1.1.

ANLISIS BACTERIOLOGICO POR METODO DE LA MEMBRANA

FILTRANTE

1.1.1. DETERMINACION DE ORGANISMOS MESOFILICOS

1.1.1.1.
1.1.1.2.

1.1.1.3.

Equipos y materiales a usar

Procedimiento
a) Preparacin del medio de cultivo
b) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
c) Vertido del medio a placas petric
d) Toma de muestras de agua en planta
e) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
f) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

1.1.2. DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES

1.1.2.1.
1.1.2.2.

1.1.2.3.

Equipos y materiales a usar

Procedimiento
a) Preparacin del medio de cultivo
b) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
c) Vertido del medio a placas petric
d) Toma de muestras de agua en planta
e) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
f) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

1.1.3. DETERMINACION DE COLIFORMES FECALES

1.1.3.1. Equipos y materiales a usar
1.1.3.2. Procedimiento
a) Preparacin del medio de cultivo
b) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
c) Vertido del medio a placas petric
d) Toma de muestras de agua en planta
e) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
f) Incubacin de placas
1.1.3.3. Recuento de UFC en placas
1.1.4. DETERMINACION DE STREPTOCOCOS
1.1.4.1. Equipos y materiales a usar
1.1.4.2. Procedimiento
a) Preparacin del medio de cultivo
b) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
c) Vertido del medio a placas petric
d) Toma de muestras de agua en planta
e) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
f) Incubacin de placas
1.1.4.3. Recuento de UFC en placas

1.2.

ANLISIS FSICOS

1.2.1. DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES

1.2.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.2.1.2. Procedimiento
1.2.2. DETERMINACION DE DENSIDAD
1.2.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.2.2.2. Procedimiento
1.2.3. DETERMINACION DE POTENCIAL DE IONES H+ (pH)
1.2.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.2.3.2. Procedimiento
1.2.4. DETERMINACION DE CONDUCTIVDAD ELECTRICA
1.2.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.2.4.2. Procedimiento
1.3.

ANALISIS QUIMICOS

1.3.1. DETERMINACION DE FOSFATOS

1.3.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.3.1.2. Procedimiento
1.3.2. DETERMINACION DE DUREZA
1.3.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.3.2.2. Procedimiento
1.3.3. DETERMINACION DE SULFATOS
1.3.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.3.3.2. Procedimiento
1.3.4. DETERMINACION DE ALCALINIDAD TOTAL
1.3.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.3.4.2. Procedimiento
1.3.5. DETERMINACION DE ACIDEZ TOTAL
1.3.5.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
1.3.5.2. Procedimiento
7.1. ANLISIS BACTERIOLOGICO POR METODO DE LA MEMBRANA
FILTRANTE
Para garantizar la calidad microbiolgica del agua, es necesario
realizar el control de la misma, utilizando diferentes mtodos, que
nos permitan realizar la numeracin o el recuento de bacterias
aerobias mesfilas, mohos y levaduras, coliformes o la
investigacin de microorganismos patgenos.
Este mtodo se fundamenta en determinar el nmero y tipo de
microorganismos presentes en una muestra de agua de proceso,

por medio de la filtracin de la misma a travs de una membrana

filtrante con poros de tamao adecuado (0,45 m de dimetro), la
consiguiente retencin de los microorganismos sobre dicha
membrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de
acuerdo al tipo de microorganismo.
7.1.1. DETERMINACION DE ORGANISMOS MESOFILICOS
7.1.1.1.

Equipos y materiales a usar

Muestra de agua de proceso

Alcohol
Algodn
Placas petri
Caldo nutritivo y agar bacteriolgico
Embudo de filtracin
Matraz quitasato
Membranas filtrantes
Bomba de vaco
Pinzas estriles
Estufa
Probeta 100ml.
Agua destilada
Micropipeta 1ml.
Mechero de busen
Matraz de 500 ml
Matraz de 250ml.
Balanza analtica
7.1.1.2. Procedimiento
a) Preparacin del medio de cultivo
Tarar peso de matraz de 250ml. Y matraz de 250ml.
Pesar 5g. de agar bacteriolgico y 4g. de caldo nutritivo y agregar a matraz de
500ml.
Pesar 1.76g de caldo nutritivo y agregar a matraz de 250ml.
Con la probeta medir y agregar 500ml. de agua destilada al matraz de 500ml. y
200 ml. para el matraz de 250 ml.
Homogenizar la mezcla.
Tapar con algodn o papel blanco
Llevar a autoclave para su proceso de esterilizacin.
b) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
La autoclave estar prendida previamente, introduce tu matraz en el interior de

la autoclave. Junto con los materiales a usar (probeta, frascos para muestras,
embudo de filtracin) Cirrala con cuidado.
Una vez que empiece a salir vapor, coloca la vlvula en la autoclave, para que
la presin comience a subir. Tiene que llegar hasta 15 lb/in 2. A partir de este
momento, debers tomar el tiempo de 20 minutos. Debers tener cuidado de
que la presin de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in 2, ni est por debajo de
los 15 lb/in2. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave,
segn se te indique.
Transcurridos los 20 minutos, desconecta la autoclave. Comienza a abrir la
vlvula para liberar el vapor y que la presin comience a bajar. La autoclave
puede abrirse nicamente cuando el manmetro marque cero. Antes no ya
que podra explotar!
La autoclave se abre desde atrs, procurando que nadie quede de frente hacia
donde se abre la tapa, ya que saldr mucho vapor caliente que causa
quemaduras. Una vez que se abri con cuidado, con ayuda del trapo, sacar el
matraz y los dems materiales.
Dejar enfriar un poco para luego vertir en las placas
Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse.
c) Vertido del medio a placas petric
En la cabina microbiolgica y con mechero encendido, realizar el vertido
correspondiente, tratando de no llenar en exceso las placas petri.
d) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
-

Colocar una membrana filtrante estril, bajo condiciones aspticas,

sobre el centro del portafitro, usando pinzas estriles, con la superficie
cuadriculada hacia arriba.
Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtracin y asegurando
con una pinza.
Verter 100 mL de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a filtrar.
Lavar el embudo con aproximadamente 100 ml. de agua peptonada al
0,1% o en caso no hubiera, limpiar con algodn y alcohol.
Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estril transferir
la membrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo
correspondiente al microorganismo que se va a identificar: Coliformes en
agar endo, bacterias aerobias mesfilas en agar para recuento en
placas, mohos y levaduras en agar Sabouraud y Pseudomonas
aeruginosa en agar cetrimide.
Al colocar la membrana, evitar la formacin de burbujas entre sta y el
medio de cultivo.
Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesin de la
membrana al medio.

e) Incubacin de placas
Incubar las placas en forma invertida, a las diferentes temperaturas y tiempos,
de acuerdo al microorganismo investigado:

7.1.1.3.

Recuento de UFC en placas

Contar las colonias en las membranas. Expresar los

resultados como unidades formadoras de colonias
(U.F.C.) por ml. o por 100 ml. de agua, considerando el
volumen filtrado y el factor de dilucin.
7.1.2. DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES
7.1.2.1.
7.1.2.2.

7.1.2.3.

Equipos y materiales a usar

Procedimiento
g) Preparacin del medio de cultivo
h) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
i) Vertido del medio a placas petric
j) Toma de muestras de agua en planta
k) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
l) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

7.1.3. DETERMINACION DE COLIFORMES FECALES

7.1.3.1. Equipos y materiales a usar
7.1.3.2. Procedimiento
g) Preparacin del medio de cultivo
h) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
i) Vertido del medio a placas petric
j) Toma de muestras de agua en planta
k) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
l) Incubacin de placas
7.1.3.3. Recuento de UFC en placas
7.1.4. DETERMINACION DE STREPTOCOCOS
7.1.4.1. Equipos y materiales a usar
7.1.4.2. Procedimiento
g) Preparacin del medio de cultivo
h) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo

7.1.4.3.
7.2.

i) Vertido del medio a placas petric

j) Toma de muestras de agua en planta
k) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
l) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

ANLISIS FSICOS

7.2.1. DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES

7.2.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.2.1.2. Procedimiento
7.2.2. DETERMINACION DE DENSIDAD
7.2.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.2.2.2. Procedimiento
7.2.3. DETERMINACION DE POTENCIAL DE IONES H+ (pH)
7.2.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.2.3.2. Procedimiento
7.2.4. DETERMINACION DE CONDUCTIVDAD ELECTRICA
7.2.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.2.4.2. Procedimiento
7.3.

ANALISIS QUIMICOS

7.3.1. DETERMINACION DE FOSFATOS

7.3.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.3.1.2. Procedimiento
7.3.2. DETERMINACION DE DUREZA
7.3.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.3.2.2. Procedimiento
7.3.3. DETERMINACION DE SULFATOS
7.3.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.3.3.2. Procedimiento
7.3.4. DETERMINACION DE ALCALINIDAD TOTAL
7.3.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.3.4.2. Procedimiento
7.3.5. DETERMINACION DE ACIDEZ TOTAL
7.3.5.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.3.5.2. Procedimiento
7.4. ANLISIS BACTERIOLOGICO POR METODO DE LA MEMBRANA
FILTRANTE
7.4.1. DETERMINACION DE ORGANISMOS MESOFILICOS

7.4.1.1.
7.4.1.2.

7.4.1.3.

Equipos y materiales a usar

Procedimiento
f) Preparacin del medio de cultivo
g) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
h) Vertido del medio a placas petric
i) Toma de muestras de agua en planta
j) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
k) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

7.4.2. DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES

7.4.2.1.
7.4.2.2.

7.4.2.3.

Equipos y materiales a usar

Procedimiento
m) Preparacin del medio de cultivo
n) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
o) Vertido del medio a placas petric
p) Toma de muestras de agua en planta
q) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
r) Incubacin de placas
Recuento de UFC en placas

7.4.3. DETERMINACION DE COLIFORMES FECALES

7.4.3.1. Equipos y materiales a usar
7.4.3.2. Procedimiento
m) Preparacin del medio de cultivo
n) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
o) Vertido del medio a placas petric
p) Toma de muestras de agua en planta
q) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
r) Incubacin de placas
7.4.3.3. Recuento de UFC en placas
7.4.4. DETERMINACION DE STREPTOCOCOS
7.4.4.1. Equipos y materiales a usar
7.4.4.2. Procedimiento
m) Preparacin del medio de cultivo
n) Esterilizacin de materiales y medio de cultivo
o) Vertido del medio a placas petric
p) Toma de muestras de agua en planta
q) Filtracin de muestra y siembra de la membrana
r) Incubacin de placas
7.4.4.3. Recuento de UFC en placas
7.5.

ANLISIS FSICOS

7.5.1. DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES

7.5.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.5.1.2. Procedimiento

7.5.2. DETERMINACION DE DENSIDAD

7.5.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.5.2.2. Procedimiento
7.5.3. DETERMINACION DE POTENCIAL DE IONES H+ (pH)
7.5.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.5.3.2. Procedimiento
7.5.4. DETERMINACION DE CONDUCTIVDAD ELECTRICA
7.5.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.5.4.2. Procedimiento
7.6.

ANALISIS QUIMICOS

7.6.1. DETERMINACION DE FOSFATOS

7.6.1.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.6.1.2. Procedimiento
7.6.2. DETERMINACION DE DUREZA
7.6.2.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.6.2.2. Procedimiento
7.6.3. DETERMINACION DE SULFATOS
7.6.3.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.6.3.2. Procedimiento
7.6.4. DETERMINACION DE ALCALINIDAD TOTAL
7.6.4.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.6.4.2. Procedimiento
7.6.5. DETERMINACION DE ACIDEZ TOTAL
7.6.5.1. Equipos, Materiales y Reactivos a usar
7.6.5.2. Procedimiento

CONTROL DE CALIDAD DE AGUA DE MESA.

SAB

OLO
ASPEC

PRUEBAS

COLO

AGUA DE

ANALISIS

ANALISIS

ANALISIS

Slidos

Densid

Potencial de Iones

Organismos

Fosfat

Coliformes

Clorur

Coliformes

Fosforo

Temperat

Streptoco

Dure

Conductividad

Grasas y

Nitrgeno

Sulfat

Acidez

Alcalinidad

Oxigeno

CONTROL DE CALIDAD DE AGUA DE MESA

AGUA DE

ANALISIS FISICOS

ANALISIS QUIMICO

Slidos totales

Fosfatos

Densidad

PRUEBAS

ANALISIS

Cloruros

Organismos

COLOR

Coliformes Totales

SABOR

Coliformes Fecales

ASPECTO

Streptococos

OLOR

Fosforo Total
Potencial de Iones
Dureza
Temperatura
Grasas y
Conductividad

Acidez

Nitrgeno Total

Alcalinidad

Sulfatos

Oxigeno

Acidez

Alcalinidad

ANXOS
Caractersticas qumicas:
pH (a excepcin de las aguas carbonatadas): 6,0 - 9,0.
Substancias inorgnicas:
Amonaco (NH 4 + ) mx.: 0,20 mg/l;
Aluminio residual (Al) mx.: 0,20 mg/l;
Arsnico (As) mx.: 0,01 mg/l;
Boro (B) mx.: 0,5 mg/l;
Bromato mx.: 0,01 mg/l;
Cadmio (Cd) mx. 0,01 mg/l;
Cianuro (CN-) mx: 0,10 mg/l;
Cinc (Zn) mx.: 5,00 mg/l;
Cloro residual (Cl) mx. 0,5 mg/l;
Cloruro (CI-) mx.: 350 mg/l;
Cobre (Cu) mx.: 2,00 mg/l;
Cromo (Cr) mx.: 0,05 mg/l;
Fluoruro (F-), mx.: 2,0 mg/l;
Hierro (Fe) mx.: 2,0 mg/l;
Manganeso (Mn) mx.: 0,10 mg/l;
Mercurio (Hg mx.: 0,001 mg/l;
Niquel (Ni) mx.: 0,02 mg/l;
Nitrato (NO 3 -) mx.: 45 mg/l;
Nitrito (NO 2 -) mx.: 0,10 mg/l;
Plata (Ag) mx.: 0,05 mg/l;

 Plomo (Pb) mx.: 0,05 mg/l;

Selenio (Se) mx.: 0,01 mg/l;
Slidos disueltos totales, mx. 1500 mg/l;
La autoridad sanitaria competente podr admitir valores distintos si la composicin normal del agua de la zona y la imposibilidad de
aplicar tecnologas de correccin lo hicieran necesario.
El agua envasada en esas condiciones deber consignar en el rotulado la localidad de elaboracin y no podr expenderse fuera de ella.
Para aquellas regiones del pas con sueldos de alto contenido de arsnico, se establece un plazo de hasta 5 aos para adecuarse al
valor de 0,01 mg/l.
La autoridad sanitaria competente deber informar la nmina de los productos as autorizados a las restantes jurisdicciones y a la
Autoridad Sanitaria Nacional.
Caractersticas Microbiolgicas:

Bacterias coliformes: NMP a 37 C - 48 hs (Caldo de Mc Conkey o Lauril sulfato), en 100 ml: igual o menor de 3.
Escherichia coli: ausencia en 100 ml.
Pseudomonas aeruginosa: ausencia en 100 ml.
Bacterias mesfilas (APC - 37 C 24 hs.) mx.: 500 UFC/ml. En el caso de que el recuento supere las 500 UFC/ml, y se
cumplan con el resto de los parmetros indicados, slo se deber exigir la higienizacin de la planta y realizar un nuevo
recuento.