OPERACIONES UNITARIAS DE SEPARACION Y

ESTABILIZACION
Te
Tericos Prof. G. Pic
Pic 2013
Clase 4

CRISTALIZACION

Para que se cristaliza una sustancia ?

- Eliminar el solvente (agua) y otros cosolutos.
- Se incrementa el periodo en que puede ser almacenada y transportada

- Se aumenta la estabilidad termodinmica (caso de

macromolculas)
- Se mantiene prcticamente intacta su actividad biolgica.
- Es criterio de pureza
- Se disminuye el empleo de estabilizantes

LA CRISTALIZACION SIRVE PARA

PURIFICAR
y
ESTABILIZAR UNA MOLECULA

En la formacin del estado slido

Formacin de un cristal
Formacin de un vidrio

El cristal de una sustancia pura, el cuerpo con mayor orden y

por lo tanto con menor contenido entrpico

ESTADO DE GRAN DESORDEN

(gaseoso, liquido, solucin)

Significativa disminucin de la entropa y

entalpa del sistema

Cristalizacin de un soluto disuelto en un solvente,

separacin de fases.
No es un proceso espontneo. Debe estar acoplado a otro
proceso espontneo
Soluto (sol)
 Soluto (solido- cristal)

El proceso de cristalizacin de un soluto en solucin

TERMODINAMICAMENTE: Se debe romper la interaccin soluto-solvente

H >> 0 y S >> 0
Este proceso no puede ocurrir espontneamente ya que H >> -(T S)

Se debe acoplar otra evolucin de manera que el G resultante de ambas sea

negativo

Soluto (solucin)  Agregacin G>>0

EFECTO EXTERNO G<<<0

El soluto pierde solvente y sus molculas entran en contacto entre
si, producindose la agregacin

LOS METODOS DE FORMACIN DE UN CRISTAL

SOLUTOS (solucin)

FORMACION DE AGREGADOS

TEMPERATURA
ELIMINANDO SOLVENTE
AGREGANDO UN COSOLUTO

FACTORES EXTERNOS
7

Como cristalizar un soluto disuelto en un solvente ?

Hay que lograr sobresaturacin de un soluto en solucin
1- Disminucin de la TEMPERATURA

Solubilidad (mg / mL)

Diagrama de solubilidad de un soluto vs Temperatura

B (zona inestable)

A (zona estable)

Temperatura (C)

2- Eliminacin parcial el solvente

Solubilidad (mg / mL)

A Temperatura constante

B (zona inestable)

A (zona estable)

Temperatura ( C)

3- Disminucin del volumen disponible para el soluto

por agregado de un cosoluto

Solubilidad (mg / mL)

ZONA
SOBRESATURADA

ZONA ESTABLE

Concentracin de
Cosoluto

MECANISMO MOLECULAR DE LA FORMACIN DE UN CRISTAL

PRIMERA ETAPA: EL PROCESO DE NUCLEACIN

NUCLEACION

Es la formacion de nucleos donde

antes no haba.

NUCLEACION

NUCLEACION

PRIMARIA

SECUNDARIA
Se debe a la presencia de nucleos que
facilitan la formacin de cristales

HOMOGENEA

HETEROGENEA

TERMODINAMICA DE LA FORMACION DE LOS NUCLEOS

G = Gs + Gv

(1)

solucin

cavidad

Superficie
del cristal

Soluto ( solucin) Soluto( slido)

GV :cambio de energa libre debido a la formacin de una cavidad (favorable)

Gs cambio de energa libre debido a la formacin de una superficie
(cristal)(desfavorable).

TERMODINAMICA DE LA FORMACION DE LOS NUCLEOS

G = Gs + Gv

(1)
Gs = A

(2)

Gv = n ( solucion fase slida)

G s cambio de G debido a la
formacin de una superficie
No expontneo

(3)

solucion = o + RT ln asolucin
fase slida = o + RT ln asolido

reemplazando :
Radio de los ncleos

Gv cambio de G DEBIDO A LA
FORMACION DE UNA CAVIDAD
Proceso expontaneo

Gv = nRT ln

asolucin
asolido

asolucin
=S
asolido
finalmente
G = RT ln S + A

4
G = 3 r 3 RT ln S + 4 r 2

(4)

(5)

en la situacin :
G
=0
r

Los ncleos han adquirido un

tamao donde pueden crecer
solos

G = G * ( r = r * )

( 6)

16 2 3
G =
3 ( RT ln S ) 2

(7 )

Cambio de energa
libre crtica

Depende inversamente de la T y
la concentracin de soluto

En el proceso global de formacin del cristal

Energa libre por creacin
de la interfase

G
=0
r

G = Gs + Gv

(1)

Proceso espontneo

Radio

Radio
crtico

Energa libre por creacin

de volumen

Dependencia de G de formacin de ncleos con la concentracin de soluto

16 2 3
3 ( RT ln S ) 2

(7 )

G * =

r
Disminuye S

Dependencia de G de formacin de ncleos con la Temperatura,

Hay que tener en cuenta que la solubilidad y la temperatura estn variando
La demostracin matemtica de este proceso es mas complicada

VELOCIDAD DE NUCLEACION
1. EFECTO DE LA SATURACION DEL SOLUTO

SOLUBILIDAD

MUCHOS NUCLEOS
CRISTALES PEQUEOS E
IMPERFECTOS

POCO NUCLEOS CRISTALES

GRANDES Y PUROS

TEMPERATURA

La agregacin tumultuosa y desordenada conduce a la formacin de

dos fases: con gran contenido de solvente: coalescencia

VELOCIDAD DE NUCLEACION
2. EFECTO DE LA VISCOSIDAD DE LA SOLUCION
Formacin de
vidrio

D=

kB T
A R

Formacin de
cristales

16

velocidad (unidades arbitrarias)

14

Crecimiento
de los
cristales

viscosidad
Crecimiento
de los nucleos

12
10
8
6
4
2
0

50

100

150

200

Temperatura (grados C)

10

VELOCIDAD DE CRISTALIZACION
Luego que el nucleo se form, el crecimiento del cristal depende de:
DIFUSION SOLUTO A TRAVES DEL SOLVENTE HACIA LA SUPERFICIE DEL
dw/dt

CRISTALx
solido

ci

solucin
CA

CAo

= KdA(c - ci)
c

Kd

N A = a k (CA Co )

Ks

cs

Modelo de la pelcula

LA VELOCIDAD DE DISOLUCION DEL CRISTAL.

dw/dt
-c )
dw/dt=A=KsK(C
s(c
i - iCs ) s

dw incremento de peso del cristal en un dt, A area del cristal,

c concen. soluto en el seno solucion,
ci is the solute concentration at the crystal/solution interface,
Cs concentracion de la solucion sobre saturada,
Kd coeficiente de difusion en la interfase, Ks coeficiente del proceso opuesto

PROCESO DE MADURACION O ENVEJECIMIENTO DEL CRISTAL

IMPUREZAS

Cristales conteniendo impurezas

CRISTAL PERFECTO

- EL CRISTAL PIERDE SOLVENTE Y OTRAS MOLECULAS NO PROPIAS.

PROCESO LENTO
- HAY UN INTERCAMBIO DINAMICO DE PARTICULAS ENTRE LOS
CRISTALES IMPERFECTOS Y LAS AGUAS MADRES
- LOS CRISTALES AUMENTAN DE TAMAO
SE DEBE DEJAR EL PRECIPITADO JUNTO CON SU AGUA MADRE POR LO
MENOS 12 Hs

11

LA CRISTALIZACION DE MACROMOLECULAS

MACROMOLECULA EN SOLUCIN
DISMINUCION DE SU SOLUBILIDAD

Sales

Formacin de Complejos:
Polielectrolitos- Protenas

Polmeros
Solventes Orgnicos

Cristalizacin

LA CRISTALIZACION DE ENZIMAS Y OTRAS

MACROMOLECULAS
LA PRIMERA ENZIMA CRISTALIZADA

Journal Biological Chemistry 1926

12

EL METODO DE 1926
J. Biological Chemistry (1926)

Polvo de poroto de soja

previamente desengrasado

Extraccin con solucin

acuosa de acetona 31,6%
FILTRACIN POR
DECANTACION

SOLUCIN
12 HS REPOSO EN FRIO

Cmo se cristaliza una protena?

Condiciones que se requieren
1- Modificar la temperatura PROHIBIDO
2- Eliminacin parcial del solvente por evaporacin NO !!!
3- Concentracin de la solucin de macromolcula por
ultrafiltracin
Presin

Solucin de
protena

Membrana de poro
controlado

Filtrado: solvente + solutos

de bajo peso molecular

13

Z 2 e 2 N
S
ln =
So 2 D RT (1 + a )

4- Cambio de pH
8 N 2 I
1000 D k T

(+) (+)

(-)

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REPULSION

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Salting in

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(+)

REPULSION

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(+)

Solubilidad (mg/ mL)

I = (Ci Z )
2
1

(-)

(+)
(+) (-)

(+)
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(-)

(-)

(+) (+)
(+)
(+)
(+)
(-)

(+)

AGREGACION

Salting out
pH isoelectrico

pH

Solubilidad (mg / mL)

5- Modificacin de la concentracin y tipo de sales

Cloruro de sodio
Sulfato de magnesio
Fosfato de sodio

Fuerza inica

6- Modificacin de la constante dielctrica del medio: agregado de etanol a

bajas concentraciones: 10%

ln

1
S
1
= k 2 2
So
Dw Dm

14

Solubilidad (mg / mL)

7- Agregado de un cosoluto: sales,

polmeros, solventes

ZONA
SOBRESATURADA
ZONA META

ZONA DE
PRECIPITACION

ESTABLE

SALES
ZONA ESTABLE

SOLVENTES
POLIMEROS

Concentracin de
Cosoluto

cosoluto

EL MECANISMO MOLECULAR MEDIANTE EL CUAL OCURRE LA

PRECIPITACIN DE UNA PROTEINA
POLIMEROS: disminuyen el volumen de solvente disponible para
que la protena se ubique, deshidratan. Se favorece la agregacin
SOLVENTES ORGANICOS: inducen la perdida de agua en la
protena, disminuye la constante dielctrica del medio
SALES: modifican la interaccin solvente protena
SALES

SOLVENTES

POLIMEROS

Sulfato de amonio

Etanol

Polietilenglicoles

Sulfato de sodio

Acetona

Polivinil alcoholes

Cloruro de sodio

Butanol

Nitrato de amonio

Dimetl sulfoxido

Sulfato de Litio

Metanol

15

EQUIPOS DE CRISTALIZACION INDUSTRIAL

Salida vapor

1
SOLUBILIDAD

Descarga de los cristales

Entrada solucin

2
2

RENNET: mucosa del estomago de

neonato o ternero
pH 5,0 + NaCl saturacin (3,3M)

TEMPERATURA

Sobrenadante
descartar

(precipitacin con sales)

PRECIPITADO
Disuelto con agua pH 6,0

Se repite 4 veces, usando

cada vez la mitad de
volumen

Acidificar con HCl hasta pH 4.5

Cristaliza la renina
(precipitacin por pH = pI )

16