Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
SEGN IUPAC:
del color
estacionaria).
Interacciones de
Cadenas de hidrocarburos
Dbil
Dbil
Dipolares y atracciones
Inducidas por dipolos
Enlaces hidrgeno
Atracciones inicas
nitrgeno
Grupos OH
y NH2
Fuerza moderada
Fuerte
ADSORCIN
La proporcin de la distribucin entre las dos fases luego del
equilibrio se llama coeficiente de adsorcin, el cual disminuye
cuando aumenta la temperatura, menos sustancia es adsorbida
cuando la temperatura se incrementa.
El tiempo de retencin (tR ) disminuir y los valores de Rf aumentarn. La
desorcin es la separacin de las molculas adsorbidas por el adsorbente.
DISTRIBUCIN O REPARTO
Ocurre un reparto mltiple de la muestra entre dos lquidos o fluidos no miscibles por la diferencia de
solubilidad de los componentes en esas fases. (Ley de distribucin de Nernst)
La fase estacionaria es siempre un lquido inmovilizado de algn modo y la fase mvil puede ser un
lquido o un gas, que la atraviesa con un gran rea de interfase.
C1
C2 : Conc. en fase 2
= k
C2
Ce
=k
C1 : Conc. en fase 1
Cm
INTERCAMBIO INICO
La FE es una matriz porosa, llamada resina, es un polmero con grupos portadores de
carga elctrica positiva o negativa a la cual estn enlazados los ligandos y a travs de la
cual pasa la fase mvil, la FE retiene el soluto inico pero de signo opuesto, se
intercambia por un proceso irreversible con iones de la FM.
Se denomina intercambio aninico si el analito tiene carga negativa y catinica si tiene
carga positiva.
R+X-
A-
R+A-
X-
C+ R-C+
X+
Resina intercambiadora
aninica
R-X+
Resina intercambiadora
catinica
FILTRACIN EN GEL
Es llamada tambin Cromatografa de permeacin en gel y se basa en la diferencia de tamao
molecular, se usa para compuestos de PM > 2000.
La FE consiste de un fluido contenido dentro de una matriz polimrica tridimensional y porosa
(gel) , cuyos poros no son mayores que un determinado tamao.
Los poros resultan de la formacin de enlaces cruzados formados por una reaccin
qumica entre la cadena del polmero y un reactivo puente, el tamao de los poros puede
disminuirse , incrementando el nmero de enlaces cruzados.
La FM es el fludo que est fuera de la matriz del gel. Las molculas ms grandes de las
sustancias son incapaces de ingresar a los poros y son eluidas primero y las ms
pequeas son retenidas dentro de los poros del gel, requiriendo ms tiempo y solvente
para ser eluidas .
El lmite de exclusin es el tamao mximo de una molcula ( peso molecular), que puede ser
retenida en los poros del gel .
FILTRACIN EN GEL
BioGel
Sephadex
Cdigo
P-60
P-100
P-200
P-300
G-50
G-100
G-150
G-200
Rango de Fraccionamiento
(kDa)
3-60
5-100
30-200
60-300
2-30
4-150
5-300
5-600
Flujo mximo
(cm/hr)
5
5
4
3
5
5
3
2
AFINIDAD
AFINIDAD O BIOAFINIDAD
MODALIDADES DE CROMATOGRAFA
CROMATOGRAFA DE FASE NORMAL
La fase estacionaria es de naturaleza fuertemente polar o hidroflica: slice, almina y la fase mvil es apolar ( hexano,
cloroformo, etc )
Las muestras polares quedan retenidas ms tiempo que las menos polares; es un mtodo apropiado para solutos de
alta y mediana polaridad o para separar ismeros de posicin.
En el mecanismo de separacin pueden ocurrir : Interaccin dipolo dipolo, interacciones de puente hidrgeno,
transferencia de carga.
FASE LIGADA
La fase ligada est formada por un material de base: slicagel, almina, agarosa
copolmero de estireno, que se une qumicamente a un compuesto con un grupo funcional
determinado.
La unin ms frecuente es un enlace covalente tipo siloxano (Si - O - R). Hay tambin
en solventes alcalinos.
Su mecanismo de retencin ocurre por la interaccin entre el soluto y la fase ligada, que
puede ser:
Particin: del soluto con FM y FE lquidas
Adsorcin: interaccin con la FE slida
Mixto: particin y adsorcin.
TCNICAS CROMATOGRFICAS
Cromatografa Planar
Se presenta cuando la fase estacionaria est colocada en una superficie plana tridimensional,
aunque una de sus dimensiones es muy reducida, se considera que es bidimensional.
Puede ser:
Cromatografa de Capa fina (Thin Layer Chromatography, TLC)
Cromatografa de Alta Performance en Capa Fina ( High Performance Thin Layer Chromatography,
HPTLC)
Cromatografa en Papel, CP
El flujo de la fase mvil puede ser por capilaridad ( C. horizontal y ascendente) o por capilaridad y
Gravedad (C. descendente).
Puntiforme
Banda
Cualitativa
x
Identificacin
Pureza
x x
Ausencia
Preparativa
Cuantitativa
x x
TLC o CCD
TLC (Rf)
TLC
HPTLC
CROMATOGRAFA EN PAPEL
EMPAQUETADO
COLUMNA
CROMATOGRAFA EN COLUMNA
APLICACIN
MUESTRA
LECHO
CROMATOGRFICO
f. estacionaria
COLUMNA
MUESTRA
EMPAQUETADO
COLUMNA
FLUJO
gravedad
DIFUSIN
llave
SEPARACIN
CROMATOGRAFA EN COLUMNA
PERFIL DE ELUCIN
FRACCIONES
ANLISIS DEL
CONTENIDO DE LAS
FRACCIONES
Espectrofotomtrico
Abs 280nm Protenas
Otras Abs - Colorantes
Molc. distribuida
en f.mvil
fraccin
ETAPAS DE LA CROMATOGRAFA
EN COLUMNA
columna
ELUATO
(sale)
(proceso de ELUCIN
Flujo: mide la velocidad de la fase mvil, se expresa como gasto
en volumen ( ml disolvente/minuto de recorrido de la columna)
o gasto lineal (cm de recorrido/minuto)
CROMATOGRAMA: Grfica que expresa la respuesta del detector
en funcin del tiempo de elucin
Limitaciones de la cromatografa en
Columna abierta
Descubrimientos que
facilitaron la HPLC
Sntesis
de resinas incompresibles
Nuevas tcnicas en el empaque de
las columnas
Microparticulacin de las resinas
Adelantos en la tecnologa
espectrofotometrica
INSTRUMENTACIN
Tamao
partculas (m)
MP
P (Bar)
Tiempo
(min)
Cromatografa
en Columna
63 - 200
64
CC Flash
40 63
40 mg 2,5 g
0,75
09
CLBP
50 - 120
10 mg 1 g
1 - 10
15 - 20
12
12
25 - 40
100 mg - g
12 15
500 mg g
150
HPLC
semiprep
10
1 50 mg
400
HPLC anal
g a 1 mg
20
10
1,5 - 3
1000