GUA DE

PRCTICAS

Unidad
acadmica:
EAP DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA

ASIGNATURA: BIOQUMICA

Carmen Pea Suasnabar

Elena Benavides Rivera

SEMESTRE: 2015 2

INTRODUCCION

La bioqumica es una ciencia bsica, cuya actividad primordial est

dirigida a demostrar las reacciones bsicas que determinan la
estructura y el funcionamiento de los seres vivos.
La enseanza de la Bioqumica en las distintas reas de Ciencias de la
Salud requiere de una metodologa especfica y profunda, para la
Carrera de Farmacia y Bioqumica se ha preparado la presente gua
que permitir a nuestros estudiantes contar con un instrumento
prctico y didctico para fortalecer el proceso enseanzaaprendizaje.
La presente gua otorga metodologas sencillas y claras para
la obtencin, determinacin, identifi cacin u observacin de
metabolitos o sustancias relacionadas con los procesos
bioqumicos de los seres vivos; asimismo, plantea
los
ejercicios que debe realizar cada estudiante para un mejor resultado
acadmico.

PRCTICA 01
CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE UN FLUIDO
BIOLGICO
I. Fundamento terico
La titulacin es una tcnica que permite determinar la concentracin de
una solucin cuya concentracin es desconocida utilizando como patrn
otra solucin pero con concentracin conocida denominada (solucin
valorada).
La titulacin de una sustancia cida o bsica se fundamenta en la reaccin
de neutralizacin de dos especies contrarias, as tenemos que si no
conocemos la concentracin de la solucin cida, la solucin bsica debe
estar valorada y debe conocerse en ambas soluciones los volmenes
utilizados.
HCl + NaOH

NaCl + H2O

Los buffer son una mezcla de dos especies qumicas relacionadas (cido o
base dbil y su respectiva sal conjugada) ambas tienen una capacidad para
captar y liberar H+.
Los Buffer estn presentes en casi todos los fluidos biolgicos ejerciendo un
equilibrio en la concentracin de H+.
Dentro de los buffer ms conocidos que se encuentra presente en los
sistemas biolgicos tenemos:
Buffer bicarbonato HCO3-1 y H2CO3

Buffer Fosfato HPO4-2 y H2PO4-1

Las protenas y los aminocidos tambin ejercen capacidad buffer, debido a

los grupos funcionales que presentan, a pesar que literalmente no son
buffer sin embargo por la funcin son considerados como buffer biolgicos.
II COMPETENCIA
Determina la concentracin de una muestra desconocida mediante la
titulacin Determina la capacidad buffer.
III. Materiales y equipos:
3.1
Reactivos.
a. HCl 0,1N
b. NaOH 0,01N
c. Fenolftalena
d. Agua destilada

3.2Equipos y materiales
a. Cinta para medir pH
b. Matraz 100 mL
c. Bureta 25 mL
d. Soporte universal
e. Pipetas 5 y 10 mL
f. Beaker de 100 mL
g. Pinzas de nueces
h. Baguetas
IV. Procedimiento:

a)

Titulacin de una solucin cida desconocida:

1. En un Matraz agregar 1 mL de la muestra desconocida del cido y 9
mL de agua destilada, homogenizar.
2. Luego agregue II gotas de fenolftalena.
3. Iniciar la titulacin con NaOH 0.01 N, agregando gota a gota
utilizando la bureta.
4. Observar con que volumen de NaOH cambia de color (debe de
quedar de un color rosado plido) anotar el gasto del NaOH.
5. Determinar la concentracin [H+], mediante la
siguiente formula.
[MP] x VMP = [bs] x Vbs
b) Capacidad buffer de la orina:
1.
Colocar 2 mL de orina en un beaker, luego agregue 5 mL
de agua.
2. Agregue II gotas del indicador de fenolftalena
3. Titule con la bureta que contiene el NaOH 0.01 N.
4. Anotar el gasto del NaOH
5. Determinar la concentracin de H+ en cada muestra, con la formula
anterior.
6. Determinar la capacidad amortiguadora de la orina, mediante la
siguiente formula:
= # n (base
adicionado) Vol
buffer (L) x pH
V. Cuestionario:
1. Si el pH de la sangre es de 7,42 Determinar la
concentracin de hidrogeniones libres?

2. A una solucin de 80 mL de cido carbnico 0,05 mol/L se le adiciona

20 mL de NaOH 0,01 mol/L.
a)
Represente la reaccin en ecuacin qumica
b)Despus de la mezcla cual es la concentracin del cido y sal en
la solucin
c) Determine el pH de la solucin
d)Si a la solucin final se le agrega 20 mL de agua destilada, cual
ser su pH. Explique si existe variacin o no.

VI. Fuentes de Informacin.

a. Devlin Thoms
M.
Bioqumica
con
Aplicaciones
Clnicas. Tomo I y II.
Barcelona. Edit. Revert Colombiana. S. 2000.
b. Luque L, Hermoza A. Biologa
Molcular e
Ingenieria
Gentica. Barcelona.Edit.
Hartcourt. 2001.
c. Martin D W. Bioqumica de
Moderno. 2000.

Harper. Mxico .Edit

d.Rawn M. Bioqumica. Madrid McGraw- Hill

2003.

Manual

.Interamericana.

PRCTICA 2
EXTRACCIN DE CASEINA Y DETERMINACIN DE SU
PUNTO ISOELCTRICO
I.

Fundamento terico

La leche contiene tiamina, riboflavina, cido pantotnico y

Vitaminas A, D y K, minerales (Ca, K, Na, P), protenas,
carbohidratos (lactosa) y lpidos.
Las protenas se pueden clasificar de manera general en
protenas globulares y fibrosas. Las protenas globulares son
aquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no
establecen interacciones intermoleculares como son los puentes
de hidrgeno (caractersticos de las protenas fibrosas) siendo
solubilizadas en suspensiones coloidales.
En la leche hay tres clases de protenas: casena, lacto albminas
y lacto globulinas (todas globulares).
La casena es una protena conjugada de la leche del tipo
fosfoprotena que se separa de la leche por acidificacin y forma
una masa blanca. Las fosfoprotenas son un grupo de protenas
que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene
cido fosfrico. En la casena la mayora de los grupos fosfato
estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina y
treonina. La casena en la leche se encuentra en forma de sal
clcica (caseinato clcico).
La propiedad caracterstica de la casena es su baja solubilidad a
pH 4,6. El pH de la leche es 6,6 aproximadamente, estando a ese
pH la casena cargada negativamente y solubilizada como sal
clcica. Si se aade cido a la leche, la carga negativa de la
superficie de la micela se neutraliza (los grupos fosfato se
protonan) y la protena neutra precipita
Ca2+ Caseinato + 2HCl Casena + CaCl2
Todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del
medio en el que se encuentren y de los aminocidos que la
componen.
Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los
radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH
del medio: catinicos, neutros y aninicos.
Cualquier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra
en un medio lo suficientemente cido debido a que los grupos
COOH de los aminocidos asprtico y glutmico estaran en su

forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lisina estaran

protonados (-NH3 +).
De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH
muy alto estara cargada negativamente ya que en este caso
los grupos carboxilo estaran desprotonados (COO-) y los grupos
amino estaran en su forma neutra (NH2). Las protenas tienen un
pH caracterstico al cual su carga neta es cero. A este pH se le
denomina punto isoelctrico (pI).
En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las
cargas positivas y negativas por lo que la protena presenta su
mxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su
solubilidad y facilitar su agregacin.

II.

COMPETENCIA

Obtiene Caseina a partir de leche y

isoelctrico.
III.

determina

su punto

MATERIALES Y REACTIVOS
- Beaker de 25, 50 y 250 mL
- Probeta de 50 mL
- Matraz aforado de 50 mL
- Pipetas de 0,5; 1,0 y 10 mL
- Embudo de vidrio mediano
- Papel de filtro
- Termmetro
- Tubos
- Reactivos por grupo:
o Agua destilada
o Acetato sdico
0,1 N o cido
actico 0,01 N o
cido actico 0,1
N o cido actico
1,0 N o NaOH 1N
o ter etlico
o Etanol al 70%
- Materiales y reactivos de uso general:
o Soluciones buffer pH 4,0 y 7,0 para calibrar el
potencimetro o Potencimetro (pH-metro)
o Leche entera corriente ( 1 litro)

DESARROLLO EXPERIMENTAL
A. Aislamiento de la casena:
a. Caliente, en un vaso de precipitados, 150 mL de agua
destilada a 38 C, aada 50 mL de leche y luego gota a
gota y con agitacin, adicione cido actico 1M hasta que
observe que se forma un precipitado (la leche se corta)
b. Deje sedimentar y filtre sobre papel de filtro usando un
embudo de cristal.
c. Lave el precipitado con 20 mL de etanol en el mismo filtro.

d. Seque el precipitado colocando varios pliegues de papel de

filtro.

e. Coloque el precipitado en un vaso de precipitado pequeo

previamente pesado, vuelva a pesar el vaso con el
precipitado y luego adicione 5 mL/g de ter etlico.
a. Filtre nuevamente.
b. Deseche el lquido, quedar un precipitado blanco de fcil
manipulacin que es la casena.
B. Preparacin de la solucin de casena:
a. Coloque aproximadamente 250 mg de casena en un vaso de
50 mL.
b. Agregue 20 mL de agua destilada y 5 mL de NaOH 1N; agite
hasta lograr una solucin total de la casena.
c. Una vez disuelta la casena, se vierte en un matraz
aforado de 50 mL, adicione 5 mL de cido actico 1N y
diluya con agua destilada hasta 50 mL y mezcle bien.
d. La solucin debe ser clara y limpia y si no es as, debe volver a
filtrar.
C. Determinacin del pI de la casena:
En diez tubos de 25 mL limpios y secos adicione exactamente los
volmenes de los reactivos segn la siguiente tabla:
TABLA DE DISOLUCIONES
TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Ace
tato
0.1
0.5
1
1.5
2
3
4
6
8
6
8

Ac.
Actico
0.1 N
9.5
9
8.5
8
7
6
4
2
-

Ac.
Actico
-0.01 N
4
2

pH
resultante(
aprox.)
3.2
3.6
3.8
4.0
4.2
4.5
4.7
5.1
5.5
6.1

Medir experimentalmente el pH en todos los tubos, que debe

cubrir un rango aproximado semejante al terico (3 a 6,5).
Anotar los valores reales en la Tabla, que deben ser semejantes
a los expresados y en todo caso creciente.
Aadir 1 mL de disolucin de casena a cada tubo.

 Agitar suavemente cada uno y esperar aproximadamente 3

minutos.

 Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm con las cubetas

de colorimetra de 1 cm de paso ptico, teniendo la precaucin
de agitar bien el contenido de cada tubo para obtener una
solucin / suspensin homognea antes de verter una parte en
la cubeta.
Anotar resultados, representar la absorbancia frente al pH, y
determinar el pI aproximado de la casena.
I
V

V
.

Cuestionario
1) Cul es el punto isoelctrico de la casena?
2) Por qu las protenas tienen solubilidad mnima en
el pI?
Fuentes de informacin:
a. Devlin Thoms M. Bioqumica con Aplicaciones
I y
Clnicas.
Tomo
II.
Barcelona. Edit. Revert Colombiana. S. 2000.
b. Luque L, Hermoza A. Biologa Molecular e
Ingeniera Gentica. Barcelona. Edit. Hartcourt. 2001.
c. Martin D W. Bioqumica de Harper. Mxico .Editorial
Manual Moderno. 2000.
d. Rawn M. Bioqumica. Madrid Mc Graw - Hill. Interamericana.
2003.

PRCTICA 3
I.

MARCO TERICO

El almidn constituye un importante componente de la dieta de los seres

humanos. El proceso de digestin de este nutriente se inicia en la cavidad
oral, lugar en que acta la alfa-amilasa salivar, enzima que tiene la propiedad
de hidrolizar los enlaces alfa 1,4 del almidn y formar polisacridos de menor
peso molecular.

II. COMPETENCIA:

Realiza in vitro la hidrlisis del almidn por accin de la amilasa

salival
III.MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES

- Beaker de 25, 50 y 250 mL

- Probeta de 50 mL
- Matraz aforado de 50 mL
- Pipetas de 0,5; 1,0 y 10 mL
- Embudo de vidrio mediano
- Papel de filtro
- Tubos
Reactivos
- Agua destilada
- Buffer fosfatos 0,1 M pH 6,5
- Solucin de almidos al 1 %
- cido Clorhidrico 0,5 N
- Solucin de Saliva al 10 %

IV. TCNICA OPERATORIA

Para realizar el experimento se prepararn los siguientes medios de reaccin:
1
mL.
mL.
mL.
mL.

tampn fosfato 0.1 M pH 6.5

de almidn al 1 %
cido clorhdrico 0.5 N
de agua destilada

2
1.0
2.0
--2.0

3
1.0
2.0
--1.5

1.0
2.0
1.5
---

Colocar los tubos de ensayo en el bao mara a 37 C durante 2 min, luego

adicionar:
mL. solucin de saliva

---

0.5

0.5

Colocar nuevamente los tubos en bao mara y sacar alcuotas de 0.5 mL. de
cada uno de los tubos a los 0, 5, 10, 15 y 20 minutos, y adicionarlos a tubos
previamente preparados que contienen 2.0 mL de cido clorhdrico 0.05 N, de
acuerdo al siguiente esquema:
Tubo N
mL de cido clorhdrico 0.05 N
2.0

2
2.0

3
2.0

Luego adicionar a cada tubo:

Gotas de solucin de Lugol
1 gota

I gota

I gota

Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado.

Durante el desarrollo del experimento se observarn modificaciones del color
inicial de los tubos como consecuencia de la accin de la alfa-amilasa salivar.
El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color pardo
claro.

V.

CUESTIONARIO
a. Elabore un mapa conceptual acerca de los factores que
afectan la actividad enzimtica
b. Explique las aplicaciones clnicas de la ecuacin de Linewaber y
Burk.

VI. FUENTES DE INFORMACIN

a. Devlin Thomas M. Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. Tomos I y
II. Barcelona. Revert Colombiana. S. 2000.
b. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la
Espaa. McGraw Hill- Interamericana. 2001.
c. David L N, Cox M M. y Lehninger A. Principios
Barcelona. Omega. 2001.
d. Luque L y Hermoza A. Biologa Molecular e
Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.

Salud.

de

Bioqumica.

Ingeniera

PRCTICA

EXTRACCIN DE OLIGOFRUCTANOS E IDENTIFICACIN

DE CARBOHIDRATOS
I.FUNDAMENTO TERICO:
Los carbohidratos son biomolculas que presentan grupo funcional
carbonilo (aldehdo y cetona) y varios grupos hidroxilos en cada
carbono.
Los carbohidratos tienen la propiedad qumica oxidarse por el
carbono anomrico, (grupo carbonilo) dando origen a un cido
orgnico, y produciendo la reduccin de otros compuesto, es por
ello que los carbohidratos principalmente los monosacridos y
algunos disacridos expresan esta propiedad, sin embargo e n los
polisacridos dicha propiedad est ausente.
Los carbohidratos pueden formar polmeros mediante la unin entre
ellos (enlaces o- glucosdicos) dando origen a monosacridos,
disacridos, oligosacridos y polisacridos.
Los fructanos son los polisacridos no estructurales ms abundantes
en la naturaleza, presentes en muchas especies de plantas, en
hongos del tipo Aspergillus sp. y en bacterias. De este grupo los
ms ampliamente estudiados y de mayor uso a nivel industrial son
la inulina y los fructooligosacridos o FOS, que se caracterizan por
sus enlaces de tipo -(2-1) entre las unidades de fructosa, con un
grado de polimerizacin que vara entre 2 y 60 unidades, y se les
considera carbohidratos de cadena corta o de bajo nivel de
polimerizacin.
II.

COMPETENCIAS:

Extrae oligofructanos del jugo del yacon e identifica los carbohidratos

con los diferentes reactivos.
Explica el fundamento de reconocimiento de los reactivos.
III. MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivo de Lugol

Reactivo de Benedict
Reactivo de Molish
Reactivo de Selivanoff
cido clorhdrico 0,5 N
Alcohol etlico

 Acido sulfrico
Solucin A (Galactosa)

Solucin B (Sacarosa)
Solucin C (Maltosa)
Solucin D (Almidn)
Pipetas de 1, 5 y 10 mL
Beaker 250 mL
Rejilla
Trpode
Mechero
Bao mara
Tubos de prueba 13 x 100mm

IV. MTODO OPERATORIO:

a. El extracto de yacn se obtiene triturando muestra fresca, se
diluye con agua y se agita por 15 min a 80 C. Se enfria y se
afora a 100 mL con agua destilada. Se filtra (muestra).
b. Reaccin con el reactivo de Lugol: esta prueba es utilizada
para identificar polisacridos:
A
B
C
D
E
mL Solucin
0, ----mL
-0,5 ---A Solucin
5
B Solucin
mL
--0,5 --C Solucin
mL
---0,5 -D
mL Muestra
----0,5
mL HCl 0,5 N
0, 0,2 0,2 0,2 0,2
2
mL Rvo. de
0,
0,2 0,2 0,2 0,2
Lugol
2
Llevar a bao Mara a 100 C por 3 a 5 minutos. Evaluar el color
y el precipitado.
Indique segn resultados, que carbohidratos corresponde a cada
solucin.
c. Reaccin de Molish.
Colocar 2 mL de cada solucin y la muestra problema.
Luego adicionar II gotas de reactivo de Molish, mezclar.
Lentamente deslizar por las paredes del tubo, 1 mL. de
cido sulfrico concentrado, (reaccin exotrmica). La
formacin de un anillo de color violeta o prpura indica
presencia de glcidos.
d. Reaccin de Benedict.
Colocar 2.5 mL de Reactivo de Benedict en 5 tubos,
calentar hasta
ebullicin por 2 minutos. Si no hay
cambio de color se adicionan V gotas de c a d a s o l u c i n
y d e Muestra problema, luego se colocan en B.M.
hirviente durante 3 minutos, luego se deja enfriar. La

aparicin de una coloracin o, precipitado, amarillo

anaranjado o rojo, indica presencia de glcidos reductores.

e. Reaccin de Selivanoff. En un tubo de prueba se coloca

3 mL de solucin clorhdrica de resorcinol y 6 mL de
cada solucin y de la Muestra problema. Luego se
coloca en Bao de Mara hirviente por unos minutos. El
desarrollo inmediato de una coloracin anaranjado rojizo
indica presencia de cetosas.

V.

CUESTIONARIO:

1.Explique el fundamento del reconocimiento de Benedict.

2.Indique dos mtodos qumicos para reconocer azucares reductores

VI. FUENTES DE INFORMACIN.

a. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud.
Espaa.
Edit.
Mc
Graw- Hill- Interamericana de. 2001.
b. Luque
L
y Hermoza A. Biologa Molecular e
Ingeniera Gentica. Barcelona. Edit. Hartcourt. 2001.
c. Matheus Van Holde. Bioqumica. Mxico. Edit. Mc Graw Hill.
2000.
d. Martin, D.W. Bioqumica de
Harper.
Mxico. Edit. Manual
Moderno. 2000.
d.Lehninger, A.. Bioqumica. Barcelona .Edit. Omega. 2001.
e.Claros MG, Avila C. Gallardo F. Madrid .Edit. ISBN. 2001

PRCTICA 5
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE GLUCOSA EN SUERO
SANGUINEO
I. MARCO TERICO.
La glucosa es una sustancia cuyos niveles en la sangre pueden constituir un
indicio, que podra permitir diagnosticar diversas patologas: diabetes
mellitus, mixedema, hipopituitarismo, etc.
II. COMPETENCIA
Determina la concentracin
enzimtico de Trinder.

de glucosa en sangre utilizando el mtodo

III MATERIALES Y EQUIPOS.

a. Espectrofotmetro.
b. Centrifuga.
c. Bao Mara 37 C.
a. Gradilla.
b. Pipeta de 1, 5 y 10 mL.
c. Micropipeta de 10 a 50 uL
d. Micropipeta de 100 a 1000 uL
e. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
f. Ligaduras
g. Agujas 20 x 1
h. Tips azules y amarillos
Reactivos.

a. Solucin estndar de Glucosa 100 mg/dL.

b. Reactivo Enzimtico
c. Alcohol etlico absoluto
d. Indicador rojo de fenol.
e. Agua destilada.
f. Algodn
IV. FUNDAMENTO DEL MTODO:
La determinacin enzimtica de glucosa sangunea se realiza utilizando 2
enzimas: glucosa oxidasa y peroxidasa, cuyas acciones catalticas en
presencia de apropiados reactivos qumicos, permitirn la formacin de un
compuesto coloreado que es directamente proporcional a la glucosa existente
en el medio de reaccin.
Glucosa oxidasa
Glucosa + H2O + 02
2 H2O2
H 2O

Peroxidasa
+ 4-AF + fenol

Acido glucnico + H2O2

quinona coloreada

V. PROCEDIMIENTO.
Preparar los siguientes medios de ensayo:
B
Suero o plasma
Standard
Reactivo de trabajo (mL)

X
10 L

------1.0

St

---1.0

---10 L
1.0

Incubar en bao mara a 37 C durante 10 minutos

espectrofotmetro a 505 nm.

leer en el

VII. RESULTADOS.
Determinar la concentracin mg/dL utilizando el mtodo del factor de
calibracin
VII. Cuestionario
1. Cules son los valores normales de glicemia?
2. En qu condiciones debe tomarse la muestra?
3. Como procedera si el resultado es 220 mg/dL?
VIII. FUENTES DE INFORMACIN
a.
b.

Lehninger, A. Bioqumica. Barcelona . Omega. 2002.

Devlin TM. Bioqumica con aplicaciones clnicas. Barcelona. Revert
Colombiana S.A.
2000.
c.
Lozano - Galindo. Bioqumica para
Ciencias
de la Salud.
Espaa McGraw - Hill- Interamericana. 2001.
d.
Luque L.
y
Hermoza
A.
Biologa
Molecular
e
Ingeniera
Gentica. Barcelona. Hartcourt. 2001.
e.
MartinDW. Bioqumica de
Harper. Mxico.
Manual
Moderno.2000.

PRCTICA 6

AISLAMIENTO DE GLUCGENO DEL HGADO DE POLLO

I. MARCO TERICO.
El glucgeno como sustancia de reserva, se
encuentra en muchos tejidos animales, especialmente
en el hgado y msculos. El hgado de gran nmero de
especies animales tiene la capacidad de almacenar la
glucosa bajo la forma de glucgeno.
El glucgeno puede ser extrado por varios mtodos,
uno de los cuales es la hidrlisis alcalina del tejido, la
que degrada a las protenas y otros constituyentes de
la clula dejando l i b r e al glucgeno, posteriormente
puede ser precipitado por su baja solubilidad en
alcohol.
Si una persona es sometida a un perodo de ayuno
durante 24 horas, el glucgeno heptico disminuye ya
que tiene que cubrir las necesidades de glucosa.
Las vas de sntesis y degradacin de este
polisacrido,
denominadas
glucognesis
y
glucogenlisis respectivamente, estn integradas en el
conjunto de reacciones de la red metablica celular a
travs de un metabolito comn la glucosa-6-fosfato.
II. COMPETENCIA
Aisla glucgeno del hgado de pollo y determina el
porcentaje de este carbohidrato contenido en el
hgado.
III. MATERIALES Y EQUIPOS.
3.2.

Equipos y materiales.

a. Espectrofotmetro.
b. Centrifuga.
c. Bao Mara 37 C.
d. Cocina elctrica.
e. Mortero y piln.
f. Balanza.
i. Gradilla.
j. Pipeta de 1, 5 y 10 mL.
k. Micropipeta de 10 a 50 uL
l. Tubos de prueba de 13 x 100mm y de 16 x 150 mm.

m.
Micropipetas de 100 a 1000 uL con punteras.
n. Embudo mediano; baguetas y punteras amarillas.
o. Pinzas de madera y bolas de vidrio de 100 mm de
dimetro
3.2. Reactivos.
g.

Solucin saturada de sulfato de sodio.

h. KOH al 30% ;
i. NaOH O.5M.
j. HCl 1.2 M
k. Alcohol etlico absoluto
l. Indicador rojo de fenol.
m.
Agua destilada.

IV. PROCEDIMIENTO.
A.

Aislamiento de glucgeno
a. En un tubo de prueba de 16 x 150 mm, depositar
1 g. de hgado (triturado), adicionar 4 mL de KOH
al 30 %, luego colocar el tubo en Bao Mara
hirviente durante 20 minutos, agitando de vez en
cuando.
b. Retirar el tubo y colocarlo en un recipiente
con agua helada.
a. Adicionar 0.4 mL de
solucin saturada de sulfato
de sodio y mezclar enrgicamente
b. Adicionar 8 mL de alcohol absoluto (para
pp el glucgeno), dejar en el bao de hielo
durante 5 minutos.
c. Centrifugar por 5 minutos a 3,000 g.
d. Elimine el sobrenadante y disuelva el glucgeno pp
en 5 mL de agua destilada, (caliente suavemente
para disolver).

B. Hidrlisis y determinacin del glucgeno.

a. En una gradilla disponga dos tubos de prueba, y
adicione a cada tubo 2mL de la solucin anterior.
b. Adicionar a cada tubo 2 Ml de HCL 1.2 M., tape la
boca de los tubos con una bolita de vidrio, y luego
coloque los tubos a B.M. por 2 hrs.

c. Agregue a cada tubo I gota de rojo de fenol y

neutralice con NaOH
0.5 M hasta que el indicador vire de rosa a anaranjado
y luego a amarillo.

d. Deje enfriar y luego complete a 5 mL con agua

destilada.
e. Determine luego glucosa por el mtodo de la glucosa
oxidasa.
V. RESULTADOS
El glucgeno se expresa en mg/dL de glucosa.
VI. CUESTIONARIO.
a. Grafique la cascada glucogenoltica
b. Fundamente la causa por la que la glucosa no se
almacena en el organismo como glucosa, sino bajo la
forma de glucgeno.
c. Describa como actan
las enzimas que
intervienen en la
glucogenolisis.
d. Cmo se realiza la regulacin de la glucogenogensis?
VII. FUENTES DE INFORMACIN
a. Lehninger, A. Bioqumica. Barcelona . Omega. 2002.
b. Devlin TM. Bioqumica con aplicaciones clnicas.
Barcelona. Revert Colombiana S.A. 2000.
c. Lozano - Galindo. Bioqumica para
Ciencias
de la
Salud.
Espaa McGraw - Hill- Interamericana. 2001.
d. Luque L. y
Hermoza A. Biologa
Molecular
e Ingeniera
Gentica. Barcelona.
Hartcourt. 2001.
e. Martin DW. Bioqumica de Harper. Mxico.
Manual Moderno.2000.

PRCTICA 7

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA EN

DIVERSOS TEJIDOS DE ORIGEN ANIMAL Y
VEGETAL
I.

MARCO TERICO

La enzima catalasa, controla la formacin del perxido de hidrgeno

al trmino de la cadena de transporte de electrones, desdoblndolo
en agua y media molcula de oxgeno, juega un rol importante en el
equipo de antioxidantes de tipo enzimtico.

I
I

COMPETENCIA
Evidencia la presencia de Catalasa en diversos tipos de tejidos mediante el
Dedoblamiento del perxido de oxigeno

II
I.

MATERIALES
a. Tabla y cuchillo para picar
b. Balanza.
c. Esptula
d. Mortero con piln
c. Tubos de prueba de 13 x 100mm y de 16 x 150 mm

d. Pipetas de 1, 5 y 10 mL
e. Baguetas
f. Centrifuga.
f. Embudo de vidrio
g. Papel de filtro
Reactivos.
a. Solucin de perxido de hidrgeno 30 mM
b. Solucin salina fisiolgica (Cloruro de Sodio 0.9 %)
IV. PROCEDIMIENTO

1. Se limpiarn apropiadamente, m u e s t r a s d e t e j i d o
vegetal (papa, rabanito) y animal (hgado,
corazn, musculo), se pesar 1 g de cada
muestra, se triturar y homogeneizar al 10 %
c o n s o l u c i n s a l i n a fi s i o l g i c a .
2. Colocar en tuboss de ensayo 3 mL de solucin
d e p e rx i d o d e h i d r g e n o 3 0 m M y a a d i r 0 . 5 m L
d e l fi l t r a d o.
3 . O b s e r v a r e l d e s p re n d i m i e n t o d e x i g e n o
Re p e t i r e l e n s a y o c o n c a d a m u e s t r a y c o m p a r a r
l o s re s u l t a d o s
V.

RESULTADOS
Formular las conclusiones de acuerdo a lo observado en el
procedimiento operatorio

VI.

CUESTIONARIO.
a. Elabore la grfica de la cadena respiratoria poniendo
nfasis en la participacin de la catalasa
b. Elabore un mapa conceptual de la actividad
biolgica de la enzima.

VII. FUENTES DE INFORMACIN.

a. David LN, Cox M.M. y
de
Omega 2001.
b. Lozano - Galindo.
de la
Interamericana. 2001.

Lehninger A. Principios
Bioqumica. Barcelona.
Bioqumica
para Ciencias
Salud .Espaa. McGraw-Hill

c. Luque L, Hermoza A. Biologa Molecular e Ingeniera

Gentica. Barcelona. Hartcourt 2001.
d. Martin DW. Bioqumica de Harper. Mxico. Manual
Moderno. 2000.

PRCTICA 8
SAPONIFICACIN
I.

MARCO TERICO
Los aceites vegetales, como el aceite de coco o de olivo, y las grasas
animales, como el sebo, son steres de glicerina con cidos grasos.
Por eso cuando son tratados con una base fuerte como sosa o potasa
se saponifican, es decir producen la sal del cido graso conocida
como jabn y liberan glicerina. En el caso de que la saponificacin se
efecte con sosa, se obtendrn los jabones de sodio, que son slidos
y ampliamente usados en el hogar. En caso de hacerlo con potasa,
se obtendrn jabones de potasio, que tienen consistencia lquida.

II.

OBJETIVO:

Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lpidos, algunas de

las cuales pueden servirnos para su identificacin.
III. MATERIALES
Materiales
Beaker 500ml 100ml,
Bao mara
Papel filtro
Pipetas de 10ml
Cpsula de porcelana.
Reactivos
Aceite de palma o aceite de coco
KOH (1g/ml agua),

 HCl al 10%
CaCl2 al 10%
NaCl (sal de cocina).
IV. TECNICA
OPERATORIA
Reaccin de
saponificacin
En un vaso de precipitado de 1000ml calienta en un bao mara
15 g de aceite de palma o aceite de coco. Agitando
constantemente agrega 13 ml de KOH (1g/ml agua). Terminada
la adicin, contina calentado en bao mara y agita durante 50
min. Adicionar cloruro de sodio para separar el jabn.
V.

CUESTIONARIO

1) Si se agita frecuentemente la mezcla de reaccin, Se acelera la

velocidad de saponificacin? Porqu?
2) Qu son las micelas?
3) Una molcula de jabn, Es o no soluble en agua? Explica tu
respuesta.
4) Explica fsicamente cmo un jabn es capaz de quitar una
mancha de aceite de una tela.
5) Qu diferencia estructural hay entre un jabn y un detergente?

VI. FUENTES DE INFORMACIN

a. Lozano - Galindo. Bioqumica

para
Ciencias de la
Salud. Espaa . Edit. Mc GrawHill- Interamericana de. 2001.
b. Luque
L
y Hermoza A. Biologa Molcular e
Ingenieria Gentica. Barcelona.Edit. Hartcourt. 2001.
f. Matheus Van Holde. Bioqumica. Mxico. Edit. Mc Graw
Hill.2000.
g. Martin, D.W. Bioqumica de

Harper. Mxico. Edit. Manual

Moderno. 2000.
h. Lehninger, A.. Bioqumica. Barcelona .Edit. Omega. 2001.
i. Claros MG, Avila C. Gallardo F. Madrid .Edit. ISBN. 2001

PRCTICA 9

DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SUERO

SANGUINEO
I.

MARCO TERICO.
El colesterol es el esteroide
ms abundante
en el
organismo humano. Es un componente habitual de la
dieta ( carne, leche, huevos) , pero fundamentalmente
el, organismo lo sintetiza en el higado. Es importante
mencionar que una de sus principales funciones biolgicas
es la de regular la fluidez de las membranas celulares y
la de constituirse como uno de los precursores de
hormonas
esteroideas,
gestgenos
y
corticoides,
andrgenos, estrgenos , vitaminas y otros compuestos
biolgicos
Se desplaza por la sangre en partculas denominadas
lipoprotenas,
que
contienen
tanto
lpidos
como
protenas. El organismo cuenta con tres tipos de
lipoproteinas:
Lipoproteinas de baja densidad (LDL): Contienen
cerca del 70 por ciento del colesterol del suero y favorecen
los trastornos cardiovasculares
Lipoproteinas de baja densidad (HDL): Acumulan el
20 por ciento del colesterol total y tienen un efecto
protector
Lipoproteinas de muy baja intensidad (VLDL):
Contienen en torno al 10 por ciento del colesterol total
del suero y la mayor parte de los triglicridos
La principal consecuencia del exceso de colesterol en
sangre es el desarrollo de enfermedades coronarias (EC).
Que son frecuentes en las poblaciones cuya alimentacin
es rica en grasas saturadas
La hipercolesterolemia est estrechamente ligada a la
arterosclerosis, una alteracin degenerativa que ataca a
las arterias en las que se forman placas
de
ateroma. que obstruyen total o
parcialmente los vasos de las arterias ocasionando una

falta de riego. Si la falta de riego se localiza en las arterias

coronarias que irrigan el corazn se puede originar una
angina de pecho o un infarto de miocardio. Si se produce
en las arterias cerebrales son frecuentes las hemorragias
y trombosis cerebrales. Cuando la obstruccin se localiza
en las extremidades puede favorecer la gangrena de un
miembro y, en el peor de los casos, su amputacin.

II.

COMPETENCIA
Determina
la concentracin de colesterol en suero
sanguneo.
Concientiza
el
riesgo
que
genera
concentraciones elevadas de colesterol (a t e r o m a ) o
bajas (a f e c c i n heptica o tiroidea).

III.

MATERIALES Y EQUIPOS.
Equipos y materiales.
1. Espectrofotmetro.
2. Centrifuga.
3. Bao Mara regulado a 37C.
4. Jeringas descartables x 5ml. con aguja
hipodrmica estril.
5. Algodn, ligadura.
6. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
7. Pipetas de 10 mL.
8. Micropipetas de 0 a 50 uL.
9. Punteras amarillas, gradillas y baguetas.
Reactivos.
10.
Set de reactivos para colesterol ( enzimtico ).
11.
Muestra biolgica.
12.
Alcohol medicinal.

IV.

TECNICA OPERATORIA.
A.En una gradilla disponer tres tubos de prueba de
13 x 100mm, rotularlos con P (problema), S (Standard
) y B (blanco) luego proceder como sigue

REACTIVOS

Suero del paciente

10

Standard de colesterol

Agua destilada

Reactivo enzimtico

1m

10ul
1mL

B. Reposo x 20 minutos.

C. Leer a 650 nn, llevando el espectrofotmetro a

cero en absorvancia con el blanco de reactivos.
D. Para obtener la concentracin de colesterol de
la muestra problema, se aplica la siguiente
frmula.

10
1m

mg de colesterol/ dL =
absorbancia del problema X 200
absorbancia del standard
V.

RESULTADOS.
Concentraciones de colesterol, en mg/dL, obtenidos por los
alumnos enen las muestras analizadas.

VI.

CUESTIONARIO.
i. Describa como se realiza la biosntesis del colesterol.
ii. Qu ocurre cuando el LDL-colesterol no es
fagocitado?
iii. Mencione cuatro mtodos para la determinacin
de colesterol en sangre, indicando cul? de
ellos es el ms exacto y porque. y
Porqu?
iv. Mencione lo requisitos indispensables que
debe observar una persona,para que su
determinacin de colesterol sea real.
v. Explicite la biosntesis de colesterol a partir
de la ingesta de carbohidratos.

VII. FUENTES DE INFORMACIN.

i. Stryer l , Berg JM. Bioquimica. 5ta ed. Barcelona. Reverte.
2003.
ii. Devlin TM.Bioqumica . 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
iii. Lehninger .Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona.
Omega . 2006.
iv. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed.
Madrid.Addison Wesley. 2002.

PRCTICA 10

HIDRLISIS ENZIMTICA DE LOS LPIDOS

I. MARCO TERICO.
Los lpidos de la dieta son hidrolizados a nivel del yeyuno por accin de
la lipasa pancretica. En este proceso juegan un papel muy importante
las sales biliares, compuestos que tienen la propiedad de emulsionar los
lpidos para una eficiente accin de la lipasa pancretica.

II. COMPETENCIA
Demostrar experimentalmente la accin hidroltica de la lipasa pancretica

III. MATERIALES y REACTIVOS.

a. Tubos de ensayo
b. Pipetas de 1, 5 y 10 mL.
c. Gradillas
d. Probeta de 50 mL.
e. Beakeres de 50, 100 y 250mL
f. Frasco gotero.
g. Piceta
h. Mortero con piln
i. Bureta de 25 o 50mL
j. Bao Mara
Reactivos
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Aceite
Sales biliares al 1 %
Solucin de NaOH 0,05 N
Buffer fosfato 0,1 M, pH 7,8
Solucin de fenolftalena
Solucin de pancreatina al 1 %

IV. TCNICA OPERATORIA

Con la finalidad de mostrar experimentalmente la accin hidroltica de
la lipasa pancretica se prepararn los siguientes medios de reaccin:

mL. de tampn fosfato 0.1 M pH 7.8

mL. de aceite
mL. de sales biliares al 1%
mL de agua
5.0

1.0
2.0
---

2.0
1.0
2.0
2.0

2.0
1.0
--2.0

2.0
1.0
2.0

---

Aadir II gotas de fenolftalena a cada uno de los tubos, luego adicionar

gota a gota una solucin de NaOH 0.05N hasta que aparezca una
coloracin dbilmente grosella estable, luego adicionar:
mL. de solucin de pancreatina al 1%

---

5.0

5.0

5.0

Volver a incubar los tubos a la misma temperatura durante 1 hora,

agitndolos cada 5 minutos.
Al finalizar el tiempo de incubacin adicionar nuevamente a cada tubo II
gotas de fenolftalena y proceder a titular, utilizando una bureta, con
una solucin de NaOH 0.05 N hasta que aparezca nuevamente la
coloracin ligeramente grosella.
V. RESULTADOS
Los resultados se expresarn como miliequivalentes de cido esterico
liberado por accin de la lipasa pancretica.
VI. CUESTIONARIO
1.Que funcin cumple la fenolftalena
2.Como explica los resultados obtenidos?
3.Qu rol tuvieron las sales biliares?
4.
VII. FUENTES DE INFORMACIN
a. Stryer l , Berg JM. Bioquimica. 5ta ed. Barcelona.
Reverte. 2003.
b. Devlin TM.Bioqumica . 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger .Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona.
Omega . 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed.
Madrid.Addison Wesley. 2002.

PRCTICA 11
REPRESENTACIN GRFICA DEL MECANISMO
DE ACCIN DE LAS HORMONAS A NIVEL DE
MEMBRANA y A NIVEL DE NUCLEO
I.
MARCO TERICO.
Las hormonas son sustancias qumicas que se caracterizan
por ejercer su actividad en un lugar diferente a donde se
producen, se encuentran por lo general asociadas a una
glndula endocrina, esta libera a la hormona al torrente
sanguneo hasta que recibe la seal fisiolgica adecuada.
La hormona viaja por el torrente circulatorio e interacta
con la las clula diana mediante la unin inicial a un
receptor macromolecular, situado en la
membrana
plasmtica o en el interior de la clula .
Para ejercer su accin, todas las hormonas deben unirse
a su receptor especfico, estas uniones inician mecanismos
intracelulares que conllevan las respuestas celulares. De
acuerdo a su mecanismo de accin las hormonas se
dividen en dos grupos , unas de las que vamos a tratar en
esta prctica , se unen a los receptores celulares
localizados en la membrana de las clulas diana. Esta unin
dispara uno o ms de las vas de transduccin que llevan a
las respuestas celulares. La interaccin con el receptor de
membrana es rpida y reversible. Debe existir alta afinidad
y especificidad, ya que las hormonas se encuentran en
muy baja concentracin a nivel sanguneo. Con la unin de
la hormona al receptor y activacin del segundo mensajero
se producen seales intracelulares que son especficas
para cada receptor; son amplificadas y generan una
variedad de efectos secundarios y terciarios que modifican
la funcin celular.
Los receptores de membrana en general presentan
dominios especficos que: a.). Se unen al ligando; b).
Interactan con sistemas efectores ya sea en forma
indirecta a travs de la protena G o directa por los canales
del calcio; c). Tienen actividad enzimtica inherente; d).
Determinan
la
localizacin
en
la
membrana
e
internalizacin.

Las hormonas esteroideas y tiroideas actan a nivel de

ncleo, utilizando receptores intracelulares.

Con respecto a las hormonas esterodeas, estas se

producen en clulas especficas de los testculos, la
corteza adrenal, ovarios y placenta. Los testculos son los
encargados de secretar, principalmente, testosterona
(andrgenos), la corteza adrenal produce la aldosterona,
cortisol y la DHEA (dehidroepiandrosterona), los ovarios
producen los estrgenos que engloban el estradiol, 4androsteno-3, 17-diona y la progesterona, y por ltimo
esta la placenta que tambin secreta estradiol y
progesterona, pero adems produce otra sustancia, el
estriol.

Gracias a su naturaleza lipdica las hormonas esterodeas

atraviesan facilmente las membranas de las clulas diana
o clulas blanco, y se unen a las molculas receptoras
de tipo proteico, que se encuentran en el citoplasma. De
esta manera llegan al ncleo, donde actan sobre genes
del ADN, se produce la transcripcin. Las molculas de
ARNm originadas se encargan de dirigir en el citoplasma
la sntesis de unidades proteicas, que son las que
producirn los efectos fisiolgicos hormonales.
Las hormonas tiroideas se liberan cuando el hipotlamo
secreta la hormona liberadora de tirotropina, que estimula
la hipfisis anterior para liberar TSH, que a su vez
estimula la glndula tiroides para secretar: L- tiroxina (T4)
y L-triyodotironina (T3) (fig. ). Pequeas cantidades de T4 y
T3 estimulan el metabolismo energtico, especialmente en
el hgado y en el msculo. Estas hormonas se unen a un
receptor proteico intracelular especfico; el complejo
hormona-receptor activa algunos genes que codifican
enzimas que intervienen en la produccin de energa,
incrementando su sntesis y, por tanto, incrementando la
tasa metablica basal del animal.

II.

COMPETENCIA.

Representa con grficos el mecanismo de accin

las hormonas a nivel de membrana.

de

III.

MATERIALES

a.
Bibliografa del silabo de Bioqumica I
b. Bibliografa de carcter cientfico (revistas, manuales, etc.)
c. Retroproyector.
d. Videos VHS, etc
e. Libros y revistas
f. C D .Power point. IV.
PROCEDIMIENTO.
Se realizar
de
acuerdo a
la
tcnica para
elaborar representaciones
grficas del mecanismo de accin de las hormonas a nivel
de membrana biolgica y a nivel del ncleo.

V.RESULTADOS.
Grficos de los diferentes mecanismos de accin.
VI.CUESTIONARIO.
a. Elabora un grfico sobre el mecanismo de accin de la
adrenalina
b. Cules son las funciones del glucagn y de la
adrenalina en el organismo?
c. Elabore un mapa conceptual de los receptores de membrana.
VII.FUENTES DE INFORMACIN.
a. Stryer l , Berg JM. Bioquimica. 5ta ed. Barcelona. Reverte.
2003.
b. Devlin TM.Bioqumica . 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger .Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona.
Omega . 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed.
Madrid.Addison Wesley. 2002.

PRCTICA12
DETERMINACIN DE UREA POR MTODO
ENZIMTICO

I.MARCO TERICO.
La rea es el metabolito final del metabolismo de las
proteinas ,es excretada en grandes cantidades por la orina.
Su excrecin es la funcin principal del rin, representando
por s sola bastante ms de la mitad del residuo slido de la
orina. Usualmente constituye del 80 al 90% del nitrgeno total;
El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al
da algo ms en personas que comen dieta rica en
protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas
Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo contrario se
acumular en lquidos corporales.
Los dos factores principales que establecen el ritmo de
excrecin de urea son:
1) la concentracin de urea en el plasma, y
2) la intensidad de filtracin glomerular.
Estos factores aumentan la concentracin de rea.
En general, la cantidad de rea que pasa por los tbulos y
va a la orina es aproximadamente proporcional a la carga de
rea que penetra en los tbulos proximales, en promedio 50 a
60%. Sin embargo, esto solo es cierto cuando la intensidad de
filtracin glomerular es normal.
Cuando la intensidad de filtracin glomerular es muy baja, el
filtrado persiste en los tbulos por largo tiempo, antes de
acabar en la orina.
Como todos los tbulos son por lo menos ligeramente
permeables a la urea, cuanto ms tiempo persista el liquido
tubular en los tbulos, mayor reabsorcin de rea hacia la
sangre; la proporcin de rea filtrada que llega a la orina
disminuye considerablemente.
Por otra parte, cuando la filtracin glomerular es muy intensa,
el liquido pasa a travs del sistema tubular tan rpidamente
que se reabsorbe muy poca rea. Por lo tanto con intensidad

de filtracin glomerular muy elevada, casi el 100% de rea

pasa a la orina.
Es importante destacar que en aquellos pacientes con
insuficiencia renal se debe conservar la intensidad de filtrado
glomerular en valores altos, debido a que cuando esta
disminuye demasiado, se incrementa la rea en sangre.
II.COMPETENCIA.
Determina la concentracin de rea tanto en suero sanguneo
como en orina por el mtodo enzimtico de la ureasa.

III.MATERIALES Y REACTIVOS
-Equipos y materiales.
a.
Espectrofotmetro.
b. Centrifuga.
c.Bao Mara regulado a 37.
d.
Jeringas descartable x 5 mL; ligadura y algodn.
e.
Tubos de prueba de 13 x 100 mm.
f. Micropipetas de 0 a 50 uL., pipetas de 1 , 5 y 10 ml.
g.
Gradillas, baguetas.
- Reactivos.
a. Reactivo 1: contiene fenol y nitroprusiato de sodio.
b. Reactivo 2: contiene una solucin concentrada
de hipoclorito de sodio e hidrxido de
sodio.
c. Ureasa en solucin.
d. Standard de rea solucin de rea 60 mg / dL.
IV.TCNICA OPERATORIA.
a.

En una gradilla disponer 3 tubos de prueba de 13 x

100 ml., marcarlos con las letras S (standard ); P
(problema ) y B (blanco ) y proceder como sigue :

Standard

20ul

Suero

20ul

Ureasa

I gota

Reactivo N 1 mL.

Reactivo N 2 mL.

I
Igota
gota
Mezclar por agitacin suave e incubar x 5
minutos a 37C Luego agregar

Mezclar por agitacin suave e incubar x 5

minutos a 37C Luego agregar
Agua destilada mL

10

10

10

a. Mezclar por inversin. Reposos 10 minutos y leer a 540 nn.

b. Calcular la concentracin de rea en mg/dL

aplicando la siguiente frmula
mg / dL = lectura del problema
x
60 lectura del Standard
13.4.1. Valores de referencia. De 20 a 45 mg / dL.
V.CUESTIONARIO.
a. Explique porque para obtener mg/dL, se multiplica por
60.
b. Cmo se convierte el N urico en urea y, viceversa
c. Grafique la interrelacin del ciclo de la urea
con el ciclo
de Krebs.
d. Indique que enzimas actan en la mitocondria, y
cules en el citoplasma, en el ciclo de la rea.
e. Se requiere de ayuno para realizar la determinacin
de rea en sangre.
VI.FUENTES DE INFORMACIN.
a. Devlin T homas M.
Bioqumica
con
Aplicaciones
Clnicas. tomos I
y II. Barcelona. E Revert Colombiana. S A. 2000.
b. David LN, Cox M M. Lehninger Principios de
Bioqumica . Barcelona. Omega. 2001.
c. Lozano Galindo.
Bioqumica para
Ciencias
de la
Salud. Espaa. McGraw
- Hill- Interamericana.
d. Luque L y Hermoza A. Biologa Molecular e
Ingeniera
Gentica. Barcelona. Hartcourt. 2001.

PRACTICA 13

DETERMINACIN DE LAS CONCENTRACIONES DE CIDO RICO

EN ORINA Y SUERO SANGUNEO.
I. MARCO TERICO.
El cido rico es el metabolito de excrecin de las purinas.
II. COMPETENCIA.
Determina las concentraciones de cido rico tanto en suero sanguneo
como en orina, por el mtodo de la uricasa.
III. MATERIALES Y EQUIPOS.
a. Espectrofotmetro.
b. Centrifuga.
c. Bao Mara 37 C.
d. Gradilla.
e. Pipeta de 1, 5 y 10 mL.
f. Micropipeta de 10 a 50 uL
g. Micropipeta de 100 a 1000 uL
h. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
i. Ligaduras
j. Agujas 20 x 1
k. Tips azules y amarillos
Reactivos.
l.
m.
n.
o.
p.

Solucin estndar de cido rico 10 mg/dL.

Reactivo Enzimtico
Alcohol etlico absoluto
Agua destilada.
Algodn

IV. FUNDAMENTO DEL MTODO:

La determinacin enzimtica de cido rico en suero sanguneo se realiza
utilizando 2 enzimas: uricasa y peroxidasa, cuyas acciones catalticas en
presencia de apropiados reactivos qumicos, permitirn la formacin de un
compuesto coloreado que es directamente proporcional a la glucosa existente
en el medio de reaccin.
Uricasa
cido rico + H2O + 02
2 H2O2
H 2O

Peroxidasa
+ 4-AF + fenol

Alantona + H2O2
quinona coloreada

V. TCNICA OPERATORIA
Preparar los siguientes medios de ensayo:
B
Suero o plasma
Orina diluida al 10 %
----Standard
Reactivo de trabajo (mL) 1.0

MP1

MP2
10 L

----

St
-----

-------

---1.0

1.0

Incubar en bao mara a 37 C durante 10 minutos

espectrofotmetro a 505 nm.

--------

10uL

-----

10 uL

1.0
y

leer en el

VI. RESULTADOS.
Utilizando el mtodo del factor de calibracin, determinar la concentracin de
cido rico y expresarla en mg/dL de suero, y por orina de 24 horas en el caso
de la orina.
VII. CUESTIONARIO
1. Cules son los valores normales de cido rico?
2. En qu condiciones debe tomarse la muestra?
3. Como procedera si la lectura en el caso de la orina diluida fuera
mayor a 2?
VIII. FUENTES DE INFORMACIN
a.
Stryer l , Berg JM. Bioquimica. 5ta ed. Barcelona. Reverte. 2003.
b.
Devlin TM.Bioqumica . 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c.
Lehninger .Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona. Omega . 2006.
d.
Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed. Madrid.Addison Wesley.
2002.

PRACTICA 14
DETERMINACION DE
BILIRRUBINA TOTAL Y
FRACCIONADA SERICA
I. MARCO TERICO.
La vida del hemate es de 120 das, transcurridos los cuales
las clulas del sistema reticulo endotelial, especialmente
del bazo , hgado y mdula fagocitan a stos hemates
liberando hemoglobina, la cual es catabolizada y
convertida en biliverdina, la misma que al reducirse se
convierte en bilirrubina. La bilirrubina se une a la
albmina , y asi es transportada desde las fuentes
extrahepticas, a los sinusoides, el complejo bilirrubinaalbmina atraviesa las microvellosidades sinusoidales
pasando a la clula heptica. La albmina se separa y la
bilirrubina por accin de los glucornidos se convierte en
diglucornido de la bilirrubina. La bilirrubina no conjugada
y los glucornidos de la bilirrubina son transportados a la
sangre
La conjugacin para la formacin del glucornido es un
prerrequisito para la eliminaci de la bilirrubina en la bilis,
y sea un factor limitante en el transporteLa bilirrubina
conjugada se elimina ms rapido que la no conjugada

II. COMPETENCIA.
Determina la concentracin de bilirrubina total y
fraccionada en suero, conceptualizando su importancia
biolgica
III. EQUIPOS Y MATERIALES
a.
b.
c.
d.

Espectrofotmetro.
Centrifuga
Bao de Mara a 37C.
Jeringas descartables d x 5mL, con aguja
hipodrmica descartable N 20 x 1 .
e. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
f. Micropipetas de 0a 50uL; punteras de color amarillo.
g. Pipetas de 1, 5 y 10 mL.
h. Gradillas; baguetas; ligaduras.

Reactivos.
a.

Reactivo A: Acido sulfanilico al 0.5 % con 6 mL de HCL

b. Nitrito de sodio al 2%.

c.

d.
e.

Reactivo B. Se prepara en el momento de usar

mezclando 10 mL. de Reactivo A con 0.3 mL. de
nitrito de sodio.
Standard de bilirrubina de 5 mg/dL.
Metanol. G.R.
f.
Alcohol medicinal.
g. Agua destilada.

IV. TCNICA OPERATORIA.

a. En una gradilla disponer
blanc con las letras B (
o

4 tubos de prueba rotulados

BD ( bilirrubina directa ) , BT ( bilirrubina total ) y S (

standard ) luego proceder como sigue:
b.Mezclar y dejar en reposo 5 minutos.

Suero mL
St. de bilirrubina 5 mg
/dL,
AguamL.
destilada mL.
Metanol
Reactivo A mL
Reactivo B mL.

B
0.
3
4.
5
0
5
-

S
0
34.
50.
5

B
D
0
-.

B
T
0
-.

4
-.
0
.

4
-.

a. Leer en el espectroofotmetro a 525 nn.

b. Para obtener la concentracin de la bilirrubina y
fracciones se aplican las siguientes frmulas.

mg /dL de BT= lectura BT x 5 ; mg / dL de BD =

lectura de BD x 5 Lectura S
lectura de S

mg / dL de
V.

BI = BT

- BD

CUESTIONARIO.
a. Describa el fundamento y las reaciones que
ocurren en la determinacin de bilirrubina.
Porqu se utiliza metanol.
b. De qu otras fuentes que no sea los hemates
envejecidos , proviene la bilirrubina.
c. Qu concentraciones sricas de bilirrubina puede
tener un neonato con Rh positivo , con el hecho de
que la madre tenga sangre Rh negativo.

0
.

d. Ud. Determinara bilirrubina en un suero bemolizado.

Porqu ?.
VI.

FUENTES DE INFORMACIN.
a. Stryer l , Berg JM. Bioquimica. 5ta ed. Barcelona. Reverte.
2003.
b. Devlin TM.Bioqumica . 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger .Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona.
Omega . 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed.
Madrid.Addison Wesley.
2000