PRACTICA N 6

ANLISIS FARMACOGNSTICO Y TAMIZAJE FITOQUMICO PRELIMINAR EN

EXTRACTOS ESTANDARIZADOS (EXTRACTO ETANLICO)
MTODO DE SEPARACIN Y PURIFICACIN DE DROGAS VEGETALES
(CROMATOGRAFA EN CAPA FINA)

MARCO TEORICO
La cromatografa en capa fina (en ingls thin layer chromatography o TLC) es una
tcnica analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica
Orgnica. Entre otras cosas permite: Determinar el grado de pureza de un
compuesto. Se puede determinar as, por ejemplo, la efectividad de una etapa
de purificacin. Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa
podran ser idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la
misma sustancia. Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar
cmo desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo que
es lo mismo, saber cundo la reaccin ha acabado. La muestra a analizar se
deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico o aluminio que
previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que contiene
uno o varios disolventes mezclados (eluyente o fase mvil). A medida que la
mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente.
Determinacin del Rf.- La retencin se puede explicar en base a la competencia
que se establece entre el soluto a separar y la fase mvil por adsorberse a los
centros activos polares de la fase estacionaria. As, las molculas de soluto se
encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce la
elucin van siendo desplazadas por la fase mvil. La retencin y la selectividad en
la separacin dependen de los valores respectivos de las constantes de los
diferentes equilibrios qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de: la
polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza de los grupos
funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn ms retenidos puesto
que se adsorben ms firmemente a los centros activos de la fase estacionaria,
mientras que los no polares se eluirn con mayor facilidad. La naturaleza del
disolvente. As, para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad del

disolvente facilita su desplazamiento en la placa. La relacin entre las distancias

recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa se conoce
como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones
cromatogrficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la cubeta,
temperatura, etc.). Debido a que es prcticamente imposible reproducir
exactamente las condiciones experimentales, la comparacin de una muestra con
otra debe realizarse eluyendo ambas en la misma placa. Para calcular el Rf se
aplica la siguiente expresin: Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) /
distancia recorrida por el eluyente (Y) La distancia recorrida por el compuesto se
mide desde el centro de la mancha. Si sta es excesivamente grande se obtendr
un valor errneo del Rf.

COMPETENCIAS:
Realizar el Tamizaje Fitoqumico en el extracto etanlico de la especie a
investigar.
Realizar el anlisis cualitativo mediante mtodo de separacin:
Cromatografa en Capa Fina.

MATERIALES:
Extracto etanlico de la Especie vegetal a investigar.
Reactivos para el anlisis cualitativo (Tamizaje Fitoqumico).
Reactivos para el anlisis cualitativo (Cromatografa en Capa Fina.
PROCEDIMIENTO:
Obtencin de la muestra madre.

CROMATOGRAFIA
1.- Extraer la muestra madre del extracto etanlico.

2.- Agregar al tubo de ensayo 1ml de acetato de etilo a la muestra problema.

3.- Calentar el capilar estirndolo de ambos lados para obtener la forma de un

lpiz en la parte media del capilar.

4.- En una placa cromatografica marcar en la parte inferior y superior un

centmetro en ambos bordes.
5.- En la parte izquierda inferior sembrar la muestra problema 30 veces.

6.- En la parte derecha inferior sembrar el patrn.

7.-Llevar la placa cromatografica a una cuba cromatografica, la cual la cuba

contiene 2ml de benceno y 1ml de acetato de etilo= 3ml

8.- Esperar a que suba la muestra problema y el patrn hasta la altura marcada sin
sobrepasar la lnea imaginaria.

9.Luego
de yodo la
Para
ello

revelar
placa
calentar

con los vapores

cromatografa.
en el mechero.

10.- Calcular el Rf: La

distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha Rf =

distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el eluyente (Y).
11.- Repetir el mismo procedimiento con los siguientes reactivos:

Fehling
FeCl3
Gelatina
Shinoda
Ninhidrina
Dragendorff
Borntrager
Lieberman- Burchard