TTULO: PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I.

Introduccin
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias

artificiales

preparadas

en

el

laboratorio.

El

material alimenticio en el que crecen los microorganismos es

el

Medio

de

Cultivo.

Para

que

las

bacterias

crezcan

adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La
mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes
complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos
del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de
cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la
que se aadirn otros ingredientes. El Agar es un elemento
solidificante muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran
numerosos materiales de enriquecimiento como carbohidratos,
suero, sangre completa, bilis, etc. Los carbohidratos se
adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin

de

los

microorganismos

que

ayuden

identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para

promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes

II.

Objetivos
1) Conocer los medios de cultivo y la finalidad que
cumplen

III.

desarrollo

III.1. los medios

Uno

de

de cultivo en microbiologa.
los

identificacin
crecimiento

sistemas
de
en

ms

importantes

microorganismos
sustancias

es

para

la

observar

su

alimenticias

artificiales

preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en

el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad
y presin de oxgeno adecuado, as como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo
debe

contener

los

nutrientes

y factores

de

crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren
nutrientes complejos similares en composicin a los
lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base
de muchos medios de cultivo es una infusin de
extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros
ingredientes

III.2. CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

Los

medios

de

cultivo

pueden

clasificarse

segn

diferentes criterios, pero los ms importantes son

aquellos que se basan en:
a) Su consistencia
b) Su utilizacin
c) Su composicin
d) Su origen
2) SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios lquidos: Son los que se presentan en
este

estado,

denominndose

por

esta

razn

caldos. El medio lquido ms utilizado es el

llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente
de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente

cuando

se

pretende

la

obtencin de una suspensin bacteriana de una

determinada concentracin.
2) Medios slidos: Se preparan a partir de los
medios

lquidos,

agregndoles

un

agente

gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el

agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de
los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso
est muy limitado porque su punto de fusin es
bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la

que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que

es la tempera ptima de crecimiento para muchos
microorganismos. Agar-agar:Es un polmero de
azcares obtenido de algas marinas. Se trata de
una molcula insoluble enagua pero soluble en
agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un
gel firme entre 32 y 39C y nose funde por debajo
de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido
alrededor de los 45C. Tiene el inconveniente de
que introduce compuestos orgnicos indefinidos
que

pueden

falsear

los

resultados

de

las

necesidades nutritivas de un microorganismo.

Aunque el agar es una mezcla de polisacridos,
Araki, en 1937, los dividi en dos grupos:- agarosa,
con poco sulfato, libre de cido pirvico, y- agar
pectina, con mucho sulfato y gran cantidad de
cenizas. La proporcin de agarosa a agar pectina
en el agar vara segn el alga de origen. El agar
puede utilizarse para diferentes fines, aunque los
ms importantes son: agar comercial para la
industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares
purificados y agarosa, utilizada para electroforesis
en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar
que

se

produce,

microbiolgico,

por

se
lo

utiliza

que

es

en

trabajo

importante

la

ausencia de metales txicos.

3) Medios semislidos: Se preparan a partir de
los medios lquidos, agregando a stos un agente
solidificante en una proporcin menor que para

preparar medios slidos. Uno de sus usos es la

investigacin de la movilidad de las bacterias
3) SEGN SU UTILIZACIN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen
los componentes mnimos para que pueda
producirse el crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. El medio
ms conocido de este grupo es el agar nutritivo
o agar comn, que resulta de la adicin de agar
al caldo nutritivo.
Otros representantes de este grupo son el agar
triplicase de soja, el agar Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos
que, adems de las sustancias nutritivas normales,
incorporan una serie de factores

indispensables

para el crecimiento de microorganismos exigentes.

Este enriquecimiento se hace por adicin de
sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero,
leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos
factores.

En

ocasiones

es

posible

aadir

suplementos artificiales a los medios para producir

un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex,
Isovitalex, etc) El gonococo, por ejemplo, necesita
cistina y cistena para su crecimiento. Estas
sustancias son aportadas por la sangre calentada
adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para
favorecer el crecimiento

de ciertas bacterias

contenidas en una poblacin poli microbiana. El

fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una poblacin

microbiana

especfica.

Un

ejemplo

de

medio

selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para

favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de entero bacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias
aadidas a un medio selectivo impiden totalmente
el crecimiento de una poblacin microbiana, se
denomina

inhibidor.

Los

medios

inhibidores

podran considerarse como una variante ms

restrictiva de los medios selectivos. Los medios
inhibidores
adicin

se

de

cualquier

consiguen

sustancias

otra

que

habitualmente

antimicrobianas

inhiba

completamente

por
de
el

desarrollo de una poblacin determinada. Un

medio inhibidor es el MacConkey que permite el
crecimiento de los grmenes Gram negativos e
impide el crecimiento de los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner
en

evidencia

caractersticas

bioqumicas

que

ayuden a diferenciar gneros o especies. La

adicin de un azcar fermentable o un sustrato
metabolizable se utilizan para este fin. El medio
MacConkey

es

un

medio

diferencial

porque

permite distinguir los grmenes que fermentan la

lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo
son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre
(tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente
diferencial), etc.
6) Medios de identificacin: Son los destinados
a comprobar alguna cualidad especfica que puede

servirnos para reconocer la identidad de un

microorganismo. Estos medios han de poseer los
elementos necesarios para asegurar el crecimiento
de los microorganismos, el sustrato especfico que
vaya a ser metabolizado y el indicador que nos
muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de
Simmons y en general, cualquier medio al que se
le haya aadido un elemento diferencial de un
microorganismo,

son

medios

utilizados

en

identificacin. Actualmente estn apareciendo en

el

mercado

especficos

una
de

microorganismos,

gran

cantidad

identificacin
con

lo

cual

de

medios

para

ciertos

se

consigue

simultneamente abaratar el costo y reducir el

tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto
ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux),
utilizados para identificar los grmenes urinarios
ms importantes a partir de la placa de cultivo
gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos
especficos.
7) Medios

de

multiplicacin:

Sirven

para

obtener una gran cantidad de clulas a partir de

un microorganismo ya aislado. Se emplean en la
obtencin de vacunas, en la investigacin y en la
industria. Los medios ms adecuados para la
multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin
cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de
estos medios.
8) Medios de conservacin: Se utilizan para
conservar una cepa que, por diversas razones nos
interese mantener. Fundamentalmente se utilizan

como controles de calidad de las pruebas y

reactivos

utilizados

Microbiologa.

En

el

en

el

Laboratorio

laboratorio

se

de

pueden

conservar las cepas de tres formas:

a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin
bacteriana,
c) congelando las cepas en leche descremada
estril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el
transporte de muestras clnicas que no pueden
sembrarse inmediatamente. Subutilizacin debe
hacerse introduciendo la torunda con la que se
obtuvo la muestra en el interior del medio
(generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos
de este grupo los medios de Stuart-Amies,CaryBlair, etc.

4) ATENDIENDO A SU COMPOSICIN.
Segn las sustancias que entren a formar parte en
su composicin, los medios de cultivo pueden ser
clasificados en:
1) Medios complejos:

Fueron

los

primeros

utilizados, y los ms empleados se preparan a

partir de tejidos animales, y ms raramente de
vegetales. Su composicin no es exactamente
definida, y por consiguiente no es rigurosamente
constante.

Esto

puede

tener

ciertos

inconvenientes en condiciones experimentales,

donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En

la prctica corriente estos medios dan excelentes

resultados y son los ms empleados.
2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen
en su composicin exclusivamente sustancias
qumicas conocidas y disueltas en agua destilada
en

proporciones

determinadas,

resultando

un

medio de composicin perfectamente definida.

3) Medios semisintticos: El gran nmero de
factores de crecimiento exigidos para ciertos
grmenes hace que la fabricacin de un medio
sinttico para estos grmenes sea imposible o
demasiado cara. En este caso se aportan los
factores de crecimiento bajo la forma de un
extracto orgnico complejo (extracto de levadura,
extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no
crecen en ningn medio por muy enriquecido que
est ste, hacindolo exclusivamente en clulas
vivas

con

unas

caractersticas

determinadas.

Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las

Chlamydias, Rickettsias, etc.
5) Segn su origen:
a) naturales: son los preparados a partir de
sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
b) sintticos: son los medios que contienen una
composicin qumica definida cualitativamente y
cuantitativamente.

Se

utilizan

para

obtener

resultados reproducibles.
c) semisintticos son los sintticos a los que se
les aaden factores de crecimiento bajo una forma

de un extracto orgnico complejo, como por

ejemplo extracto de levadura

IV.

PROCEDIMIENTO
En la prctica conocimos los siguientes medios de
cultivos:
6) Medios selectivos:
Se usan cuando se quiere aislar un tipo de
bacteria en particular. Por ello, se disearon
medios que favorecen el crecimiento de bacterias
de inters y que inhiben al resto. Algunas de las
sustancias que se utilizan son: antibiticos,
ciertas concentraciones de sales o agregando
una determinada sustancia que solamente le
permita crecer a ese tipo de bacterias. Ejemplos
de ellos son: agar sal, agar celulosa.
7) Medios diferenciales: son los que permiten
distinguir diferencias a nivel metablico de
diversas especies o gneros bacterianos. Para
ello, se agrega al cultivo alguna sustancia que
pueda ser metabolizada slo por las bacterias
que son de inters. Un ejemplo de ellos es la
lactosa.

8) Medios selectivo-diferenciales:
Estos son muy tiles ya que, adems de la
seleccin de un tipo de bacteria, se logra
informacin
sobre
sus
caractersticas
metablicas. Un medio tpico es el agar manitolsal. Este incluye un indicador tal el caso del rojo
de fenol.
9) Medios de mantenimiento:
Son los de variada composicin y su fin es
mantener, satisfactoriamente la viabilidad y las
caractersticas
fisiolgicas
de
un
cultivo

bacteriano. Generalmente este tipo de medio no

es ptimo, ya que si la bacteria crece
rpidamente
tiende
tambin
a
morir
aceleradamente. La mayora de las formulaciones
omite la glucosa porque a pesar de que, en
muchos casos, promueve el crecimiento, es
tambin comn la produccin de cido, el cual es
daino para las bacterias.
V.

CONCLUSIONES
De la siguiente prctica podemos concluir lo siguiente:
10) Hemos hablado de cuatro tipos de cultivo que
son:
a. Medios selectivos:
Se usan cuando se quiere aislar un tipo de
bacteria en particular.
b. Medios diferenciales:
Son los que permiten distinguir diferencias a
nivel metablico de diversas especies o
gneros bacterianos.
c. Medios selectivo-diferenciales:
Estos son muy tiles ya que, adems de la
seleccin de un tipo de bacteria, se logra
informacin
sobre
sus
caractersticas
metablicas.
d. Medios de mantenimiento:
Son los de variada composicin y su fin es
mantener, satisfactoriamente la viabilidad y
las caractersticas fisiolgicas de un cultivo
bacteriano.

VI.
VII.

BIBLIOGRAFA.
CUESTIONARIO
1. Qu es el medio de cultivo?
Cultivo es un mtodo para la multiplicacin de
microorganismos, tales como bacterias y virus, en

el que se prepara un medio ptimo para favorecer

el proceso deseado.
2. con que propsito o finalidad para utilizar los
medios de cultivo?
Los medios de cultivo se utilizan para diferentes
propsitos: la enumeracin y el aislamiento de
ciertos tipos de bacterias; el mantenimiento de los
cultivos para su uso posterior y para facilitar el
reconocimiento de algn tipo de bacteria en
particular.
3. Cuntas clases y cules son los medios de
cultivo en esta prctica y para que se utiliza
cada uno de estos medios de cultivo?
a. Medios selectivos:
Se usan cuando se quiere aislar un tipo de
bacteria en particular.
b. Medios diferenciales:
Son los que permiten distinguir diferencias a
nivel metablico de diversas especies o gneros
bacterianos.
c. Medios selectivo-diferenciales:
Estos son muy tiles ya que, adems de la
seleccin de un tipo de bacteria, se logra
informacin
sobre
sus
caractersticas
metablicas.
d. Medios de mantenimiento:
Son los de variada composicin y su fin es
mantener, satisfactoriamente la viabilidad y las
caractersticas
fisiolgicas
de
un
cultivo
bacteriano.

4. Investiga que otros medios de cultivo existen

indicando su finalidad
2) Medios lquidos:

El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo

nutritivo, compuesto principalmente de extracto
de carne, peptona y agua.
3) Medios slidos:
Los ms utilizados son la gelatina y el agar.
Razn por la que no puede utilizarse para
cultivos a 37C, que es la tempera ptima de
crecimiento para muchos microorganismos.
4) Medios semislidos:
Uno de sus usos es la investigacin de la
movilidad de las bacterias.
5) Medios comunes:
El medio ms conocido de este grupo es el agar
nutritivo o agar comn, que resulta de la
adicin de agar al caldo nutritivo.
6) Medios de enriquecimiento:
Son aquellos que, adems de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de
microorganismos exigentes
7) Medios selectivos:
Son medios utilizados para

favorecer

el

crecimiento de ciertas bacterias contenidas en

una poblacin poli microbiana. Utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y
frenar el del resto de entero bacterias.
8) Medios inhibidores:
Los
medios
inhibidores
habitualmente

por

adicin

se

consiguen

de

sustancias

antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba

completamente el desarrollo de una poblacin
determinada.

Un

medio

inhibidor

es

el

MacConkey que permite el crecimiento de los

grmenes

Gram

negativos

impide

el

crecimiento de los Gram positivos.

9) Medios de identificacin:
Son los destinados a comprobar alguna cualidad
especfica que puede servirnos para reconocer la
identidad de un microorganismo.
10) Medios de multiplicacin:
Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a
partir

de

un

microorganismo

ya

aislado.

Se

emplean en la obtencin de vacunas, en la

investigacin y en la industria. Los medios ms
adecuados

para

la

multiplicacin

suelen

ser

lquidos.
11) Medios de conservacin:
Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas

razones

nos

interese

mantener.

Fundamentalmente se utilizan como controles de

calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el
Laboratorio de Microbiologa.:
12) Medios de transporte:
Se usan para el transporte de muestras clnicas
que no pueden sembrarse inmediatamente.

13)
ATENDIENDO A SU COMPOSICIN.
Segn las sustancias que entren a formar parte en
su composicin, los medios de cultivo pueden ser
clasificados en:
14)
Medios complejos:

Fueron los primeros utilizados, y los ms

empleados se preparan a partir de tejidos
animales, y ms raramente de vegetales.
15)
Medios sintticos:
Son aquellos que contienen en su composicin
exclusivamente sustancias qumicas conocidas
y disueltas en agua destilada en proporciones
determinadas,

resultando

un

medio

de

composicin perfectamente definida.

16)
Medios semisintticos:
El gran nmero de factores de crecimiento
exigidos para ciertos grmenes hace que la
fabricacin de un medio sinttico para estos
grmenes sea imposible o demasiado cara.
17)
Segn su origen:
a) naturales:
Son los preparados a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal.
b) sintticos:
Se
utilizan
para
obtener
resultados
reproducibles.
c) semisintticos son los sintticos a los que se
les aaden factores de crecimiento bajo una forma
de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura