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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE EDUCACIN, COMUNICACIN Y HUMANIDADES


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TINCIN DE GRAM
La tincin de Gram fue desarrollada por el bacterilogo dans Hans Christian Gram en 1884 y es uno de los
procedimientos de tincin ms tiles porque permite clasificar las bacterias en dos grandes grupos:
Grampositivas y gramnegativas.
En este procedimiento (fig. 3.11a)
1. Un extendido fijado con calor se cubre con un colorante violeta bsico, por lo general violeta de
genciana. Como el colorante violeta imparte su color a todas las clulas, se lo denomina colorante
primario.
2. Despus de un breve lapso, se escurre el colorante violeta, se lava el extendido y se lo cubre con
yodo, un mordiente. Cuando se lava el yodo, tanto las bacterias grampositivas como las
gramnegativas aparecen de color violeta oscuro o prpura.
3. A continuacin se lava el portaobjetos con alcohol o con una solucin de alcohol-acetona. Esta
solucin es un agente decolorante que elimina el color violeta de las clulas de algunas especies
pero no de otras.
4. Se elimina el alcohol con agua y se tie el portaobjetos con safranina, un colorante bsico. Luego se
vuelve a lavar el extendido, se lo seca con papel absorbente y se lo examina con el microscopio.
El colorante violeta y el yodo se combinan
en el citoplasma de cada bacteria y lo
colorean de violeta oscuro o prpura. Las
bacterias que conservan este color
despus de haberles agregado el alcohol
para decolorarlas se clasifican como
grampositivas; las bacterias que pierden el
color violeta oscuro despus de la
decoloracin
se
clasifican
como
gramnegativas (fig. 3.11b). Como las
bacterias gramnegativas son incoloras
despus del lavado con alcohol, dejan de
ser visibles. Por ese motivo se les aplica el
colorante bsico safranina, que las
convierte en rosadas. Los colorantes como
la safranina que tienen un color que
contrasta con el colorante primario se
denominan colorantes de contraste. Dado
que las bacterias grampositivas conservan
el colorante violeta original, no son
afectadas por el colorante de contraste
safranina.
Las diferentes clases de bacterias reaccionan d modo distinto frente a la tincin de Gram porque las
diferencias estructurales en sus paredes determinan la retencin o el escape de una combinacin de violeta
de genciana y de yodo, denominada complejo violeta-yodo (CV-I). Entre otras diferencias las bacterias
grampositivas tienen un peptidoglucano (disacridos y aminocidos) en su pared celular ms grueso que las
bacterias gramnegativas. Adems, las bacterias gramnegativas contienen una capa de lipopolisacrido

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(lpidos y polisacridos) como parte de su pared celular (vase fig. 4-13). Cuando se los aplica tanto a clulas
grampositivas como a clulas gramnegativas el violeta de genciana y luego el yodo ingresa con facilidad en
las clulas, en cuyo interior se combinan para formar CVI. Este complejo es ms grande que la molcula de
violeta de genciana que ingres en las clulas y, por su tamao, no puede ser eliminado por el agregado de
alcohol de la capa de peptidoglucano intacta de las clulas grampositivas. Por consiguiente, las clulas
grampositivas retienen el color del colorante violeta de genciana. En cambio, en las clulas gramnegativas el
alcohol altera la capa externa de lipopolisacrido y el complejo CV-I se elimina de la capa delgada de
peptidoglucano. Como consecuencia, las clulas gramnegativas son incoloras hasta que se agrega el
colorante de contraste safranina, despus de lo cual aparecen de color rosado.
En sntesis, las clulas grampositivas retienen el colorante y permanecen de color violeta. Las clulas
gramnegativas no retienen el colorante; son incoloras hasta que se las tie con un colorante de contraste rojo.
El mtodo de Gram es una de las tcnicas de tincin ms importantes en microbiologa mdica pero sus
resultados no pueden aplicarse de modo universal porque algunas clulas bacterianas se tien de modo
deficiente o no se tien. Los resultados de la tincin de Gram son ms uniformes cuando se la utiliza en
bacterias jvenes, en etapa de crecimiento.
La coloracin de una bacteria mediante la tincin de Gram puede proporcionar informacin valiosa para el
tratamiento de ciertas enfermedades. Las bacterias grampositivas suelen ser destruidas con facilidad por las
penicilinas y las cefalosporinas. Las bacterias gramnegativas por lo general son ms resistentes porque los
antibiticos no pueden atravesar la capa de lipopolisacrido. Parte de la resistencia a estos antibiticos entre
las bacterias grampositivas y gramnegativas se debe a la inactivacin bacteriana de los antibiticos.
TINCIN DE CIDO-ALCOHOL RESISTENCIA
Otra tincin diferencial importante (que diferencia bacterias en grupos distintivos) es la tincin de cidoalcohol resistencia, que se fija de modo firme slo a las bacterias que poseen ceras en las paredes de sus
clulas. Los microbilogos utilizan esta tincin para identificar a todas las bacterias del gnero
Mycobacterium, que comprende dos patgenos importantes; Mycobacterium tuberculosis, el agente causal de
la tuberculosis, y Mycobacterium leprae, el agente causal de la lepra. Esta tincin tambin se utiliza para
identificar las cepas patgenas del gnero Nocardia.
En el procedimiento de tincin de cido-alcohol resistencia se
aplica el colorante rojo carbolfucsina a un extendido fijado y se
calienta suavemente el portaobjetos durante varios minutos.
(El calentamiento aumenta la penetracin y la retencin del
colorante.) Luego se enfra el portaobjetos y se lo lava con
agua. A continuacin el extendido se trata con cido-alcohol,
un decolorante que elimina el color rojo de las bacterias que no
son cido-alcohol resistentes. Los microorganismos cidoalcohol resistentes retienen el color rojo porque la
carbolfucsina es ms soluble en los lpidos de la pared celular
que en los cido-alcohol resistentes (fig. 3.12). En las bacterias
que no cido-alcohol resistentes las paredes carecen de
componentes lipdicos y la carbolfucsina se elimina con
facilidad durante la decoloracin, lo que deja a las clulas
incoloras. Luego el extendido se colorea con azul de metileno,

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que acta como colorante de contraste. Las bacterias que no son cido-alcohol resistente aparecen azules
despus de la aplicacin del colorante de contraste.

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