Control de la

expresin gnica en eucariontes

Niveles:
DNA
transcripcional
postranscripcional
traduccional
postraduccionales

Control de la expresin gnica en eucariontes

niveles de control de la expresin gnica

regulacin transcripcional
regulacin postranscripcional
regulacin traduccional
regulacin postraduccional
regulacin a nivel de DNA
flujo de la informacin gentica

12. Control de la expresin gnica en eucariontes

niveles de control de la expresin gnica

regulacin transcripcional
regulacin postranscripcional
regulacin traduccional
regulacin postraduccional
regulacin a nivel de DNA
flujo de la informacin gentica

niveles de control
de la
expresin gnica

Sntesis de ARN en eucariotas:

Transcripcin
ARN polimerasas (I, II y III)
Utiliza promotores y tiene un importante uso de enhancers
(potenciadores)
Factores de transcripcin (interaccionan con ADN y otros
factores)
Poca regulacin en el punto de terminacin
Los ARN transcriptos primarios son ampliamente procesados

Requiere de varios tipos de factores como TFIII-A, TFIII-B y TFIII

TIPO 2 (ej alg tARN)

TIPO 1 (ej 5S)

Punto de inicio

Punto de inicio

TFIIIA

TFIIIC

TFIIIC
TFIIIB

TBP

TFIIIB

TFIIIB

TFIIIB

TBP

TFIIIC

TATA

Punto de inicio

P
P
P

TFAs

TFIIA

P
P
P

TFIIB

P [YSPTSPS]n

TFIIF

ARN Polimerasa II

TFIIH

TFIIJ

TFIIE

Las protenas del

potenciador se unen a las
del promotor induciendo
la transcripcin

En eucariotas existen 3 ARN-polimerasas nucleares

ARN pol I

ARN pol II

ARN pol III

ARN polimerasa I
Transcribe ARN ribosomal (nucleolo)
Est formada por 13 subunidades
Necesita la accin de 2 elementos de control (UCE y Core)
Punto de inicio
170
150
130
110
Upstream control element

60

40 20 10 +10 +20
Core promoter

UBF1

UBF1

SL1

Existen muchas (cientos) copias de la unidad de transcripcin

(todos el mismo promotor)
Sintetiza el 80-90% del ARN total de una clula
Produce un nico ARN transcripto primario

Procesamiento del prepre-rRNA

Los cortes son en lugares especficos en una secuencia especfica
Parece estar ayudada/catalizada por ARN pequeos nucleolares (snoARNs).
snoRNAs se asocian a protenas (snoRNP) (ej. fibrillarina)

Metilaciones (Met):
Sufre varias metilaciones Por
ej 18S: 4Met
Posiciones conservadas de los
metilos (en determinadas
ribosas).
5S: sintetizado por ARNpol-III (nucleoplasma)
no sufre modificaciones
migra hacia el nucleolo para ensamblarse

ARN polimerasa III

Transcribe ARN pequeos (5S, tARNs y snARN) (nucleoplasma)
Est formado por 14 subunidades
Es la polimerasa con menor produccin de ARN
Los promotores pueden estar tanto en la regin 5 (snARN) como 3 (5S y tARN)
Los internos: tipo 1 y 2
3

Punto de inicio

Tipo 1

Tipo 2

A
Oct

PSE

TATA

Procesamiento del pre-tRNA

(ARN pol III)
Intrones
*Una endonucleasa corta en los extremos. Se
producen dos medias-molculas de tRNA [5OH y
3PO4 cclico (2-3)]
*La reaccin de la ligasa de tARN, tiene lugar en
tres pasos:
a)Fosforilacin del 5OH con el gamma-PO4 del
GTP.
b)Formacin de un intermediario activado de la
ligasa (ligasa-AMP) que transfiere el AMP
cclico al 5PO4 del sustrato.
c)El PO4 cclico se abre dando 2PO4 y 3OH.
Se da la formacin del 5-3-fosfodiester y el
AMP cclico se libera.
*La fosfotransferasa dependiente de NAD
(nicotinamida adenina dinucletido) transfiere el
2PO4 al NAD

Extremo 5: endonucleasa ribonucleasa P (RNasa P) (enzima-RNP)

Extremo 3: Cambio de U del extremo por CCA (3 )

Codn de Tyr
5-UAC-3
Anticodn
5-GUA-3

Agregado de grupos
metilos e isopentilos
a residuos de
purinas

Metilacin de los
2OH de la ribosa

Conversin de U a residuos de dihidro-U

(D), pseudo-U () o ribotimidinas (T,
metiluridinas)

ARN POLIMERASA II
Transcribe los genes estructurales (prot) a ARNm (y hnARN) (nucleoplasma).
Es la enzima que transcribe la ms diversa poblacin de ARNs.
Mltiples subunidades
Se observan 3 grupos de promotores: genricos, especficos e inducibles.
Promotores genricos: secuencia mnima necesaria con la cual la polimerasa
puede iniciar la transcripcin. No depende de secuencias reguladas por tejidos.
Son de baja eficiencia
Al menos 8 factores de transcripcin (TFII A,B,C,D,E,F,H,J)
Condiciones generales para la sntesis de ARN
Inr (regin iniciadora) puede ser descrita como Py2CAPy5
TATA box: secuencia consenso de 8pb a unos ~25pb, rodeado de
secuencias ricas en GC. Lo contienen la gran mayora de los promotores. Se
une TFIID/TBP
TAF: TBP-associated factors

12. Control de la expresin gnica en eucariontes

niveles de control de la expresin gnica

regulacin transcripcional
regulacin postranscripcional
regulacin traduccional
regulacin postraduccional
regulacin a nivel de DNA
flujo de la informacin gentica

12. Control de la expresin gnica en eucariontes

niveles de control de la expresin gnica

regulacin transcripcional
regulacin postranscripcional
regulacin traduccional
regulacin postraduccional
regulacin a nivel de DNA
flujo de la informacin gentica

Procesamiento del pre

pre-mARN

regulacin postranscripcional
(RNA)
modificacin (CAP y poliA) y
procesamiento de intrones (splicing)
transporte al citoplasma
vida media
siRNA

regulacin postranscripcional
(RNA)
modificacin (CAP y poliA) y
procesamiento de intrones (splicing)
transporte al citoplasma
vida media
siRNA

La caperuza
- Implica una condensacin de un grupo trifosfato y varias
metilaciones.
- Juega un importante papel en la iniciacin de la sntesis de la
protena
- Protege al ARNm de la
degracin mientras se
est sintetizando el
transcripto
- Involucrado en
exportacin ARNm al
citoplasma

CAP

elimina el fosfato del extremo 5,

que es distinta a las fosfatasas
habituales que slo eliminan el
fosfato

or RNA triphosphatase

aade un grupo guanililo (5-fosfo-guanosina)

al extremo difosfato del hnRNA mediante el
enlace fosfodister 5-5.

metilasa que introduce

metilos a partir de SAM
en varias posiciones

Capping:
order of
events and
enzymes

AdoMet = S-adenosylmethionine,
the methyl donor
Product is Cap 1

Fig. 15.4

CAP
cap0

GTP-Met +

+ pp + p
cap1

cap2

Caperuza del tipo 0: se produce por metilacin en el N-7 de la

guanosina terminal. Es la caperuza mnima que se encuentra en los
mRNA eucariotas. Los unicelulares es el nico tipo de modificacin que
presentan.

Caperuza del tipo 1: se obtiene cuando sobre una caperuza tipo 0 se

metila el 2-OH del primer nucletido original del hn-RNA. Se puede
encontrar en cualquier organismo, salvo en los eucariotas unicelulares.
En algunos eucariotas superiores, si el segundo nucletido (el que
originalmente era el primero) es A, se puede metilar la base en la
posicin N6.

Caperuza del tipo 2: se produce cuando una caperuza tipo 1 se metila

en el 2-OH de la ribosa siguiente. Es habitual encontrarla en los
snRNA, y slo se suele encontrar en los vertebrados, y solo est en un
10-15% de los transcritos.

La guanilil-tranferasa y la metilasa se sabe que se asocian

al dominio CTD de la RNA-polimerasa II gracias al factor
de elongacin hSPT5, de manera que consiguen que se
forme la caperuza antes de que el transcrito tenga 30 nt
de longitud y antes de que comience a elongar.
La fosforilacin del CTD se ha visto que tambin marca el fin
de la adicin de la caperuza y el inicio de los ayustes de los
intrones.

Cap Functions
Cap provides:
1.
Protection from some ribonucleases*
2.
Enhanced translation*
3.
Enhanced transport from nucleus
4.
Enhanced splicing of first intron for some pre-mRNAs

*Also functions of the polyA-tail

adicin de la caperuza (CAP) al 5

adicin de la cola poliA al 3

seal de
poliadenilacin

2. The 3 end of mRNA is marked by a poly(A) tail

a. Transcription of mRNA continues through the poly(A)
consensus sequence (AAUAAA).
b. Proteins bind and cleave RNA. These include:
i. CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor).
ii. CstF (cleavage stimulation factor).
iii. Two cleavage factor proteins (CFI and CFII).
c. After cleavage, the enzyme poly(A) polymerase (PAP) adds A
nucleotides to the 3 end of the RNA, using ATP as a substrate.
PAP is bound to CPSF during this process.
d. PABII (poly(A) binding protein II) binds the poly(A) tail as it is
produced.

Fig. 5.11 Diagram of the 3 end formation of mRNA and the addition of the poly(A) tail

Peter J. Russell, iGenetics: Copyright Pearson Education, Inc., publishing as Benjamin Cummings.

Complejo actuante: CPSF, CstF

CstF,, CF (I yII),
yII), PAP y PABP.

Polyadenylation

CPSF: cleavage and polyadenylation specificity factor

CStF: cleavage stimulatory factor
CF: cleavage factor
PAP: polyA polymerase
PAB: polyA binding protein

Function in transport,
stability, translation

La cola de poli(A
poli(A))

1) Da estabilidad al ARNm en el citoplasma

2) Colabora con la exportacin del ARNm
3) Est implicada en la traduccin
4) Consecuencia prctica (purificacin)
5) Excepcin: las histonas

Polyadenylation: Mechanism
Occurs in 2 phases
Phase 1: requires AAUAAA and ~8 nt
downstream (3)
Phase 2 : Once ~10 As are added,
further adenylation does not require
the AAUAAA

2 Phases to polyadenylation
Hela-cell nuclear extract was incubated with radioactively-labeled RNA
substrates, which were then separated by gel electrophoresis.
Substrates:
1. 58-nt RNA from SV40
that ends with AAUAAA plus
8 nt (
).
2. Same as (1), but with a
40-nt polyA-tail (A40).
3. Same as (1), but with a
random 40-nt at the 3 end
(X40).
The series with an X contain
a mutated AAUAAA
(AAGAAA).

Conclusion: the AAUAAA not needed for phase 2, only phase 1.

Fig. 15.21

regulacin postranscripcional
(RNA)
modificacin (CAP y poliA) y
procesamiento de intrones (splicing)
transporte al citoplasma
vida media
siRNA

maduracin del mRNA eucaritico

genes fragmentados o en piezas

patrones de maduracin del hnRNA de la tropomisoina

tropomiosina de ratas: 1 mRNA = 14 formas de la protena

troponina T muscular: 1 mRNA = 64 formas de la protena
Drosophila: macho/hembra depende de una maduracin de tra

secuencias consenso en las uniones exn-intrn

para corte y empalme

autoprocesamiento

procesamiento por
escisoma

Splicing

Splicing is mediated by snRNPs

Remocin de los intrones

(corte--empalme o Splicing
(corte
Splicing)
)

-Las reacciones son por transesterificacin

-La remocin de los intrones no es secuencial.
-Involucra
Involucra partculas de snRNP y otros factores
independientes

Formacin del
spliceosoma

U1: ARN pequeo

nuclear (snARN) que
forma parte de la
partcula snRNP U1,
que reconoce el sitio
donante (sitio 5 de
splicing)

Splicing
Splicing alternativo

Trans--splicing
Trans
splicing - Agregado de SL
*La secuencia lider (SL) provee un exon
extra en el 5 del transcripto
*Es el mismo mecanismo que en el cissplicing por transesterificacin (pero se
genera una molcula de ARN con
forma de Y)
*Esencial en Trypanosoma
- La regin que codifica para la SL es muy
parecida al U1 (que falta)
- Cap 4 (2,2,7-trimetil guanosina y estn
metilados los 4 nts sgtes)

*Trans-splicing alternativo (LYT1:

nuclear y secretada)

Editado del ARNm

Ejemplo en mamferos con la protena ApoB.

-No hay evidencia que exista otro gen u otro exn

-Aparentemente el cambio ocurre por una desaminacin (C
U), por lo que podra estar involucrada una citosina
desaminasa

Editado usando ARN guas

Mecanism
o

Esencial para Trypanosomtidos

regulacin postranscripcional
(RNA)
modificacin (CAP y poliA) y
procesamiento de intrones (splicing)
transporte al citoplasma
vida media
siRNA

transporte
al
citoplasma