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UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

“EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE UN GEL A BASE DEL


EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS DE Senna
multiglandulosa (MILLHUA TANQUISH) EN RATAS”

Tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico y


Bioquímico

TESISTAS

BR: José Adolfo Coronel Silva


BR: Gabriela Zuñiga Trucios.

ASESOR:
Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera

25 de julio del 2017

Lima – Perú
2017
DEDICATORIAS

A Dios por darme la vida, por mantenerme en este camino, por darme las
fuerzas en todo momento y de esta manera cumplir con éxito mis objetivos
planteados en esta etapa de mi vida.

A mi novia Breny, por su apoyo incondicional y por estar siempre presente en


este recorrido académico y arduo trabajo para alcanzar mi meta.

A mis padres Consuelo y Felix, también a mis hemanos(as), por depositar su


confianza en mí, por sus sabios consejos, por sus ejemplos de responsabilidad
y valores.

José Adolfo

El presente trabajo es dedicado a DIOS por mantenerme bien de salud y darme


las fuerzas necesarias para continuar con mi mayor objetivo.

A Mi novio Kevin por ser mi fuente de inspiración por estar conmigo en todo
momento brindándome apoyo, fuerza y por sus sabios consejos.

A mis hermanos, por ser el primer cimiento para mi vida profesional Pedro,
Cesar, Yesica, Nataly, Jhonny.

Gabriela
AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Inca Garcilaso de la Vega, por darme la oportunidad para


desarrollar mis capacidades, adquirir nuevos conocimientos, formarme
profesionalmente y también como persona; así mismo a todos los docentes de
la Facultad de Farmacia y Bioquímica que durante mi vida estudiantil supieron
entregarme sus sabios conocimientos y consejos.

A nuestro asesor de Tesis Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera, por su valioso
apoyo, orientación y generosidad; por compartir su experiencia para desarrollar
y culminar el presente trabajo.

Al Prof. Gilmer Soliz Sánchez, Dr. Q.F. Orlando Oscar Acosta Cornejo, Q.F.
Carlos Cano Pérez, Dra. Lidia Edith Goicochea Samanez; por su gran apoyo
invalorables consejos y orientación que permitieron la realización del presente
trabajo.

A todos nuestros amigos por su amistad, y por acompañarnos durante toda la


carrera profesional, mil gracias.

Gabriela y José Adolfo


RESUMEN

Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” es una planta nativa, utilizada en


medicina tradicional por sus beneficios en la salud. En el presente trabajo de
investigación se evaluó la actividad antiinflamatoria del gel a base del extracto
etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”
procedente de Huancayo distrito de Viquez. Se determinó los metabolitos
secundarios mediante la marcha fotoquímica; se obtuvo: flavonoides, taninos,
alcaloides glicosidos, quinona. Luego se efectuó el screening cromatografico,
para posteriormente realizar las lecturas al espectrofotómetro se determinó los
siguientes compuestos químicos: 6-hidroxi-4',5'7-trimetoxiflavona, 5-hidroxi-
3',4',7-trimetoxiflavonol, 4',5-dihidroxi-3',5',7-trimetoxiflavonol, 3',7-dihidroxi-4',6-
dimetoxiaurona. Para la investigación farmacológica tópica, se preparó un gel
base, al cual se le añadió concentraciones del extracto al 1, 3 y 5 por ciento,
como referencia se utilizó Diclofenaco (gel) al 1 por ciento. En el experimento
se usó ratas machos de 300 g ± 50 g. La técnica para inducir a la inflamación
fue edema plantar inducido con carragenina al 1 por ciento. En las condiciones
experimentales realizadas se demostró que el gel a base del extracto etanólico
de hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” posee efecto
antiinflamatorio, además se evidenció que el extracto puro y la concentración al
5 por ciento, presentó un mejor comportamiento antiinflamatorio a lo largo de
todos los momentos de tiempo comparado con el control (+).

Palabras Clave: Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”; Actividad


antiinflamatoria.
ABSTRACT

Senna multiglandulosa "Millhua tanquish" is a native plant, used in traditional


medicine for its health benefits. In this research, the antiinflammatory activity of
the gel based on the ethanolic extract of Senna multiglandulosa leaves "Millhua
tanquish" from Huancayo district of Viquez was evaluated. Secondary
metabolites were determined by phytochemical gait; was obtained: flavonoids,
tannins, alkaloids glycosides, quinone. The following chemical compounds were
determined: 6-hydroxy-4',5',7-trimethoxyflavone, 5-hydroxy-3',4',7-
trimethoxyflavolol, 4',5'-dihydroxy-3',5',7-trimethoxyflavolol, 3',7-dihydroxy-4',
6-dimethoxyuronone. For the topical pharmacological investigation, a base gel
was prepared; to which concentrations of 1, 3 and 5 percent extract were added
as reference, 1 percent Diclofenac (gel) was used as reference. In the
experiment, male rats of 300 g ± 50 g were used. The technique to induce
inflammation was plantar edema induced with 1 percent carrageenan. In the
experimental conditions, it was demonstrated that the gel based on the
ethanolic extract of Senna multiglandulosa leaves "Millhua tanquish" has anti-
inflammatory effect, in addition it was evidenced that the pure extract and the
concentration at 5 percent, showed a better anti-inflammatory behavior
throughout Of all time points compared to the control (+).

KEY WORDS: Senna multiglandulosa "Millwa tanquish"; Anti-inflammatory


activity.
ÍNDICE

Dedicatoria

Agradecimiento

Índice de Tablas

Índice de Figuras

Índice de Anexos

Resumen

Abstract

Pag

Introducción 1

CAPÍTULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 2

1.1. Descripción de la realidad problemática 2

1.2. Formulación del problema 3

1.2.1. Problema general 3

1.2.2. Problemas específicos 3

1.3. Objetivos de la investigación 4

1.3.1. Objetivo general 4

1.3.2. Objetivos específicos 4

1.4. Justificación de la investigación 4

1.5. Limitaciones de la investigación 6

CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO 7

2.1. Estado del arte nacionales y extranjeros 7

2.2. Antecedentes de la investigación 10

2.2.1. Antecedentes nacionales 10

2.2.2. Antecedentes extranjeros 13


2.3. Bases legales 15

2.3.1. Normas nacionales 15

2.3.2. Normas extranjeras 15

2.4. Bases teóricas 15

2.4.1. Descripción general de la planta 15

2.4.2. Distribución botánica 16

2.4.3. Identificación taxonómica 16

2.4.4. Descripción física de la planta 16

2.4.5. Propiedades curativas 17

2.4.6. Metabolitos secundarios 17

2.4.7. Tipos de metabolitos secundarios básicos 17

2.4.8. Registro de campo (ubicación geográfica) 19

2.4.9. Cromatografía de capa fina 23

2.4.10. Prueba de Edema Plantar en ratas inducido por 24


Carragenina
2.4.11. Reformulación de formas farmacéuticas de aplicación 26
tópica con efecto antiinflamatorio
2.4.12. Farmacología Dermatológica 28

2.4.13. Lineamientos generales para el tratamiento por vía 28


tópica
2.4.14. Drogas tópicas Cutáneas 29

2.4.15. Inflamación 30

2.4.16. Antiinflamatorios 35

2.4.17. Ratas (rattus norvegicus) 37

2.4.18. Instrumento de medición (vernier digital) 37

2.5. Formulación de hipótesis 38

2.5.1. Hipótesis general 38

2.5.2. Hipótesis específica 38


2.6. Operacionalización de variables e indicadores 38

2.6.1. Variables 38

2.6.2 Dimensiones 39

2.6.3 Indicadores 39

2.7. Definición de términos básicos 40

CAPÍTULO III: METODOLOGÍA 42

3.1. Tipo y diseño de la investigación 42

3.2. Población y muestra 42

3.2.1. Población 42

3.2.2. Muestra 42

3.2.3. Técnicas e instrumentos de recolección de datos 43

3.2.4. Descripción de instrumentos 43

3.2.5. Validación de instrumentos 43

3.2.6. Técnicas de procesamiento de datos y análisis 44


estadístico

3.3 Equipos, materiales y reactivos 45

3.3.1 Material biológico 45

3.3.2. Material de vidrio y otros 45

3.3.3. Equipo e instrumentos 45

3.3.4. Reactivos 45

3.4 Procedimientos experimentales 46

3.4.1. Recolección 46

3.4.2. Obtención del extracto etanólico 46

3.4.3. Marcha de solubilidad 46

3.4.4. Tamizaje fitoquímico 47

3.4.5. Screening cromatográfico 49


3.4.6. Elaboración del gel 53

3.4.7 Evaluación de actividad antiinflamatoria (método del 55


edema plantar).

CAPÍTULO IV: RESULTADOS y DISCUSIONES 58

4.1. Procesamiento de datos: Resultados 58

4.1.1. Identificación de metabolitos secundarios 58

4.1.2. Lectura al espectrofotómetro 60

4.1.3. Prueba de hipótesis efecto antiinflamatorio 63

4.2. Discusión de los resultados 85

4.2.1. Evaluación de la inflamación 85

4.2.2. Identificación de metabolitos secundarios 87

CAPÍTULO V: CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 90

5.1. Conclusiones 90

5.2. Recomendaciones 91

Referencias bibliográficas 92

Anexos

Anexo 01: Matriz de consistencia

Anexo 02: Matriz de operacionalización de variables

Anexo 03: Formulación del problema de investigación

Anexo 04: Análisis del problema de investigación

Anexo 05: Instrumento de recolección de datos.

Anexo 06: Juicio de expertos.


Anexo 07: Matriz de Validación por Juicio de Expertos.

Anexo 08: Materia prima

Anexo 09. Obtención del extracto

Anexo 10: Tamizaje fotoquímico del extracto de hojas DE Senna


multiglandulosa), Millhua tanquish

Anexo 11: Separación de metabolitos secundarios

Anexo 12: Elaboración del gel

Anexo 13. Evaluación de la actividad antiinflamatoria del gel de


extracto de hojas de Senna multiglandulosa), Millhua tanquish

Anexo 14. Espectrofotometría UV/Vis

Anexo 15. Clasificación taxonómica de “Millhua tanquish”


ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 01.- Marcha de solubilidad del extracto seco de hojas de Senna 58


multiglandulosa “Millhua tanquish”.
Tabla 02.- Screening Fitoquimico del extracto seco de hojas de Senna 59
multiglandulosa “Millhua tanquish”.
Tabla 03.- Análisis de la distribución de la magnitud en mm. de 65
inflamación para cada tratamiento evaluado
Tabla 04.- Distribución de las medidas en mm de la magnitud 68
inflamación según tratamiento evaluado en ratas
Tabla 05.- Análisis de la distribución de la magnitud en mm de 71
inflamación en cada momento de evaluación
Tabla 06.- Distribución de las medidas de la magnitud en mm de 73
inflamación en los momentos de evaluación en ratas
Tabla 07.- Evaluación del modelo de Análisis de Varianza (ANOVA) de 76
medidas repetidas de dos factores de la magnitud de la
inflamación en ratas.
Tabla 08.- Medias de la magnitud en mm de inflamación según 76
tratamiento evaluado y momento de evaluación
Tabla 09.- Comparación post-hoc de las medias de la magnitud en mm 77
de inflamación entre momento de evaluación y según
tratamiento evaluado en ratas.
Tabla 10.- Comparación post-hoc de las medias de la magnitud en mm 78
de ancho inflamación entre tratamiento a evaluar y
momento de evaluación en ratas
Tabla 11.- Análisis de la Aceptación de la Hipótesis General como 84
Respuesta Inductiva a los Resultados Estadísticos de sus
Hipótesis Específicas.
ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 01.- Estructura química del flavonoide; 6-hidroxi-4´,5´7-


60
trimetoxiflavona.

Figura 02.- Estructura química del flavonoide; 5-hidroxi-3´,4´,7- 61


trimetoxiflavonol.

Figura 03.- Estructura química del flavonoide; 4´,5-dihidroxi-3´,5´,7- 61


trimetoxiflavonol.

Figura 04.- Estructura química del flavonoide; 3´,7-dihidroxi-4´,6- 62


dimetoxiaurona.

Figura 05.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 66


ante la exposición a control (-).

Figura 06.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 66


ante la exposición a control (+).
Figura 07.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 66
ante la exposición a Extracto al 1%.
Figura 08.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 67
ante la exposición a Extracto al 3%.
Figura 09.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 67
ante la exposición a Extracto al 5%.
Figura 10.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 67
ante la exposición a Extracto Puro.
Figura 11.- Gráfico de caja y bigotes de la magnitud inflamación según 69
tratamiento evaluado en ratas.
Figura 12.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 71
a las 2 horas.
Figura 13.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 71
a las 3 horas.
Figura 14.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 72
a las 6 horas.
Figura 15.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 72
a las 18 horas.
Figura 16.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación 72
a las 21 horas.
Figura 17.- Gráfico de caja y bigotes de la magnitud de inflamación en 73
los momentos de evaluación en ratas
Figura 18.- Gráfico de dispersión de medias de la magnitud de 83
inflamación entre tratamiento evaluado y según momento
de evaluación en ratas
INTRODUCCIÓN

En la actualidad se utiliza las plantas como medicina para curar distintas


enfermedades principalmente en la zona rural, resaltando de esta manera
como el principal recurso terapéutico de la humanidad, en su búsqueda de
mejorar la terapia se han realizado valiosas investigaciones como resultado se
ha obtenido fármacos de fuentes naturales.

El creciente auge de la fitoterapia ha permitido el empleo de extractos de


plantas medicinales en el tratamiento de diferentes patologías de la piel, unas
veces como excipientes emolientes o demulcentes incluidos en formulaciones
farmacéuticas, y otras aportando directamente sustancias farmacológicamente
activas. (1) Por ello es importante la contribución en el incremento del
conocimiento sobre formulaciones que incorporen activos-sustancias, extractos
provenientes de plantas medicinales (2). Es muy importante realizar este tipo
de trabajos, en torno al aprovechamiento de los metabolitos secundarios de las
plantas, y así darle un carácter más científico a nuestra medicina tradicional.
Además, hay muchas plantas que requieren nuestra atención que no han sido
estudiadas por completo, se ignoran por completo su actividad terapéutica
principal (3). La finalidad de esta investigación se basa en la necesidad actual
de dar soluciones a los procesos de inflamación que son muy comunes en
nuestro medio, de tal forma reducir los efectos adversos que producen los
medicamentos.
En esta investigación se experimentó en vivo el efecto antiinflamatoria del gel a
base del extracto de hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”,
mediante el test de edema inducido con carragenina al 1 por ciento, en
modelos biológicos (ratas), con el objetivo de buscar una eficiencia
antiinflamatoria del fitofármaco a diferentes concentraciones, e identificación los
metabolitos secundarios con mayor presencia en el extracto.

pág. 1
CAPITULO I

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 Descripción del problema.

El Perú posee una diversidad de plantas medicinales por el cual es


importante evaluar sus efectos terapéuticos, en la costa, sierra y selva
existen vegetales que contienen sustancias de valor medicinal aún
por descubrir, variedades de plantas por analizar con posibles efectos
farmacológicos que son de gran importancia para nuestra sociedad.

Un tejido lesionado ya sea por acción de bacterias, traumatismo u


otros factores, provocan la inflamación que a largo plazo puede ser
dañina, es necesario de manera inmediata tratarlo, los medicamentos
comúnmente más utilizados para aliviar y tratar las inflamaciones
externas son de aplicación tópica los cuales son más rápidos y
efectivos.

Los antiinflamatorios son medicamentos más utilizados a nivel


mundial, también son causantes de lesiones gástricas debido al uso
prolongado vía oral, además los medicamentos sintéticos tienen
efectos adversos que pueden causar problemas graves al
consumidor, es un problema que nos induce a buscar alternativas y
obtener un producto natural para tratar dichas patologías.

“Senna multiglandulosa” Millhua tanquish, es utilizado de forma


tradicional, en esta búsqueda por resaltar sus beneficios encontramos
que existen factores que condicionan su uso, como la falta de

pág. 2
accesibilidad de medicamentos en muchas poblaciones vulnerables
por el incremento de los precios, es allí donde este estudio nos lleva a
tener una alternativa frente a un mercado farmacéutico con altos
precios y que solo se centra en la ciudad. La inflamación es un
problema de salud común y universal.

1.2 Formulación del problema

1.2.1 Problema general.

¿El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna


Multiglandulosa “Millhua tanquish” poseerá efecto
antinflamatorio en ratas?

1.2.2 Problemas específicos.

 ¿Cuál es la actividad antiinflamatoria del gel a base de


extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa
“Millhua tanquish” comparado con Diclofenaco (gel) en
ratas?

 ¿En qué concentración del gel a base de extracto etanólico


de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”
poseerá efecto antiinflamatorio en ratas?

 ¿Qué metabolitos secundarios presenta en mayor


concentración el extracto etanólico de las hojas de Senna
multiglandulosa “Millhua tanquish”?

pág. 3
1.3 Objetivos de la investigación

1.3.1 Objetivo general.

Comprobar el efecto antinflamatorio del gel a base del extracto


etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua
tanquish” en ratas.

1.3.2. Objetivos específicos.

 Comparar la actividad antiinflamatoria del gel a base del


extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa
“Millhua tanquish” con Diclofenaco (gel), en ratas.

 Precisar la concentración del gel a base del extracto


etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua
tanquish” con efecto antiinflamatorio en ratas.

 Identificar algunos metabolitos secundario con mayor


presencia en el extracto etanólico de las hojas de Senna
multiglandulosa “Millhua tanquish”.

1.4 Justificación de la investigación.

En nuestro país siempre ha tenido muy arraigadas sus tradiciones,


entre las cuales destaca el uso de las plantas medicinales con el fin
de restaurar o conservar la salud. Por falto de estudios, la mayoría de
estos conocimientos se trasmitieron de manera empírica, en muchos
casos no hay una base científica que los respalde, ni al cual acceder,
aun la mayoría de las personas que viven en lugares extremos acude
al uso de (extractos naturales) los famosos yerberos.

pág. 4
Con respecto a esto Baez Castillo afirma: “es muy importante realizar
este tipo de trabajos, para que se vaya acabando con la superstición
que siempre ha girado en torno a las plantas, y así darle un carácter
más científico a nuestra medicina tradicional. Además, aún hay
muchas plantas que requieren nuestra atención y que no han sido
estudiadas, se ignora por completo su actividad terapéutica” (5).
Estos estudios son necesarios y beneficiosos para nuestra sociedad,
ayudando a resolver muchos mitos medicinales donde la eficacia de
sus acciones fitoterapéuticas tienen una base científica, llenando el
vacío dejado por generaciones. Según Santamaría C. “Los productos
naturales constituyen un importante campo de la investigación
farmacológica, presentando amplias posibilidades para llegar al
conocimiento de nuevas e interesantes moléculas útiles en el
tratamiento de determinadas patologías” (7).
“Los fármacos antiinflamatorios de uso actual, inducen efectos
secundarios en la mayoría de los pacientes, por ejemplo los AINE
antiinflamatorios no esteroides (al ser administrados por vía oral)
provocan irritación de la mucosa gástrica de diversa severidad,
por lo que es indispensable contar con nuevas alternativas
terapéuticas con efecto antiinflamatorio con menor toxicidad y costo”
(22).
Por estos problemas que existen hoy en día, es importante evaluar el
efecto de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” como
antiinflamatorio, a través de la aplicación tópica de un gel a base del
extracto etanólico de hojas de dicha especie y de esta manera saber
que proporciona una terapia eficaz, segura, accesible, de fácil y
rápida administración.

pág. 5
1.5 Limitación de la investigación.

El estudio se efectuó bajo modelo biológico experimental en ratas


albinas, por lo tanto se sometió al proceso planificado por el
investigador, lo cual permitió comprender mejor el efecto de la terapia
alternativa en el manejo de los cuadros inflamatorios externos.
Concerniente con lo teórico, existen estudios similares que facilitó
desarrollar los objetivos planteados, en cuanto a los recursos
económicos estuvo al alcance del investigador.
Para realizar las actividades experimentales se tuvo acceso al
laboratorio de farmacognosia y química instrumental de la Facultad de
Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica de la Universidad Inca Garcilaso
de la Vega y en el laboratorio de farmacología del bioterio de medicina
de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

pág. 6
CAPITULO II

2. MARCO TEORICO

2.1 Estado del arte nacional y extranjero.

Autores Metodología de la Dificultades identificadas en efecto


investigación antiinflamatorio de un gel a base del
extracto etanólico de las hojas de
Senna multiglandulossa “Millhua
tanquish”.

Sisalema Sánchez, (2013)


Diana Elizabeth Separación
El autor estudió una especie de Senna;
de metabolitos secundarios con actividad antibacteriana. En las
de martin galvis (Senna cuales abarco identificación de
multijuga) con actividad metabolitos secundarios. Uso como
Marcha fitoquímica tratamiento su extracto Sin embargo dio
antibacteriana. resultado, pero no preparo un
fitofármaco.

Vargas, C. (2007) Estudio de


la actividad cicatrizante y
antiinflamatoria del extracto En su investigación de hojas de Senna
alcohólico de las hojas de reticulata , en las cuales administró
Senna reticulata (Willd.) H. Marcha fitoquímica extracto de las hojas, como cicatrizante
Irwin &Barneby (Retama). y antiinflamatorio

Marlon Díaz. (2016)


Evaluación de la actividad
antiinflamatoria de una crema En su trabajo de investigación elaboró
a partir del extracto purificado una crema a partir de un extracto de
de Baccharis tricuneata (L.f.) Marcha fitoquímica Baccharis tricuneata. Pertenece a una
Pers. “taya”. Asociación distinta especie de vegetal. No es
Científica de Investigación Senna.
Farmacéutica.

Ramírez, E. et al. (2014);


realizó una investigación
Marcha fitoquímica
“Actividad antioxidante,
antiinflamatoria e
inmunomoduladora del
extracto clorofórmico de las
El autor administró vía oral su extracto a
hojas de Chuquiraga lessing
las ratas, dando resultado el extracto
“Huamanpinta”.

pág. 7
puro.

Frente a los métodos que adoptan los distintos autores para conseguir los
resultados, cada modelo experimental se basa en un elemento distinto del
proceso; cada modelo experimental es un reflejo de compromisos
académicos diferentes. La existencia de una gran diversidad de especies
vegetales, presentan distintos metabolitos secundarios.

En el presente trabajo de investigación se evaluó la actividad


antiinflamatoria del gel a base del extracto etanólico de las hojas de
Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” procedente de Huancayo
distrito de Viquez.

Palabras Clave: Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”; Actividad


antiinflamatoria.

Es así tras haber realizado una revisión bibliográfica sobre los productos
naturales activos en procesos inflamatorios, se planteó en este trabajo de
investigación demostrar que la aplicación tópica a base de hojas de
Senna multiglandulosa “Millhua Tanquish” en ratas albinos con edema
plantar inducidos por carragenina al 1 por ciento, presenta efecto
antiinflamatorio, analizando diferentes métodos con procedimientos
farmacológicos que corroboren su propiedad antiinflamatoria. A su vez
también conocer en qué vehículo como base podría conformar su
formulación para la elaboración de la aplicación tópica y asimismo
conseguir la dosis eficaz terapéutica, con el único propósito de validar el
uso popular de esta especie nativa; que se presume que por poseer una
variedad de flavonoides junto a otras sustancias activas, se le atribuye la
excelente propiedad antiinflamatoria. La finalidad de esta investigación se
basa en la necesidad actual de dar soluciones a los procesos de
inflamación que son muy comunes en nuestro medio, de tal forma reducir
los efectos adversos que producen los medicamentos, (AINES).

pág. 8
pág. 9
2.2. Antecedentes de la investigación.

Hoy en día se tiene acceso a una innumerable cantidad de información


científica sobre plantas en todo el mundo, sobre el desarrollo de
fitofármacos, que es usado en distintas patologías, así como su análisis
fitoquímico, ha revelado la existencia de infinidad de sustancias que
tienen efectos terapéuticos. Sin embargo aún existe un grupo que no
ha sido estudiado, los cuales necesitan el respaldo científico para
validar su uso terapéutico; es allí donde nace el interés por investigar el
efecto antiinflamatorio de la especie Senna multiglandulosa “Millhua
tanquish”.
Las investigaciones son necesarias para evaluar efectos terapéuticos,
determinar los tipos de constituyentes químicos de la planta, examinar
nuevas estructuras que sirvan como base para nuevos fármacos,
descubrir otros fitofármacos con el fin de salvaguardar nuestra salud.

2.2.1 Antecedentes nacionales

Hoyos V, et al. (2011). En su tesis Doctoral “Diseño de una


formulación de aplicación tópica a base de Baccharis latifolia
(Chilca), con efecto antiinflamatorio.” En su investigación “la
concentración de 2.5 mg/g fue seleccionada para elaborar la
forma farmacéutica del extracto al 2 por ciento, obteniéndose un
crema-gel, fue determinado por cromatografía de columna, utilizó
el método del edema plantar en ratones emplearon la técnica de
edema plantar inducido por carragenina. El efecto antiinflamatorio
del extracto en crema gel fue superior a lo esperado” (2).

Poma E, et al. (2011). En su investigación; “Estudio fitoquímico y


actividad antiinflamatoria de la Annona muricata L. (guanábana)
de Cuzco”. “Indujo a una inflamación por el método del edema
plantar inducido por λ-carragenina; realizó un ensayo preliminar

pág. 10
para determinar la dosis adecuada partiendo de la dosis
tradicionalmente usada, en la localidad de Quillabamba; agrupó
las ratas albinas en 3 grupos: Grupo control: Agar-agar; Grupo
patrón: Indometacina 5 mg/Kg en agar-agar y Grupo droga:
Extracto acuoso de Annona muricata L. La dosis que
administraron es de 1,5 mg/Kg de peso del extracto acuoso de
hojas secas de Annona muricata L. presentó efecto
antiinflamatorio, con eficacia del 53,18% en comparación con la
Indometacina” (10).

Enciso, et al. (2011). En su tesis doctoral “Efecto antiinflamatorio


y antioxidante de los flavonoides de las hojas de Jungia rugosa
Less (matico de puna) en un modelo experimental en ratas”.
Según la tesis doctoral de Enciso, Edwin, se refiere: “Las hojas
de Jungia rugosa Less fueron recolectadas en el cerro
Condorcunca, a 3 500 msnm, distrito de Quinua, departamento de
Ayacucho. La actividad antiinflamatoria fue evaluada in vivo
usando el método de edema plantar inducido por carragenina y en
sangre se cuantifico los niveles séricos de interleuquinas 1, 6 y
proteina C reactiva (PCR); también, se indujo el granuloma, según
Sedwicks, evaluándose por histopatología. La actividad
antioxidante fue evaluada in vitro mediante la neutralización del
radical 1,1-difenil- 2-picril-hidrazilo (DPPH). Principales medidas
de resultados: Actividad antiinflamatoria y antioxidante” (11).

Díaz, M. Et al; (2012); en su investigación, “Evaluación de la


actividad antiinflamatoria de una crema a partir del Extracto
purificado de Baccharis Tricuneata (L.f.) Pers. (Taya)”. “Usó como
inductor aceite de Crotón al 5 por ciento administró 20 μL en la
oreja derecha del ratón; respecto a las cremas y al fármaco de
referencia se administraron 20mg Para ambas muestras de
estudio. El control positivo se administró betametasona al 0.05 por
ciento. Después de 4 horas de tratamiento, por dislocación

pág. 11
cervical se sacrificaron a los ratones, compararon las medidas de
las orejas, la crema tiene actividad antiinflamatoria desde la
mínima concentración al 1 por ciento de 56.38% cuando mayor
sea la concentración mejor es el efecto antiinflamatorio” (12).

Castillo O, et al. (2013), en su investigación “Identificación de


metabolitos secundarios presentes en la planta nativa (Cucharilla)
Oreocallis grandiflora”. Menciona que “para el análisis fitoquímico,
realizó la maceración estática, filtración, evaporación del solvente,
separación de metabolitos secundarios con el uso de la
cromatografía de capa fina y la identificación de componentes
activos, donde el punto de análisis fueron las reacciones de
coloración. Los metabolitos secundarios encontrados en la
determinación cualitativa de la planta nativa “Cucharilla” Oreocallis
grandiflora. Fueron alcaloides, compuestos fenólicos como
catequinas, flavonoides, quinonas, triterpenos y esteroides como
glicósidos cardiotónicos” (13).

Ramírez, E. et al. (2014); en su investigación “Actividad


antioxidante, antiinflamatoria e inmunomoduladora del extracto
clorofórmico de las hojas de Chuquiraga lessing (huamanpinta)”.
Fue evaluada “mediante el modelo biológico de edema suplantar
inducido por carragenina, descrito por Winter. Se emplearon 42
ratas sometidas a ayuno 12 horas antes de iniciar el ensayo, con
libre acceso de agua y distribuidas aleatoriamente en seis grupos
de siete ratas cada uno. Se administraron ibuprofeno 120 mg/Kg y
prednisona 1,2 mg/Kg, como estándares, y el extracto a 100, 200
y 300 mg/Kg de peso. En el porcentaje de inhibición de la
inflamación, se calculó la media de los incrementos de volumen
de cada lote a 0,5; 1; 2; 3; 5 y 7 horas. El extracto presentó la
mayor actividad antiinflamatoria a la dosis de 300 mg/Kg (39,1%)
y 200 mg/Kg de peso (32,7%)” (14).

pág. 12
Churampi, L. et al. (2015); En su investigación; “Evaluación de la
actividad antiinflamatoria del extracto etanólico del fruto de
Passiflora mollissima (kunth) l.h.bailey “tumbo serrano” y su uso
como activo biológico en industria cosmética”. “Indució a la oreja
del ratón con TPA (12-0-temadecanoil forbol-13 acetato) y como
grupo control positivo utilizó indometacina de 500 μg por oreja. El
extracto etanólico del fruto al 20% de Passiflora mollissima
(Kunth) L.H.BaileyTumbo serrano), presenta actividad
antiinflamatoria al administrarse por vía tópica a la dosis de 500 y
1000 μg” (15).

2.2.2 Antecedentes extranjeros

Bas E. (2007), en su investigación. “Mecanismo de acción


antiinflamatoria de 5-O-desmetilnobiletina y derivados del catalpol
en hipersensibilidad retardada”. “Indució a una inflamación aguda
con carragenina y fosfolipasa A2 (PLA2) ya que este es un
agente flogístico que induce inflamación por liberación de
prostaglandinas es clásicamente utilizada por su capacidad de
inducir inflamación aguda, edema, daño a los vasos sanguíneos,
liberación de quininas y por potencializar la endotoxicidad,
generando una Inflamación aguda” (16).

Baez G. (2007), En su trabajo de investigación “Determinación


del efecto antiinflamatorio de los extractos hexánicos, etanólicos y
clorofórmicos de las plantas medicinales: Bursera aloexylon
(etc.)”. Menciona que “el efecto antiinflamatorio se midió en ratas
Wistar con peso de 150g a 200g, usó como inductor carragenina
en la almohadilla plantar trasera derecha (pata problema),
provocando inflamación, y la pata trasera izquierda fue el control,
usó el fármaco indometacina como referencia de antiinflamatorio.
Primero administró por vía oral el extracto y una hora después
inyectó carragenina, la inflamación se midió en un pletismómetro,

pág. 13
realizó seis mediciones desde el tiempo 0 hasta el tiempo 5. Su
resultado se evaluó estadísticamente por análisis de varianza y la
prueba de Dunnett y Fisher. Un valor de p<0.07 se consideró
estadísticamente significativo” (7).
Saudy P. (2011). En su tesis Doctoral “Separación y evaluación
del efecto antiinflamatorio y antioxidante de los flavonoides de
Eysenhardtia polystachya (Ort.)” En su investigación “todos sus
extractos presentaron alcaloides, azúcares reductores, cumarinas,
glucósidos cardiacos, quinonas, saponinas, taninos y flavonoides
(flavonas y flavonoles), el extracto etanólico. Presentó en mayor
concentración y sus resultados demuestran que las fracciones
ricas en flavonoides inducen un efecto antiinflamatorio
probablemente provocado por la inhibición selectiva de la COX-2”
(16).
Son modelos farmacológicos preclínicos que sirven para evaluar
la actividad antiinflamatoria y cuantificar a los flavonoides en
productos naturales, ya que estos datos permiten correlacionarlos
a los flavonoides con su alto potencial en inhibir las inflamaciones.

Matiz E et al. (2011), En su investigación; “Actividad


antiinflamatoria de flores y hojas de Caesalpinia pulcherrima L.
(Swartz)”. En este trabajo “indujeron con el agente irritante
carragenina al 2 por ciento, en la pata trasera derecha. Después
de 3 y 5 horas midieron la inflamación usando un pletismómetro
electrónico, compararon entre la pata tratada y la no tratada.
Edema auricular inducido por TPA. El edema fue medido como la
diferencia de peso entre la oreja tratada y la correspondiente no
tratada. Granuloma inducido por pellet de algodón. Los
granulomas fueron removidos, despojados de tejido suelto,
secados por 48 horas a 40 °C y pesados en balanza analítica. La
diferencia entre el peso del granuloma y el peso original del pellet
(10 mg) se consideró como la cantidad de tejido granulomatoso
formado. Se muestra que todas las fracciones evaluadas inhiben
significativamente la formación de granuloma inducido por el pellet

pág. 14
implantado. De los tres modelos empleados, el edema inducido
por TPA mostró la más clara evidencia de la efectividad contra la
inflamación” (17).

Muñoz A, et al. (2014); en su investigación “Evaluación de la


actividad antiinflamatoria de extractos de “Santa maría” Piper
peltatum mediante el test de edema inducido en ratas (rattus
novergicus)”. Evaluó la actividad antiinflamatoria del extracto de
“Santa María” Piper peltatum a dosis de 1 mg/Kg, 2 mg/Kg, 3
mg/Kg de peso, mediante el edema plantar en ratas inducido por
carragenina al 0.05 por ciento. Al realizar la comparación de
medias mediante el análisis de varianzas se encontró que existe
una diferencia estadísticamente significativa entre los grupos
tratados y el grupo control” (18).

2.3 Bases legales

2.3.1. Normas nacionales


LEY Nº 26842, ley general de la salud
LEY N° 30407, Ley de protección y bienestar animal; articulo 25.

2.3.2. Normas extranjeras


México: Ley general de salud, Última Reforma DOF 27-01-2017
México: Decreto ley de protección a los animales del distrito
federal; articulo 4.

2.4. Bases teóricas

2.4.1 Descripción general de la planta.


Senna multiglandulosa conocida popularmente con el nombre
“Millhua Tanquish” es una planta americana con escasos registros
de uso medicinal e investigaciones farmacológicas; razón por la

pág. 15
cual es de interés, con el fin de demostrar la actividad
farmacológica contra afecciones inflamatorias. Es una especie de
planta con flores perteneciente a la familia de las leguminosas
conocida por varios nombres comunes, incluyendo glandular
Senna, suave Senna y arbusto del ranúnculo. Es originaria de
América, pero es ampliamente cultivada como planta ornamental
en otras partes del mundo. (19)

2.4.2 Distribución botánica.


Arbusto reportado desde México. En el Perú localizado en toda la
sierra desde Cajamarca hasta Puno. Frecuente en la sierra central
y en menor grado en el Valle del Mantaro.
Afirma Antonio Brack como sinónimo de la especie: Cassia
tomentosa L y como nombres comunes: Huashlla, Mutuy. Así
mismo su distribución es desde América Central hasta Bolivia,
Chile y en nuestro país se encuentra en la sierra entre 2300 y
4000 msnm. Habita en climas semiseco y templado, asociada a
vegetación perturbada de pastizal, matorral xerófilo, bosque de
encino y de pino (20). El crecimiento de la planta se da sin
necesidad de sembrío, ya que crece espontáneamente a las
condiciones dadas.

2.4.3 Identificación taxonómica.


 Reino: Plantae
 División: Magnoliophyta
 Clase: Magnoliopsida
 Subclase: Rosidae
 Orden: Fabalaceae.
 Familia: Fabaceae.
 Género: Senna.
 Especie: Senna multiglandulosa.

2.4.4 Descripción física de la planta.

pág. 16
Es un árbol o arbusto de 1 a 4 m de altura. Las hojas están
divididas como si fueran plumas, con muchos pelillos en el
anverso, de forma ovalada. La inflorescencia es un racimo de
varias flores, cada una con cinco pétalos de color amarillo, de
medición de 1 a 2 centímetros de largo. Sus frutos son vainas
casi cilíndricas, comprimidas y con pelillos, densamente provisto
de follaje y usualmente muy ramificado desde la base. Su tallo
fuerte corto, irregular, nudoso y corteza agrietada de color
marrón claro (20).

2.4.5 Propiedades curativas.


La parte más empleada es la flor. En infusión y tomada como té
se le utiliza contra la tos; si se le agrega un pedazo de acitrón,
queso de tuna, vino tinto y mezclar se usa para aliviar los cólicos
menstruales fuertes e inflamación de vías urinarias. Las hojas
preparadas en infusión y bebida en té se ocupan para tratar las
amebas (20).

2.4.6 Metabolitos secundarios.


Los metabolitos secundarios son también llamados Productos
Naturales, no son universales, cada planta en sus distintos
órganos (flor, hoja, tallo, raíz) tiene diferentes tipos de
compuestos químicos con actividad terapéutica, cosmética u
astríngete, las plantas son auto constructoras de su propio
alimento mediante la fotosíntesis. (21)

2.4.7 Tipos de metabolitos secundarios Básicos.


Los metabolitos secundaros de acuerdo a sus grupos
funcionales se clasifican en tres partes, los cuales son:
terpenoides y esteroides, compuestos fenólicos y alcaloides. (21)

a. Compuestos Terpenoides y esteroides.

pág. 17
“Al hablar de Terpenoides se refiere a un grupo de substancias
que tienen un origen biosintético común y que siguen la llamada
regla del isopreno esbozada por Wallach en 1886.
La unidad fundamental que define estos esqueletos contiene
cinco átomos de carbono múltiplo;(hidroxilos, cetonas,
aldehídos) y se la conoce como isopreno” (21).

Triterpenos: “están compuestos por 30 carbonos, derivan del


escualeno, su estructura es compleja en su estructura contienen
(cetona o aldehído) se encuentran con mayor frecuencia como
glicocidos y saponinas” (21).

Esteroides: “Son sólidos forma una solución jabonosa no son


fáciles de aislar” (21).

b. Compuestos fenólicos.
“Son polares y solubles en agua, son detectados después de
que se diluye con alcohol al 1 por ciento cloruro férrico por la
presencia del color verde, purpura, azul o negro, Su origen
aromático permite una intensa absorción en la región UV del
espectro siendo este método muy importante para su
identificación” (21).

Flavonoides: conocidas con el nombre de antotaxinas, son


ampliamente citadas científicamente. Se conoce como diez
clases de flavonoides, todos contienen quince átomos de
carbonos en su núcleo básico, C6-C3-C6, Las antocianinas
pertenecen a los flavonoides sin embargo son estudiadas por
separado. Cada flavonoide se encuentra en forma de glicósidos
(glucosa, galactosa, xilosa y arabinosa;) están unidos como una
misma aglicona en diferentes partes y presentando con mayor
posición el número glicósidos conocidos; derivan del 2-
fenilcromano, su estructura base (benzopiran-4-ona con un
sustituyente aromático en el carbono). Se clasifican por su

pág. 18
estructura química (flavonas, flavonoles, flavanonas,
dihidroflavanoles, isoflavonas, chalconas y auronas),
antocianinas. Dan coloración a las flores y frutos. (21) (37)

 Actividad Farmacológica de flavonoides.


Tienen propiedades y actividades antiinflamatoria en mayor
concentración, antioxidante, antialérgica, hepatoprotectora,
antitrombótica, antiviral y anticarcinogénica. Estas propiedades
han sido empleadas en medicina tradicional como en la
industria, demostrándose in vitro el efecto de los flavonoides
sobre diferentes mediadores y enzimas pro inflamatoria. Existen
pruebas de su efecto de los flavonoides en la producción de
mediadores inflamatorios a través de la inhibición de enzimas
implicados en el metabolismo del ácido araquidónico, así como
en la producción de óxido nítrico. En los últimos tiempos se ha
afianzado el hecho de que los flavonoides son capaces de
modular la supresión de genes proinflamatorios (1) (37).

 Cuantificación de flavonoides totales.


La espectroscopia UV ha llegado a ser la mejor técnica para
determinar su estructura de los flavonoides por dos principales
razones: Requiere sólo una pequeña cantidad de sustancia pura.
La información estructural obtenida de un espectro UV se
incrementa por el uso de reactivos de desplazamiento que
reaccionan con uno o más grupos funcionales del núcleo
de los flavonoides. La adición de cada uno de los reactivos por
separado a una solución alcohólica de los flavonoides induce
cambios estructuralmente significativos en el espectro UV.
(23)
C. Alcaloides:

pág. 19
Son compuestos fisiológicamente activos, son muy
heterogéneos, su característica principal es que posee
nitrógeno, además de ello los alcaloides provienen de los
aminoácidos (21).

2.4.8 Registro de campo (ubicación geográfica).


Senna multiglandulosa. “Millhua tanquish”. Se recolectó en el
Departamento de Junín, Provincia de Huancayo, Distrito de
Víquez, en el mes de julio del 2016 a una altitud de 3650 msnm.
Se realizó el estudio respectivo en el Laboratorio de Fitoquímica
de la Facultad de Ciencias Farmacéutica y Bioquímica en la
Universidad Inca Garcilaso de La Vega, así mismo también en
su laboratorio de farmacología del bioterio de medicina de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

a. Métodos de extracción.
Extracción por maceración y la percolación o lixiviación son los
más utilizados y reconocidos en el área de fitoquímica (21).

Maceración: El órgano (hojas, flores y tallos); triturado se pone


en un solvente etanólico o hidroalcóholico, se guarda en un
frasco de 2-14 días; puede agitarse constantemente. La mezcla
es filtrada para obtener una mayor concentración de soluto (21).

Percolación o lixiviación: el órgano residual es prensada y el


fluido obtenido es combinado con el percolado para concentrar
el extracto (21).

C. Clasificación de extractos vegetales.

Dependiendo al concentrado de los extractos, se clasifican en


(Extractos líquidos, Extractos semisólidos o blandos, Extractos
secos) (21).

pág. 20
d. Preparación de extractos.

Es importante establecer los parámetros de extracción para


lograr la estandarización del proceso ya que garantizará la
calidad, rendimiento, seguridad y eficacia del producto medicinal.
Naturaleza química de la materia prima vegetal: conocer las
características del metabolito o compuesto químico a extraer (4).

e. Especificaciones de calidad de la droga vegetal.

Entre las especificaciones de calidad exigidas para la evaluación


de materias primas vegetales con fines medicinales se
encuentran: Características macroscópicas (forma, tamaño,
caracteres superficiales, textura y fractura) (24).

f. Concentración de extractos.

Este proceso se hace con presión disminuida baja temperatura


para la salida del solvente se emplea el rota vapor como una
alternativa, para realizar este tipo de trabajo en el laboratorio y
es ampliamente usado mientras que sistemas análogos se
utilizan a escala industrial (evaporadores, condensadores) (21)
(24).

g. Tamizaje fitoquímico.

Determinar cualitativamente los principales grupos químicos


presentes en una planta y a partir de allí, orientar la extracción
y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los
grupos de mayor interés. El tamizaje fitoquímico consiste en la
extracción de la planta con solventes apropiados y la aplicación
de reacciones de color y precipitación. Debe de permitir la
evaluación rápida, con reacciones sensibles, reproducibles y de
bajo costo (21).

pág. 21
g.1 Metodología en el análisis fitoquímico.

Un análisis fitoquímico debe comprender cuatro etapas bien


definidas:

Recolección y clasificación botánica de la especie en estudio.


Extracción, separación y purificación de constituyentes químicos.

Determinación estructural.

Ensayos farmacológicos (21).

g.2 Reacciones de identificación.

Consiste en usar una serie de reactivos, que identificar cada


metabolito secundario que esté presente en el extracto a
investigar (4) (21).

 Ensayo de Sudan.
Determina compuestos grasos, la presencia de una película
coloreada de rojo es positiva.

 Ensayo de Bornträger.
Se determina quinonas, dando positivo el color (rosado, rojo)

 Ensayo de Lieberman Buchard.


Determina triterpenos y/o esteroides, es positivo el cambio
rápido de coloración. Rosado, azul, verde, negro.

 Ensayo de Molish.
Permite reconocer azúcares reductores. Inmediatamente
aparece la formación de un anillo color violeta en la interface.

 Ensayo del Cloruro Férrico.


Permite reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o
taninos. Desarrollo de una coloración rojo-vino, compuestos
fenólicos en general.

pág. 22
- Desarrollo de una coloración verde intensa, taninos del tipo
pirocatecólicos.

- Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo


pirogalotánicos.

 Ensayo de Shinoda.
Permite reconocer la presencia de flavonoides. Si la alícuota
del extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de
ácido clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de
magnesio metálico. Después de la reacción se espera 5 minutos,
se añade 1 mL de alcohol amílico, se mezclan las fases y se
deja reposar hasta que se separen.

Si la alícuota del extracto se encuentra en agua, se procede de


igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico
concentrado. El ensayo se considera positivo cuando el alcohol
amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intenso
en todos los casos.

 Ensayo de Kedde: identifica la presencia de glucósidos


cardiotónicos.
- Solución 1: Ácido 3-5 dinitrobenzóico al 2 por ciento en
metanol; Solución 2: Hidróxido de potasio al 5-7 por ciento en
agua.

 Ensayo de Mucílagos: La presencia de polisacárido, que


forma un coloide hidrófilo (21).

2.4.9. Cromatografía de capa fina.

La I.U.P.A.C define la cromatografía de forma más amplia.


Para ellos es un método usado principalmente para la
separación de los componentes de una muestra, en el cual los
componentes son distribuidos entre dos fases, una de las
cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil (21).

 Concepto de Rf.

pág. 23
Es el registro y se define como la distancia que recorre la
muestra desde el punto de aplicación /distancia que recorre el
disolvente hasta el frente del eluyente.
Distancia recorrida desde el origen por el compuesto (x)
𝑅𝑓 =
Distancia recorrida desde el origen por el eluyente (y)

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se


corre la muestra (tipo de absorbente, eluyente, así como las
condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturación)
(21).

a. Cromatografía preparativa.

Las placas utilizadas en cromatografía preparativa son placas


grandes, de aproximadamente 20 x 20 cm. que permiten
separar aproximadamente 1 gramo de mezcla utilizando unos
35 g. de adsorbente. La siembra de la muestra se realizó con
un tubo capilar a lo largo de una línea recta. Una vez
localizados los compuestos, éstos se extraen de la fase
estacionaria, uno a uno, con la ayuda de una espátula, sobre
un papel de filtro u otro soporte. Posteriormente se colocó cada
componente en un erlenmeyer, y se mezcló con un disolvente
(metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtró varias veces
para separar el compuesto y la fase estacionaria. Para la
lectura correspondiente en el espectrofotómetro UV-Vis. (21).

2.4.10 Prueba de Edema Plantar en ratas inducido por


Carragenina.
El fundamento del método de edema plantar inducido por
carragenina fue descrito por primera vez por Winter et al. Y
posteriormente modificado por Sughisita et al. (1981).
Consiste en la administración subcutánea o subplantar de una
seudosolución de ƛ carragenina un mucopolisacárido sulfatado
extraído de alga marina Chondrus crispus, a nivel de la
aponeurosis plantar de la rata, provocando una reacción de

pág. 24
carácter inflamatorio mediada por la liberación de diversos
autacoides: serotonina, histamina, prostaglandina, etc. Además
diversos factores del complemento están implicados en la
amplificación de la respuesta. La última fase esta mediada por
prostaglandinas (PGE1 y PGE2, PGF2). La sustancia a evaluar
se puede administrar por diferentes vías: Intraperitoneal, oral.
La respuesta vascular máxima ocurre aproximadamente a las 4
horas de la administración de carragenina y coincide con la
fase mediada por las prostaglandinas. La extravasación de
proteínas ocurre durante toda la respuesta al agente
edematógeno.
La migración celular, leucocitos polimorfonucleares, comienza
a las 2 horas de haberse aplicado al agente (25). Se prefiere la
carragenina ante otros irritantes porque el edema producido
esta menos modificado por factores ajenos a los propiamente
característicos de la inflamación y además, porque la actividad
anti-inflamatoria de este ensayo guarda una buena correlación
con la actividad anti-inflamatoria en clínica.

a. Manejo de animales de experimentación.


En ocasiones lo que se requiere es administrar un producto por
diferentes vías y para ello se requiere que el animal no
ofrezca resistencia, en el momento de la administración de
ahí que sea útil saber sujetar bien a los animales desde
el primer momento para evitar accidentes. En general, los
animales pequeños son fáciles de manejar, a los ratones se los
debe sujetar por la parte superior del cuello, entre las orejas,
en el caso de las ratas es mejor cogerlas del lomo, cuando no
se tiene suficiente experiencia puede protegerse las manos
con guantes de cuero. Para la fijación de animales
pequeñas se dispone de tablas de madera provistas de
ganchos para sujetar las extremidades (26).

pág. 25
b. Métodos y actividad antiinflamatoria.

En función de la forma de aplicación se emplearon métodos


que provocan una irritación tópica, aguda o Sincrónica y
fueron válidos para el estudio de sustancias activas en
procesos inflamatorios de piel y mucosas.

La evaluación del efecto farmacológico se puede hacer


mediante la medición del espesor de la oreja o pata inflamada
(derecha) y su comparación con la oreja o pata no inflamada
(izquierda Es imprescindible comparar el resultado con una
sustancia o fármaco de referencia.

El agente irritante varía en función del modelo que se requiera


mimetizar, puede ser Ácido Araquidónico (AA), 12-0-
temadecanoil forbol-13 acetato (TPA), serotonina (5-HT),
histamina, carragenina, bradicidina (BK), PLA2, entre otros.
Unos por administración tópica y otros de empleo parenteral
(27).

2.4.11 Reformulación de formas farmacéuticas de aplicación


tópica con efecto antiinflamatorio.
Los vehículos para aplicación tópica deben tener una serie de
características que están directamente relacionados a las
condiciones de uso, objetivo terapéutico, naturaleza de la
lesión propiedades fisicoquímicas y biológicas del activo, Los
criterios a evaluar en estas formulaciones incluyen:
• pH: debe ser neutro o débilmente ácido, próximo al pH de
la piel.
• Estabilidad física y química así como compatibilidad con los
activos
• Debe tener una extensibilidad y adaptabilidad a la
superficie de la piel y cavidades cutáneas.
• El flujo recomendable es plástico-tixotrópico.

pág. 26
• Se prefiere que sean fácilmente eliminables de las zonas
tratadas por simple lavado.
• No deben manchar.
• No deben tener efectos de irritación primaria ni
sensibilización a la piel.
• Características específicas para un efecto antiinflamatorio
agudo (no oclusivo, refrescante).
• Buena miscibilidad vehículo/emulsión epicutánea.
• Buena penetración.
• Buena capacidad de cesión difusa de los activos.
• Posibilidad de resistir a la esterilización.
• Buena adherencia (12).

a.- Excipientes para gel.


 Carbómero: En su estructura molecular cuenta con gran
cantidad de grupos carboxilo, propiedad que le permite
aumentar su volumen en presencia de agua. Al disolverse en el
agua, las moléculas de carbopol cambian su configuración e
incrementan la viscosidad del líquido, dando lugar a la
formación de un gel. (gelificación)
 Glicerina: Como inhibidor de cambios enzimáticos durante
la fermentación de ungüentos, pastas o crema, aportan a la piel
elasticidad y humedad. Da blancura a la piel y la suaviza,
humectante tópico.
 Trietanolamina: Actúa como una base química débil
debido al par solitario de electrones en el átomo de nitrógeno.
Este producto químico se utiliza para ajustar el pH en
preparaciones, hace que el carbómero se haga más espeso.
Se coloca al final.
 Metilparabeno: Sirve como conservador en productos
alimentarios y farmacéuticos, controlan el crecimiento de
hongos y levaduras y en menor grado de bacterias.

pág. 27
 Agua destilada: Fase acuosa (28).

b.- Consideraciones para la selección de la forma farmacéutica.


La sensación de quemazón local y tirantez que acompaña a los
procesos inflamatorios cutáneos se mitigan por la aplicación de
ungüentos refrescantes. El efecto refrigerante se debe a la
evaporación de agua presente en los ungüentos, siendo
preferidos las cremas O/A y los geles, debido a que presentan
una mayor proporción de agua. En las cremas O/A se utilizan
sobre todo emulsificantes solubles en agua y muchas veces se
busca estabilizar la fase externa de esta preparación con la
adición de un agente gelificante (crema-gel) (28).

2.4.12. Farmacología Dermatológica.


La piel tiene muchas funciones esenciales, entre ellas
protección, termorregulación, capacidad de respuesta
inmunitaria, síntesis bioquímica, detección sensitiva, así como
comunicación social y sexual. El tratamiento para corregir
disfunción de cualquiera de esas actividades puede
suministrarse por vía sistémica, intralesional, local, y con
radiación ultravioleta. El tratamiento por vía tópica es un
método terapéutico conveniente, pero su eficacia depende de
la comprensión de la función de barrera de la piel, de modo
primario dentro del estrato córneo (29).

a. La piel como barrera.


La piel actúa como una barrera de dos vías para evitar la
absorción de agua y electrolitos o la perdida de los mismos. La
función de barrera depende en gran parte de la epidermis, de
manera más específica, la capa más externa (29).

b. Parámetros que controlan la absorción.

pág. 28
La absorción de medicamentos hacia la piel está en función de
naturaleza del fármaco, la conducta del vehículo, y el estado de
la piel. Tres variables principales explican las diferencias de la
velocidad de absorción o el flujo de diferentes medicamentos
por vía tópica, o del mismo fármaco en diferentes vehículos: la
concentración del compuesto en el vehículo, el coeficiente de
partición del fármaco entre el estrato córneo y el vehículo, y el
coeficiente de difusión del medicamento en el estrato córneo
(29).

2.4.13. Lineamientos generales para el tratamiento por vía tópica.


 Dosificación: Es necesario proporcionar al enfermo una
cantidad del medicamento por vía tópica que baste para cubrir
las superficies corporales afectadas en aplicaciones repetidas.
Una regla general es que se requieren unos 30 g para cubrir el
cuerpo entero de un adulto una vez. El costo y la
inconveniencia pueden obstaculizar el uso repetido del
tratamiento local o regional sobre áreas de superficie grandes.
 Hidratación: La absorción de medicamentos aumenta con
la hidratación, definida como un incremento del contenido de
agua del estrato córneo, que se genera mediante inhibición de
la perdida transdérmica de agua. Los métodos de hidratación
incluyen oclusión con una película impermeable, aplicación de
vehículos oclusivos lipófilos como ungüentos, y mojar la piel
antes de la oclusión.
 Vehículo: La elección del vehículo puede tener tanta
importancia como el fármaco activo. En general, la inflamación
aguda se trata con preparaciones secantes acuosas, y la
crónica, con preparaciones hidratantes. Los enjuagues
constituyen el método más fácil para secar erupciones
húmedas agudas. Las lociones (polvo en suspensión acuosa) y
las soluciones (medicamentos disueltos en un solvente) son
ideales para áreas con pelo. Múltiples cremas y ungüentos, sin
fármaco activo, se comercializan con humectantes.

pág. 29
 Frecuencia de aplicación: Los medicamentos por vía tópica
a menudo se aplican dos veces al día. Con todo, para algunos
fármacos, la aplicación una vez al día de una dosis más grande
puede ser tan eficaz como la aplicación más frecuente de dosis
más pequeñas (29).

2.4.14. Drogas tópicas Cutáneas.


Se denomina drogas tópicas y cutáneas aquellas que se
aplican exteriormente para conseguir diferentes acciones y se
clasifican en:
 Emolientes: Drogas que aplicadas externamente son
capaces de relajar y ablandar las partes inflamadas.
 Astringentes: Drogas que producen constricción y
sequedad de la piel y las mucosas.
 Vulnerarias y cicatrizantes: Son aquellas capaces de curar
o favorecer la curación de las heridas y una droga cicatrizante
es la que favorece la cicatrización o reparación de los tejidos
 Rubefacientes: Droga que aplicada sobre la piel produce
irritación y enrojecimiento (21).

2.4.15. Inflamación.
La inflamación esencialmente es una respuesta de naturaleza
protectora cuyo propósito final es defender al organismo de la
patogenia de la lesión celular y de las secuelas que pudiera
causar. Si no existiera este proceso la infección se propagaría
incontroladamente (5).
La inflamación es un proceso fisiopatológico caracterizado por
el enrojecimiento, el edema, la presencia de fiebre, el dolor y la
pérdida de función, mediante el cual las células y tejidos
responden a daños traumatismos, infecciosos, tóxicos,
alérgicos o autoinmunes. Los procesos inflamatorios son
dirigidos por las células del sistema inmune a través de una
compleja red de interacciones celulares y moleculares,

pág. 30
compuesta por reacciones locales y la activación sistemática
mediada por citoquinas y otras moleculares (30).

a. Factores de la inflamación.

Bacterias, virus, parásitos sus toxinas y factores inmunológicos


(reacciones de hipersensibilidad, además de agentes irritantes,
sobre todo sustancias químicas (corrosivas), isquemia y
lesiones térmicas o físicas (quemaduras) (8).

b. Proceso inflamatorio
Se produce la adhesión leucocitaria y posteriormente, la
trasmigración que es el proceso mediante el cual los leucocitos
abandonan la circulación mediante diapédesis.
.
La activación leucocitaria se caracteriza por la producción de
metabolitos del ácido araquidónico (AA) debido al incremento
de la actividad de fosfolipasa A2 (FLA2) por diacilglicerol (DAG)
y calcio, generación de especies reactivas del oxígeno (ERO) y
liberación del contenido lisosomal a causa de la lisis celular, lo
cual conduce al daño celular y tisular (22) (32).

c. Fases de la inflamación.
- Liberación de mediadores.
- Regulación del proceso inflamatorio
- Reparación (31).

d. Tipos de inflamación.
Según el tiempo de duración se divide en aguda y crónica. La
inflamación aguda tiene un tiempo relativamente corto
(minutos, horas), se inicia muy rápidamente y se caracteriza
por el exudado de fluidos plasmáticos y la migración de
leucocitos predominantemente neutrófilos.

pág. 31
La inflamación crónica tiene un tiempo de duración larga
(semanas, meses o incluso años) y se caracteriza
histológicamente por el infiltrado de linfocitos y macrófagos con
la proliferación de vasos sanguíneos y tejido conectivo (31).

e. Mecanismos de la inflamación.
En la cascada de la inflamación, por el estímulo de los
fosfolípidos de la membrana celular, en la cual se activan
enzimas fosfolipasas para transformar estos fosfolípidos en un
compuesto llamado ácido araquidónico (AA), por el cual
también se generan dos formas de la enzima ciclooxigenasa,
COX-1 y COX-2, que darán lugar a distintos prostaglandinas, y
enzimas Lipoxigenasas que darán lugar a distintos
leucotrienos, los productos derivados del AA afectan a
diversos procesos biológicos incluido la inflamación y la
hemostasia (31).

f. Migración Leucocitaria.
Conforme la sangre fluye desde los capilares a las vénulas
poscapilares, las células circulantes son barridas por el flujo
laminar contra la pared del vaso. Como los eritrocitos son más
pequeños y se suelen desplazar con más rapidez que los
leucocitos de mayor tamaño. Los leucocitos son reclutados de
la sangre hacia el tejido extravascular; donde se pueden
encontrar los patógenos infecciosos o los tejidos lesionados y
son activados para realizar sus funciones (21).
El reclutamiento de los leucocitos es un proceso escalonado
que incluye la unión laxa y el rodamiento sobre el endotelio
mediado por la selectinas, la unión firme al endotelio mediado
por las integrinas y la migración a través de los espacios
interendoteliales. Los neutrófilos predominan en el infiltrado
inflamatorio precoz y posteriormente son sustituidos por los
macrófagos (31).

pág. 32
g. Células y moléculas que actúan en la inflamación.
En el proceso de inflamación intervienen una serie de
moléculas, que son producidas directa o indirectamente antes
mencionadas. En condiciones normales estos mediadores son
inactivos, porque circulan en forma de precursores en la sangre
a los que se denomina mediadores plasmáticos, y los que se
encuentran empaquetados en orgánulos o son sintetizados de
nuevo durante la inflamación se denomina mediadores
celulares. Estos mediadores químicos actúan sobre una o
múltiples células dianas, su duración puede ser corta o larga
según el tiempo de estadía puede ser muy perjudicial (31).

h. Mediadores químicos de la inflamación.


Los mediadores químicos de la inflamación (MQI) son
sustancias químicas de muy diversa naturaleza y origen. Son
de vida media corta y los principales efectos que ejercen son
vasodilatación arteriolar, aumento de la permeabilidad vascular
y quimiotaxis. Otros efectos incluyen contracción del músculo
liso, opsonización, dolor, citotoxicidad y activación de diversas
funciones celulares. Algunos generan efectos sistémicos de la
inflamación tales como fiebre, leucocitosis y respuesta de fase
aguda.
Aquellos de origen plasmático surgen a raíz de la activación en
cascada de diversas proteínas plasmáticas. Los de origen
tisular están almacenados en células o bien su síntesis se inicia
durante el proceso inflamatorio (31).

i. Mediadores Derivados de Células.


• Histamina.
• Serotonina.

pág. 33
• Prostaglandinas (PG)
• Leucotrienos (LT)

j. Factor activador de plaquetas (FAP)


Es Acetil glicerol éster fosfocolina, se genera a partir de los
fosfolípidos de membrana en los neutrófilos, monocitos,
basófilos, células endoteliales y plaquetas por acción de la
fosfolipasa A2. (20).
Es más potente que la histamina y la bradiquinina, factor
quimiotáctico, estimula la adhesión leucocitaria. Debido a
estímulos muy diversos tales como microorganismos,
activadores de macrófagos y complejos antígeno-anticuerpo.
Su secreción puede estar estimulada por endotoxina, toxinas,
lesiones físicas y diversos procesos inflamatorios. El efecto
principal en la inflamación es: aumento de la quimiotaxis y
aumento de la permeabilidad vascular (31).
. Reparación de la inflamación.
La reparación de los tejidos depende de la proliferación de las
células no dañadas (residuales) y la sustitución a partir de
células madre.
La proliferación celular se produce cuando las células
quiescentes entran en el ciclo celular. El mismo está
estrechamente regulado por estimuladores e inhibidores y
existen unos puntos de control intrínsecos para evitar la
replicación de las células anómalas.
Los tejidos que se dividen de forma continua (lábiles) contienen
células maduras capaces de dividirse y células madre que se
diferencian para reponer las células perdidas.
Las células madre de los embriones (células ME) son
pluripotenciales; los tejidos adultos, sobre todo la médula,
contienen células madre adultas capaces de generar múltiples
estirpes celulares.

pág. 34
El tejido lesionado se repara mediante tejido conectivo que va a
producir la fibrosis y la escarificación. En este proceso
intervienen los siguientes componentes:
• Formación de nuevos vasos sanguíneos (angiogénesis)
• Migración y proliferación de fibroblastos
• Depósito de matriz extracelular
• Maduración y organización del tejido fibroso
(remodelación).
El proceso de reparación empieza a las 24 horas tras la
lesión. Los fibroblastos y las células del endotelio vascular
comienzan a proliferar formando el tejido de granulación
en el cual se forman nuevos vasos (angiogénesis) (31).

2.4.16. ANTIINFLAMATORIOS
Son fármacos diseñados para combatir la inflamación y las
enfermedades que se derivan de problemas como: fracturas,
reumatismo, estomatitis y lesiones urinarias y genitales. Como
todos los medicamentos, pueden causar efectos secundarios y
pueden ser causa de intoxicación, incluyendo sobredosis o la
interacción con otros medicamentos (22).

a. Medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINES)


Son un grupo de fármacos inhiben la enzima Ciclooxigenasa,
mediadora de la síntesis de prostaglandinas y su efecto es
antiinflamatorio, analgésico y antipirético. Los productos que
tienen estas propiedades los diferenciamos por sus efectos
secundarios y por la duración del efecto producido.Estos
fármacos también ejercen efectos antipiréticos y analgésicos,

pág. 35
pero son sus propiedades antinflamatorias las que les confieren
mayor utilidad en el tratamiento del trastorno, en el cual el dolor
tiene relación con la intensidad del proceso inflamatorio (22).

b. Mecanismo de acción.
AINES inhiben la actividad de la enzima Ciclooxigenasa (COX),
produciendo una disminución de la formación de
prostaglandinas y tromboxanos a partir del ácido araquidónico.
Los efectos terapéuticos producen disminución en la síntesis
de prostaglandinas y su importancia en la producción del dolor,
inflamación y fiebre.
La selectividad por COX-1, en comparación con COX-2, es
variable e incompleta para los AINES más antiguos, pero se
han sintetizado muchos inhibidores selectivos de la COX-2 ya
que no afectan la función plaquetaria a las dosis usuales.
La eficacia de los fármacos selectivos de la COX-2 equivale a
otros AINES, dado que puede mejorar la seguridad
gastrointestinal. Por otro lado estos inhibidores de la COX-2
pueden aumentar la incidencia de edema e hipertensión (22).
C. Diclófenaco (gel) (Fármaco de Referencia)
 Mecanismo de Acción: Inhibe la biosíntesis de las
prostaglandinas.
 Absorción: Las concentraciones plasmáticas se alcanza a
los 20 minutos.
 Distribución: 99,7% a proteínas séricas, principalmente a
la albúmina (99,4%), el volumen de distribución aparente tiene
valores situados entre 0,12 y 0,17 l/Kg (31).
 Metabolismo: La biotransformación sucede en parte por
conjugación con el ácido glucurónico de la molécula sin
cambios y principalmente por una hidroxilación simple y
múltiple seguido de una conjugación con el ác. Glucurónico.

pág. 36
 Eliminación: El 60% de la dosis administrada es eliminada
por vía renal en forma de metabolitos y menos del 1% es
eliminado como molécula intacta.
 Absorción cutánea: Una de las formas que ha sido
estudiada con mayor rigor es la del uso de agentes promotores
de la permeación (APP), que son sustancias químicas capaces
de disminuir la resistencia difusional que ofrece la piel. Los
terpenoides incrementan la difusión desartículando la
estructura de los lípidos del estrato córneo, el d-limoneno ha
demostrado un mejoramiento relevante en la penetración de
gran cantidad de compuestos, como domperidona, estradiol,
verapamilo. Por la baja penetración transdérmica del piroxicam
(agente antiinflamatorio no esteroidal), el uso de d-limoneno se
ha revelado de una forma exitosa como APP para compuestos
activos pertenecientes a esta categoría farmacológica, ejemplo
de ello es la indometacina. Basándose en lo anteriormente
planteado, la influencia de diferentes concentraciones de d-
limoneno, y valoraron como exitosa aquellas soluciones que
contenían 5,0 y 10,0 % del agente promotor (33).

2.4.17. Ratas (Rattus norvegicus).


Es una especie de roedores comunes con amplia distribución.
El animal de laboratorio tiene que ser respetado como ser vivo,
entender que padece necesidades y sufre dolor, por ley es
obligación del personal (investigador) que lo cuida, mantiene y
utiliza, asegurar su bienestar y confort mientras viva. (18).

 TAXONOMIA (Rattus norvegicus)


Reino: Animalia.
Phylum: Chordata.
Clase: Mammalia.
Orden: Rodentia.
Familia: Muridae.

pág. 37
Nombre científico: Rattus norvegicus.

En las investigaciones el uso de animales de experimentación


el protocolo está basado en el «principio de las 3 R» reducción,
refinamiento y reemplazo.
• Reducción: Estrategia encaminada a utilizar el mínimo
número de animales necesario para alcanzar el objetivo
propuesto en el procedimiento.
• Refinamiento: Incluye la mayoría de aquellos
procedimientos que afectan a la vida del animal de
experimentación y permiten aliviar o reducir el posible dolor o
malestar, es decir el bienestar animal.
• Reemplazo: Con la utilización de técnicas alternativas que
puedan aportar el mismo nivel de información que el obtenido
en procedimientos con animales, e incluso mejores resultados,
y que no impliquen en absoluto la utilización de estos animales
de experimentación (18).

2.4.18. Instrumento de medición (Vernier digital)


Es un instrumento de medición indirecta, definida por una
lectura inmediata (34).
2.5.- FORMULACION DE HIPÓTESIS

2.5.1 Hipótesis general.

El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna


multiglandulosa “Millhua tanquish” posee efecto antiinflamatorio en
ratas.

2.5.2 Hipótesis específica.

El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna


multiglandulosa “Millhua tanquish” posee efecto antiinflamatorio
comparado con Diclófenaco (gel), en ratas.

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Existe una concentración del gel a base del extracto etanólico de
las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” con efecto
antiinflamatorio en ratas.

Existen algunos metabolitos secundarios con mayor presencia en el


extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua
tanquish”.

2.6. OPERACIONALIZACION DE VARIABLES E INDICADORES

2.6.1 Variables.

 Variable independiente: Gel a base de extracto de hojas de


Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”.

 Variable dependiente: Efecto antiinflamatorio.

 Variable Interviniente: Peso de las ratas.

2.6.2 Dimensiones.

 Dimensión de la variable independiente: Fitoquímico y galénico.

 Dimensión de la variable dependiente: Farmacológico.

 Dimensión de la variable interviniente: Magnitud.

2.6.3 Indicadores.

 Indicador de la variable independiente:

Identificación de metabolitos secundarios


Concentración del extracto a evaluar:
Gel con extracto al 1 por ciento

pág. 39
Gel con extracto al 3 por ciento
Gel con extracto al 5 por ciento
Extracto Puro

Gel puro

Diclofenaco gel al 1 por ciento

 Indicador de la variable dependiente.


Cambios en el diámetro de la pata inflamada de la rata y se mide
con un Vernier digital en mm. 0.5 mm a 10 mm.

Tiempo de medición a las; 2 hrs, 6 hrs, 18 hrs y 21 hrs.

 Indicador de la variable intervieniente.


Gramos de peso de la rata. 200 g a 390 g.

2.7. DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS.

a.- Carragenina: Polisacáridos presentes en la pared celular de


algas rojas. Diferentes tipos de carrageninas (κ, λ, ι, etc),
Propiedades gelificante (κ e ι) o espesantes (λ), Diferentes
aplicaciones, directas (tratamientos gástricos, efecto saciante, etc),
Indirectas en productos de consumo diario (yogures, dentífricos,
geles, etc) Código E407. (35).
b.- Extractos vegetales: Se define como extracto vegetal el producto
líquido obtenido a partir de plantas o parte de ellas con varios
procedimientos y con varios solventes (36).

pág. 40
c.- Dosificación: Es la cantidad necesaria de un compuesto químico
terapéutico que se administra a un individuo de acuerdo a su peso,
edad y tamaño, es necesario para el tratamiento de una enfermedad
(22).
d.- Flavonoides: Los flavonoides son compuestos fenólicos
derivados del 2-fenilcromano, cuya estructura base es el núcleo
benzopiran-4-ona con un sustituyente aromático en el carbono 2;
Clásicamente los flavonoides poseen actividades antiinflamatoria,
antioxidante, antialérgica, hepatoprotectora, antitrombótica, antiviral
y anti carcinogénica (36).

e.- Frecuencia de aplicación: Es las veces que se administra un


medicamento vía oral o tópica de acuerdo a la distribución o
farmacocinética de cada medicamento. (28).

f.- Inflamación: Es la expresión de las alteraciones que se producen


en respuesta a una lesión o una agresión a un tejido; se puede
describir empleando las palabras latinas originales: dolor, rubor,
calor y tumor (7).

g.- Hidratación: La absorción de medicamentos aumenta con la


hidratación, definida como un incremento del contenido de agua del
estrato córneo, que se genera mediante inhibición de la pérdida
transdérmica de agua (22).

h.- Piel: Consiste en dos capas principales, la epidermis externa y la


dermis subyacente. Las estructuras epidérmicas especializadas
como los folículos pilosos y las glándulas sebáceas y
sudoríparas se sitúan en la dermis sin interrumpir la unión
dermo-epidérmica (31).
J.-Solubilidad: Capacidad de disolución de un compuesto químico;
depende de la forma en que se encuentran: aglícones libres (son

pág. 41
insolubles en agua) o heterósidos (son solubles en agua y mezclas
hidroalcohólicas e insolubles en disolventes orgánicos apolares (29).

K.-Vehículo: El tratamiento por vía tópica se suministra mediante


diversos vehículos, con mayor frecuencia enjuagues, lociones,
soluciones, cremas y ungüentos, con progresión en ese orden desde
menos hasta más hidratantes. La elección del vehículo puede tener
tanta importancia como el fármaco activo (12).

pág. 42
CAPITULO III

3. METODOLOGIA

3.1. Tipo y diseño de investigación.

Tipo: Aplicado es decir soluciona un problema de salud.

Nivel: Explicativo por tener variables de causa y efecto.

Diseño de la investigación.
El diseño de la investigación que se realizó fue de tipo experimental, es
decir no se limitó a observar los acontecimientos sino a intervenir en los
mismos.

3.2. Población y muestra.


3.2.1 Población:

Cuarenta y dos ratas albinas machos, Con peso entre 300 g. ±


50 g, de seis a siete semanas de edad, adquiridos en el
Instituto Nacional de Salud.

3.2.2 Muestra:

Divididas en siete grupos, cada grupo conformado por seis


ratas.

pág. 43
3.2.3 Técnicas e instrumentos de recolección de datos.
La técnica empleada en la presente investigación fue la de
observación de tipo estructurada, no participante, colectivo
llevado a cabo por ambos investigadores en el laboratorio.

3.2.4. Descripción del Instrumento.

El instrumento fue una ficha de observación ad-hoc elaborada


por los investigadores, basándose en los indicadores de las
variables para establecer los reactivos del instrumento. (Anexo
05). El instrumento en mención estuvo constituido por
reactivos abierto y cerrado acorde a las características de los
indicadores.

3.2.5. Validación del instrumento.

El instrumento empleado fue viable toda vez que se consideró


económico, sencillo y simple en su estructura al poseer solo
una cara. En lo referente a la sensibilidad al cambio, el
instrumento definía claramente la evaluación según el tipo de
tratamiento, poseendo capacidad discriminativa en los datos
recolectados. En lo correspondiente a la confiabilidad no fue
posible llevar a cabo la repetitividad ni el análisis de fiabilidad
inter-examinador debido a las características longitudinales de
la experimentación. La validez total del instrumento se
estableció a cuatro niveles; a nivel lógico los reactivos del
instrumento se consideraron válidos ya que su construcción
sigue una secuencia ordenada y una comprensión gramatical
adecuada; la validez de contenido se obtuvo mediante la
evaluación por juicio de 3 expertos, quienes fueron:

Dr. Gilmer Solís Sánchez.

Dr. Orlando Oscar Acosta Cornejo.

pág. 44
Dra. Lidia Edith Goicochea Samanez.

Los jueces calificaron las características del instrumento por


medio de una ficha de validación por expertos (anexo 06),
para lo que se les entregó a cada uno la matriz de
consistencia interna del estudio (anexo 01); las puntuaciones
obtenidas por la evaluación de cada uno de los jueces
validadores fueron integradas en la matriz de validación por
jueces (anexo 07), lo que permitió obtener la validez de
contenido global. Por su parte cada uno de los reactivos fue
validado en contenido por medio de la prueba estadística V de
Aiken.

La validez criterial no se puedo llevar a cabo debido a las


características de la investigación.

A nivel de constructo, la validez fue establecida debido a que


se alcanzó previamente validez lógica, de contenido y de
criterio.

3.2.6. Técnicas de procesamiento y análisis de datos.


Se procedió a organizar las fichas de recolección y enumerarlas para
ser ingresadas a la base de datos en Microsoft Excel en su versión
de acceso, bajo las modificaciones planteadas por el investigador.

El procesado de los datos se llevó a cabo en una laptop de marca


TOSHIBA, modelo L45 B4205FL, de 4GB de memoria RAM con
sistema operativo Windows Vista.

La información recolectada se analizó con el paquete estadístico


SPSS (Statistical Package for the Social Science) en su versión de
acceso; en la cual se llevó a cabo la aplicación de estadística
descriptiva para establecer la distribución de los datos recolectados
a través de medidas de tendencia central, dispersión, forma y
posición. También se utilizó estadística inferencial para la docimasia
de las hipótesis de la investigación.

pág. 45
3.3 Equipos materiales y reactivos.

3.3.1 Material biológico.

• Hojas de Senna multiglandulosa “Millua tanquish”


• Ratas swiss albinos machos de 300 g ± 50 g. de peso.

3.3.2. Material de vidrio y otros.

Se utilizó: Placas petri, tubos de ensayo, pipetas, baguetas,


vaso de precipitado, matraz erlemeyer, embudos, pro-pipeta,
cubeta para cromatografía, frascos color ámbar, frascos de
plástico, capilares, guantes, mascarillas, gorros. Hisopos
estériles, jeringas de 1 mL, papel kraft, estickers, tijera, papel
filtro, comida para animales.

3.3.3 Equipos e instrumentos.

Balanza analítica, balanza de plato superior, rotavapor, cocinilla


eléctrica, cromatoplacas, lámpara UV. Micrómetro digital,
Espectrofotómetro UV.

3.3.4. Reactivos.
Alcohol 96°, agua destilada, N-hexano, Cloroformo
Diclorometano, Acetato de Etilo, Butanol, metanol, tricloruro
férrico, Gelatina y sal, Ninhidrina, Dragendorff, Mayer,
Borntrager, Molish, Shinoda, Lieberman; metoxido de sodio,
tricloruro de aluminio, ácido clorhídrico concentrado.

pág. 46
3.4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTALES

La marcha fitoquímica y ensayos preliminares se ejecutó en el


laboratorio de farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
de la Universidad Inca Garcilaso de la Vega. El estudio de actividad
antiinflamatoria se realizó en el laboratorio de farmacología del bioterio
de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

3.4.1 Recolección.
Las hojas frescas de la especie de Senna multiglandulosa, “Millua
tanquish”, se recolectó en el caserío de Viques- Huancayo, a 3500
m.s.n.m. En el mes de julio del 2016.

3.4.2. Obtención del extracto etanólico.


Las hojas seleccionadas se sometieron a limpieza previa luego se
desinfectó con alcohol, para la deshidración al estado natural bajo
sombra. Las hojas secas fueron trosadas en forma mecánica
luego fue envasado en tres frascos de 500 mL de color ámbar
boca ancha, a estos frascos se le añadió alcohol de 96°, se dejó
macerar por 20 días con agitación cada doce horas, protegidos
de luz y calor. El macerado se filtró en papel filtro, para eliminar
el solvente se utilizó evaporador rotatorio, pasado tres horas se
obtuvo un aproximado de 80 mL de concentrado de extracto. Se
depositó en una placa Petri luego se colocó en una cocinilla
eléctrica a 60 °C, hasta obtener el extracto seco, se pesó el
extracto seco, se colocó en un recipiente bien cerrado, protegido
de la luz y el calor, se guardó en el refrigerador a 6 °C para su
utilización.

3.4.3 Marcha de solubilidad

pág. 47
Sirve para identificar en que solventes es más soluble el extracto
seco de Senna multiglandulos “Millhua tanquish”

Con la ayuda de una bagueta se cogió una mínima cantidad de la


muestra y se colocó en los cinco tubos de ensayo

Primer tubo con muestra se le añadió cloroformo.

Segundo tubo con muestra se le añadió Diclorometano.

Tercer tubo con muestra se le añadió alcohol 96°

Cuarto tubo con muestra se le añadió agua destilada.

Quinto tubo con muestra se le añadió etanol.

Se observó una solubilidad en el quinto tubo, como resultado la


muestra del extracto es soluble solo en el solvente etanol.

3.4.4. Tamizaje Fitoquímico.

Se utilizó la técnica como; pruebas de coloración y precipitación


(4) (21).
El extracto seco se añadió en un tubo de ensayo limpio y seco
utilizando una bagueta; luego se añadió 10 mL de etanol con
agitación constante hasta homogenización completa. Se utilizó 10
tubos limpios y secos, a cada uno se agregó 1 mL del tubo antes
preparado, luego a nueve tubos se adicionó los reactivos de
reconocimiento de metabolitos secundarios y un tubo quedó como
control.

• Identificación de taninos.
Reacción de cloruro férrico
A 1 mL del extracto etanólico se agregó III gotas de cloruro
férrico, la coloración negra azulada indicó que son taninos
derivados del ácido pirogálico.

pág. 48
Reacción de gelatina
A 1 mL del extracto etanólico se agregó III gotas de reactivo de
gelatina. La formación de precipitado blanco indicó presencia de
taninos.

• Identificación de aminoácidos libres.


Reacción de ninhidrina
A 1 mL del extracto etanólico se agregó III gotas de reactivo de
ninhidrina. No presentó coloración violácea, negativo para
aminoácidos libres.

• Identificación de flavonoides.
Reacción de Shinoda
A 1 mL de extracto etanólico se agregó limaduras de magnesio y
se añadió III gotas de HCL concentrado. La coloración de un anillo
amarillo rojizo indicó presencia de flavonoides.

• Identificación de triterpenoides y esteroides.


Reacción de Lierberman-Burchardat
A 1 mL de extracto etanólico se agregó III gotas de reactivo de
Lierberman Burchardat. Su coloración azul verdoso indicó
presencia de núcleo esteroidal o triterpenoidal.

• Identificación de quinonas.
Reacción de Borntrager
A 1 mL de extracto etanólico se agregó NaOH 5 por ciento en
caliente, se enfrió y aciduló con HCL 10 por ciento, se añadió
benceno, agitó y dejó en reposo. Se observó la separación de la
fase bencénica a la cual se añadió NH4OH, la coloración rojo
indicó la presencia de antraquinonas.

• Identificación de alcaloides.
Reacción de Dragendorff

pág. 49
A 1 mL del extracto etanólico se agregó III gotas de solución
reactivo la formación de precipitado rojo ladrillo indicó presencia
de alcaloides.

Reacción de Mayer
A 1 mL de extracto etanólico previamente acidulada se agregó III
gotas de solución reactivo la formación de precipitado blanco
indicó presencia de alcaloides.

• Identificación de azucares
Ensayo de Molish.
A 1 mL de extracto etanólico previamente acidulada se agregó III
gotas de solución reactivo Molish posteriormente se adicionó
ácido sulfúrico (H2SO4) inmediatamente apareció la formación de
un anillo color violeta en la interface.

3.4.5 Screening cromatográfico

Fundamento: “La cromatografía se denomina como un conjunto


de técnicas que permite la separación de los componentes de una
mezcla que en algunos casos no son separables por otros
métodos. Se fundamenta en la distribución de una muestra entre
dos fases de acuerdo a su afinidad, la primera es la fase móvil
(inmiscible sobre la fase estacionaria y puede ser gaseosa, líquida
o un fluido supercrítico) y la segunda es la fase estacionaria la
cual se soporta sobre un sólido” (21). La detección de
flavonoides y alcaloides se llevó a cabo según la técnica de
cromatografía de capa fina.

a.- Cromatografía capa fina analítica (prueba1°)

En un tubo de ensayo se agregó una cantidad mínima del extracto


seco, en seguida se añadió 2 mL de alcohol, una vez disuelto el

pág. 50
extracto se sembró en una cromatoplaca de silica gel el tamaño
de la placa fue de 3 cm de ancho por 7 cm de largo.
Luego se preparó en una cubeta para cromatografía, la mezcla de
disolventes cloroformo: metanol en una proporción 3:1. (Fase
móvil).
Después de 10 min. de realizar el sembrado se colocó la
cromatoplaca en la cubeta para observar el recorrido de la
muestra pasado 20 min. se retiró la cromatoplaca y se dejó secar
por 5 min. en la campana extractora.
En seguida se observó los colores que emitía la cromatoplaca en
una lámpara UV. Onda larga.
También se hizo la Prueba del amoniaco (revelador especifico):
Es una prueba cualitativa para identificar flavonoides, por lo
general debe haber un cambio de color verde a verde limón.
La cromatoplaca se acercó a un frasco abierto en la cual
emanaba vapores de amoniaco, y se observó manchas que
cambió de color verde a verde limón posiblemente presencia de
flavonoides.

b.- Cromatografía de columna rápida.

Es una técnica de separación rápida por color, en la cual


podemos variar solventes (no polar, medianamente polar y polar).
(21)
Se usó el extracto seco etanólico. Y como fase móvil: Etanol y
agua destilada. La columna se preparó de la siguiente manera:
Se cortó el papel filtro a una medida que solo cubra los orificios
del embudo de bunkner, se agregó alcohol hasta humedecer el
papel filtro, luego se añadió la silica gel llenando el embudo un
aproximado de 2 cm.
Por otro lado a la placa Petri con el extracto seco se agregó silica,
se mezcló hasta formar una macilla, esta macilla fue colocada en
la columna ya preparada, luego se colocó otro papel filtro
cubriendo la macilla en seguida se agregó el solvente etanol

pág. 51
(relativamente polar), se observó la filtración total de color verde
oscuro, y se depositó en un frasco color ámbar, para llevarlo a
sequedad.
En seguida se añadió el solvente acuoso (polar), obteniéndose un
filtrado de color medianamente blanco, fue depositado en un
frasco color ámbar, para llevarlo a sequedad.
A Los extractos etanólico y acuoso se colocó en una cocinilla
eléctrica a 60°C hasta sequedad.

c.- Cromatografía analítica en capa fina. (Cromatografía capa fina


escala preparativa)
Técnica analítica cualitativa que permite la separación de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos, retención y desplazamiento.
En un tubo de ensayo se agregó una cantidad mínima del extracto
seco, obtenido del filtrado etanólico y en seguida se añadió 2 mL
de alcohol, una vez disuelto el extracto se sembró en una
cromatoplaca de silica gel de 15 cm de ancho por 20 cm de largo.
En el tubo de ensayo N° 2 se agregó una cantidad mínima del
extracto seco, obtenido del filtrado acuoso luego se añadió 2 mL
de alcohol, una vez disuelto el extracto se sembró en una
cromatoplaca de silica gel de 15 cm de ancho por 20 cm de largo.
Para la técnica de cromatografía se preparó en una cubeta la
mezcla de disolventes Cloroformo: metanol en una proporción 3:1.
(Fase móvil).
Después de 10 minutos de realizar el sembrado se colocó las
cromatoplacas en la cubeta para observar el recorrido de los
compuestos.
En un transcurso de 60 minutos se retiró la cromatoplaca y se
dejó secar por 20 minutos en la campana extractora.
Una vez localizados los compuestos, éstos se separaron por
color, uno a uno. Con la ayuda de una espátula, se envasó en
chartulas para luego filtrar.

pág. 52
d.- Extracción de los compuestos de la fase estacionaria

El filtrado consiste en la separación del compuesto coloreado de


la fase estacionaria (silica gel), por medio del solvente metanol.
Los filtrados obtenidos se guardaron en viales limpios y secos,
para la observación e identificación respectiva de los compuestos
en el espectrofotómetro UV/Vis. Se obtuvo 15 colores del filtrado
etanolico y 6 colores del filtrado acuoso.

e.- Identificación espectrofotométrica de cada muestra:

Se calibró el Espectrofotómetro UV, se hizo lectura a cada uno


de los 21 filtrados obtenidos por fraccionamiento, a la celda se
agregó medio mililitro del filtrado N°1, se enrazo con metanol, en
seguida se llevó al espectrofotómetro UV/Vis si no se visualizaba
muy claro se diluía al filtrado, eliminando unas cinco gotas de la
celda y se agregó más metanol, también para acomodar mejor el
espectro, se calibró la absorbancia de acuerdo al recorrido del
compuesto, a cada espectro se tomó fotografías para el análisis
respectivo, de esta manera se hizo con las 21 muestras.

f.- Análisis espectral UV para flavonoides usando reactivos de


desplazamiento:
Se analizaron los 21 espectros luego se decidió por cuatro
espectros para analizar.
Los espectros de los filtrados 1, 2, 3 y 4 se separaron, para
identificar flavonoides a través de reacciones de desplazamiento
según Lock O. (4)
Se calibró el Espectrofotómetro UV, a cada uno de los 4
filtrados se hizo lectura
• Se agregó a la celda medio mililitro del filtrado uno, luego se
llenó con metanol en seguida se llevó al UV/Vis, se observó el
espectro.

pág. 53
• Después de ver el espectro a la misma celda se agregó
NaOMe. III gotas, nuevamente se llevó al Espectrofotómetro
UV. Se observó el espectro.
• En seguida se eliminó lo que contenía la celda, se lavó con
metanol, nuevamente se llenó con el mismo filtrado medio
mililitro del filtrado, se añadió metanol y se observó el
espectro.
• Se cogió la celda, al mismo contenido se agregó AlCl3 III
gotas, luego se observó el espectro.
• Por último a la celda con el mismo contenido se añadió HCL
al 50% se observó el espectro: Así se realizó el mismo
procedimiento para las 4 muestras. (Anexo 15)

3.4.6. Elaboración del gel.

a.- Excipientes.

Agua destilada
Carbopol 940 0.8%
Glicerina
Metilparaveno 0.1%
Trietanolamina. CSP. (TEA)

b.- Preparacion del gel.

• Prueba de estabilidad.
Antes de elaborar el gel se sometió al extracto a un estudio de
homogeniedad, estabilidad, para elegir los excipientes adecuados:
Agua 50 mL
Carbomero 1 g
Metilparabeno. O.5 g
Glicerina 4 mL
Extracto seco 4 g
Se añadió estos compuestos en un vaso de vidrio para mezclarlo,
luego se envasó en un frasco de vidrio color ámbar, se observó

pág. 54
durante 7 días acompañando de agitación cada 6 horas. Al
presentar estabilidad y homogeneidad, se procedió a preparar el
gel.
Pasos:
1. Se Pesó 1 g de carbómero.
2. Se Añadió la cantidad pesada de carbómero sobre un colador
común de cocina y se tamizó sobre un vaso de 0.5 L. El tamizado
es muy importante para romper las posibles aglomeraciones del
producto que posteriormente pueden dar muchos problemas a la
hora de disolver el carbómero en agua.
3. Se añadió lentamente los 300 mL de agua destilada y al mismo
tiempo se fue mezclando lentamente con el carbómero usando
una varilla de vidrio, hasta formar una pasta. Para que no se
formen grumos.
4. Una vez añadido toda el agua se dejó agitando (se usó placa
agitadora con el imán) hasta que se obtenga una solución
transparente y viscosa por un lapso de 20 min. Aproximadamente.
3. Con ayuda de una pipeta Pasteur se añadió a la mezcla 10 mL
de glicerina.
4. Finalmente, y también sirviéndose de una pipeta Pasteur, se
añadió unas VIII gotas de trietanolamina, luego se observó el
incremento de viscosidad y se obtuvo 300 g de gel.

c.- Gel con extracto de Senna multiglandulosa. (Millhua tanquish)

Utilizando la fórmula de la regla de tres simple, se preparó tres


potes de 30 g de gel; al 1, 3 y 5 por ciento del extracto seco de la
siguiente manera.
1.- Gel al 1por ciento: En un frasco de plástico limpio y seco se
agregó 29.7 g de gel y luego se añadió 0.3 g de extracto seco,
usando una varilla de vidrio, se mescló hasta homogenización
completa.
2.- Gel al 3 por ciento: En un frasco de plástico limpio y seco se
agregó 29.1 g de gel y luego se añadió 0.9 g de extracto seco,

pág. 55
usando una varilla de vidrio, se mescló hasta homogenización
completa.
3.- Gel al 5 por ciento: En un frasco de plástico limpio y seco se
agregó 28.5 g de gel y luego se añadió 1.5 g de extracto seco,
usando una varilla de vidrio, se mescló hasta homogenización
completa.

3.4.7. Evaluación de actividad antiinflamatoria (método del edema


plantar)

Fundamento: “Consiste en la inducción de la inflamación por


aplicación de λ-carragenina al uno por ciento, principal
responsable generar inflamación, en la pata izquierda de la rata,
la evaluación de la técnica está dada por la medición de la
respuesta inflamatoria que se traduce por el aumento del volumen
que se produce en el área aplicada, suplantar.” (Cyted 1995).
(26)

a.- Distribución de la muestra.


Para el ensayo se utilizan 42 ratas albinos machos (Cepa Balb/c)
de seis a ocho semanas de edad con peso promedio de 300 ± 50
g; adquiridas en el Centro Nacional de Producción de Biológicos
del Instituto Nacional de Salud (INS) las cuales fueron mantenidas
en condiciones normales de humedad y temperatura en el
laboratorio de farmacología del bioterio de medicina, de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos, proporcionándoles
alimento y agua.
Se distribuyeron en forma aleatoria en número de 6 ratas por cada
tratamiento, (7 grupos X 6 ratas cada grupo). Los grupos
recibieron los extractos como se detalla, menos el grupo control.

b.- Ensayo preliminar.

pág. 56
Se realizó un ensayo preliminar, para determinar la técnica de
aplicación, para saber cuántas personas se requiere para la
manipulación de las ratas al momento del tratamiento, y calcular el
tiempo para las respectivas mediciones en el experimento, se
utilizó 7 ratas adicionales, a cada una de las ratas se aplicó el
tratamiento indicado para cada grupo. (Se realizó 2 días anteriores
al experimento de la investigación.)

c.- Procedimiento:
1. Se agruparon las ratas albinas en 7 grupos, cada grupo con 6
ratas.

Grupo I: Sin tratamiento.

Grupo II: Diclofenaco en gel al 1 por ciento.

Grupo III: gel con extracto de Senna multiglandulosa al 1 por


ciento.

Grupo IV: gel con extracto de Senna multiglandulosa al 3 por


ciento.

Grupo V: gel con extracto de Senna multiglandulosa al 5 por ciento.

Grupo VI: extracto puro de Senna multiglandulosa.

Grupo VII: gel puro.

2.- Se pesó a cada rata y se anotó el valor en el instrumento de


recolección de datos.
3.- Se aplicó λ-carragenina al uno por ciento, en la pata izquierda la
cantidad de 0.1 mL vía suplantar a los 7 grupos, (42 ratas).
4.- Pasado 2 horas se procedió a medir las patas inflamadas, aun
sin tratamiento, con un vernier digital calibrado, y se anotó el valor
en el instrumento para la recolección de datos.
5.- A continuación se aplicó vía tópica, el gel que le corresponde a
cada grupo de tratamiento, descrito en la primera parte, con la
ayuda de un hisopo se cogió una pequeña cantidad del gel, se
aplicó en el edema suplantar de cada rata, se observó en todo

pág. 57
momento para que el gel permanezca en la pata y tener un
adecuado tratamiento.
6.- Pasado 3 horas, después de la primera aplicación, se procedió
a medir las patas inflamadas, ya con tratamiento, con un vernier
digital calibrado, y se anotó el valor en el instrumento elaborado
para la recolección de datos y a continuación se aplicó por segunda
vez, el gel que lo corresponde a cada grupo.
7.- Pasado 6 horas, después de la primera aplicación, se procedió
a medir las patas inflamadas, ya con tratamiento, con un vernier
digital calibrado, y se anotó el valor en el instrumento elaborado
para la recolección de datos y a continuación se aplicó por tercera
vez, el gel que lo corresponde a cada grupo.
8.- Pasado 18 horas, después de la primera aplicación, se procedió
a medir las patas inflamadas, ya con tratamiento, con un vernier
digital calibrado, y se anotó el valor en el instrumento elaborado
para la recolección de datos y a continuación se aplicó por cuarta
vez, el gel que lo corresponde a cada grupo.
9.- Pasado 21 horas, después de la primera aplicación, se procedió
a medir las patas inflamadas, ya con tratamiento, con un vernier
digital calibrado, y se anotó el valor en el instrumento elaborado
para la recolección de datos.
Estos datos obtenidos se adjuntaron para el respectivo desarrollo
estadístico y así determinar los objetivos planteado en dicha
investigación.

pág. 58
CAPITULO IV

4. RESULTADO Y DISCUSIONES.

4.1 Técnicas de procesamiento, análisis de datos y resultados

4.1.1 Identificación de metabolitos secundarios.

Tabla 01: Marcha de solubilidad del extracto seco de hojas de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish”.

TUBOS SOLVENTES IDENTIFICACION

1 Cloroformo -

2 Diclorometano -

3 Alcohol 96° +

4 Agua destilada +

5 etanol +++

FUENTE: Elaboración propia:

La marcha de solubilidad se realizó con el extracto seco de la especie de

Senna multiglandulosa “Millhua tanquish”; se usó solventes de diferente

polaridad, se determinó como mejor solvente el etanol.

 Leyenda

(-) SIN EVIDENCIA,

(+) BAJA EVIDENCIA,

(++) MODERADA EVIDENCIA,

(+++) ALTA EVIDENCIA.

pág. 59
Tabla 02: Screening Fitoquimico del extracto seco de hojas de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish”.

Tubos Reactivos Metabolitos secundarios Identificación

1 Gelatina Taninos ++

2 Ninhidrina Aminoácidos libres -

3 Fe Cl3 Fenoles +++

4 Dragendorff Alcaloides ++

5 Mayer Alcaloides ++

6 Borntrager Quinonas ++

7 Lieberman Triterpenos o esteroideos +

8 Molish Glicósidos ++

9 Shinoda Flavonoides +++

FUENTE: Elaboración propia.

El screening fitoquimico se realizó con el extracto seco de la especie de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish”, se determinó la presencia importante de

flavonoides, fenoles y menor presencia de taninos, alcaloides, quinonas,

glicosidos.

 Leyenda

(-) SIN EVIDENCIA,

(+) BAJA EVIDENCIA,

(++) MODERADA EVIDENCIA,

(+++) ALTA EVIDENCIA.

pág. 60
4.1.2. Lectura al espectrofotómetro

Flavonoides aislados del extracto etanolico de Senna multiglandulosa


“Millhua tanquish”

a.- Lecturas en el espectro UV-Visible de la fracción 1

λ MeOHmax 275,315 nm.

λMeONamax 275,315 nm.

λCl3Almax 275,315 nm

λCl3Almax 275, 315 nm. Con HCl permanece igual.


O
CH3 CH3
O O

HO
O O
H3C

6-hidroxi-4',5,7-trimetoxiflavona

FIGURA 01: Estructura química del flavonoide; 6-hidroxi-4',5'7-


trimetoxiflavona.

Según el espectro en metanol el esqueleto básico que corresponde esta


fracción es de una flavona, al tratarlo con metoxido de sodio no presenta
ningún cambio tiene un hidroxilo libre en la posición 6, presenta metoxidos
en la posición 4', 5,7 al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio no se
observa efecto bactocromico que luego al tratarlo con HCL los picos se
mantienen.

b.- Lecturas en el espectro UV-Visible fracción 2

λ MeOH max 258,360 nm.

λMeONamax 278, 414 nm.

λCl3Almax 267, 410 nm

λCl3Almax 268, 415 nm. Con HCl permanece igual.

pág. 61
CH3
O
O
CH3 CH3
O O

OH
OH O

5-hidroxi-3',4',7-trimetoxiflavonol

FIGURA 02: Estructura química del flavonoide; 5-hidroxi-3',4',7-


trimetoxiflavonol.

Según el espectro en metanol el esqueleto básico que corresponde esta


fracción es de un flavonol, al tratarlo con metoxido de sodio no presenta
ningún cambio tiene un hidroxilo libre en la posición 5, presenta metoxidos
en la posición 3',4',7 al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio no se
observa efecto bactocromico que luego al tratarlo con HCL los picos se
mantienen.

c.- Lecturas en el espectro UV-Visible fracción 3

λ MeOHmax 260,365 nm.

λMeONamax 281, 404 nm.

λCl3Almax 273, 414 nm

λCl3Almax 273, 414 nm. Con HCl permanece igual.

CH3
O
OH
CH3
O O
O
CH3
OH
OH O

4',5-dihidroxi-3',5',7-trimetoxiflavonol

FIGURA 03: Estructura química del flavonoide; 4',5-dihidroxi-3',5',7-


trimetoxiflavonol.

pág. 62
Según el espectro en metanol el esqueleto básico que corresponde esta
fracción es de un flavonol, al tratarlo con metoxido de sodio no presenta
ningún cambio tiene un hidroxilo libre en la posición 4', 5 presenta
metoxidos en la posición 3',5',7 al hacer reaccionar con tricloruro de
aluminio no se observa efecto bactocromico que luego al tratarlo con HCL
los picos se mantienen.

d.- Lectura en el espectro UV-visible fracción 4

λ MeOHmax 275, 416 nm.

λMeONamax 275, 402 nm.

λCl3Almax 277, 416 nm

λCl3Almax 277, 410 nm. Con HCl permanece igual.

HO O CH3

CH3 OH
O O

H
O

3',7-dihidroxi-4',6-dimetoxiaurona

FIGURA 04: Estructura química del flavonoide; 3',7-dihidroxi-4',6-


dimetoxiaurona.

Según el espectro en metanol el esqueleto básico que corresponde


esta fracción es de una Aurona al tratarlo con metoxido de sodio no
presenta ningún cambio tiene un hidroxilo libre en la posición 3', 7
presenta metoxidos en la posición 4',6 al hacer reaccionar con tricloruro
de aluminio no se observa efecto bactocromico que luego al tratarlo
con HCL los picos se mantienen.

pág. 63
4.1.3. Prueba de hipótesis efecto antiinflamatorio

En este apartado se realizó la docimasia de las hipótesis planteadas para

la ejecución de la presente investigación, considerando que la hipótesis

principal corresponde a:

“El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish” en ratas posee efecto antiinflamatorio.”

Debido a la complejidad de las variables de medición, está se subdividió

en hipótesis específicas.

a.- Contrastación de Hipótesis Específicas

Para poder entender de manera precisa el evento de estudio, se analizó

de manera separada sus hipótesis específicas, las cuales fueron:

1. “El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish” tiene actividad antiinflamatoria

comparado con Diclofenaco (gel) en ratas.”

2. “Existe una concentración del gel a base del extracto etanólico de las

hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” con efecto

antiinflamatorio en ratas”

3. “Los tratamientos del gel a base del extracto etanólico de las hojas de

Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” en ratas varía según el

tiempo”

pág. 64
a.1.- Contrastación de Hipótesis Específica 1

La hipótesis específica 1 corresponde a:

“El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna

multiglandulosa “Millhua tanquish” tiene actividad antiinflamatoria

comparado con Diclofenaco (gel) en ratas.”

A fin de poder realizar la docimasia de esta hipótesis, se realizó el ritual

de significancia estadística, para lo cual se sugirió una secuencia

ordenada de pasos:

I.- Formulación de Hipótesis Estadística

H0: Las medidas de la magnitud de inflamación son iguales entre todos

los tratamientos evaluados.

H1: Las medidas de la magnitud de inflamación son diferentes entre

todos los tratamientos evaluados.

II.- Establecer el Nivel de Significancia

Para la presente investigación se decidió trabajar con un nivel de

confianza del 95%, correspondiente a un nivel de significancia (α) de 5% =

0.05.

III.- Determinación del Estadígrafo a Emplear

Al tratarse de una variable cualitativa y otra cuantitativa se planteó seguir

la vía de los análisis bivariados, así también se identificó que la variable

de agrupación determina siete categorías, con lo que se estableció la

necesidad de utilizar estadígrafos para más de dos muestras

pág. 65
independientes. A fin de poder identificar el estadígrafo idóneo para el

análisis, se deberá cumplir con los siguientes supuestos:

• Determinación de la Distribución Normal de los Datos

Para esto se ejecutó de la prueba Shapiro-Wil, al tratarse de un tamaño

muestral inferior a 30 unidades muestrales, trabajándose bajo las

siguientes hipótesis de prueba:

H0: La distribución de las medidas de la magnitud de inflamación entre

todos los tratamientos evaluados sigue una distribución normal.

H1: La distribución de las medidas de la magnitud de inflamación entre

todos los tratamientos evaluados no sigue una distribución normal.

TABLA 03.- Análisis de la distribución de la magnitud de inflamación para cada

tratamiento evaluado.

TRATAMIENTO EVALUADO VALOR GRADOS DE LIBERTAD P-VALOR†

Control (-) 0.913 25 0.036*

Control (+) 0.953 25 0.295**

Extracto al 1% 0.906 25 0.024*

Extracto al 3% 0.922 25 0.058**

Extracto al 5% 0.942 25 0.163**

Extracto puro 0.939 25 0.138**

Gel Puro 0.921 25 0.053**

†Prueba de normalidad de Shapiro-Wilk

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza (P<0.05)

**Diferencia Estadísticamente No Significativa al 95% de Confianza (P>0.05)

pág. 66
Figura 05.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante

la exposición a control (-).

Figura 06.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante la

exposición a control (+).

Figura 07.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante la

exposición a Extracto al 1%.

pág. 67
Figura 08.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante la

exposición a Extracto al 3%.

Figura 09.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante la

exposición a Extracto al 5%.

Figura 10.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación ante la

exposición a Extracto Puro.

pág. 68
Al encontrarse resultados con un P-Valor menor a 0.05, se rechazó la

hipótesis nula, por lo que declararemos que se ha establecido la

distribución no normal de los datos, lo que sustenta la certeza del uso de

una prueba no paramétrica.

IV.- Estimación del P-Valor

Se llevó a cabo la ejecución de la prueba H de Kruskal-Wallis, a fin de

poner a prueba la hipótesis específica planteada.

TABLA 04.- Distribución de las medidas de la magnitud inflamación en

milímetros según tratamiento evaluado en ratas.

TRATAMIENTO MAGNITUD DE INFLAMACIÓN


P-VALOR†
EVALUADO
Media (DE) Mediana (RIQ)

Control (-) 2.81 (0.32) 2.80 (0.60)

Control (+) 2.11 (0.92) 2.00 (1.45)

Extracto al 1% 3.04 (0.29) 3.00 (0.30)

Extracto al 3% 3.35 (0.41) 3.50 (0.70) <0.001*

Extracto al 5% 2.05 (1.00) 2.00 (1.65)

Extracto puro 1.94 (1.00) 1.80 (1.65)

Gel Puro 3.01 (0.26) 3.00 (0.45)

†Prueba H de Kruskal-Wallis.

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza. (P<0.05)

pág. 69
Figura 11.- Gráfico de caja y bigotes de la magnitud de inflamación según

tratamiento evaluado en ratas.

V.-Toma de Decisión

Al encontrarse un P-Valor menor a 0.05, se rechazó la hipótesis nula, por

lo que declararemos que se ha establecido la dependencia de las

variables; es decir, que la magnitud de inflamación varía

significativamente, donde la menor inflamación se alcanzó con el extracto

puro, mientras que la máxima inflamación global fue con el extracto al 3

por ciento, de esta manera el extracto posee efecto antiinflamatorio

comparado con Diclofenaco (gel).

b.- Contrastación de Hipótesis Específica 2

La hipótesis específica 2 corresponde a:

“Existe una concentración del gel a base del extracto etanólico de las

hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” con efecto

antiinflamatorio en ratas”

A fin de poder realizar la docimasia de esta hipótesis, se realizó el ritual de

significancia estadística, para lo cual se siguió una secuencia ordenada de

pasos:

pág. 70
I.- Formulación de Hipótesis Estadística

H0: La magnitud de la inflamación es igual en todos los momentos de

evaluación.

H1: La magnitud de la inflamación es diferente en todos los momentos

de evaluación.

II.- Establecer el Nivel de Significancia

Para la presente investigación se decidió trabajar con un nivel de confianza

del 95%, correspondiente a un nivel de significancia (α) de 5% = 0.05.

III.- Determinación del Estadígrafo a Emplear

Al tratarse de una variable cuantitativa que se evalúa siguiendo un diseño

longitudinal en 5 momentos, se estableció la necesidad de utilizar

estadígrafos para más de dos muestras relacionadas. A fin de poder

identificar el estadígrafo idóneo para el análisis, se cumplió con los

siguientes supuestos:

• Determinación de la Distribución Normal de los Datos

Para esto se ejecutó de la prueba Kolmogorov-Smirnov, al tratarse de un

tamaño muestral superior a 30 unidades muestrales por cada momento, se

trabajó bajo las siguientes hipótesis de prueba:

H0: La distribución de la magnitud de inflamación en todos los

momentos de evaluación sigue una distribución normal.

H1: La distribución de la magnitud de inflamación en todos los

momentos de evaluación no sigue una distribución normal.

TABLA 05.- Análisis de la distribución de la magnitud en milímetro de

inflamación en cada momento de evaluación.

pág. 71
MOMENTO EVALUADO VALOR GRADOS DE LIBERTAD P-VALOR†

Inflamación a las 2 Horas 0.154 35 0.034*

Inlfamación a las 3 Horas 0.108 35 0.200**

Inflamación a las 6 Horaas 0.236 35 <0.001*

Inflamación a las 18 Horas 0.188 35 0.003*

Inflamación a las 21 Horas 0.243 35 <0.001*

†Prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza (P<0.05)

**Diferencia Estadísticamente No Significativa al 95% de Confianza (P>0.05)

Figura 12.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación a las

2 horas.

Figura 13.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación a las 3

horas.

pág. 72
Figura 14.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación a las 6

horas.

Figura 15.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación a las

18 horas.

Figura 16.- Gráfico Q-Q de la distribución de la magnitud de inflamación a las

21 horas.

pág. 73
Al encontrarse algunos resultados con un P-Valor menor a 0.05, se

rechazó la hipótesis nula, por lo que declararemos que se ha establecido

la distribución no normal de los datos, lo que sustenta la certeza del uso

de una prueba no paramétrica Signos Rangos de Friedman.

IV.- Estimación del P-Valor

Se llevó a cabo la ejecución de la prueba Signos Rangos de Friedman, a fin

de poner a prueba la hipótesis específica planteada.

TABLA 06.- Distribución de las medidas de la magnitud en milímetros de

inflamación en los momentos de evaluación en ratas.

MAGNITUD DE INFLAMACIÓN
MOMENTO DE EVALUACIÓN P-VALOR†
Media (DE) Mediana (RIQ)

Inflamación a las 2 Horas 3.33 (0.33) 3.40 (0.60)

Inflamación a las 3 Horas 3.00 (0.43) 3.00 (0.50)

Inflamación a las 6 Horas 2.66 (0.67) 3.00 (1.20) <0.001*

Inflamación a las 18 Horas 2.17 (0.73) 2.50 (1.40)

Inflamación a las 21 Horas 1.92 (1.03) 2.50 (2.00)

†Prueba Signos Rangos de Friedman.

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza. (P<0.05)

pág. 74
Figura 17.- Gráfico de caja y bigotes de la magnitud de inflamación en los

momentos de evaluación en ratas.

V.-Toma de Decisión

Al encontrarse un P-Valor menor a 0.05, se rechazó la hipótesis nula, por lo

que declararemos que se ha establecido la dependencia de las variables;

es decir, que la magnitud de inflamación varía significativamente con el

tiempo de evaluación, donde la menor inflamación se alcanzó después de

21 horas de tratamiento, mientras que la máxima inflamación fue a las 2

horas de evaluación, se determinó la concentración al 5% tiene efecto

antiinflamatorio similar al control (+).

c.- Contrastación de Hipótesis Específica 3

La hipótesis específica 3 corresponde a:

“Los tratamientos del gel a base del extracto etanólico de las hojas de

Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” en ratas varía según el tiempo.”

A fin de poder realizar la docimasia de esta hipótesis, se realizó el ritual de

significancia estadística, para lo cual se siguió una secuencia ordenada de

pasos:

pág. 75
I.- Formulación de Hipótesis Estadística

H0: El modelo de interacción no explica las diferencias en las medidas

de la inflamación.

H1: El modelo de interacción si explica las diferencias en las medidas

de la inflamación.

II.- Establecer el Nivel de Significancia

Para la presente investigación se decidió trabajar con un nivel de confianza

del 95%, correspondiente a un nivel de significancia (α) de 5% = 0.05.

III.- Determinación del Estadígrafo a Emplear

Al tratarse de una variable independiente cualitativa y una variable

dependiente cuantitativa que se desarrollan en un diseño longitudinal que

actúa como una variable independiente cualitativa se planteó seguir la vía

de los análisis multivariados; por estos motivos se estableció la necesidad

de emplear el Análisis de Varianza (ANOVA) de medidas repetidas de dos

Factores.

IV.- Estimación del P-Valor

Se llevó a cabo la ejecución de la prueba Análisis de Varianza (ANOVA) de

medidas repetidas de dos Factores, a fin de poner a prueba la hipótesis

específica planteada.

pág. 76
TABLA 07.- Evaluación del modelo de Análisis de Varianza (ANOVA) de

medidas repetidas de dos factores de la magnitud en milímetros de la

inflamación.

FACTORES Grados de Libertad F P-VALOR†

Tratamiento 6 49.06 <0.001*

Tiempo 4 721.98 <0.001*

Interacción 24 63.27 <0.001*

†Análisis de la Significancia de cada Factor.

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza. (P<0.05)

TABLA 08.- Medias de la magnitud en milímetros de inflamación según

tratamiento evaluado y momento de evaluación.

TRATAMIENTO MOMENTO DE EVALUACIÓN


EVALUADO 2 Horas 3 Horas 6 Horas 18 horas 21 Horas

Control (-) 2.82 3.12 3.12 2.52 2.48

Control (+) 3.46 2.62 2.02 1.54 0.90

Extracto al 1% 3.22 3.22 3.22 2.78 2.78

Extracto al 3% 3.74 3.74 3.28 2.94 3.06

Extracto al 5% 3.46 2.66 1.98 1.36 0.78

Extracto puro 3.42 2.54 1.82 1.28 0.66

Gel Puro 3.18 3.12 3.18 2.78 2.78

TABLA 09.- Comparación post-hoc de las medias de la magnitud en milímetros

de inflamación entre momento de evaluación y según tratamiento evaluado.

MAGNITUD DE INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

pág. 77
MAGNITUD DE INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

CONTROL (-)

2 Horas - 3 Horas 0.30 0.11; 0.49 10.64 0.001*

3 Horas - 6 Horas 0.00 -0.23; 0.23 0.00 1.000**

6 Horas - 18 Horas -0.60 -0.81; -0.39 -19.23 <0.001*

18 Horas - 21 Horas -0.04 -0.22; 0.14 -1.59 <0.001*

CONTROL (+)

2 Horas - 3 Horas -0.84 -1.03; -0.65 -24.28 <0.001*

3 Horas - 6 Horas -0.60 -0.83; -0.37 -22.90 <0.001*

6 Horas - 18 Horas -0.48 -0.69; -0.27 -23.76 <0.001*

18 Horas - 21 Horas -0.64 -0.82; -0.46 -41.56 <0.001*

EXTRACTO AL 1%

2 Horas - 3 Horas 0.00 -0.19; 0.19 0.00 1.000**

3 Horas - 6 Horas 0.00 -0.23; 0.23 0.00 1.000**

6 Horas - 18 Horas -0.44 -0.65; -0.23 -13.66 <0.001*

18 Horas - 21 Horas 0.00 -0.18; 0.18 0.00 1.000**

EXTRACTO AL 3%

2 Horas - 3 Horas 0.00 -0.19; 0.19 0.00 1.000**

3 Horas - 6 Horas -0.46 -0.69; -0.23 -12.30 <0.001*

6 Horas - 18 Horas -0.34 -0.55; -0.13 -10.37 <0.001*

18 Horas - 21 Horas 0.12 -0.06; 0.3 4.08 0.517*

EXTRACTO AL 5%

2 Horas - 3 Horas -0.80 -0.99; -0.61 -23.12 <0.001*

3 Horas - 6 Horas -0.68 -0.91; -0.45 -25.56 <0.001*

6 Horas - 18 Horas -0.62 -0.83; -0.41 -31.31 <0.001*

18 Horas - 21 Horas -0.58 -0.76; -0.4 -42.65 <0.001*

pág. 78
MAGNITUD DE INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

EXTRACTO PURO

2 Horas - 3 Horas -0.88 -1.07; -0.69 -25.73 <0.001*

3 Horas - 6 Horas -0.72 -0.95; -0.49 -28.35 <0.001*

6 Horas - 18 Horas -0.54 -0.75; -0.33 -29.67 <0.001*

18 Horas - 21 Horas -0.62 -0.8; -0.44 -48.44 <0.001*

GEL PURO

2 Horas - 3 Horas -0.06 -0.25; 0.13 -1.89 1.000**

3 Horas - 6 Horas 0.06 -0.17; 0.29 1.92 1.000**

6 Horas - 18 Horas -0.40 -0.61; -0.19 -12.58 <0.001*

18 Horas - 21 Horas 0.00 -0.18; 0.18 0.00 1.000**

†Comparación Post-Hoc de Bonferroni.

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza. (P<0.05)

**Diferencia Estadísticamente No Significativa al 95% de Confianza. (P>0.05)

TABLA 10.- Comparación post-hoc de las medias de la magnitud en milímetros

de ancho inflamación entre tratamiento a evaluar y momento de evaluación.

MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

2 HORAS

Control (-) - Control (+) -0.64 -1.08; -0.20 -18.50 0.001*

Control (-) - Extracto al 1% -0.40 -0.84; 0.04 -12.42 0.112**

Control (-) - Extracto al 3% -0.92 -1.36; -0.48 -24.60 <0.001*

Control (-) - Extracto al 5% -0.64 -1.08; -0.20 -18.50 0.001*

Control (-) - Extracto Puro -0.60 -1.04; -0.16 -17.54 0.002*

pág. 79
MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

Control (-) - Gel Puro -0.36 -0.80; 0.08 -11.32 0.234**

Control (+) - Extracto al 1% 0.24 -0.20; 0.68 7.45 1.000**

Control (+) - Extracto al 3% -0.28 -0.72; 0.16 -7.49 0.915**

Control (+) - Extracto al 5% 0.00 -0.44; 0.44 0.00 1.000**

Control (+) - Extracto Puro 0.04 -0.40; 0.48 1.17 1.000**

Control (+) - Gel Puro 0.28 -0.16; 0.72 8.81 0.915**

Extracto al 1% - Extracto al 3% -0.52 -0.96; -0.08 -13.90 0.011*

Extracto al 1% - Extracto al 5% -0.24 -0.68; 0.20 -6.94 1.000**

Extracto al 1% - Extracto Puro -0.20 -0.64; 0.24 -5.85 1.000**

Extracto al 1% - Gel Puro 0.04 -0.40; 0.48 1.26 1.000**

Extracto al 3% - Extracto al 5% 0.28 -0.16; 0.72 8.09 0.915**

Extracto al 3% - Extracto Puro 0.32 -0.12; 0.76 9.36 0.472**

Extracto al 3% - Gel Puro 0.56 0.12; 1.00 17.61 0.005*

Extracto al 5% - Extracto Puro 0.04 -0.40; 0.48 1.17 1.000**

Extracto al 5% - Gel Puro 0.28 -0.16; 0.72 8.81 0.915**

Extracto Puro - Gel Puro 0.24 -0.20; 0.68 7.55 1.000**

3 HORAS

Control (-) - Control (+) 0.50 0.11; 0.89 19.08 0.004*

Control (-) - Extracto al 1% -0.10 -0.49; 0.29 -3.11 1.000**

Control (-) - Extracto al 3% -0.62 -1.01; -0.23 -16.58 <0.001*

Control (-) - Extracto al 5% 0.46 0.07; 0.85 17.29 0.01*

Control (-) - Extracto Puro 0.58 0.19; 0.97 22.83 0.001*

Control (-) - Gel Puro 0.00 -0.39; 0.39 0.00 1.000**

Control (+) - Extracto al 1% -0.60 -0.99; -0.21 -18.63 <0.001*

Control (+) - Extracto al 3% -1.12 -1.51; -0.73 -29.95 <0.001*

pág. 80
MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

Control (+) - Extracto al 5% -0.04 -0.43; 0.35 -1.50 1.000**

Control (+) - Extracto Puro 0.08 -0.31; 0.47 3.15 1.000**

Control (+) - Gel Puro -0.50 -0.89; -0.11 -16.03 0.004*

Extracto al 1% - Extracto al 3% -0.52 -0.91; -0.13 -13.90 0.002*

Extracto al 1% - Extracto al 5% 0.56 0.17; 0.95 21.05 0.001*

Extracto al 1% - Extracto Puro 0.68 0.29; 1.07 26.77 <0.001*

Extracto al 1% - Gel Puro 0.10 -0.29; 0.49 3.21 1.000**

Extracto al 3% - Extracto al 5% 1.08 0.69; 1.47 40.60 <0.001*

Extracto al 3% - Extracto Puro 1.20 0.81; 1.59 47.24 <0.001*

Extracto al 3% - Gel Puro 0.62 0.23; 1.01 19.87 <0.001*

Extracto al 5% - Extracto Puro 0.12 -0.27; 0.51 4.72 1.000**

Extracto al 5% - Gel Puro -0.46 -0.85; -0.07 -14.74 0.01*

Extracto Puro - Gel Puro -0.58 -0.97; -0.19 -18.59 0.001*

6 HORAS

Control (-) - Control (+) 1.10 0.58; 1.62 54.46 <0.001*

Control (-) - Extracto al 1% -0.10 -0.62; 0.42 -3.11 1.000**

Control (-) - Extracto al 3% -0.16 -0.68; 0.36 -4.88 1.000**

Control (-) - Extracto al 5% 1.14 0.62; 1.66 57.58 <0.001*

Control (-) - Extracto Puro 1.30 0.78; 1.82 71.43 <0.001*

Control (-) - Gel Puro -0.06 -0.58; 0.46 -1.89 1.000**

Control (+) - Extracto al 1% -1.20 -1.72; -0.68 -37.27 <0.001*

Control (+) - Extracto al 3% -1.26 -1.78; -0.74 -38.41 <0.001*

Control (+) - Extracto al 5% 0.04 -0.48; 0.56 2.02 1.000**

Control (+) - Extracto Puro 0.20 -0.32; 0.72 10.99 1.000**

Control (+) - Gel Puro -1.16 -1.68; -0.64 -36.48 <0.001*

pág. 81
MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

Extracto al 1% - Extracto al 3% -0.06 -0.58; 0.46 -1.83 1.000**

Extracto al 1% - Extracto al 5% 1.24 0.72; 1.76 62.63 <0.001*

Extracto al 1% - Extracto Puro 1.40 0.88; 1.92 76.92 <0.001*

Extracto al 1% - Gel Puro 0.04 -0.48; 0.56 1.26 1.000**

Extracto al 3% - Extracto al 5% 1.30 0.78; 1.82 65.66 <0.001*

Extracto al 3% - Extracto Puro 1.46 0.94; 1.98 80.22 <0.001*

Extracto al 3% - Gel Puro 0.10 -0.42; 0.62 3.14 1.000**

Extracto al 5% - Extracto Puro 0.16 -0.36; 0.68 8.79 1.000**

Extracto al 5% - Gel Puro -1.20 -1.72; -0.68 -37.74 <0.001*

Extracto Puro - Gel Puro -1.36 -1.88; -0.84 7.55 <0.001*

18 HORAS

Control (-) - Control (+) 0.98 0.47; 1.49 63.64 <0.001*

Control (-) - Extracto al 1% -0.26 -0.77; 0.25 -9.35 1.000**

Control (-) - Extracto al 3% -0.42 -0.93; 0.09 -14.29 0.206**

Control (-) - Extracto al 5% 1.16 0.65; 1.67 85.29 <0.001*

Control (-) - Extracto Puro 1.24 0.73; 1.75 96.88 <0.001*

Control (-) - Gel Puro -0.26 -0.77; 0.25 -9.35 1.000**

Control (+) - Extracto al 1% -1.24 -1.75; -0.73 -44.60 <0.001*

Control (+) - Extracto al 3% -1.40 -1.91; -0.89 -47.62 <0.001*

Control (+) - Extracto al 5% 0.18 -0.33; 0.69 13.24 1.000**

Control (+) - Extracto Puro 0.26 -0.25; 0.77 20.31 1.000**

Control (+) - Gel Puro -1.24 -1.75; -0.73 -44.60 <0.001*

Extracto al 1% - Extracto al 3% -0.16 -0.67; 0.35 -5.44 1.000**

Extracto al 1% - Extracto al 5% 1.42 0.91; 1.93 104.41 <0.001*

Extracto al 1% - Extracto Puro 1.50 0.99; 2.01 117.19 <0.001*

pág. 82
MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

Extracto al 1% - Gel Puro 0.00 -0.51; 0.51 0.00 1.000**

Extracto al 3% - Extracto al 5% 1.58 1.07; 2.09 116.18 <0.001*

Extracto al 3% - Extracto Puro 1.66 1.15; 2.17 129.69 <0.001*

Extracto al 3% - Gel Puro 0.16 -0.35; 0.67 5.76 1.000**

Extracto al 5% - Extracto Puro 0.08 -0.43; 0.59 6.25 1.000**

Extracto al 5% - Gel Puro -1.42 -1.93; -0.91 -51.08 <0.001*

Extracto Puro - Gel Puro -1.50 -2.01; -0.99 -8.63 <0.001*

21 HORAS

Control (-) - Control (+) 1.58 1.19; 1.97 175.56 <0.001*

Control (-) - Extracto al 1% -0.30 -0.69; 0.09 -10.79 0.355**

Control (-) - Extracto al 3% -0.58 -0.97; -0.19 -18.95 0.001*

Control (-) - Extracto al 5% 1.70 1.31; 2.09 217.95 <0.001*

Control (-) - Extracto Puro 1.82 1.43; 2.21 275.76 <0.001*

Control (-) - Gel Puro -0.30 -0.69; 0.09 -10.79 0.355**

Control (+) - Extracto al 1% -1.88 -2.27; -1.49 -67.63 <0.001*

Control (+) - Extracto al 3% -2.16 -2.55; -1.77 -70.59 <0.001*

Control (+) - Extracto al 5% 0.12 -0.27; 0.51 15.38 1.000**

Control (+) - Extracto Puro 0.24 -0.15; 0.63 36.36 1.000**

Control (+) - Gel Puro -1.88 -2.27; -1.49 -67.63 <0.001*

Extracto al 1% - Extracto al 3% -0.28 -0.67; 0.11 -9.15 0.522**

Extracto al 1% - Extracto al 5% 2.00 1.61; 2.39 256.41 <0.001*

Extracto al 1% - Extracto Puro 2.12 1.73; 2.51 321.21 <0.001*

Extracto al 1% - Gel Puro 0.00 -0.39; 0.39 0.00 1.000**

Extracto al 3% - Extracto al 5% 2.28 1.89; 2.67 292.31 <0.001*

Extracto al 3% - Extracto Puro 2.40 2.01; 2.79 363.64 <0.001*

pág. 83
MAGNITUD DE LA INFLAMACIÓN
MOMENTOS A COMPARAR Diferencia P-VALOR†
IC 95% Variación (%)
de Medias

Extracto al 3% - Gel Puro 0.28 -0.11; 0.67 10.07 0.522**

Extracto al 5% - Extracto Puro 0.12 -0.27; 0.51 18.18 1.000**

Extracto al 5% - Gel Puro -2.00 -2.39; -1.61 -71.94 <0.001*

Extracto Puro - Gel Puro -2.12 -2.51; -1.73 -34.53 <0.001*

†Comparación Post-Hoc de Bonferroni.

*Diferencia Estadísticamente Significativa al 95% de Confianza. (P<0.05)

**Diferencia Estadísticamente No Significativa al 95% de Confianza. (P>0.05)

Figura 18.- Gráfico de dispersión de medias de la magnitud de inflamación

entre tratamiento evaluado y según momento de evaluación en ratas.

V.-Toma de Decisión

Al encontrarse un P-Valor menor a 0.05, se rechazó la hipótesis nula, por lo

que declararemos que se ha establecido la dependencia de las variables;

es decir, que cada tratamientos evaluados varían significativamente

conforme pasa el tiempo; además se evidenció que el extracto puro

pág. 84
presento un mejor comportamiento antiinflamatorio a lo largo de todos los

momentos de tiempo.

d.- Evaluación de la Validez de la Hipótesis General

De la misma manera que con las hipótesis específicas, la hipótesis general:

“El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa

“Millhua tanquish” en ratas posee efecto antiinflamatorio”, solo se considera

verdadera por inducción, al establecerse la veracidad de las hipótesis

específicas que la conforman, así podemos agrupar las hipótesis

específicas y sus resultados en la siguiente tabla:

Tabla 11.- Análisis de la aceptación de la hipótesis general como respuesta

inductiva a los resultados estadísticos de sus hipótesis específicas.

RESULTADO
HIPÓTESIS ESPECÍFICAS
ESTADÍSTICO

“El gel a base del extracto etanólico de las hojas de


Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” tiene actividad
SE ACEPTA
antiinflamatoria comparado con Diclofenaco (gel) en
ratas.”

“Existe una concentración del gel a base del extracto


etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa SE ACEPTA
“Millhua tanquish” con efecto antiinflamatorio en ratas.”

“Los tratamientos del gel a base del extracto etanólico de


las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” en SE ACEPTA

ratas varía según el tiempo.”


RESULTADO
HIPÓTESIS GENERAL
INDUCTIVO

“El gel a base del extracto etanólico de las hojas de


SE ACEPTA
Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” en ratas posee

pág. 85
efecto antiinflamatorio.”

4.2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

4.2.1. Evaluación de la inflamación.

 Poma. E. et al. (2011). En su investigación; “Estudio fitoquímico y


actividad antiinflamatoria de la Annona muricata l. (guanábana) de
Cuzco”. Mediante el análisis fitoquímico se observó la presencia de
flavonoides. Con el empleo del método del edema plantar en ratas
inducido por λ-carragenina, Los resultados obtenidos fueron
estadísticamente diferentes. La dosis administrada de 1,5 mg/Kg de
peso del extracto acuoso de hojas secas de Annona muricata L.
produjo un efecto antiinflamatorio, con eficacia del 53,18% en
comparación con la Indometacina. (9)

El gel a base del extracto etanolico de hojas de Senna


multiglandulosa “Millhua tanquish”, de acuerdo a los ensayos
efectuados y la hipótesis propuesta, han demostrado efecto
antiinflamatoria el cual se realizó mediante el método del edema
plantar en ratas. La variación comparada con la presente
investigación es el tratamiento en este caso vía tópica posiblemente
es la más eficaz que el tratamiento vía oral en inflamaciones externas.

 Ramírez, E. et al. (2014); realizó una investigación “Actividad


antioxidante, antiinflamatoria e inmunomoduladora del extracto
clorofórmico de las hojas de Chuquiraga lessing “huamanpinta”. Se
administraron ibuprofeno 120 mg/Kg y prednisona 1,2 mg/Kg, como
estándares, y el extracto a 100, 200 y 300 mg/Kg de peso. En el
porcentaje de inhibición de la inflamación, se calculó la media de los
incrementos de volumen de cada lote a 0,5; 1; 2; 3; 5 y 7 horas. El

pág. 86
extracto presentó la mayor actividad antiinflamatoria a la dosis de 300
mg/Kg (39,1%) y 200 mg/Kg de peso (32,7%). (14)

Se aplicó el gel a diferentes concentraciones al 1, 3, 5 por ciento del


extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Mmillhua
tanquish” respectivamente, también se aplicó extracto puro, gel puro,
y Diclofenaco (gel) como estándar, como resultado se evidencio que
dicho extracto si tiene efecto antiinflamatorio comparado con
Diclofenaco (gel), además se evidenció que el extracto puro presento
un mejor comportamiento antiinflamatorio a lo largo de todos los
momentos de tiempo.

 Díaz, M et al. (2012); su investigación, “Evaluación de la


actividad antiinflamatoria de una crema a partir del extracto purificado
de Baccharis Tricuneata (L.f.) Pers. ( taya)” menciona que la crema
elaborada a diferentes concentraciones mostro significativa actividad
antiinflamatoria desde la mínima concentración al 1 por ciento de
56.38 % mostrando mayor efectividad conforme aumentaban la
concentración del extracto el cual se llevó acabo in vivo. (12)

El tiempo es determinante en la fase del tratamiento porque la


magnitud de inflamación varía significativamente con el tiempo de
evaluación, donde la menor inflamación se alcanzó después de 21
horas de tratamiento, mientras que la máxima inflamación fue a las 2
horas de evaluación, al evaluar todos los tratamientos aplicados se
demostró que a la concentración al 5 por ciento tiene efecto
antiinflamatorio similar al control (+)

pág. 87
4.2.2. Identificación de metabolitos secundarios.

Sisalema S. en su investigación: Separación de metabolitos


secundarios de Martin galvis (Senna multijuga) con actividad
antibacteriana. El tamizaje fitoquímico indicó que (Senna multijuga)
contiene antraquinonas, triterpenos, esteroides, monoterpenos,
sesquiterpeno lactonas, flavonoides y cumarinas. (24).

Vargas C. en su investigación: Estudio de la actividad cicatrizante y


antiinflamatoria del extracto alcohólico de las hojas de Senna
reticulata (Willd.) H. Irwin & Barneby (Retama). Se determinaron los
metabolitos secundarios mediante la marcha fitoquimica, identificando
flavonoides, alcaloides, taninos, saponinas y glicócidos. (38)

En la presente investigación, el tamizaje farmacognóstico permitió


determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes
químicos del extracto etanólico de hojas de Senna multiglandulosa
“Millhua tanquish”, como son: compuestos fenólicos, flavonoides,
taninos, quinonas, glucósidos y alcaloides.

En el análisis cromatográfico en capa fina (TLC), se utiliza el sistema


de solventes cloroformo: metanol (3:1), debido al color de la
fluorescencia que desarrollan a la luz UV, que se intensifica o cambia
con exposición de vapores de amoniaco, se observó la presencia de
flavonoides, esta metodología fue desarrollada por Lock, O. (4)

El sistema de solventes cloroformo: metanol (3:1), resulto ser el más


adecuado porque permite apreciar el mayor número de componentes
con resolución óptica, efectuado la cromatografía a escala preparativa
se observó las líneas de color a la luz UV, 365, 354 nm, cada una de
estas líneas fue extraídas, luego se purificó y guardó en viales para

pág. 88
ser elucidadas mediante espectroscopia UV-Visible en metanol y con
reactivos de desplazamiento químico cuyo resultado se muestra en
(anexo 13). Según Marby. (23)

El método más usual para un análisis preliminar de un flavonoide es la


absorción UV-Vis; esta técnica es usada tanto para identificar el tipo
de flavonoide, los espectros de flavonoides son determinados
usualmente en solución metanolica. El espectro típicamente consiste
de dos máximos de absorción en los rangos 240-285 nm, (banda II,
BII) y 300-500 nm (banda I, BI) Lock, O. (4)

Se seleccionó cuatro fracciones purificadas para el estudio


espectrofotométrico los reactivos de desplazamiento sirven para
elucidar los espectros y se observó de la siguiente manera:
Fracción 1: Observación, con el reactivo metanol se observó un
desplazamiento a 275, 416 nm, al agregar metóxido de sodio se
esperó 5 min, en seguida se observó un desplazamiento a 275,
402 nm, al agregarle tricloruro de aluminio se observó un
desplazamiento a 277, 416 nm, a continuaçión se agrego ácido
clorhidrico se espero 5 min, se observo a 277, 410 nm, permanció
igual no existe efecto batocromico, representa el siguiente nombre
del metabolito secundario: 6-hidroxi-4',5'7-trimetoxiflavona.

Fracción 2: Observación, con el reactivo metanol se observó un


desplazamiento a 258,360 nm, al agregar metóxido de sodio se
esperó 5 min, en seguida se observó un desplazamiento a 278, 414
nm, al agregarle tricloruro de aluminio se observó un
desplazamiento a 267, 410 nm, a continuación se agregó ácido
clorhidrico, se espero 5 min, Se observó a 268, 415 nm,
permaneció igual no existe efecto batocromico, representa el
siguiente nombre del metabolito secundario: 5-hidroxi-3',4',7-
trimetoxiflavonol.

pág. 89
Fracción 3: Observación, con el reactivo metanol se observó un
desplazamiento a 260,365 nm, al agregar metóxido de sodio se
esperó 5 min, en seguida se observó un desplazamiento a 281, 404
nm, al agregarle tricloruro de aluminio se observó un desplazamiento
en 273, 414 nm, a continuación se agrego ácido clorhidrico se
espero 5 min, luego se observó a 273, 414 nm, permaneció igual
no existe efecto batocromico, representa el siguiente nombre del
metabolito secundario: 4',5-dihidroxi-3',5',7-trimetoxiflavonol.

Fracción 4: Observación, con el reactivo metanol se observó un


desplazamiento a 275, 416 nm, al agregar metóxido de sodio se
esperó 5 min, en seguida se observó un desplazamiento a 275, 402
nm, al agregarle tricloruro de aluminio se observó un desplazamiento
en 277, 416 nm 273, a continuación se agrego ácido clorhidrico se
espero 5 min, luego se observó a 277, 410 nm, permaneció igual no
existe efecto batocromico, representa el siguiente nombre del
metabolito secundario: 3',7-dihidroxi-4',6-dimetoxiaurona.

pág. 90
CAPITULO V

CONCLUSIONES Y RECOMENDACINES

5.1. CONCLUSIONES.

 Según el ensayo preclínico el gel a base del extracto etanólico de hojas


de Senna multiglandulosa “Millhua tanquish” posee actividad
antinflamatoria vía tópica en ratas.

 El gel a base del extracto etanólico de hojas de Senna multiglandulosa


“Millhua tanquish” posee actividad antinflamatoria vía tópica, comparado
con el control (+) (Diclofenaco gel).

 En todas los tratamientos aplicados con el gel a base del extracto


etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa “Millhua tnquish” a la
concentración de 5 por ciento, el control (+) y extracto puro presentaron
una disminución de la inflamación significativa en cambio el extracto al 1
por ciento, gel puro, control (-) no hubo efecto antiinflamatorio
significativo, se precisa que la concentración al 5 por ciento posee efecto
antiinflamatorio.

 En el análisis espectrofotométrico se determinó la presencia de


metabolitos secundarios como son flavonoides, representado por las
siguientes estructuras químicas: 6-hidroxi-4',5'7-trimetoxiflavona, 5-
hidroxi-3',4',7-trimetoxiflavonol, 4',5-dihidroxi-3',5',7-trimetoxiflavonol,
3',7-dihidroxi-4',6-dimetoxiaurona.

pág. 91
5.2. RECOMENDACIONES.

 Este estudio es un antecedente para que se continúe con la


investigación de esta planta medicinal en otros modelos de
inflamación y se considere como materia prima en la creación de un
fitofármaco con propiedades antiinflamatoria y antioxidante.

 Se recomienda realizar un análisis cuantitativo de los metabolitos


secundarios presentes en la planta Senna multiglandulosa “Millhua
tanquish” con el fin de precisar la cantidad de cada tipo de
metabolitos secundarios, haciendo uso del IR, Espectrometría UV,
cromatografía de gases, Resonancia magnética nuclear, entre
otros.

 Es necesario el estudio de las otras partes de la planta como raíz,


tallo, flores, fruto.

pág. 92
Referencias bibliográficas.

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Colombia. Biosalud. Volumen 10 No.1, págs. 9. 2011.

pág. 98
ANEXOS
ANEXO 1: MATRIZ DE CONSISTENCIA.
“EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE UN GEL A BASE DEL EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS DE Senna multiglandulosa (MILLHUA
TANQUISH) EN RATAS”
PROBLEMA OBJETIVOS HIPOTESIS VARIABLES DIMENSI INDICADORES METODOLOGIA
ONES
GENERAL: GENERAL: GENERAL: VI: VI: VI: Identificación de DISEÑO: Experimental.
¿El gel a base del extracto Comprobar el efecto El gel a base del extracto Gel a base Fitoqímic metabolitos secundarios.
TIPO: Aplicada
del extracto oy Concentración:
etanólico de las hojas de Senna antiinflamatorio del gel a base del etanólico de las hojas de Senna
etanólico de galénico. -Extracto al 1%
Multiglandulosa (Millhua tanquish) extracto etanólico de las hojas de multiglandulosa (Millhua las hojas de NIVEL: Explicativo
-Extracto al 3%
Senna -Extracto al 5%
poseerá efecto antiinflamatorio en Senna multiglandulosa (Millhua tanquish) en ratas posee efecto POBLACION Y MUESTRA.
multiglandulo -Extracto Puro
ratas? tanquish) en ratas. antiinflamatorio. sa (Millhua La muestra estuvo
-Gel puro
tanquisH) conformada por 42 ratas
-Diclofenaco gel
evaluadas.
ESPECIFICOS: ESPECIFICOS: ESPECIFICOS: VD: VD: VD:
¿Cuál es la actividad “Comparar la actividad “EL gel a base del extracto Efecto Farmacol Cambios en el diámetro INSTRUMENTOS DE
antiinflamato ógico. de la pata inflamada de la RECOLECCION DE DATOS.
antiinflamatoria del gel a base de antiinflamattoria del gel a base del etanólico de las hojas de Senna
rio. rata medido con un TECNICA:
extracto etanólico de las hojas de extracto etanólico de las hojas de multiglandulosa (Millhua tnquish) Vernier digital en mm. Observación estructurada no
Senna multiglandulosa (Millhua Senna multiglandulosa (Millhua tiene actividad antiinflamatorio Desde 0.5 mm a 10 participante de laboratorio
mm.
tanquish) comparado con tanquish) con diclofenaco (gel) en comparado con diclofenaco (gel) INSTRUMENTO:
diclofenaco (gel) en ratas? ratas” en ratas.” Ficha de Observación Ad-
hoc.
¿En qué concentración el gel a
“Precisar la concentración del gel “Existe una concentración del VIN: Peso de Magnitud Gramos de peso de la rata PROCESAMIENTO Y
base del extracto etanólico de las la rata. . Desde 300 g ± 50 g. ANALISIS DE DATOS. Análisis
a base del extracto etanólico de gel a base del extracto etanólico
hojas de Senna multiglandulosa descriptivo e inferencial con
las hojas de Senna de las hojas de Senna los programas SPSS,
(Millhua tnquish) posee efecto mediante pruebas:.
multiglandulosa (Millhua tanquish) multiglandulosa (Millhua tnquish)
antiinflamatorio en ratas? -Shapiro-wil
con efecto antiinflamatorio en con efecto antiinflamatorio en
-H de Kruskal-Wallis.
ratas” ratas.” -Signos y rangos de
“Identificar algunos metabolitos “Existen metabolitos Friedman
¿Qué metabolitos secundario -Anova de 2 Factores de
secundarios con mayor presencia secundarios con mayor Medidas Repetidas.
presenta en mayor concentración
en el extracto etanólico de las presencia en el
el extracto etanólico de las hojas
hojas de Senna multiglandulosa extracto etanólico de las hojas
de Senna multiglandulosa (Millhua
(Millhua tnquish)” de Senna multiglandulosa
tnquish)?
(Millhua tnquish)”

pág. 99
ANEXO 2: MATRIZ DE OPERACIONALIZACION DE VARIABLES

VARIABLES DIMENSIONES INDICADORES ITEMS FUENTE INSTRUMENTO


VI: Gel a base del Fitoquímica y -Identificación de
extracto etanólico galénico metabolitos -Extracto al 1%
Tratamiento
de las hojas de secundarios. -Extracto al 3% Ficha de
administrado por el
Senna -Concentración a -Extracto al 5% Observación
investigador
multiglandulosa evaluar. -Extracto Puro Ad Hoc
(Millhua tanquish) -Gel puro
-Diclofenaco gel
VD Farmacológico Cambios en el
Efecto diámetro de la pata Pata de cada una Ficha de
antiinflamatorio. inflamada de la rata De 0.5 mm a 10 de las ratas en las Observación
medido con un mm. que se realizó la Ad hoc.
Vernier digital en experimentación
mm
V. INT. Magnitud Gramos de peso de De 300 g ± 50 g. Ficha de
Cada una de las
Peso de la rata la rata Observación
ratas
Ad hoc.

pág. 100
ANEXO 3: FORMULACION DEL PROBLEMA DE INVESTIGACION

ÁREA Farmacología, farmacognosia, farmacotecnia.


CAMPO Ensayo pre-clínico en Laboratorio.
TEMA GENERAL Efecto antiinflamatorio
TEMA ESPECIFICO Efecto antiinflamatorio del gel a base del extracto de las hojas de Senna multiglandulosa
(Millhua tanquish) en ratas.
ESPECIFICACIONES DEL TEMA “El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna multiglandulosa (Millhua tanquish)
tiene actividad antiinflamatoria comparado con Diclofenaco (gel) en ratas.

“Existe una concentración del gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna
multiglandulosa (Millhua tanquish) con efecto antiinflamatorio en ratas.”

“Existen algunos metabolitos secundarios en mayor concentracion, en el extracto etanólico


de las hojas de Senna multiglandulosa (Millhua tanquish)”.

PROBLEMA A INVESTIGAR ¿El gel a base del extracto etanólico de las hojas de Senna Multiglandulosa (Millhua
tanquish) en ratas poseerá efecto antiinflamatorio?

pág. 101
ANEXO 4: ANALISIS DEL PROBLEMA DE INVESTIGACION

Incremento de interacciones Son muchas las patologías


medicamentosas dermatológicas que cursan
con la inflamación

Incremento de los
precios
CAUSAS Irritación de la mucosa El consumo de AINES en la
gástrica actualidad es elevado.

Los fármacos antiinflamatorios de uso PROBLEMA


actual, inducen efectos secundarios
en la mayoría de los pacientes

Uso de las plantas


medicinales con el fin de Nuevas alternativas
restaurar o conservar la salud terapéuticas

Obtener un
EFECTOS
medicamento
fitofármaco para el
tratamiento de
Menor toxicidad Menor costo
inflamaciones.

pág. 102
ANEXO 5: INSTRUMENTO DE RECOLECCION DE DATOS.

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA


FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS
Y BIOQUÍMICA

FICHA DE OBSERVACIÓN AD-HOC DE RECOLECCIÓN DE DATOS DE LOS


ANIMALES (RATAS)

EFECTO ANTIINFLAMATORIO DEL GEL A BASE DEL EXTRACTO


ETANOLICO DE LAS HOJAS DE Senna multiglandulosa (Millhua tanquish)
EN RATAS.

INSTRUCCIONES

Antes de iniciar con la observación, procure encontrarse en un estado de equilibrio emocional y


somático.
Si se siente cansado, estresado o enfermo, suspenda la observación.
Procure realizar todas las mediciones bajo las mismas condiciones de comodidad.
En el caso de no tener certeza sobre la medición de alguna unidad de análisis, descarte su evaluación.
Registre los datos sin borrones ni enmendaduras.
Los espacios en los que no pueda registrar información, táchelos con una línea.

a) Datos generales
NÚMERO DE FICHA: …………………………………………………
EDAD: ……………… SEXO: macho hembra
PESO: …………………………………………………………………….
COLOR: ………………………………………………………………….
RAZA:…………………………………………………………………….

b) Datos específicos-
TRATAMIENTO EVALUADO

Control (-)  Control (+)  Extracto al 1%  Extracto al 3% 


Extracto al 5%  Extracto puro  Gel puro 
MOMENTO DE EVALUACIÓN
3 Horas
Basal 2 Horas (Inicio del 6 Horas 18 Horas 21 Horas
Tratamiento)
Espesor
de la
Pata en ________ ________ ________ ________ ________ ________
mm

pág. 103
Anexo 6: Juicio de expertos.

pág. 104
pág. 105
pág. 106
ANEXO 7: Matriz de Validación por Juicio de Expertos.

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

Matriz de Validación de Contenido por Juicio de Expertos de la Ficha de


Observación Ad-Hoc para la Recolección de Datos
"EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE UN GEL A BASE DEL EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS DE
Senna multiglandulosa (MILLHUA TANQUISH) EN RATAS”

JUEZ VALIDADOR Efectividad Pertinencia Suficiencia Viabilidad Secuencialidad Repetitividad


Dr. Gilmer Solis Sánchez 100 100 100 100 100 100 100%
Dr. Orlando Oscar Acosta Cornejo 90 100 90 100 100 100 97%
Dra. Lidia Edith Goicochea Samanez 90 90 90 100 90 80 90%
93.33% 97% 93.33% 100% 97% 93.33% 96%
*Instrumento Válido (>70%)

28 de setiembre 2016

pág. 107
ANEXO 8: Materia prima.

Fotografía 01. Recolección de Senna multiglandulosa (Millhua tanquish)

Fotografía 02. Peso de las Hojas secas y maceración, de Senna


multiglandulosa (Millhua tanquish).

pág. 108
ANEXO 9: Obtención del extracto.

Fotografía 03. Extracción y concentración del extracto.

Fotografía 04. Evaporación del solvente etanolico.

pág. 109
ANEXO 10: Tamizaje fitoquímico del extracto de hojas de Senna
multiglandulosa (Millhua tanquish).

Fotografía 05. Ensayo de solubilidad.

Fotografía 06. Ensayo para metabolitos secundarios.

Fotografía N° 7. Reactivos para identificación de metabolitos secundarios.

Fotografía 08. Extracto más Reactivos.


pág. 110
ANEXO 11: Separación de metabolitos secundarios.

Fotografía 09. Sembrado y elución de la muestra.

Fotografía 10. Fraccionamiento y purificación de metabolitos.

pág. 111
ANEXO 12. Elaboración del gel.

Fotografia 11: pesando el extracto y gel.

Fotografia 12: Mezcla del gel.

pág. 112
ANEXO 13: Evaluación de la actividad antiinflamatoria del gel de extracto
de hojas de Senna multiglandulosa, (Millhua tanquish).

Fotografia 13: Bioterio de medicina humana UNMSM.

Fotografia 14: Carragenina y material usado en el experimento.

Fotografia 15: Pesando las ratas albinas y midiendo para el valor basal.

pág. 113
Fotografia 16: Administracion de carragenina y pata inflamada.

Fotografia 17: Administracion del Gel de extracto y el diclofenaco.

Fotografia 18: Realizando la medida de la pata inflamada.

Fotografia 19: Observando las ratas.

pág. 114
ANEXO 14: Espectrofotometría UV/Vis.

Fotografía 20: Manejando el Espectrofotómetro UV/ Vis.

Fotografía 21: Observando el recorrido del compuesto químico.

Lecturas espectrofotométrica de flavonoides de la fracción 1.

Con el reactivo metanol.

pág. 115
Con el reactivo metóxido de sodio.

Con el reactivo metanol.

Con el reactivo tricloruro de aluminio.

pág. 116
Con el reactivo Ácido clorhídrico concentrado.
O
CH3 CH3
O O

HO
O O
H3C

6-hidroxi-4',5,7-trimetoxiflavona

Lecturas espectrofotométrica de flavonoides de la fracción 2.

Con el reactivo metanol.

pág. 117
Con el reactivo metoxido de sodio.

Con el reactivo Tricloruro de aluminio.

Con el reactivo acido clorhidrico concentrado.

pág. 118
CH3
O
O
CH3 CH3
O O

OH
OH O

5-hidroxi-3',4',7-trimetoxiflavonol

Lecturas espectrofotométrica de flavonoides de la fracción 3.

Con el reactivo metanol.

Con el reactivo metoxido de sodio.

pág. 119
Con el reactivo Tricloruro de aluminio.

Con el reactivo acido clorhidrico

CH3
O
OH
CH3
O O
O
CH3
OH
OH O

4',5-dihidroxi-3',5',7-trimetoxiflavonol

pág. 120
Lecturas espectrofotométrica de flavonoides de la fracción 4.

Con el reactivo metanol.

Con el reactivo metoxido de sodio.

Con el reactivo metanol.

pág. 121
Tricloruro de aluminio

Con el reactivo ácido clorhídrico concentrado

HO O CH3

CH3 OH
O O

H
O

3',7-dihidroxi-4',6-dimetoxiaurona

pág. 122
Anexo 15. Clasificación taxonómica de “Millhua tanquish”.

pág. 123
pág. 124