin de este
germen en pacientes con patologa gstrica. Los tratamientos
actuales consisten en la utilizacin de uno o ms ATB, costosos,
de eficacia dudosa y no exenta de efectos secundarios. A nuestro
criterio este es un "nicho" valioso para ser ocupado por el
propleos. Considero que otras propiedades del propleos
contribuiran para coadyuvar en el tratamiento de patologas
inflamatorias

gstricas,

ellas

seran:

la

antiinflamatoria,

cicatrizante, antioxidante e incluso la antiespasmdica

Durante la dcada del 70 y del 80 se estableci sensibilidad
bacteriana y se determin la diferente potencia antibacteriana de
los propleos considerando su origen. Centros de referencia
mundial en los 90 comenzaron a investigar, utilizando mtodos

altamente sofistificados, comenzndose a conocer el mecanismo

por el cual este producto natural ejerce su accin. Un estudio
realizado en el Departamento de Bioqumica de la Universidad de
Oxford, publicado en Microbiologie Research

informa que el

cido cinmico y algunos flavonoides desactivan la energa de la

membrana citoplasmtica, inhibiendo la motilidad bacteriana,
hacindola ms vulnerable al ataque del sistema inmunolgico y
potenciando los ATB. Previamente se determin que el propleo
desorganiza el citoplasma, la membrana citoplasmtica y la
pared celular causando bacterilisis parcial e inhibiendo la
sntesis proteica

10

La mayor informacin que se tiene sobre este producto natural

proviene del extranjero. Pero en el Per no se ha realizado un
trabajo que d cuenta sobre las propiedades del propleos que
existe en las diferentes zonas de este pas. El presente trabajo se
centra en la actividad bacteriana del propleos

extrado y

procesado en el distrito de Charat de la provincia de Otuzco.

1.3. JUSTIFICACION
El presente trabajo parte de la importancia de las propiedades
antimicrobianas del propleo. Estas son valiosas para frenar la
patogenicidad de E. coli y S. aureus; el primero causante de las
principales complicaciones digestivas, y el otro, de las de tipo
pulmonar.
1.4. PROBLEMA
El extracto hidroalcohlico de propleos presenta actividad
inhibitoria bacteriana frente a las cepas de Escherichia coli y
Staphylococcus aureus?
1.5. OBJETIVOS:
1.5.1.

Objetivo General:
Dar a conocer la propiedad antibacteriana del extracto
hidroalcohlico de propleo.

1.5.2.

Objetivos Especficos:

Determinar

la

concentracin

concentracin
mnima

mnima

antibacteriana

inhibitoria
del

la

extracto

hidroalcohlico de propleo
Conocer
el
efecto
antibacteriano

hidroalcohlico de propleos sobre cepas de E. coli

Conocer el efecto antibacteriano del extracto hidroalcohlico

del

extracto

sobre cepas de S. aureus.

2. MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS O MTODOS
2.1 Poblacin objetivo

2.1.1. Unidad de Anlisis

La unidad de anlisis est constituida por las cepas de

Escherichia coli y Staphyloccus aureus .

2.1.2. Tamao de la muestra
Para determinar el tamao de la muestra se emple la siguiente
frmula:

Z
2

= 1,96, para

Z
P
2
( 1P2)
2

( +Z ) X 2 PQ
2

= 0,05

= 0,84 para = 0,20

PQ = 0,6 ( P P ), valor asumido por no contar con
(2, 8)
x 2x comparacin
0,36= 5,6= 6 de variables
estudios n=
previos
y2 por
gl+3
13
independientes.
nf= n ( gl+1 ) = 6 ( 11 )= 7,09= 7
1

Por tanto, el nmero de repeticiones ser 7 para 10 diferentes

concentraciones de propoleo as tenemos un total de 70 muestras

para las cepas de Echerichia colia y 70 muestras para las cepas

de Staphylococus aureus.
2.1.3. Variables y escalas de medicin

VARIABLE

CLASIFICACIN

ESCALA DE
MEDICIN

Independiente

Tratamiento

Cualitativa

Nominal

Dependiente

Crecimiento en la placa

Cualitativa

Nominal

A. Variable Independiente
a) Definicin conceptual
Conjunto de medios (extracto alcohlico de propleo a
diferentes concentraciones) cuya finalidad es la inhibicin de
la formacin de Escherichia coli y Staphylococus aureus.
a) Definicin Operacional
An por desarrollar.
B. Variable Dependiente
a) Definicin conceptual
Crecimiento en una placa inoculada homogneamente por
accin de discos antibiticos de concentracin conocida, la
difusin de este hacia el medio va a originar la inhibicin del
crecimiento. Permite comprobar la efectividad del antibitico.
b) Definicin Operacional
An por desarrollar.

2.1.4 Proceso de captacin de informacin

Resiembra de E.coli y S.aureus:
Se tom una asada de cultivo de Sthaphylococcusaureus y
Escherichiacoli y se sembr por estra en Agar Tripticasa Soya
(TSA), luego se incub a 37 C por 24 horas, tiempo necesario
para obtener cepas jvenes.
Obtencin del inculo:
Se prepar dos suspensiones de Staphylococcusaureus y
Escherichiacoli, cuya concentracin corresponda al tubo N 1 de
la escala de Mc Farland (equivalente a 3x 108 clulas/mL)
Obtencion Del Extracto Etanolico De Propleo
El propleo en estado bruto (como se obtiene de las colmenas),
se enfro hasta 0C, luego se pesaron 20 gramos (Ver Anexo 1), y
se transfirieron a un matraz baln de 250 mL y se le aadieron
200 mL de etanol al 80%, se someti a reflujo en equipo Soxhlet
durante una hora, al cabo de este tiempo se detuvo y se filtr a
travs de papel filtro Whatman N 40; se separ el filtrado y el
slido residual se someti nuevamente a reflujo con 200 mL de
solvente correspondiente, el nuevo filtrado obtenido se reuni con
el anterior, siendo ste el extracto total final.
Los extractos totales finales se transfirieron al matraz de un
rotavapor tipo Bchi y se mantuvo en evaporacin hasta la

desaparicin del solvente. El slido que se obtuvo se someti a

secado en estufa a 70C durante 2 horas, para obtener el
denominado extracto blando total.
Determinacin Del Efecto Bactericida:
Se determinar la concentracin mnima bactericida con el
mtodo de dilucin en caldo.
Se preparar una serie de 11 tubos (Ver Anexo 2), al primero se le
agreg 2 mL de caldo nutritivo con extracto de levadura a doble
concentracin y a los restantes la misma cantidad de caldo a
simple concentracin. Al primer tubo se le adicionar 2 mL de
extracto etanlico de propleo al 8% (80 mg/mL), de este se
tomar una alcuota de 2mL que se aadir al siguiente tubo y as
se proceder con los tubos restantes hasta desechar los ltimos 2
mL, de esta forma se obtendrn las diluciones de 40 a 0,04 mg/ml
A cada tubo se agregar una asada del inculo bacteriano. Los
tubos sern incubados a 37 por 24 horas. Posteriormente se
tomar una asada de cada tubo y se sembrar en Agar Tripticasa
Soya (TSA), las placas se incubarn tambin por 24 horas a 37;
los aislados sern considerados sensibles al extracto de propleo
cuando no haya crecimiento en las placas despus de 24 horas
de incubacin, cada ensayo ser sometido a 7 repeticiones. De
las placas donde no se observar crecimiento tanto de SARM y
Escherichia coli se escogern las de menor concentracin, estas

correspondern a la concentracin mnima bactericida del

extracto etanlico de propleo sobre la bacteria evaluada.
3. ASPECTOS TICOS
El estudio ser realizado teniendo en cuenta los principios de
investigacin con seres humanos de la Declaracin de Helsinski II, ya que
este estudio es experimental pero no se atentar con ninguno de los
principios. Sin embargo, se requerir del consentimiento informado de los
pacientes y se resguardara la confidencialidad de la informacin obtenida.
En la realizacin del estudio de investigacin se respetar:

Confidencialidad:

los

datos

obtenidos

sern

totalmente

confidenciales, conocidos slo por los investigadoras y utilizados

slo para fines de la investigacin.

Privacidad: Se tendr en cuenta el anonimato de los pacientes.

Beneficencia: porque la investigacin beneficiar a la poblacin

en estudio, los cuales tienen necesidad de ello; y el beneficio
ser mayor que los riesgos y costos para las mismas.

No maleficencia: la investigacin no constituye fuente de daos

o riesgos para la poblacin en estudio.

Autonoma: es la poblacin en estudio quien decide participar

en la investigacin; no se obliga ni se impone.

BIBLIOGRAFA
1 Sociedad Cooperativa Apcola de Espaa. Propleos. Copyright .
2005
2 FAO. 2003. Calidad del propleo. En lnea. Consultado el 20 de
agosto

del

2011.Disponible

en:

http://faolex.fao.org/docs/pdf/els49789.pdf
3 Rodolfo Lesser Preuss. Manejo y Crianza y Prctica de las Abejas.
Editorial Andrs Bello.
4 Apiterapia con Propleo. Composicin del propleo.Consultado el
20 de agosto del 2011.Disponible en: http://www.propoleo.cl/
5 Jos Corts Rubira. Evaluacin Del Efecto de Extractos Etanlicos
de Prpolis.Ingeneria Tcnica Agrcola. 2008

6 Lavie P. Caractersticas del propleos. In: Propleos. Bucarest:

Apimondia
Press; 1975. p: 35-42.
7 Rojas N y col. Accin antibacteriana de un preparado a base de
propleos. In:
Ass M. editors. Investigaciones Cubanas sobre el propleos.
Proceedings of 1 simposio sobre los efectos del propleos en la
salud humana y animal. Varadero, Cuba; 1988:78-82.
8 Yamamoto T. Present state of basic studies on propolis in Japan.
Proceedings
of the International Conference on: Bee Products: properties,
applications and
Apitherapy; 1996 May 26-30; Tel- Aviv, Israel.
9 Mirzoeva OK. Grishanin RN, Calder PC. Antimicrobial action of
propolis and
some of its components: the effects on growth, membrane
potential and
motility of bacteria. Microbiol. Res 1997; 152(3):239-46
10 Takaisi-Kikuni NB. Schilcher H. Electron microscopic

and

microcalorimetric investigations of the possible mechanism of

the antibacterial action of a defined
propolis provenance. Planta Medica. 1994;60(3):222-7.
11 Cmo se extrae el propleo. Propleo. Apiterapia. Consultado el
23 de agosto. Disponible en : http://www.mielarlanza.com
12 Propleo :Elixir inmunolgico y algo ms. Consultado el 25 de
agosto.

Disponible

en:

http://www.prama.com.ar/sugerencias_saludables/propoleo.htm
13 Farrr, Frasquet I,Snchez. El prpolis y la salud humana.
Valencia, Espaa.2004
14 El propleo y la salud. Consultado el 22 de agosto. Disponible
en: http://www.atinachile.cl/content/view/1505482/El-Propoleo-yla-Salud.html
15 Murray P, Rosenthal K, Pfaller M. Microbiologa Mdica. 2009;
301-307.

16 Sears Cl, Kapper Jb. Enteric Bacterial Toxins: Mechanisms Of

Action And Linkage To Intestinal Secretion. Microbiol Revs 1996;
60: 167-215.
17 OBrien A, Gd Laveck, Mr Thompson, Formal Sb. 1982.
Production Of Shigella Dysenteriae Type 1-Like Cytotoxin By
Escherichia Coli. J Infect Dis 1977;146:763-769.
18 Olivas E. Manual De Prcticas De Microbiologa I Y Ii Y
Parasitologa. 2004; 29-30.
19 World

Health

Organization.

Guidelines

For

Drinking-Water

Quality: Surveillance And Control Of Community.

20 Gutirrez-Czarez Z, Qadri F, Albert Mj, Giron Ja. Identification Of
enterotoxigenic Escherichia Coli Harboring Longus Type Iv Pilus
Gene By Dna Amplification. J Clin Microbiol 2000; 38: 1767-1771.
21 Pumarola A, Busquet A. Microbiologa Y Parasitologa Mdica.
1987; 436-437.
22 Rocha Rc, Lozano P. Mecanismo De Patogenicidad E Interaccin
Parsito Hospedero. 2006; 49-52.
23 Snyder Jd, Wells Jg, Yashuk J, Puhr N, Blake Pa. Outbreak Of
Invasive Escherichia Coli Gastroenteritis On A Cruise Ship. Am J
Trop Med Hyg 1984; 33:281-284.
24 Boop Ca, Brenner Fw, Wells Jg, Strockbine N. Escherichia,
Shigella, And Salmonella. En: Manual Of Clinical Microbiology.
Murray Pr, E Jo Baron, Ma Pfaller, Fc Tenover, Rh Yolken. 7thed
Washington, D.C. E D. Asm. Press. 2009:459-474.
25 Farmer Jj Iii. Enterobacteriaceae: Introduction And Identification.
En: Manual Of Clinical Microbiology. 6 Ed . Washington, D.C.
Asm Press1995: 440.

26 Nataro Jp, Kaper Jb. Diarrheagenic Escherichia Coli. Clin Microbiol

Rev1998;11:142-201.
27 Rodrguez

G,

Rincn

Mg,

Corts-Tenorio

Lj,

Moreno

A.

Escherichiacoli Causante De Diarrea En Mxico, Identificada Por

Hibridacin En Faseslida Colony Blot. Enfermedades Infecciosas
Y Microbiologia, 2001. 21supl: S116
28 Rodrguez G. Estudio De Cepas De Escherichia Coli Aisladas En
Mxico.Memorias Iv Jornadas Cientfico Culturales De Qumicos
Clnicos. Instituto Mexicano Del Seguro Social; 1998 Noviembre
25; Mxico, D.F., Mxico.
29 Eslava C, Mateo J, Cravioto A. Cepas De Escherichia Coli
Relacionadas Con La Diarrea. En: Diagnstico De Laboratorio De
Infecciones Gastrointestinales. Giono S, Escobar A, Valdespino Jl.
Secretaria De Salud. Mxico, 1994: 251.
30 Especificaciones: Base De Agar Sangre. Tlalnepantla, Edo. De
Mxico. Disponible En: Http://Www.Mcd.Com.Mx/Pdfs/Base%20de
%20agar%20sangre.Pdf
31 Murray, P.R. (2009). Microbiologa Mdica (6ta Edicin). Espaa:
Elsevier.
32 Streptococcus Pyogenes. (2007). Diseo Original Por Free Css
Templates.

Disponible

En:

Http://Streptococcus-

Pyogenes4.Blogspot.Com/
33 Jawetz,Melnick Y Adelberg (2003). Microbiologa Mdica: 22
Edicin. Elsevier Espaa.
34 Murray, P.R. (2009). Microbiologa Mdica (6ta Edicin). Espaa:
Elsevier

35 Procesamiento del

Propleo. Propolis. Consultado el

agosto.Disponible

30 de

en

http://www.propolisnatural.es/propolis/procesado-propolis.html
36 Extracto Alcohlico De Propleo.Inkanat. Consultado el 30 de
Agosto. Disponible en : http://www.inkanat.com/es/detalle.asp?
prod=tintura-extracto-propoleo
37 Guillermo Salamanca Groso; Carlos Martnez, Eduardo Parra,
Telmo Martnez, Laura Rubiano, Carolina Ramrez, El Sistema De
Control Y Puntos Crticos en La Extraccin Y Beneficio de
Propleos.
38 Mac Conkey, A.1905.Lactose-Fermenting Bacteria In Feces. J.
Hyg. 5:333-379.
39 Lab Linsan. Tecnologa Biolgica De

Diagnostico. Agar Mac

Conkey. Medio Selectivo para Detectar Bacilos Gram Negativos

Fermentadores de Lactosa.
40 Gray, L.D. 1995 Escherichia, Salmonella, Shigella And Yersinia,
P450-456. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover,
And R.H. Yolken(Ed.), Manual Of Clinical Microbiology, 6th Ed.
American Society For Microbiology, Washington, D.C.