UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

DEPTO. QUMICA ORGNICA
QUMICA ORGNICA III

Sntesis eficiente de nuevas chalconas a base de cafena, pirazolinas y pirazol[3,4-b]

[1,4]diazepinas como agentes potenciales antimalricos, antitripanosmicos y
antileishmanisicos
Insuasty, B., Ramrez, J., Becerra, D., Echeverry, C., Quiroga, J., Abonia, R., Robledo, S., Dario, I., Upegui, Y., Muoz, J.,
Ospina, V., Nogueras, M. & Cobo, J. Elsevier, 93, 401-413.

Bruno Colussi (201280033), Rosa Peralta (201315386), Zucel Romero (201315415), Leonel Salazar (201315509),
Javier Mendoza (201322066)
INTRODUCCIN
La cafena es un heterociclo que posee actividad biolgica debido a que acta como estimulante del sistema
nervioso central. De acuerdo a la literatura, el anillo de la cafena, al ser sustituida en el C-8, puede inhibir la actividad de
la monoaminooxidasa MAO (Tipo A y B), enzima que est localizada en el exterior de la membrana de la mitocondria en
clulas del cerebro, intestino, msculos y otros rganos. No obstante, cada nueva sustitucin va a impartir su propia
caracterstica qumica, con propiedades farmacodinmicas y farmacocinticas distintas a sus anlogos. En estudios
previos se demostr que la chalcona tiene la caracterstica de producir compuestos que poseen accin antitumoral,
antibacterial, antiinflamatoria, antileishmanisica, antimalrica y antitriponosmica, dependiendo de la sustitucin
aromtica. La reaccin de chalconas con derivados de hidrazina es una de las reacciones mayor extendida en la sntesis
orgnica. Investigadores han revelado que en la mayora de casos, el producto formado es un derivado de pirazolinas.
Estos derivados presentan diversas actividades biolgica como antimoral, antifngica, antiviral, inhibidor de MAO,
hipotensiva, etc (Loh, et. al., 2013). De lo contrario, desde el descubrimiento de la benzodiazepinas, muchos derivados de
diazepina como las pirazoldiazepinas se han sintetizado las cuales han presentado una importante actividad antitumoral,
antitripanosomal y antileishmanial (Lee & Kim, 2009).
El objetivo principal de este trabajo fue evaluar la capacidad de las chalconas a base de cafena, de las
pirazolinas y de las pirazol[3,4-b][1,4]diazepinas para inhibir el crecimiento de Plasmodium falciparum, Leishmania
panamensis y Trypanozoma cruzi, con el fin de determinar si son agentes potencialmente activos antes estos patgenos.
Entre ellos, solo la pirazolina 6a-f mostr una sobresaliente crecimiento inhibitorio de 85.2 5.4%. Mientras las diazepinas
10a-f mostraron un crecimiento inhibitorio remarcable en el rango de 80.3 13.5% a 94.2 0.2% cuando fueron
examinadas a 20 g/mL. Por ende, la sntesis de chalconas a base de cafena, pirazolinas y pirazolo[3,4-b][1,4] bajo
condiciones normales y tiempos de reaccin cortos fue llevada a cabo exitosamente, sin embargo se debe de confirmar
las actividades evaluadas en ensayos in vivo.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Qumica
El 8-clorocafena 1 fue sintetizada y fue sometida a una reaccin de sustitucin nucleoflica aromtica con la vainillina 2 en
DMF y carbonato de potasio, lo cual dio la formacin de un aldehdo 3 mediante una SN2 al realizarse en un solo paso
expuesta a radiacin de microondas. La reaccin de Claisen-Schmidt se dio entre el compuesto 3 y una acetofenona
sustituida que form un intermediario ceto-enol en medio bsico y una E 1, para la sntesis de las chalconas 5a-f. Las
chalconas se obtienen fcilmente a partir de la condensacin de acetofenonas y aldehdos aromticos, se observ que los
compuestos activos guardan una clara coplanaridad entre los tomos del fragmento definido por el carbono carbonilo del
sistema ,-insaturado (Pontificia Universidad Javeriana, s.f.). Posteriormente, los compuestos 5a-f se trataron con
hidracina y etanol a altas temperaturas dando como resultado la formacin de los derivados de pirazol 6a-f en un alto

rendimiento (90-96%). Esta reaccin se llev a cabo mediante una aminacin reductiva . Las propiedades qumicas del
anillo de pirazol estn influenciadas por la posicin relativa de los heterotomos, la unin directa de 1,2-azoles implica un
mayor grado de efecto inductivo en el ciclo y la presencia de los dos nitrgenos vecinos en el pirazol reduce la basicidad
del nitrgeno bsico (C=N) (Joule, 1972). El grupo NH- de dihidro-1H-pirazol del anillo, una amina con hibridacin sp 3, 6af se trat con anhdrido actico para dar 7a-f o con cido frmico para 8a-f a partir de una adicin nucleflica. El
compuesto 5a-f se trat con 4,5-diamino-3-metil-1-fenilpirazol 9 en N,N-dimetilformamida y BF3 en Oet2, catalizada con
irradiacin dando pirazol[3,4-b][1,4]diazapina 10a-f. Esta reaccin se dio mediante otra aminacin reductiva. Debido a la
presencia de grupos aminos no equivalentes en el anillo de pirazol pueden esperarse dos productos posibles de ciclacin
regioisomrica; no obstante, solo se obtuvo uno de los dos tipos de productos debido al efecto electrnico del anillo de
pirazol que incrementa selectivamente la nucleofilicidad del grupo amino en el carbono-4, al encontrarse menos impedido.
Sin embargo, el rendimiento de este tipo de reacciones oscila entre los 60-75%.
Se emplearon distintas tcnicas para caracterizar e identificar cada uno de los derivados obtenidos. Se emple
una cromatografa en capa fina para determinar la pureza de la sntesis y los puntos de fusin fueron determinados
experimentalmente. As como los espectro de IR, el espectro de masas, el RMN 1H y el RMN 13C de cada unos de los
derivados. En la siguiente tabla se observan los compuestos ms representativos de cada una de las series sintetizadas,
con las bandas de absorcin ms caractersticas.
SERIE 1
Compuest
o

Nombre
IUPAC

SERIE 2

SERIE 3

5d

6b

7b

8b

10d

(E)-3-((4-(2,6-Dioxo-1,3,7trimethyl-2,3,6,7-tetrahydro1hpurine-8-yl)oxy)-3methoxyphenyl)-1-(4methylphenyl)-prop-2-en1-one

3-(4-Chlorophenyl)-5-((4-(2,6dioxo-1,3,7-trimethyl-2,3,6,7tetrahydro-1H-purine-8yl)oxy)-3-methoxyphenyl)-4,5dihydro-1Hpyrazole

1-Acetyl-3-(4-chlorophenyl)5-((4-(2,6-dioxo-1,3,7trimethyl-2,3,6,7-tetrahyd ro1H-purine-8-yl)oxy)-3methoxyphenyl)-4,5dihydro-1H-pirazole

3-(4-Chlorophenyl)-5-((4(2,6-dioxo-1,3,7-trimethyl2,3,6,7tetrahydro-1H-purine-8yl)oxy)-3-methoxyphenyl)1-formyl-4,5dihydro-1H-pirazole

5-(4-Chlorophenyl)-7-((4-(2,6dioxo-1,3,7-trimethyl-2,3,6,7tetrahydro-1H-purine-8yl)oxy)-3-methoxyphenyl)-3methyl-1phenyl-1,6,7,8tetrahydropyrazolo[3,4-b]
[1,4]diazepine

1713cm-1 grupo C=O ,insaturado

1703 cm-1 y 1662 cm-1
grupos C=O de la cafena

3322cm-1 grupo NH del

pirazol

1703 cm-1 grupo C=O

1693 cm-1 y 1659 cm-1
grupos C=O de la cafena

1706 cm-1 grupo carbonilo

1691 cm-1 y 1668 cm-1
grupos carbonilo de la
cafena
1602 y 1506 grupo N=C y
C=C

3261cm-1 banda del grupo

NH
1703cm-1 y 1658cm-1 banda
del grupo carbonilo de la
cafena
1613cm-1 banda C=N

Estructura

Espectro
IR

Actividad antiplasmdica
La malaria es una enfermedad producida por parsitos del gnero Plasmodium, la infeccin ms comn es la
causada por P. falciparum. La actividad antiplasmdica se evalu en cultivos de P. falciparum a partir de los compuestos
sintetizados, a una concentracin de 20 g/ mL. El efecto de cada compuesto en el crecimiento del parsito se midi
cuantificando la tincin de ADN parsito con bromuro de etilo, donde la cantidad de fluorescencia es proporcional a la
cantidad de ADN, siendo proporcional a la cantidad de parsitos viables. Si la inhibicin era mayor al 50% se hizo una
serie de cuatro diluciones, se determin la IC50, concentracin a la cual el 50% del crecimiento del parsito ya fue inhibido.

La chalcona 5d y tres pirazolinas 6a, 6c y 7a presentaron un % de inhibicin > 50% siendo 54.3 1.0, 85.2
5.4, 56.8 9.0 y 62.5 1.2% respectivamente. El compuesto 6a y la serie 10a-f presentaron un crecimiento inhibitorio
mayor que la cloroquina, frmaco utilizado para el tratamiento de la malaria cuyo IC 50 fue 58.2 5.6%,. Los compuestos
10c, 10d y 10f presentaron % de inhibicin mayor al 90%. De los compuestos que presentaron un IC 50 < 20 g/mL a
excepcin son bastante activos contra la sepa de P. falciparum, siendo el compuesto 10f el ms activo de todos con un
IC50 = 11.3 g/mL y el 10b el menos activo con un IC 50 = 14.1 g/mL. Ninguno de los compuestos activos present
actividad hemoltica contra P. falciparum por lo que estos compuestos fueron considerados no txicos. Por lo tanto, estos
resultados sugieren que los compuestos 6a, 7a y 10a-f tiene un alto potencial antimalrico, los cuales sugieren realizar un
ensayo posterior in vivo.
Actividad Citotxica y antileishmanisica
Debido a que Leishmania es un parsito intracelular, todos los compuestos fueron probados inicialmente por su
toxicidad en clulas humanas en cuatro series de concentraciones diluidas. La actividad citotxica de los compuestos se
evalu sobre los monocitos humanos. Dicha actividad para cada compuesto fue determinada de acuerdo a su efecto en la
viabilidad celular por el mtodo microenzimtico MIT, en el cual el bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio
es reducido a un producto prpura llamado formazn por la enzima succinasa deshidrogenasa luego de 72 horas. La
citotoxicidad fue determinada de acuerdo a sus porcentajes de viabilidad y mortalidad obtenidos en cada condicin del
experimento. Los resultados fueron expresados como concentracin letal al 50%, la cual es la concentracin necesaria
para matar al 50% de las clulas. La toxicidad fue establecida de acuerdo a los valores de LC 50 como la siguiente escala:
LC50 < 100 M
LC50 > 100 g/mL o
<200 M
LC50 > 200 M

Txico
Moderadamente txico
No txico

Por lo tanto, el compuesto 7a fue el compuesto que present mayor actividad citottoxica 14.8 3.5 g/mL en
comparacin a los otros y el antibitico control anfotericina B mostr una actividad citotxica de 36.0 7.5 g/mL.
En cuanto a su actividad antileishmanisica, se evalu frente a Leishmania panamesis, en uno de los dos
estados morfolgicos: amastigotes intracelulares introduciendo cidos nucleicos a las clulas con un gen proteico
fluorescente de color verde. L. panamesis produce una Leishmaniasis Cutnea Difusa y las clulas infectadas fueron
determinadas de acuerdo a sus eventos por doble fluorescencia: fluorescencia de color verde (para parsitos) y la
fluorescencia de color rojo (clulas).
La actividad se realiz a una concentracin de 20 g/mL y los compuestos que mayor inhibicin tuvieron fue el
5b y 5e (88.3 1.5 y 82.6 2.2%). Sin embargo, el compuesto que mostr mejor actividad antileishmanisica fue el
compuesto 5d porque es activo a 2.6 1.0 g/mL EC 50, la cual es muy cerca a la concentracin de la anfotericina B (0.05
0.01 g/mL), la cual fue utilizada como el control para la actividad antileishmanisica dando como control positivo,
mientras que las clulas infectadas fueron incubadas en ausencia de cualquier compuesto o droga control. Asimismo, los
compuestos 7c-7f tienen la capacidad de inhibir ms del 50% del crecimiento del parsito a una concentracin de 20
g/mL.
Actividad Antitripanosmica
Para medir la actividad antitripanosomal se emple a una concentracin de 20 g/mL contra a los
microorganismos de la especie Trypanosoma cruzi, la cual produce la enfermedad de Chagas. Si la inhibicin era mayor
al 50%, los compuestos se evaluaban posteriormente a cuatro concentraciones distintas. Para esto, la actividad
tripanosmica fue evaluada en amastigotes intracelulares de T. cruzi, introduciendo cidos nucleicos a las clulas con un

gen -galactosidasa. Luego de 72 horas de incubacin se determin el efecto de todos los compuestos en amastigotes
intracelulares viables empleando un mtodo colorimtrico, midiendo la actividad de -galactosidasa. Las clulas
infectadas expuestas a drogas control (benznidazol) fueron usadas como control para la actividad tripanosomal, mientras
que las clulas incubadas en ausencia de alguno de los compuestos o drogas fueron utilizadas como control negativo.
Los resultados para las actividades antimalricas, antileishmanisicas y antitripanosmicas fueron expresadas a
una concentracin efectiva al 50% (EC50). La actividad de cada compuesto fue establecida de acuerdo a sus valores de
EC50 utilizando la siguiente escala:
LC50 < 20 M
LC50 > 20 g/mL o
<50 M
LC50 > 50 M

Activo
Moderadablemente activo
No activo

A una concentracin de 20 g/mL los compuestos 6d y 10f presentaron un crecimiento inhibitorio del 61.9 7.8
y 56.6 9.0%. Los compuestos 5d y 5f fueron evaluados a 1 g/mL, donde nicamente 5f present inhibicin contra T.
cruzi, por lo que el valor de EC50 es mucho mejor que 20 g/mL siendo de 5.9 1.4 g/mL respectivamente. El EC50 fue
determinado tambin en compuestos 5f, 6d y 10f que inhibieron el crecimiento de T. cruzi a ms del 50% a una
concentracin de 20 g/mL o cercana al 10% a una concentracin de 1.0 g/mL, por lo que pueden ser utilizados como
frmacos antitripanosomales. No obstante, el compuesto 6d present el mayor porcentaje de inhibicin de 61.9 7.8 % y
un EC50 de 19.4 g/mL.
CONCLUSIONES
En conclusin, la sntesis de chalconas a base de cafena, pirazolinas y pirazolo[3,4-b][1,4] en buenas
cantidades bajo condiciones normales y tiempos de reaccin cortos fue llevada a cabo exitosamente, sin embargo se
debe de confirmar las actividades evaluadas en ensayos in vivo. En cuanto actividad antimalrica, el pirazolo[3,4-b]
[1,4]diazepinas presentaron las mejores respuestas inhibitorias en un rango de 80.3 13.5 al 94.2 0.2%, especialmente
el compuesto 10f, cuyo porcentaje de inhibicin fue de 94.2 0.2% mayor que el estndar del cloroquina. La actividad
antileishmanisica revela que los compuestos 7c-7f muestran un porcentaje de inhibicin mayor al 50% frente a
Leishmania panamensis y valor de EC50 entre 12.6 2.2 y 18.1 1.8 %. No obstante, fue el compuesto 5d que present
la mejor actividad antileishmanisica al presentar una EC 50 cercana a la anfotericina B de 2.6 1.0 g/mL. En la actividad
antitripanosmica, el compuesto 6d present el mayor porcentaje de inhibicin con 61.9 7.8%. y un EC 50 de 19.4
g/mL, mientras que el compuesto 5f present un porcentaje de inhibicin a una baja concentracin de 9.7 1.5 % y un
EC50 de 5.9 g/mL respectivamente, cuyo EC50 fue mucho menor que el del benznidazol de 10.7 2.0 g/mL.
REFERENCIAS
Insuasty, B., Ramrez, J., Becerra, D., Echeverry, C., Quiroga, J., Abonia, R., Robledo, S., Dario, I., Upegui, Y., Muoz, J.,
Ospina, V., Nogueras, M. & Cobo, J (2015). An efficient synthesis of new caffeine-based chalcones, pyrazolines
and pyrazolo[3,4-b][1,4]diazepines as potential antimalarial, antitrypanosomal and antileishmanial agents. Elsevier,
93, 401-413
Lee, J. & Kim, Y. (2009). Combinatorial Library Synthesis and Biological Evaluation of Pirazolo[4,3-e][1,4]diazepine as a
Potential Privileged Structure. Wiley-InterScience, 4, 733-737. doi: 10.1002/cmdc.200800453
Loh, W., Kheng, C., Shyang, T., Fun, H., Sapnakumari, M., & Narayana, B. (2013). Synthesis and Crystal Structures of Nsubstituted Pyrazolines. Molecules, 18, 2386-2396. doi: 10.3390/molecules18022386