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Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2 clulas hijas,
genticamente idnticas a la madre. Se produce en cualquier clula eucarionte, ya sea diploide
o haploide y como mantiene invariable el nmero de cromosomas, las clulas hijas resultarn
diploides, si la madre era diploide o alploide. La divisin del citoplasma se llama citocinesis, y la
divisin del ncleo, cariocinesis. Algunas clulas no realizan mitosis y permanencen en un
estado interfsico, pero otras la realizan frecuentemente (clulas embrionarias, clulas de
zonas de crecimiento, clulas de tejidos sujetos a desgaste.).
PROFASE: La cromatina se condensa para formar los cromosomas y los 2 centrolos
migran a polos opuestos organizando un sistema de microtbulos (aparato mittico) para
permitir la migracin de los cromosomas.
1. PROMETAFASE: Los cromosomas condensados migran hacia la placa ecuatorial del
huso acromtico.
2. METAFASE: Los cromosomas se alnean en el plano ecuatorial, y cada uno estn
unido por su centrmero a una fibra del huso acromtico.
3. ANAFASE: Las 2 cromtides de cada cromosoma se separan por fisin del centrmero
y se dirigen hacia polos opuestos. El movimiento de los cromosomas hijos hacia los
polos se debe a un acortamiento de las fibras cromosmicas y se alargan las fibras
interzonales.
4. TELOFASE: El huso mittico y los steres se desorganizan. Alrededor de cada grupo
cromosmico se organiza una envoltura nuclear a partir del reticulo endoplasmtico y
de la envoltura original. Los cromosomas se dispersan y retoman el aspecto de
cromatina que tenan antes de iniciarse la divisin. Los nucleolos reaparecen a partir de
sus organizadores.
Meiosis
Es un proceso de reduccin cromtica por el que los cromosomas se reducen a la mitad. En la
meiosis I (etapa reduccionaria) se reduce el nmero diploide de cromosomas a la mitad
(haploide) pero an los cromosomas son dobles. En la meiosis II (etapa ecuacional) se
mantiene el nmero cromosmico haploide conseguido en la etapa anterior. Los cromosomas
son simples.
Meiosis I: Est precedida por una interfase durante la cual se duplica el materialo
gentico.
Meiosis II: Los procesos de esta divisin son semejantes a los de una mitosis en una
clula haploide.
Si se trata de secuencias con orientacin inversa (RIs) el segmento de DNA que se encontraba
entre las RIs queda invertido tras la recombinacin, caso (a) de la figura anterior. Por el
contrario, si se trata de repeticiones directas (en la misma orientacin), despus de ocurrir la
recombinacin el elemento intermedio queda delecionado como un crculo de DNA, que es el
caso (b) de la figura anterior (ver tambin Fig 15.8, 15.9, Genes VII).
Cuando las secuencias se ecuentran en molculas diferentes, el fragmento se integra al DNA.
Como ejemplo de esta recombinacin vamos a estudiar la integracin del Fago lambda al
cromosoma bacteriano. El mecanismo general se representa en la figura siguiente:
El sitio de integracin del fago se llama attP (attachment Phage), e interacciona con el sitio de
integracin attB de la bacteria (attachment Bacteria). Aunque no existe homologa de
secuencia entre attP y attB, existe una regin de 15 pb que es idntica en ambos, esa regin se
llama O, siendo las regiones que flanquean a O, P y P' en el fago y B y B en la bacteria, as,
attP es lo mismo que POP' y attB es lo mismo que BOB'. La recombinacin se da entre los
sitios O de modo que al integrarse el DNA del fago en el DNA de la bacteria, el profago (DNA
de fago integrado) quedar flanqueado por dos nuevos sitios: BOP' y POB'. BOP' es lo mismo
que attL (a la izquierda del profago) y POB' es lo mismo que attR (a la derecha del profago).
Debido a que el DNA del fago es circular, el evento recombinacional permite su insercin en el
DNA bacteriano como una secuencia lineal. Esta forma integrada se denomina profago y queda
flanqueada a la izquierda por attL que consiste en (BOP') y a la derecha por attR (POB'). Estos
sitios attL y R estn involucrados en la escisin del profago que transcurre por el mecanismo
opuesto al de la integracin. Ello implica que los eventos de recombinacin para lograr la
integracin y la escisin son "reversibles" aunque se dan en condiciones diferentes.
El conjunto de protenas que participan en uno y otro porceso se resumen en la siguiente tabla:
Reaccin
Recombinantes
Integracin
AttB x AttP
Escisin
AttL x AttR
Xis, Int
IHF
Al doblarse el DNA se acercan dos sitios de interaccin con int, IHF dobla el DNA de dos
maneras (1) desde abajo, interaccionando con los grupos fosfato del DNA o (2) desde arriba,
mediante lminas con residuos de prolina que actan a modo de cua intercalndose entre dos
bases.
En la figura siguiente se muestran los sitios a los que se une la protena int (crculos), hay siete
sitios de interaccin en POP' y otros dos en BOB':
IHF se une a tres sitios (cuadrados). Al interaccionar los tres IHF el DNA adopta una
conformacin determinada. Todo esto forma un complejo nucleoprotico llamado intasoma,
donde la protena int lleva a cabo la rotura y unin, y la IHF dobla el DNA para que pueda darse
la reaccin. Otra representacin muestra la conformacin del DNA en el sitio POP, attP es
mucho ms grande que attB:
IHF se une a cada uno de los tres sitios de unin en attP provocando en cada caso una
curvatura de 140 de manera qeu el DNA queda en una conformacin de espiral. La funcin de
attP requiere 240 pb, pero la de attB slo 23 pb, en la cual hay solo 4 pb sobre cada lado del
centro. La diferencia de tamao entre ellos sugiere que juegan diferentes papeles en la
recombinacin. La Fig 14.21, Genes VII muestra que si attP y attB sufren los mismos cortes
escalonados, extremos simple cadena pueden quedar disponibles para cruzamientos. La
distancia entre los puntos de entrecruzamiento es de 7 pb y la reaccin genera extremos
3'fosfato y 5'OH.
La reaccin in vitro requiere superenrrollamiento en attP, pero no en attB. Cuando la reaccin
se lleva a cabo in vitro entre dos molculas de DNA se, casi todo el superenrrollamiento es
retenido por los productos. Quiere decir, que no hay intermediarios libres en los cuales ocurra
rotacin. Esto es consistente con la idea que la reaccin procede a travs de una unin
Holliday. La ruptura y reunin se parece a la actividad de topo I.
Recombinacin homloga en E.coli
Al menos 25 tipos distintos de protenas involucradas en recombinacin homloga en E.coli
RecA, RecBCD, RecF, RecG, Re cJ, RecN, RecO, RecQ, RecR, RuvAB, RuvC, PriA, SSB,
DNA polimerasas, DNA topoisomerasas y DNA ligasas.
Secuencia en cis (hotspot de recombinacin)
GCTGGTGG
Genoma de E.coli 1009 sitios (1/6kb)
Recombinacin Homloga
Ruptura de la doble hlice en 2 molculas de DNA homlogas y unin cruzada
Sitio de intercambio secuencias homlogas
Heteroduplex en sitio de intercambio
No hay alteracin de la secuencia en el sitio de intercambio
Sistema RecBCD (E.coli)
Esencial para el 99% de eventos de recombinacin en DSB en E.coli
Iniciacin
Procesamiento del DSB (RecBCD y RecQ)