FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

INTRODUCCIN

Aislar y observar el crecimiento de un microorganismo para su identificacin es

de suma importancia, y para ello se utiliza materiales alimenticios artificiales
preparados en el laboratorio llamados medios de cultivo, los cuales varan
considerablemente algunos slo requieren sustancias simples (bacterias no
exigentes) y otros requieren de sustancias complejas (bacterias exigentes)
Entonces podramos decir que los medios de cultivo son una mezcla de
nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas
ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son
esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su
fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad
y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

1. MARCO TERICO
a) Medios de Cultivo
Son sustancias o compuestos nutritivos estriles que permiten el crecimiento y
multiplicacin de los microorganismos en el laboratorio, este medio debe
cumplir una serie de condiciones como son temperatura, grado de humedad,
y presin de oxgeno adecuados, adems de nutrientes y factores de
crecimiento y estar exento de todo microorganismo contaminante con el objeto
de aislar las diferentes especies bacterianas y proceder a su identificacin
mediante estudios complementarios.

b) Clasificacin de los medios de cultivo:

Segn su composicin;
-

Medios empricos.- Extrados de alimentos naturales

Medios semi- sintticos.- Son medios de cultivo empricos
enriquecidos de ciertos compuestos qumicos
Medios sintticos.- Medios qumicamente definidos

Segn su estado fsico: Medios lquidos, medios semislidos (con 0,3 a 0,5%
de agar), medios slidos (con 1 a 2% de agar).
Segn su aplicacin:
-

Medios comunes o simples: permiten el desarrollo de la mayora de

bacterias, sobre todo las no exigentes.

Medios especiales: Medios de enriquecimiento, medios enriquecidos,

medios de conservacin y transporte medios selectivos y medios
diferenciales.

c) Preparacin de medios de cultivo:

Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o
proveedores que suministren productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica
y fisico-qumica adecuada.
Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada
o desmineralizada.
Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su
esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el
fabricante.
Es preciso ejercer un cuidado meticuloso en su preparacin los que
debern ser esterilizados inmediatamente una vez preparados
2

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

Los tubos de ensayo que contienen los medios se tapan con tapones de
algodn o tapas metlicas o plsticas con el fin de evitar la penetracin
de microorganismos extraos, luego se esterilizan Las placas Petri se
esterilizan por separado y luego los medios se vierten aspticamente en
ellas.
d) Almacenamiento de los medios de cultivo

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados

bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en
un lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz solar
directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente
de calor o vapor.

Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos. Cuando los envases

de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se
debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea posible y
mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorcin
de agua produce cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del
polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber
sufrido cambios qumicos o estar contaminados.

Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede

almacenarse a temperatura ambiente por un periodo mximo de 2 semanas
protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15C. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los
mismos, (nunca por debajo de 0C porque se destruye la estructura del gel).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo
preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde
se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia, pH, etc.) y
microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que
cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que
son aptos para su uso.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

2. OBJETIVO:
Prepara y esteriliza diversos medios de cultivo ( PLATE COUNT
AGAR)
Manejar correctamente el autoclave
3.

MATERIALES Y EQUIPOS:
Probetas de 1000 mL y frascos de 250, 500, 1000 mL
Soluciones de NaOH 1N o HCL 1N
Trpodes con rejilla metlica
Tubos estriles y placas Petri estriles ,baguetas ,beakers
Papel indicador de pH
Agar: PLATE COUNT AGAR
Agua destilada

4. PROCEDIMIENTO
Calcular el peso del agar
(PLATE COUNT AGAR ) para
60
mL,
tomando
como
referencia el peso en g para un
litro de agua referidos en las
indicaciones de preparacin.
23.5 g.1000 mL
X ...

60 mL

X = 1.41 g de agar.

En un frasco de vidrio, disolver en agua destilada el agar pesado, segn la

indicacin del envase, luego someterlo a la accin del calor hasta su
completa disolucin y dejar enfriar hasta aproximadamente 50C.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

Luego se mide el pH que debe estar en 7.0 0.2, y se ajusta con NaOH 1N
o HCL 1N.
Tapar el frasco, rotular, sealando el tipo de medio y la fecha de
preparacin.

Luego lavar 3 placas

Petri
con
sus
respectivas
tapas,
ponerlas una sobre
otra y envolverlas en
papel craft atndolas
con
pabilo
y
rotularlas.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

Esterilizar el frasco con el agar y las placas Petri envueltas en autoclave

con calor hmedo a 15 lb de presin por 15 a 20 minutos.

Despus
del
tiempo
transcurrido verter el agar
en las 3 bases de las
placas Petri, lo ms rpido
posible
y
taparlas
inmediatamente, dejarlas
enfriar hasta que el agar
se gelatinice, para luego
ponerlas con la tapa boca
abajo y colocarlas una
encima
de
otra,
envolverlas con papel craft
y atarlas con pabilo y
rotularlas;
luego
se
llevaran a incubacin.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

Cuestionario:

1. Qu importancia tiene el uso de los medios slidos?

Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad. Sopn usados principalmente para el aislamiento de hongos y
bacteria, y para su mantenimiento. Se prepara en frascos, placas Petri y
tubos de ensayo.
2. Qu sustancia es la encargada de solidificar los medios de cultivo slido?
De dnde se extrae?
Los medios slidos tienen generalmente agaragar como agente
solidificante, espesante o gelificante. El agar-agar es una sustancia
hidroflica de carcter coloidalse extrae de diversas especies de algas
marinas Gelidium corneum; gracillaria; gigartina y pterocladia.,
especialmente del gnero Gelidium.
Qumicamente el agar-agar es un polisacrido de cadena larga que se
extrae de las algas por medio del cido sulfrico diluido a una temperatura
de 80 C. dependiendo de su tamao el poder gelificante.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

Fuentes de informacin

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/Medios_de_cultivo