Ingenieria Genetica de Cultivos PDF

INGENIERIA GENETICA
DE CULTIVOS
18 DE JUNIO DEL 2012
SERGIO CONTRERAS LIZA

Facultad de Ciencias Agroindustriales y
Ambientales
EAP AGRONOMIA
UNJFSC-HUACHO
Poblacin mundial y produccin de

alimentos
De acuerdo Naciones Unidas, la poblacin
mundial alcanza los 6 mil 800 millones de

habitantes (2011), ms de 2.5 veces que en
1950, y se estima que alcanzar 9 mil
millones en el 2045, lo que se traducir en
una enorme demanda de alimentos.
Ese reto es an mayor si se toman en cuenta
los efectos negativos del cambio climtico en
la produccin agropecuaria y el deterioro de
los recursos naturales, como resultado de las
actividades humanas.
2
Seguridad Alimentaria
Por ello, las acciones deben orientarse a
buscar la seguridad alimentaria mediante la

produccin de alimentos suficientes, inocuos,
accesibles y de calidad, pero cuidando en
todo momento los recursos naturales y el
medio ambiente. Se requiere aumentar la
disponibilidad de semillas, recuperar la
fertilidad de los suelos, hacer un uso eficiente
del agua y darle valor agregado a la
produccin primaria.
3
Poblacin Mundial 1950-2050
La
pregunta relevante es Cmo la

biotecnologa contribuir a atender la
demanda alimenticia en un contexto
caracterizado por consumidores cada vez
ms exigentes, mejor informados y ms
preocupados, no slo por el contenido mismo
de los alimentos sino por cmo se produjeron
y comercializaron?
La biotecnologa ha permitido el desarrollo de
nuevas herramientas que sumadas al

mejoramiento convencional de cultivos y
animales, pueden aplicarse con diversos
fines, como el mejoramiento gentico de
variedades
vegetales
y
poblaciones
animales, el aumento de rendimientos, la
caracterizacin y conservacin de los
recursos genticos as como el diagnstico y
prevencin de enfermedades.
6
La gama de posibilidades que ofrece la
biotecnologa tambin debe responder a los

cambios en los patrones de consumo, como
los alimentos con propiedades nutraceticas,
con ms vitaminas y minerales, que resistan
mejor el transporte y el almacenamiento
Esa es la relevancia y el potencial del tema
que hoy nos ocupa.
Que es la Biotecnologa?
La biotecnologa es una tecnologa basada
en la biologa molecular , especialmente

usada en agricultura, farmacia, ciencia de los
alimentos, medioambiente y medicina.
Se desarrolla en un enfoque multidisciplinario
que involucra varias disciplinas y ciencias

como
biologa,
bioqumica,
gentica,
virologa, agronoma, ingeniera, fsica,
qumica, medicina y veterinaria entre otras.
8
Ingeniera Gentica
La Ingeniera Gentica o Biotecnologa, tal
como se entiende generalmente, abarca:

1. La aplicacin del cultivo de tejidos,
2. Las tcnicas inmunolgicas,
3. La gentica molecular y
4. Las tcnicas del ADN recombinante en
todas las facetas de la produccin
agropecuaria y la agroindustria.
Transformacin gentica de las plantas

El desarrollo de estos mtodos representa uno de los
avances ms significativos en el campo de la mejora de

plantas, ya que con la ingeniera gentica se amplan las
fuentes de la variabilidad gentica disponible hasta
incluir a todos los organismos vivos permitiendo as la
introduccin de cualquier gen de inters en especies
vegetales.
Una vez establecidos los distintos sistemas de
regeneracin in vitro as como la disponibilidad de
genes, slo faltara aplicar algn mtodo de
transferencia gnica que posibilite la obtencin de
vegetales genticamente modificados.
10
BIOTECNOLOGA VEGETAL
Metodologas de transformacin
La aplicacin de esta tecnologa depende de la
disponibilidad de sistemas eficientes para introducir

de manera estable el material gentico forneo en el
interior de clulas capaces de regenerar plantas
enteras con las caractersticas predefinidas.
Existen
muy
diversas
metodologas
de
transformacin que se pueden agrupar en dos
sistemas:
la
transformacin
directa
y
la
transformacin indirecta o mediante agentes
biolgicos.
11
La transformacin directa
Tambin utilizada en animales y procariotas, que incluye
tcnicas como la microinyeccin, el uso de agentes

fsicos o qumicos que faciliten la entrada a la clula
como el polietilnglicol, la electroporacin, la sonicacin,
la creacin de poros mediante rayos lser, la pistola de
genes o mtodo biolstico (originariamente, biobalstico).
Es especialmente importante en especies vegetales que
no son infectadas fcilmente por Agrobacterium, como

las monocotiledneas.
12
Microcan con partculas metlicas

rodeadas de ADN
13
La transformacin indirecta
Esta metodologa utiliza una bacteria fitopatgena, en
especial Agrobacterium tumefaciens, como vector biolgico

portador del DNA que ser transferido a la planta (tambin
se suele utilizar la especie Agrobacterium rhizogenes).
Este sistema es especfico de plantas, principalmente
dicotiledneas, y a pesar de tener limitaciones en su uso

es el que ms xitos ha propiciado. Gracias a la aplicacin
de esta tecnologa ya se han obtenido y ensayado
satisfactoriamente entre otras, plantas resistentes a
herbicidas, insectos (sobretodo lepidpteros) o virus, as
como frutos con el proceso de maduracin controlable y
con protenas modificadas
14
Etapas de la biotecnologa
Como se dijo antes, la biotecnologa es la
aplicacin de la tecnologa en las ciencias

biolgicas que tiene por objeto elaborar
productos nuevos utilizando organismos
vivos. Los avances cientficos de los aos 70
y 80 llevaron a un proceso de la tecnologa
moderna en 3 fases, que tienen como base
las tcnicas de ingeniera gentica y
posibilitan la realizacin de modificaciones
especficas de ADN.
15
1. Identificacin del gen
RT-PCR anlisis
El primer paso en la
ingeniera gentica es
identificar y aislar el
nuevo gen procedente de
las cadenas de ADN del
organismo
donante
utilizando unas "tijeras"
de enzimas denominadas
nucleasas restrictivas o
endonucleasas
de
restriccin.
16
2. Transferencia del gen

El siguiente paso es transferir el gen aislado
al ADN del organismo receptor utilizando las
enzimas ligasas como "adhesivo".
17
3. Expresin del gen

Finalmente, el organismo receptor decodifica o
expresa la informacin procedente del nuevo

gen y fabrica una protena nueva, con lo cual
adquiere una propiedad nueva o carcter.
18
La transferencia gentica mediante

Agrobacterium
Agrobacterium se utiliza para transferir genes
a las plantas. Los genes meta se insertan en

plsmidos (anillos de ADN en el interior del
Agrobacterium que transfieren los caracteres
a las plantas a travs del ADN).
19
Estructura de Agrobacterium
En el esquema (Figura 1) se muestra la
estructura diagramtica de la clula de

Agrobacterium. El proceso comienza con una
nica clula de Agrobacterium que se divide y
se abre un plsmido con una enzima especial.
Se separa un gen de inters del ADN
cromosmico de otro organismo con la misma
enzima. El nuevo gen se inserta en el plsmido.
20
Fig.1. Diagrama de la clula de

Agrobacterium tumefaciens
21
El plsmido quimrico
Dado que los extremos cortados o romos, tanto
del plsmido como del segmento de gen del

donante son qumicamente "afines", se pueden
pegar juntos y/o volver a combinar para formar un
plsmido que contenga el nuevo gen.
22
Tecnologa del ADN recombinante

Esta tcnica se conoce con el nombre de
"empalmes de gen" o tecnologa de ADN

recombinante. Se vuelve a insertar el plsmido
que contiene el nuevo gen en Agrobacterium.
De este modo, las plantas van a estar infectadas
con Agrobacterium ya que cuando ste entra en
las clulas vegetales, transfiere el nuevo gen al
ADN cromosmico de la planta. Cuando la
clula de la planta se divide, cada clula hija
recibe el nuevo gen.
23
Recuperacin de plantas transgnicas

Al utilizar la tcnica de cultivo de tejidos, los
cientficos hacen crecer plantas nuevas de

las clulas alteradas genticamente y todas
esas plantas poseern el carcter gentico
seleccionado e importado mediante el nuevo
gen.
24
Fig.2 .- Plsmido Ti de Agrobacterium

tumefaciens
25
Expresin del gen

Para que en un gen pueda expresarse, la
enzima ARN polimerasa debe reconocer el

"promotor" y el "terminador". La ARN
polimerasa del tabaco (una planta muy
empleada en estos experimentos de
transferencia de genes) no reconoce los
promotores y terminadores de E. coli y por
consiguiente no transcribe este gen.
26
Para solucionar el problema se fabric un
gen compuesto o quimrico a partir del gen

de la resistencia al cloramfenicol de E. coli,
un promotor y terminador procedentes del
segmento
ADN-T
de
Agrobacterium
tumefaciens. El gen quimrico se reincorpor
en un plsmido Ti (fig. 3):
27
Fig.3.- Gen quimrico en el plsmido

Ti de Agrobacterium
28
Transformacin de E. coli
29
Plantas transgnicas con gen Bt
30
Regeneracin de plntulas
De esta manera el gen quimrico funcion al
poder ser detectada la actividad de la

cloramfenicol
transcetilasa
en
tejidos
tumorales. An quedaba una dificultad a
salvar: la regeneracin de una planta entera
a partir de clulas transformadas. Como las
clulas transformadas eran tumorales e
incapaces de esta regeneracin y el siguiente
paso consisti en eliminar los genes
tumorales del segmento ADN-T
31
Se
pueden
regenerar
plantas
enteras
transgnicas que sean frtiles y con las que se
puede estudiar la transmisin de caracteres a su
descendencia. Adems si se escogen los
promotores adecuados, es posible expresar
genes en rganos especficos, como races,
semillas y tubrculos.
32
El gen de resistencia al antibitico

El gen de la resistencia a antibiticos no tiene
inters agronmico por lo que haba que

identificar, aislar y clonar los genes que
pudiesen mejorar las plantas cultivadas. En el
caso de caracteres con base gentica compleja
(donde intervienen numerosos genes), como la
resistencia de una planta al fro, es mucho ms
difcil la manipulacin gentica que con los
caracteres que se expresan como consecuencia
de la actividad de un enzima.
33
Accin de las protenas cry

Las protenas cry provocan la lisis de las clulas
intestinales
de
los
insectos.
Estos
bioinsecticidas
se
caracterizan
por
su
especificidad, pues slo son txicos en
escarabajos, moscas y mariposas (grupos de
insectos causantes de la mayora de las plagas),
y porque son prcticamente inocuas en
humanos.
E. Schnepf y H. Whiteley aislaron en 1981 el
primer gen que codifica la protena insecticida.
34
Obtencin de plantas transgnicas

Se acababa de sentar las bases para que M.D.
Chilton en 1983 obtuviera las primeras plantas

transgnicas
de
tabaco
utilizando
Agrobacterium tumefaciens. Le siguieron otros
experimentos en diversos laboratorios de
Europa y Amrica con el tomate y la papa.
Estos experimentos sirvieron para demostrar
que la expresin de protenas insecticidas en
plantas era posible y proporcionaba un mtodo
eficaz de lucha contra los insectos:
35
Plantas resistentes a insectos mediante

Agrobacterium
36
Las Plantas Bt
Todas estas investigaciones culminaron en 1996 con la
entrada en el mercado de plantas transgnicas

(algodn, papa y maz) resistentes a insectos. A todas
estas plantas transformadas se las denomina Plantas Bt
(de Bacillus thuringiensis). En 2003 el 50% de los
cultivos transgnicos comercializados, portaban genes
cry.
El problema de la aparicin de insectos resistentes a
estas plantas se prev solucionarlo con la implantacin
de distintas protenas insecticidas en una misma planta
transgnica o en plantas transgnicas sembradas en
aos alternativos.
37
Especies transformadas mediante

ingeniera gentica
Hasta 1999 se haban realizado en el mundo,
unos 3650 experimentos de campo con cultivos

transgnicos y con resultados positivos, de los
cuales la mayora corresponden a las especies
que se indican en la tabla 1. Aproximadamente
la cuarta parte de estos cultivos se han
realizado con genes cry.
38
Superficie con transgnicos por pases
39
Arroz transgnico Bt
Arroz transgnico (T) y Convencional (C) en ensayos comparativos de resistencia

a insectos por adicin de gen Bt al arroz..
40
El primer producto biotecnolgico
Publicidad del Flavr Savr tomato.

Este fue el primer alimento biotecnolgico desarrollado en Estados
Unidos, introducido al mercado a mediados de 1994 bajo la marca
Calgenes MacGregors, con al atributo de maduracin lenta del
fruto.
Resistencia a Virus: maz
Comparison of nonsymptomatic (left) and

symptomatic (below) transgenic
plants with non-transgenics at
20 dpi
Transgnico
vs.
No Transgnico
Resistencia al fro
Effect of CBF1 over-expression in Arabidopsis, Left: Non- acclimated

controls after freezing for 5 days; middle: Non-acclimated transgenics
after freezing, right: Acclimated controls after freezing
Caractersticas introducidas
44
Soya resistente a 2-4,D
Transgenic and non transgenic soybean plants response to 2,4-D in the

field.
Resistencia a herbicidas
Las plantas transformadas con la
construccin 35S:HAHB10 son ms
tolerantes a los tratamientos con
Paraquat.
Panel
superior:
tres
lneas
independientes
de
plantas
transgnicas de cuatro semanas
(primera, tercera y cuarta columna) y
plantas
silvestres
tratadas
con
Paraquat.
Panel inferior: una foto ms detallada
tomada de un experimento similar
Andro esterilidad en Trigo GM

Spikelet and anther
morphologies of male
sterile TR1376A and male
fertile TR1376B transgenic
wheat lines. (a) a male fertile
spike showing that the
glumes and spikelets are
closed during anthesis; (b) a
male sterile spike showing
that the glumes and
spikelets are opened during
anthesis; (c) spikes of a
male sterile family;
(d) dehiscent male fertile
anthers; (e) indehiscent
male sterile anthers
Superficie Mundial con transgnicos
48
Area Global 1996-2009
49
EL VALOR GLOBAL DEL MERCADO

AGROBIOTECNOLGICO
La empresa Cropnosis estim en 2007 que el
valor
del
mercado
agrobiotecnolgico
mundial fue de 6.900 millones de dlares, lo
que representa el 16% de los 42.200 millones
dlares en los que se valor el mercado
mundial de proteccin de cultivos en el 2007
y el 20% de los 34.000 millones dlares que
se valor el mercado mundial de semillas
comerciales ese mismo ao.
50
Adopcin de cultivos transgnicos
51
Resultados obtenidos
Soya Roundup Ready:
una reduccin en el uso de

herbicidas de 13.018,3 toneladas mtricas al ao; un
ahorro de costos de produccin de 1.100 millones de
dlares al ao.
Algodn Bt: una reduccin en el uso de insecticidas de
861,8 toneladas mtricas al ao; un aumento de
produccin de algodn de 83.916 toneladas mtricas al
ao.
Variedades de maz Bt: una reduccin en el uso de
insecticidas de ms de 7.257,6 toneladas mtricas al
ao; un aumento de produccin de 1.587.600 toneladas
mtricas al ao.
Papaya: la papaya biotecnolgica resistente a los virus
ahorr a la industria de Hawaii 17 millones de dlares en
2006, al protegerla de los efectos devastadores del virus
52
del anillo.
Papaya con resistencia al virus

anular
53
Ensayos de Plantas GM por atributo
54
Maz resistente a Quizalofop
Transgenic and non transgenic maize plants response to

Quizalofop in the field.
Porqu Arabidopsis es la planta

modelo para transgnesis?
Wild-type Thale cress, Arabidopsis thaliana, a member of the Cruciferae

(cabbage family). A number of factors make A. thaliana ideal for study: a
short generation time (5 weeks); a high seed number per plant (10,000); a
small genome (about one-tenth the number of base pairs as wheat); a
tendency to self-fertilization (which leads to genetic uniformity and stability);
and a susceptibility to infection by Agrobacterium tumefaciens (which means
that the plants can be genetically transformed by plasmids.
Resistencia a salinidad
Heterologous expression of betA in
wheat resulted in more vigorous
phenotypes under stress treatment.
(a) Seeds germinated in Petri dishes
moistened with MS salt solution and
supplemented with different PEG6000 concentrations [0 (top left), 10%
(lower left), 15% (top right), 20%
(middle right), and 25% (lower
right),(w/v)].
(b) The transgenic plants developed
better roots and shoots during drought
stress treatment. The intact roots of
the plants were carefully removed
from the containers and rinsed gently
to wash off the vermiculite with tap
water. Then the roots and aerial parts
are shown.
(c) Transgenic lines and WT plants in
flowerpots before (upper) and after
(below) drought stress for 7 days and
the transgenic lines were more robust
than the WT.
Resistencia a Sequa
Plantas
transformadas
con
la
construccin 35S:HAHB4 son ms
tolerantes al estrs generado por sequa y
entran tardamente en
etapa de
senescencia.
A: plantas de Arabidopsis de 4 semanas
de edad sometidas a estrs hdrico
severo. A la izquierda: plantas silvestres y
a la derecha, plantas transgnicas. La
fotografa fue tomada dos das despus
de regar.
B: plantas de Arabidopsis de siete das.
Desde la izquierda hacia la derecha:
silvestres,
transgnicas
con
la
construccin constitutiva 35S:HAHB4;
transgnicas con la construccin inducible
promotorHAHB4:HAHB4
Produccin Mundial con Cultivos

GM
59
Ventajas de Uso
Al necesitar las variedades biotecnolgicas menos
insumos qumicos, disminuira la contaminacin del

agua.
El menor uso de productos qumicos resultara en un
suministro de agua ms saludable y agua potable de
mejor calidad, as como un medio ambiente ms
favorable para la fauna y flora silvestres.
El mayor rendimiento de las plantas transgnicas puede
contribuir a aliviar la presin sobre los recursos de tierra
al reducir la necesidad de expansin a zonas ms
frgiles y permitir as una mayor conservacin de los
hbitats naturales.
60
Cultivos GM aprobados en USA

HT= resistencia
a herbicidas
IR= resistencia
a insectos
VR= resistencia
a virus
PQ= Calidad
de procesam.
AG= carcter
agronmico
MS= esterilidad
masculina .
A = aprobado
P = pendiente
61
Las
cosechas biotecnolgicas requeririan

menos energa, porque pasan menos por los
campos para aplicar los productos qumicos.
Al usar menos combustible, se descarga
menos carbono en la atmsfera en forma de
dixido de carbono.
Las cosechas resistentes a los herbicidas
alientaran la adopcin de mtodos de
labranza de conservacin, en particular el
que prescinde del escardado, con lo que se
reduce la erosin de la capa vegetal.
62
reas con Cultivos GM- 2008
63
Efectos adversos reportados
64
Impactos en el MedioAmbiente
Segn Altieri (2009) los efectos ecolgicos de
los cultivos modificados genticamente no se

limitan a ser resistentes a las plagas y a la
creacin de nuevas malezas o de cepas de
virus. Los cultivos transgnicos produciran
tambin toxinas ambientales que se mueven
en la cadena alimenticia de los ecosistemas.
65
Referencias
Altieri, M. 2009. Biotecnologa agrcola en el mundo en
desarrollo: mitos, riesgos y alternativas. Ciencias, Nm.

92 - 93, octubre-marzo, 2009, pp. 100-113. Universidad
Nacional Autnoma de Mxico
Enriquez, J. 2001. As the future catches you. Ed. Crown
Bussines. Harvard Press. N.Y.
Esau, K. 1973. Anatoma vegetal. Omega. Barcelona.
Estruch, J.J. (1998): Plantas resistentes a insectos.
Investigacin y Ciencia. N 257, Febrero, pp. 46-53. Edit.
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66
Habert, P. (1995): La Ingeniera Gentica probada en los
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Hartmann, H.T. y D.E. Kester. 2002. Hartmann and
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Prentice Hall.New Jersey.
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2nd. Ed. Mass.
Pea, G. 2002. Biotecnologa, clonacin e ingeniera
gentica. CONCYTEC. Lima. 379 pp.
67
Ronald, P. C. (1998): Creacin de un arroz resistente
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Enero, pp. 68-73. Edit. Prensa Cientfica, S.A.
Barcelona.
Salvador, M. 1995. Cultivo in vitro en fresa para la
produccin de plntulas libres de virus. Tesis, Ing.
agrnomo. UNALM.
Schpke, C. & alii. (1997): Mejora vegetal. Las
posibilidades de la yuca transgnica. Investigacin y
Ciencia. N 245, Febrero, pp. 35-36. Edit. Prensa
Cientfica, S.A.. Barcelona.
68
Schpke, C. & alii. (1997): Mejora vegetal. Las
posibilidades de la yuca transgnica. Investigacin y

Ciencia. N 245, Febrero, pp. 35-36. Edit. Prensa
Cientfica, S.A.. Barcelona.
Sopln, H; Beingolea, L. 1981. Tecnologa de
Semillas. En: Coleccin, evaluacin, conservacin y
utilizacin de recursos genticos. Curso
internacional. UNA La Molina.
Temp, J. & Schell, J. (1987): La manipulacin de las
plantas. Mundo Cientfico. N 71, Julio/Agosto, pp.
792-801. Edit. Fontalba. Barcelona.
69
PGINAS WEB CONSULTADAS

http://www.uwc.ca/pearson/biology/asex/asex
.htm
http://www.seedworld.com/CGI http://www.agric.gov.ab.ca/crops/hort/grnhous
e/gc9902b.html
http://incotec.com/technologies/priming.htm
http://www.ucdavis.edu/coursepages/PLB171
/ lectures/Seed_production.html
http://www.biologia.edu.ar/
70
Muchas gracias!
La mejor manera de enfrentar el
futuro es crendolo (P. Drucker)
sergio_cl2002@yahoo.com
71

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INGENIERIA GENETICA

SERGIO CONTRERAS LIZA

Poblacin mundial y produccin de

mundial alcanza los 6 mil 800 millones de

buscar la seguridad alimentaria mediante la

Poblacin Mundial 1950-2050

pregunta relevante es Cmo la

La biotecnologa ha permitido el desarrollo de

nuevas herramientas que sumadas al

La gama de posibilidades que ofrece la

biotecnologa tambin debe responder a los

en la biologa molecular , especialmente

que involucra varias disciplinas y ciencias

como se entiende generalmente, abarca:

Transformacin gentica de las plantas

avances ms significativos en el campo de la mejora de

disponibilidad de sistemas eficientes para introducir

tcnicas como la microinyeccin, el uso de agentes

no son infectadas fcilmente por Agrobacterium, como

Microcan con partculas metlicas

especial Agrobacterium tumefaciens, como vector biolgico

dicotiledneas, y a pesar de tener limitaciones en su uso

aplicacin de la tecnologa en las ciencias

1. Identificacin del gen

2. Transferencia del gen

3. Expresin del gen

expresa la informacin procedente del nuevo

La transferencia gentica mediante

a las plantas. Los genes meta se insertan en

estructura diagramtica de la clula de

Fig.1. Diagrama de la clula de

del plsmido como del segmento de gen del

Tecnologa del ADN recombinante

"empalmes de gen" o tecnologa de ADN

Recuperacin de plantas transgnicas

cientficos hacen crecer plantas nuevas de

Fig.2 .- Plsmido Ti de Agrobacterium

Expresin del gen

enzima ARN polimerasa debe reconocer el

Para solucionar el problema se fabric un

gen compuesto o quimrico a partir del gen

Fig.3.- Gen quimrico en el plsmido

Plantas transgnicas con gen Bt

poder ser detectada la actividad de la

El gen de resistencia al antibitico

inters agronmico por lo que haba que

Accin de las protenas cry

Obtencin de plantas transgnicas

Chilton en 1983 obtuviera las primeras plantas

Plantas resistentes a insectos mediante

entrada en el mercado de plantas transgnicas

Especies transformadas mediante

unos 3650 experimentos de campo con cultivos

Superficie con transgnicos por pases

Arroz transgnico (T) y Convencional (C) en ensayos comparativos de resistencia

El primer producto biotecnolgico

Publicidad del Flavr Savr tomato.

Resistencia a Virus: maz

Comparison of nonsymptomatic (left) and

Effect of CBF1 over-expression in Arabidopsis, Left: Non- acclimated

Soya resistente a 2-4,D

Transgenic and non transgenic soybean plants response to 2,4-D in the

Andro esterilidad en Trigo GM