Operaciones Unitarias

Carolina Pineda
2015-11-29
CROMATOGRAFA
1.-HISTORIA:
La cromatografa es fue utilizada por primera vez en el ao 1906 por un Ruso
llamado M. Tswett quien describi esta tcnica para la separacin de pigmentos
de plantas, es aqu donde esta tcnica tomo el nombre de cromatografa
debido a las bandas de colores que fueron separadas por su adsorcin selectiva
mediante una columna de vidrio. Posteriormente en ao de 1930 Kuhn y
Lederer utilizaron esta tcnica para la separacin de carotenoides, despus de
varios aos se implementaron diferentes tipos de cromatografa como: de
reparto, de papel, de capa fina, entre otros. Actualmente la cromatografa es
una tcnica muy utilizada en todas las ramas especficamente en qumica,
biologa y medicina. (Catieiras & Queralto, 1998)
Existen algunos trminos que se deben tomar en cuenta cuando se habla de
cromatografa:

Fase estacionaria: Fases que permanece fija durante el proceso de

separacin, tambin denominado como lecho cromatografico, este
puede ser solido o liquido
Fase mvil: Fluido que se traslada por el lecho cromatografico en una
direccin definida
Adsorcin: Concentracin sobre la superficie de una sustancia, de
gases, lquidos, materiales dispersos o colides
Cromatograma: Representacin grfica en donde se determinan la
concentracin de una sustancia o del componente en la fase mvil
(Eluyente), mediante picos.
(Silva & Garcia, 2006)

Figura 1. Fundamento de la cromatografa donde especifica las partes ms importantes

de esta tcnica

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2.- SIGNIFICADO
La cromatografa provienen del griego chrma y grph que significa color y
escribir respectivamente es una tcnica de separacin fsica en donde los
componentes que se quieren separar se dividen en 2 fases principales: La
primera, una fase mvil la cual se dirige en una direccin definida y la
segunda, una fase inmvil o tambin conocida como lecho estacionario.
Mediante la cromatografa es posible cuantificar, separar e identificar los
componentes de una mezcla. (Catieiras & Queralto, 1998)
La tcnica de cromatografa se da por varios procesos de sorcion y disorcion
que existe por el paso de los componentes de la mezcla que van desde la fase
mvil y pasan por la fase inmvil, haciendo que los constituyentes se separen
en base a las constantes de distribucin. A la ltima distribucin de los
componentes dependiendo si estos se encuentran
en la fase mvil o
estacionaria se denominan cromatograma. Para esto es necesario que las fase
estacionaria sea liquida o slida y la fase mvil sea liquida o gaseosa, es la
nica restriccin que se debe tener para la utilizacin esta tcnica. (Silva &
Garcia, 2006)
3.-CLASIFICACION
A continuacin se muestra un esquema que resume la clasificacin de la
cromatografa dependiendo de algunas caractersticas especficas:
Tabla 1. Esquema en donde se resumen los tipos de cromatografa en funcin de
algunas caractersticas especificas

CLASIFICACION
En funcin del mecanismo de
interaccin del soluto con la fase
estacionario

En funcin del sistema que se utiliza

como soporte
En funcin de la forma de evidenciar
los componentes separados

TIPO DE CROMATOGRAFA
- De Adsorcin
- De reparto
- De intercambio inico
- De exclusin molecular
- De afinidad
-Columna
-Papel
-Capa fina
-En el tiempo
-En el espacio

3.1 EN FUNCIN DEL MECANISMO DE INTERACCIN DEL SOLUTO CON

LA FASE ESTACIONARIO
Cromatografa de adsorcin: Se usa una fase mvil liquida o gaseosa. Una
fase estacionaria slida. El soluto se adsorbe en la superficie de las
partculas slidas. Las interacciones son de tipo van der Waals, cuanto ms

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fuertemente se adsorbe un soluto, atraviesa ms lento por la columna.
(Harris, 2007)

Figura 2. Esquema de la cromatografa de adsorcin

Cromatografa de reparto: o tambin denominada como liquido lquido, se

basa en la solubilidad de los analitos en 2 lquidos, uno en la fase mvil y el
otro en la fase estacionaria. En donde las sustancias ms solubles en la fase
inmvil atraviesan ms lentamente, mientras que la ms soluble en la fase
mvil atraviesa ms rpido la columna. Ocasionalmente el lquido que se
encuentra en la fase mvil es de tipo polimerice de elevada viscosidad
junto a un slido que trabaja como soporte. (Harris, 2007)

Figura 3. Esquema de la cromatografa de reparto

Cromatografa de intercambio inico: En esta tcnica existen tanto aniones

como cationes unidos covalentemente a la fase estacionaria la cual es
slida, comnmente se utilizan resinas. La fase mvil es lquida. Los iones
en disolucin opuesta son atrados a fase estacionaria por fuerzas
electrosttica. (Harris, 2007)

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Figura 4. Esquema de la cromatografa de intercambio inico

Cromatografa de exclusin molecular: mejor conocida como cromatografa

de filtracin por gel. Las molculas ms grandes migraran ms rpido por la
fase estacionaria, por lo contrario las molculas pequeas migraran ms
lentamente En esta tcnica no existe una interaccin atractiva en la fase
estacionaria y el soluto. En este caso las molculas son separadas en
funcin del tamao. En donde la fase mvil gaseosa o liquida pasa por el gel
poroso. Las molculas grandes pasan sin entrar a los poros, por lo contrario
las molculas pequeas migan ms lento porque entran dentro del gel y por
tal razn se demoran ms tiempo en salir de la columna. (Berg, Stryer, &
Tymoczko, 2008)

Figura 5. Esquema de la cromatografa de exclusin molecular

Cromatografa de afinidad: Se considera que es una de las tcnicas ms

selectivas, debido a que existe una interaccin especifica entre una clase de
molculas del soluto y una segunda molcula inmovilizada que est unida
covalentemente
a la fase inmvil o estacionaria Ej: Si la molcula
inmovilizada es un anticuerpo junto con una protena determinada y existe
un flujo de protenas, nicamente las protenas que reaccionan con este
anticuerpo es capaz de fijarse a la columna. Una manera de liberar esta
protena de inters es con cambios inicos o de pH. (Berg, Stryer, &
Tymoczko, 2008)

Figura 6. Esquema de la cromatografa de afinidad

3.2 EN FUNCIN DEL SISTEMA QUE SE UTILIZA COMO SOPORTE

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Cromatografa en columna: Todas las cromatografas llamadas en columna
se caracterizan por tener una fase estacionaria que se encuentra en una
columna de vidrio de aproximadamente de 5 a 30 mm de dimetro
dependiendo del uso. Por esta columna se hace pasar una fase mvil
gaseosa o liquida la cual estar en constante movimiento en una direccin
eterminada.Dependiendo de la afinidad que tienen las molculas por las
diferentes fases, estas se separan. La fase estacionaria puede ser de
distintos materiales como, derivados de agarosa, dextranos, poliacrilamida,
slice, esferas de vidrios entre otros. (Skoog, West, & Holler, 2001)
Despus de obtener separados los componentes se puede identificar los
distintos compuestos, mediante un cromatograma cualitativo o la obtencin
de la cantidad y composicin mediante un cromatograma cuantitativo
EJ: De intercambio inico, de afinidad, de adsorcin, de exclusin.

Figura 7. Esquema de la cromatografa en columna

Cromatografa en papel: Actualmente es una de las tcnicas muy poco

utilizadas debido al tiempo que toma, sin embargo en laboratorios se sigue
utilizando este mtodo para hacer anlisis cualitativos. En este caso la fase
estacionaria es una tira de papel, la muestra debe ser colocada mediante
pequeas gotas en el papel. Posterior a esto el disolvente el cual en este
caso es la fase mvil debe ascender por capilaridad. Despus se debe
colocar verticalmente el papel y en la parte de abajo estar la muestra y el
disolvente. Una vez que el disolvente llego al extremo se quita el papel y se
dejar secar. Se vern diferentes manchas de colores, si este no es el caso
se llevara a revelado. Par ello es importante elegir de manera correcta el
disolvente el cual permite la coloracin y el papel que se va a utilizar.
(Skoog, West, & Holler, 2001)

Figura 8. Esquema de la cromatografa en papel

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Cromatografa en capa fina (TLC): En esta tcnica la fase estacionaria es
una capa de partculas de unos mm de espesor, los cuales se encuentran
fijados a un soporte que puede ser de plstico, aluminio o vidrio, el
disolvente empieza a producir la separacin una vez que se aplica el
analito, la ventaja de esta tcnica es que se analiza simultneamente la
muestra y el patrn que sera la sustancia de referencia o cuando las
muestras son muy difciles de separar se pueden utilizar dos disolventes en
direcciones perpendiculares. (Skoog, West, & Holler, 2001)

Figura 8. Esquema de la cromatografa en capa fina

La mancha de una placa TLC se caracteriza por la distancia que recorre con
relacin a la distancia recorrida por la fase mvil, por tal razn se calcula el
grado de retencin:
RF=

distancia de desplazamiento del soluto

distanciade desplazamiento del disolvente

Tambin se puede determinar el coeficiente de distribucin (K)

K=

Cs (fase estacionaria)
Cm(Fase movil)

Aparte de las formulas mencionadas anteriormente una manera de determinar

las manchas en las placas de TLC se pueden realizar mediante la observacin
de fluorescencia o UV, en donde s se encuentran manchas oscuras, esto
significa que si existe el soluto, si son fluorescencia bajo luz UV no hay
presencia del mismo

3.3 EN FUNCION DE LA FORMA DE EVIDENCIAR LOS COMPONENTES

SEPARADOS

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4.- EQUIPOS

5.- VENTAJAS/DESVENTAJAS DE LA CROMATOGRAFIA

6.- APLICACIONES
7.- FORMULAS
8.- EJERCICIO
9.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS