UNIVERSIDAD NACIONAL

MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE QUMICA E
INGENIERA QUMICA
E.A.P. INGENIERA QUMICA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA

ANALTICA E INSTRUMENTAL
PRCTICA N 2

TEMA:
ESPECTROFOTOMETRA
ULTRAVIOLETA. ANLISIS DE NITRATOS DE
AGUA

CURSO

:
LABORATORIO DE ANALISIS
INSTRUMENTAL

PROFESOR :RODRIGUEZ BEST, MARIA ANGELICA

ALUMNA

DE LA ROSA HERRERA, ROCIO BEATRIZ

1.- FUNDAMENTO DEL METODO DE ANALISIS

NITRATOS EN AGUA

Laboratorio de Anlisis Instrumental

CDIGO:04070083

Los nitratos constituyen la especie nitrogenada ms abundante y de mayor inters en todos los
cuerpos de aguas naturales. Los nitratos suelen hallarse en aguas naturales en concentraciones
traza o de unos pocos ppms, mientras que en aguas residuales domesticas y agrcolas pueden
alcanzar niveles relativamente altos.
La determinacin de los nitratos en el agua de consumo humano es importante porque cunado
estos se encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm, como N, pueden causar una
enfermedad infantil conocida como metahemoglobinemia, que se caracteriza por la dificultad
de la sangre para absorber oxigeno.
Por otra parte, los nitratos, as como los fosfatos, constituyen parte de los nutrientes esenciales
para muchos organismos autrotofos o fotosintticos y en este sentido, su presencia en el agua,
puede ocasionar fenmenos de eutrificacion en ros y lagos.
Los nitratos, as como el amonio, constituyen indicadores apropiados de aguas residuales
domesticas. El primero, es tpico de las aguas residuales domesticas frescas y es muy mvil y
estable en condiciones aerbicas. El segundo tambin tpico de aguas residuales frescas, pero se
evapora con facilidad y/o se absorbe fcilmente en el subsuelo.
Mtodo Espectrofotometrico UV Visible
Este mtodo es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgnica, tales como
las provenientes de plantas suministro y/o aguas subterrneas. Las mediciones se realizan
utilizando un fotmetro a 220 nm, para concentraciones inferiores a 10 mg/l, rango para el cual
se cumple la Ley de Beer.
Teniendo en cuenta que tanto la materia orgnica como el ion nitrato absorben energa radiante
a una longitud de onda de 220 nm yque la materia orgnica mas no el nitrato, absorbe tambin a
275 nm, el mtodo analtico realiza las mediciones a estas dos longitudes de onda, con el objeto
de corregir las primeras mediciones por la interferencia que halla podido ocasionar la materia
orgnica presente en la muestra. El grado de esta correccin emprica se reacciona con la
naturaleza y concentracin de la materia orgnica y puede variar a partir de un agua a otra.
El mtodo fotomtrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para
muestras con materia orgnica, siempre que esta permanezca estable y constante.
La filtracin de la muestra se piensa para quitar interferencia posible de partculas suspendidas.

2.- DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA

La tcnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o despus de que ha
reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la radiacin. La primera
tcnica tiene ms restricciones, en particular con muestras complejas porque pocas veces se
puede encontrar una longitud de onda en la que solo se absorba el analito. En ocasiones, las
separaciones previas ayudan a eliminar las especies que puedan absorber e interferir con la
determinacin espectrofotometrica del analito. En otros casos, las interferencias se pueden
corregir con una segunda medicin de absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la
determinacin de nitrato en muestras de aguas naturales (lo realizado). El ion nitrato absorbe a
220 nm, y la materia orgnica disuelta tambin puede absorber a esta longitud de onda. Para
corregir las interferencias debidas a la materia orgnica, se toma una segunda lectura de
absorbancia a 270 nm, donde no absorbe el nitrato. Aunque tome ms tiempo a veces es
preferible hacer una separacin previa para eliminar las especies que interfieren.

Laboratorio de Anlisis Instrumental

Tambin es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la reaccin se
forme una especie que absorba una regin donde no haya interferencias.
En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:
Solucin stock de nitrato: se disolvi 0.3626g de KNO 3 , previamente secado a
105 C durante 24 horas, en 500 ml de agua y preservar por adicin de 2 ml de
cloroformo. Esta solucin contiene 100 ppm de nitrato como N. (es estable por
6 meses)

Preparacin de solucin patrn intermedia de nitrato de 100ppm a partir de la

solucin stock. El cual resulta de 10 ppm.

Soluciones de patrn de nitratos: se preparan por dilucin de la solucin

intermedia. De 0 a 5 ppm de NO3- N a 50ml.
El blanco: en una fiola de 50 ml colquese aproximadamente 45 ml de agua
ultra pura, adase 1 ml de solucin de HCl 1N y luego compltese el volumen
hasta el enrase.
Tratamiento de la muestra. sobre 5 y 25 ml de muestra transparente, filtrada si
fuera preciso, adase antes de enrazar 1 ml se solucin de HCl 1Ny mezcle
vigorosamente. El HCl tiene por objeto impedir interferencias por
concentraciones de hidrxido o carbonatos que pueden estar en las muestras.
Se prepara la curva de calibracin y se lee la absorbancia de las muestras y
patrones.
Interferencias
Interfieren la materia orgnica disuelta, los surfactantes, NO 2- y Cr6+. Pueden interferir varios
iones inorgnicos, que no se encuentran normalmente en el agua natural, como clorito y clorato.
Las sustancias inorgnicas se pueden compensar con un anlisis independiente de
concentraciones y la preparacin de curvas de correccin individuales.

4.- DESCRIPCION DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS

USADOS
Espectrofotmetro de doble haz
En un espectrofotmetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de la muestra y
de la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta manera entra y sale del
paso de la luz. Cuando el cortador no desva el haz, la luz pasa a travs de la muestra, y el
detector mide la potencia radiante que llamamos P. Cuando el cortador desva el haz a travs de
la cubeta de referencia, el detector mide P 0. El haz se corta varias veces por segundo, y el
circuito compara automticamente P y P0, dando as la transmitan ca y la absorbancia. Este
procedimiento permite hacer una correccin automtica de las variaciones de intensidad de la
fuente, y de la respuesta del detector con el tiempo y la longitud de onda, porque se comparan
con mucha frecuencia la potencia que sale de las dos muestras. Los espectrofotmetros de
mayor calidad destinados a investigacin tambin permiten un barrido automtico de longitudes
de onda y un registro continuo de absorbancia.Cuando se registra un espectro de absorbancia, es
de rutina registrar primero el espectro de la lnea base con las disoluciones de referencia
(disolvente puro o blanco) en las dos cubetas. Despus se resta el espectro base de la

Laboratorio de Anlisis Instrumental

absorbancia medida de la muestra, para obtener as la verdadera absorbancia de la muestra a las

distintas longitudes de onda.En la figura 1 se muestra un espectrofotmetro visible de doble haz.
La luz blanca procede de una lmpara de halgeno de cuarzo (como la de luz larga de un
automvil), y la fuente ultravioleta es una lmpara de arco de deuterio, que emite en el intervalo
de 200-400 nm. En un momento dado slo se utiliza una de ellas. La red de difraccin 1
selecciona una banda estrecha de longitudes de onda, que entra en el monocromador, y ste
selecciona una banda an ms estrecha, que es la que pasa a travs de la muestra. Despus de
cortado el haz, y una vez que pasa por las cubetas de la muestra y referencia, la seal es
detectada por un tubo fotomultiplicador, que produce una corriente elctrica proporcional a la
potencia radiante que llega al detector.

Fig. 1 Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de doble haz

Espectrofotmetro de ultravioleta visible

Laboratorio de Anlisis Instrumental

El instrumento con el que se trabajo en la experiencia fue un espectrofotmetro SHIMADZU

que es un espectrofotmetro de doble haz que nos evita estar en cada medida de absorbancia
poner el blanco de referencia porque tiene un comportamiento para este, las celdas
paralelopipedas con las que trabajamos fueron de cuarzo con un lado transparente a al radiacin
y el otro difuso por el no pasa la radiacin y por donde se puede manipular, se pude trabajar con
el espectrofotmetro usando la pantalla liquida que tiene o desde una computadora usando el
software UV PROVE.

5.-CALCULOS DETALLADOS
Clculo de la concentracin de la solucin estandar madre en PPM
1.-Preparacin del patrn primario: Partiendo de la solucin madre de KNO3
=0.3626 g/500 ml, se calcula el numero de mg NO-3 - N / 1L solucin:
Entonces:
0.3626g X 14 g/mol NO-3 - N = 0.0502 g NO-3 - N
500 ml
101.11g/mol KNO3
500 ml
Luego , para 1L de solucin:
0.0502 g NO-3
X
X

500ml
1 L =1000 ml

100 mg NO-3 - N / L = 100 ppm.

2.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 10ppm apartir de la la

solcucin patrn primario.
(100 ppm x V1 ) patrn primario = (100ml x 10ppm) solucin patrn intermedia
V1 =10 ml (tomar 100ml de la solucin patrn y enrasarlo a 100 ml con agua destilada
para obtener as la solucin patrn intermedia.

Laboratorio de Anlisis Instrumental

3.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 5ppm apartir de la la

solcucin patrn intermedia de 10 ppm.
(10 ppm x V2 ) patrn intermedia de 10ppm = (50ml x 5ppm)
V2 = 25 ml ( tomar 25 ml de solucion 100ppm y llebarlo a 50 ml para obetener 5ppm
4.- Preparacin de patrones a partir de la solucin 5ppm.
P1 : Obtener 0.1ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.1ppm

50ml

V1=1ml.
P2 : Obtener 0.2ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.2ppm

50ml

V1=2ml.
P3 : Obtener 0.3ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.3ppm

50ml

V1=3ml.
P4 : Obtener 0.4ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.1ppm

50ml

V1=4ml.
P5 : Obtener 0.5 ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.5ppm

50ml

V1=5ml.
5)CALCULO DE LA CONCENTRACIN DE LA MUESTRA DE AGUA VIDA
De todos los valores registrados en la tabla para mxima = 202.80 nm, se garfic
Absorbancia Vs. Concentracin (grfica N1).
Mediante esta grafica se obtienen
C muestra 1 = 0.330ppm
C muestra 2 = 0.400ppm
C muestra 3 = 0.346ppm

Laboratorio de Anlisis Instrumental

Pero los valores registrados en el espectrofotmetro:

C muestra 1 = 0.327ppm
C muestra 2 = 0.402ppm
C muestra 3 = 0.334ppm
Para una alcuota de 2 ml. De agua vida.
Determinando la concentracin de la muestra.
A) Para la muestra 1
-Con los datos de C muestra segn grafico de papel milimetrado
CM1 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM1= 0.330 x 50ml / 2ml
CM1 = 8.25 mg NO-3 N x 62 g/ mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM1 = 36.53 mg NO-3 N = 36.53 ppm NO-3
L
Segn el valor registrado en el espectrofotmetro Uv-visible : para una alcuota de 2ml
de agua vida.
CM1 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM1= 0.327 x 50ml / 2ml
CM1 = 8.18 mg NO-3 N x 62 g/mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM1 = 36.20mg NO-3 N = 36.20 ppm NO-3
L
B) Para la muestra 2
-Con los datos de C muestra segn grafico de papel milimetrado
CM2 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM2= 0.400 x 50ml / 2ml
CM2 = 10.0 mg NO-3 N x 62 g/mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM2 = 44.28 mg NO-3 N = 44.28 ppm NO-3
L
Segn el valor registrado en el espectrofotmetro Uv-visible : para una alcuota de 2ml
de agua vida.
CM2 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM2= 0.402 x 50ml / 2ml
CM2 = 10.05 mg NO-3 N x 62 g/mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM2 = 44.51mg NO-3 N = 44.51 ppm NO-3

Laboratorio de Anlisis Instrumental

L
C) Para la muestra 3
-Con los datos de C muestra segn grafico de papel milimetrado
CM3 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM3= 0.346 x 50ml / 2ml
CM3 = 8.65 mg NO-3 N x 62 g/mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM3 = 38.31 mg NO-3 N = 38.31 ppm NO-3
L
Segn el valor registrado en el espectrofotmetro Uv-visible : para una alcuota de 2ml
de agua vida.
CM3 x 2ml = C muestra 1 *50ml
CM3= 0.334 x 50ml / 2ml
CM3 = 8.35 mg NO-3 N x 62 g/mol NO-3
L
14 g/ mol N
CM3 = 36.97mg NO-3 N = 36.97 ppm NO-3
L
6.- TABLA DE DATOS Y RESULTADOS
TABLA N 1
SOLUCIN ESTNDAR MADRE (100 ppm)
Solucin de KNO3

0.3626 g /500ml

TABLA N 2
Preparacin de patrones a partir de la solucin intermedia (5ppm).
Patrn
1
2
3
4
5

V(ml)
1
2
3
4
5

TABLA N 3
Muestra de Agua Vida (botella de 625 ml)
Muestra
M1
M2
M3

Laboratorio de Anlisis Instrumental

Volumen (ml)
2 ml
2 ml
2 ml

TABLA N 4
CURVA DE PATRONES
Patrones
P1
P2
P3
P4
P4

Ppm NO-3 N
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5

V de la solucin estndar
1
2
3
4
5

TABLA N 5
ABSORBANCIA Vs. CONCENTRACION
MXIMA = 202.80 ABSOR 0.337
Patrn
P2
P3
P5

ABSORBANCIA
0.112
0.200
0.342

CONCENTRACIN (ppm)
0.2
0.3
0.5

TABLA N 6
Anlisis de las muestras con el espectrofotmetro (vm = 2ml)
Muestra
M1
M2
M3

Absorbancia
0.334
0.401
0.348

Concentracin (ppm NO-3)

0.327
0.402
0.334

TABLA N 7
Calculo de la concentracin de la muestra (Vm= 2 ml)
Muestra
M1
M2
M3

Por el mtodo grfico

(ppm NO-3)
36.56
44.28
38.31

Laboratorio de Anlisis Instrumental

Segn espectrofotmetro
(ppm NO-3)
36.20
44.51
36.97

7.-DISCUSIN DEL METODO EMPLEADO

La determinacin de nitratos en aguas es difcil dado los procedimientos complejos con los que
se cuentan, la gran posibilidad de encontrar sustancias interferentes y los rangos de
concentracin limitados que presentan las diferentes tcnicas.
Entre los mtodos que aparecen para la cuantificacin de nitratos en aguas, se pueden citar:
Cromatografa inica, mtodo espectrofotomtrico ultravioleta selectivo, mtodo del
electrodo de nitrato, mtodo de reduccin de cadmio, mtodo del cloruro titanoso, mtodo
automatizado de reduccin de hidracina, mtodo automtico de reduccin de cadmio.
El mtodo de reduccin de hidracina se basa en la reduccin de nitrato a nitrito, empleando
como

agente

reductor

al

sulfato

de

hidracina.

Luego

el

nitrito

se

determina

espectrofotomtricamente a 540 nm, longitud de onda que es absorbida por el colorante , que se
forma por diazotacin con sulfanilamida y apareamiento con diclorhidrato de N-(1-naftil)etilendiamina. El rango de aplicacin de este mtodo es de 0.01 a 10 mg N(NO3-)/L.
El mtodo espectrofotometrico ultravioleta, no es un mtodo especfico para la determinacin
de ion nitrato en agua y debe ser utilizado con los recaudos necesarios.Este mtodo presenta la
dificultad de no ser adecuado para el estudio de aguas contaminadas, es decir slo es vlida su
aplicacin para muestras de agua con bajo contenido en materia orgnica.
Para la determinacin de ion nitrato en aguas subterrneas, el mtodo espectrofotomtrico
ultravioleta selectivo presenta como caractersticas principales la baja demanda de tiempo y
reactivos necesarios y su fcil ejecucin. Comparativamente, esta es una ventaja frente al
mtodo de la reduccin con hidracina.

* En 1969 la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) admiti como agua mineral natural toda
agua no contaminada bacteriolgicamente que procedente de una fuente subterrnea natural o
perforada, contiene una determinada mineralizacin y puede inducir efectos favorables para la
salud, debiendo estar as reconocido por la autoridad pertinente del pas de origen. As mismo
La Organizacin Mundial de la Saludconsidera que la concentracin mxima en agua
potable debe ser de 50 miligramos por litro.

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8.- DISCUSION DE RESULTADOS OBTENIDOS

El max es igual a 202.80 nm con absorbancia de 0.337.

Si se trabaja directamente con la solucin stock habra nucho error por eso se trabaja
con solucin intermedia que es una solucin diluida a partir de la solucin madre.
Para la curva de patrones es a partir de la dilucin de la solucin intermedia.
El blanco se utiliza para corregir (restar) las absorbancias de las interferencias.
Se aade HCl 1N para las interferencias que haber en el agua como carbonatos,
hidrxidos, cloruros, etc. La materia orgnica tambin interfiere.
La celda utilizada es de cuarzo
En este equipo solo se cambia el contenido de la celda que tiene la muestra, la otra celda
contiene el blanco, esto hace que los resultados sean mas precisos.
Para leer en UV no es necesaria que la muestra sea coloreada.
La tecnica utilizada es solamente para seleccionar muestras con bajo contenido de
materia orgnica.
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO 3-, N- son por debajo de lo
permitido de 50 ppm segn la OMS. Por tanto de esto se concluy que el Agua Vida
es apta para el consumo humano.
En este metodo es necesario ser muy exactos en las mediciones porque se trata de
cantidades muy pequeas.

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9.- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Las sustancias absorben la luz que posse una longitud de onda caracteristica para dicha
sustancia y una fuente de luz de deuterio.
La sensibilidad del instrumento empleado permite la identificacion de sustancias que
pueden estar presentes como trazas.
Los instrumentos de doble haz hacen medidas de forma prcticamente continua de la
luz que atraviesa las celdas de la muestra y de la referencia.
El equipo utilizado es el espectrofotometro UV visible, Shimadzu 1700 de doble haz
(puede leer a la vez dos celdas).
Para evitar los efectos adversos del nitrato sobre la salud humana, la concentracin del
mismo a sido limitada en aguas de bebida a 45 mgNO 3-/L en Estados Unidos, 55
mgNO3-/L en Europa7 y 45 mgNO3-/L en Argentina.
Agitar vigorosamente los patrones y muestras antes de cada lectura ya que si no se
efecta este procedimiento el equipo no leer correctamente las absorbancias.
No tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz, las huellas
dactilares dispersan y absorben la luz es por eso que se coge de las partes opacas.
La boca de la pipeta debe estar seca para que el lquido contenido baje con facilidad.
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO 3-, N- son por debajo de lo
permitido de 50 ppm segn la OMS. Por tanto de esto se concluy que el Agua Vida
es apta para el consumo humano.

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10.- BIBLIOGRAFIA

Skoog D. West D. Analisis Instrumental Edit. Mc. Graw Hill Mexico 1992

http://www.sma.df.gob.mx/sma/download/archivos/secofi_nmx_aa_079_scfi_2001.pdf

http://www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm

http://www.scielo.br

http://www.udistrital.edu.co/comunidad/grupos/fluoreciencia/capitulos_fluoreciencia/ca
laguas_cap14.pdf#search=%22determinacion%20de%20nitratos%20en%20agua
%20mediante%20espectrofotometria%22

http://www.agua-mineral.net/592/manantial-de-agua-sin-nitratos/

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