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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS


CTEDRA DE MICROBIOLOGA

Curso: MICROBIOLOGA II

Gua de Estudio APO 3

Bacilos cido Alcohol Resistentes


Bacterias Intracelulares Obligadas

Autores: Dra. Emilia Bautista/Dra. Fabiana Moredo/Dra. Mercedes Gatti

2015

MICROBIOLOGA II FCV-UNLP

APO 3: MICOBACTERIAS/INTRACELULARES OBLIGADOS

2015

ACTIVIDAD PRESENCIAL OBLIGATORIA 3


Bacilos cido alcohol resistentes (BAAR)
Bacterias intracelulares obligadas
Tipo de actividad: taller

Objetivos

Reconocer la importancia de los microorganismos pertenecientes a al gnero Mycobacterium


como agentes causantes de enfermedad.

Identificar a travs de la morfologa, tincin, requerimientos nutricionales, pruebas bioqumicas,


serolgicas y patogenia, las caractersticas ms importantes de las especies del gnero
Mycobacterium de inters clnico.

Reconocer la importancia de los microorganismos pertenecientes a los gneros Rickettsia,


Chlamydia y Chlamydophila como agentes causantes de enfermedad.

Identificar a travs de la morfologa, tincin, propiedades culturales, serolgicas y patogenia, las


caractersticas ms importantes de los microorganismos mencionados.

Fomentar el trabajo colaborativo en equipo.

Estimular la construccin de criterio microbiolgico y profesionales reflexivos de sus prcticas.

Promover el proceso de elaboracin, como actividad cognitiva.

Contenidos
Clasificacin taxonmica, historia, caractersticas morfolgicas, culturales y metablicas. Composicin antignica,
mecanismos de patogenicidad y diagnstico de laboratorio del gnero Mycobacterium.
Clasificacin taxonmica, historia, caractersticas morfolgicas, culturales y metablicas. Composicin antignica,
mecanismos de patogenicidad y diagnstico de laboratorio de los gneros Rickettsia, Chlamydia y Chlamydophila

Saberes previos

Microbiologa I: Citologa bacteriana. Antgenos bacterianos: somtico (Ag O), cpsular (antgeno K), flagelar
(antgeno H), pilis (antgeno F). Observacin de microorganismos. Metabolismo. Cultivo de bacterias. Pruebas de
caracterizacin fenotpicas y genotpicas. Actividad patgena de las bacterias: diferencia entre endotoxina y
exotoxina.
Fsico-Qumica Aplicada a Fisiologa Veterinaria. Bioenergtica: metabolismo; vas metablicas; variacin de la
energa en el organismo; Compuestos de alta energa: ATP, GTO y otros intermediarios metablicos. Nucletidos
como reguladores alostricos (NAD, NADP, AMP, ADP, y ATP). Respiracin: biofsica de la respiracin;
respiracin celular: ciclo de Krebs; cadena respiratoria: componentes; relacin con el ciclo de Krebs; acoplamiento
de la cadena respiratoria. Metabolismo de protenas: procesos de degradacin de aminocidos. Desaminacin
oxidativa y no oxidativa. Decarboxilacin.
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Histologa. Epitelios de revestimiento. Elementos constitutivos del tejido conjuntivo. Variedades del tejido
conjuntivo. Tejidos conjuntivos especializados. Componentes de la sangre. Hematopoyesis. Neuronas.
Histofisiologa del sistema nervioso. Tejido muscular.

Familia: Mycobacteriaceae

Gnero: Mycobacterium

1.a- Mencione la clasificacin taxonmica del gnero Mycobacterium

Orden:

Familia:

Gnero:

Especies:

1.b- Mencione las caractersticas generales del gnero Mycobacterium detallando particularidades
determinadas por la complejidad de su estructura celular.
(para resaltar la complejidad de su pared celular, responsable de muchas de las propiedades caractersticas de las
bacterias: cido alcohol resistencia, crecimiento lento, resistencia a detergentes, resistencia a antimicrobianos
comunes, antigenicidad)

2.- Las Micobacterias causantes de tuberculosis se agrupan taxonmicamente en el complejo


Mycobacterium tuberculosis que abarca 7 especies y el Complejo Mycobacterium avium
/intracelullare (MAC) con 4 especies. Citar las especies de cada complejo, huspedes afectados e
indicar las que poseen potencial zoontico.

Complejo Mycobacterium tuberculosis


Especies

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Hospedadores afectados

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Complejo Mycobacerium avium/intracellulare

3.-Runyon clasifica las micobacterias no tuberculosas u oportunistas en 4 grupos.


a.- Mencionar los criterios en los cuales se bas para hacerlo.
b.- Describir las caractersticas fenotpicas de cada grupo segn esta clasificacin y ejemplifique
cada uno.
Fotocromgenas
Escotocromgenas
No cromgenas
De crecimiento rpido
4.- Describir el hbitat natural de las especies pertenecientes al gnero Mycobacterium
5.- Luego de observar las imgenes (A y B) de extendidos de Mycobacterium tuberculosis completar los
siguientes tems,
M. tuberculosis

M. tuberculosis

Imagen A

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Imagen B

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Imagen C

Las imgenes A y B corresponden a las coloraciones de Gram y Ziehl-Neelsen.


a.- Describir las caractersticas morfolgicas y tintoriales del gnero Mycobacterium.
b.- Indicar los componentes de la pared celular que confieren la acido-alcohol resistencia.
c.- Indicar las diferencias que observa entre ambas imgenes y a la etapa de la marcha
bacteriolgica corresponden.
d.- La imagen C corresponde a una observacin con auramina. Indicar la diferencia que tiene esta
tcnica con las anteriores.

6.-Antes de realizar el cultivo las muestras, estas deben ser homogeneizadas y descontaminadas. En la
imagen D se observa el procedimiento de descontaminacin de la muestra.

Imagen D

Mencionar la sustancia que se utiliza para hacerlo e indicar la finalidad del procedimiento.
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7.- A continuacin se adjuntan tres imgenes (E, F, G) correspondientes a cultivos de micobacterias.

M. bovis

M. tuberculosis

Imagen E

Imagen F

M. avium

Imagen G

a.- Describir las caractersticas de las colonias que desarrollaron en las imgenes E, F y G.
Mencionar similitudes y diferencias
b.- Mencionar las caractersticas culturales del gnero Mycobacterium.
c- Considerando que las principales especies del gnero Mycobacterium, de importancia en
medicina veterinaria y salud pblica, son nutricionalmente exigentes, de crecimiento lento, mesfilos,
aerobias estrictas o microaerfilas, indicar las condiciones de incubacin que deben respetarse para
que estos microorganismos desarrollen: Tiempo, Temperatura, Condicin atmosfrica.

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8.- Los medios de cultivo generalmente utilizados para el aislamiento del gnero Mycobacterium son
enriquecidos y selectivos: Lowenstein Jensen, Stonebrink y Herrold.
a.- Indicar el medio que se utiliza para aislar M. tuberculosis, M. bovis y M. avium sub-especie
paratuberculosis.
c.- Indicar la sustancia que se utiliza para inhibir el crecimiento de Mycobacterium bovis.
d.- Completar la siguiente tabla.
Bacteria

Sustancia que otorga


selectividad

Sustancias que son


fuente de carbono y
nitrgeno

Sustancia
indispensable para el
crecimiento

Medio de
cultivo
slido

M. tuberculosis
M. bovis
M. avium subsp
paratuberculosis
9.- La tipificacin fenotpica de las especies de Mycobacterium ms importantes que afectan al hombre
y al ganado se realiza a travs de las siguientes pruebas entre otras.
Completar la tabla
M. tuberculosis

M. bovis

M. avium subsp
avium

M. avium subsp.
paratuberculosis

Crecimiento con glicerol


Crecimiento con piruvato
Produccin de pigmento
Reduccin de nitratos a
nitritos
Produccin de niacina
Pirazinamidasa
Catalasa a 68 C
Temperatura ptima

10.- Koch obtuvo un antgeno proteico global a partir de filtrados de cultivos que concentr por calor y
llam tuberculina. Seibert precipit protenas a partir de un filtrado de M. tuberculosis y a ese antgeno
lo llam PPD (derivado proteico purificado). Hay PPD estndares internacionales para cada especie
micobacteriana aunque poseen componentes antignicos comunes. Indicar el motivo por el cual se
utiliza la PPD.

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11.- En la imagen G se observa a las micobacterias agrupadas formando haces o cuerdas. Se trata de
otro componente antignico. Indicar el componente produce ese efecto y su importancia en la
patogenicidad de la bacteria.

Imagen G

12.- Otros factores de patogenicidad, intervienen para convertir a las micobacterias en parsitos
intracelulares facultativos que persisten dentro de los macrfagos y clulas del sistema inmune.
a.- Completar el cuadro siguiente.
Factores de virulencia

Mecanismo de accin

Sulftidos
Glucolpidos de trehalosa
Cera D

b.- Realizar un esquema o mapa conceptual de la patogenia de Mycobacterium bovis.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
13- Ante una sospecha clnica de tuberculosis bovina el veterinario debe remitir muestras al laboratorio.
a.- Qu muestras enva, cmo lo hace y a qu temperatura se conservan?
b.- Para qu utiliza la tcnica de spoligotiping?
c.-Qu muestras enva para diagnostico de paratuberculosis bovina?
d.- Qu otro tipo de diagnstico no microbiolgico se pueden emplear para la TBC?
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Tanto las Chlamydias como las Rickettsias son procariotes que tienen DNA y RNA y ribosomas, siendo
el tamao celular variable. Se caracterizan por ser parsitos intracelulares obligados.
Familia: Rickettsiaceae

Gnero: Rickettsia

Las rickettsiosis constituyen un complejo y variado conjunto de enfermedades zoonticas distribuidas ampliamente
por todo el mundo, involucrando diversas especies de reservorios vertebrados y vectores (artrpodos) y
condiciones ambientales para el mantenimiento y la emergencia de las mismas. El espectro clnico vara desde
fiebre indiferenciada, fiebre con exantema (papuloso, purprico o vesiculoso) hasta cuadros sistmicos graves.
Las rickettsias pertenecen a la divisin proteobacterias. Morfolgicamente son pequeos cocos o bacilos
gram negativos, con tamao entre 0,3-0,7 m de ancho y 1-2 m de largo. Con una sola excepcin, son parsitos
intracelulares estrictos y an no pudieron cultivarse en ausencia de sus clulas hospedadoras. A diferencia de
otros patgenos intracelulares, poseen un complejo enzimtico que les permite mantener un metabolismo
independiente y produccin propia de energa. Tampoco realizan su ciclo intracelular dentro de una vacuola.
Slo pueden cultivarse en lneas celulares o recuperarse por inoculacin en animales de laboratorio. En
forma indirecta, se reconocen en muestras de tejidos por inmunofluorescencia, tcnicas histoqumicas o reaccin
en cadena de la polimerasa. Las coloraciones como Gimnez y otras, se abandonaron por su baja sensibilidad.

1.- Mencione la clasificacin taxonmica del gnero Rickettsia.

Orden:

Familia:

Gneros (mencionar los gneros pertenecientes a la familia):

Una clasificacin moderna basada en el anlisis del genoma completo, divide las especies del
gnero Rickettsia en tres grupos:
Mencinelos:

2.- Las rickettsiosis son el tpico grupo de enfermedades transmitidas por vectores, con una amplia
gama de reservorios animales.
a.- Mencione los principales vectores
b.- Esquematice el ciclo biolgico de las rickettsiosis
c.- Mencionar las variables que dan complejidad al ciclo biolgico de las rickettsiosis.

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4.- Analice la imagen B, realice una bsqueda bibliogrfica complementaria y posteriormente, describa
la patogenia de Rickettsia spp.

Imagen B

Familia: Chlamydiaceae
La familia Chlamydiaceae est conformada por un grupo de bacterias de tamao
pequeo, cuya principal caracterstica es el ciclo replicativo intracelular, lo cual las
convierte en parsitos intracelulares obligados.

1.- Mencione la clasificacin taxonmica de las especies con conforman la Flia. Chlamydiaceae

Orden:
Familia:
Gneros (mencionar los gneros pertenecientes a la familia):
--------------------------------------------------------------------------

Especies. Indicar las especies con importancia en salud pblica y animal:

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2.- Esquematice el ciclo biolgico del gnero Chlamydia


3.- Describa/esquematice la patogenia de Chlamydia psittaci.
4.- Describa la importancia de Chlamydia psittaci en medicina veterinaria y salud pblica.

Analizar las especies bacterianas abordadas en la APO 3/intracelulares obligados y citar las que son
consideradas ZOONTICAS.

Analizar las especies bacterianas abordadas en la APO 3/intracelulares obligados y citar las que
ocasionan ENFERMEDADES TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS.

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Situaciones problemticas
A- Un lote de 10 cerdos de raza Landrace de 6 meses de edad comenz con prdida de peso,
tos, caquexia y diarrea. Los animales eran alimentados con restos de comida de un hospital
cercano.
La necropsia de dos animales evidenci lesiones granulomatosas en ganglios retro farngeos y
submaxilares,pulmn, hgado, bazo, riones, ganglios mesentricos y retroperitoneales.
El estudio bacteriolgico arroj como agente etiolgico a Mycobacterium tuberculosis

Desarrollar la marcha bacteriolgica correspondiente para la obtencin de este resultado.

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B- Se estudiaron muestras de una gallina sedosa del Japn hembra de dos aos y de un and
hembra de tres aos, provenientes del zoolgico "La Mxima" de la ciudad de Olavarra. Las aves
fueron halladas muertas, se les realiz la necropsia y en ambos casos se observaron lesiones
granulomatosas compatibles con tuberculosis aviar en los rganos viscerales. El and hembra
present decaimiento una semana previa a la muerte e importante prdida de masa muscular .

En la observacin de una impronta de ganglio, aparecieron bacilos acido alcohol resistentes (BAAR)
muy finos, de longitud irregular, ms bien cortos, sueltos, sin formar cordones ni agrupaciones,

El cultivo en Lowenstein Jensen a 42 C mostr colonias pequeas, no cromgenas, lisas

Tipificacin: catalasa a 68C negativa y crecimiento a 42C positivo.


Qu microorganismo se aisl?:
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C- Por convencin las infecciones causadas por Mycobacterium tuberculosis y bovis son
denominadas Tuberculosis y las infecciones causadas por el resto de las micobacterias se
denominan Micobacteriosis. Entre las micobacteriosis, las de crecimiento rpido son denominadas
atpicas, son las ms comunes y se presentan en gatos causando lesiones limitadas en piel
(dermatitis granulomatosas a piogranulomatosas y paniculitis). Las de crecimiento lento son raras en
pequeas especies y suelen tener una presentacin diseminada.
Se presenta a consulta un hurn macho de 2 aos de edad adquirido en una tienda de mascotas
a los 3 meses de edad; el motivo de las consulta es por disminucin de peso. A la revisin presenta
constantes fisiolgicas dentro de los rangos de referencia, aumento de tamao de linfondulos
prescapulares y poplteos, lesiones pustulares en dedos del miembro posterior derecho.

C1- Qu muestra reviste importancia para el diagnstico, sospechando de la bacteria en estudio en esta
APO como agente etiolgico?
----------------------------------------------------

Con la muestra obtenida se realiza la observacin microscpica. La visualizacin de


estructuras bacilares filamentosas dentro de los macrfagos, sin afinidad tintorial (Gram) sumada a
una respuesta inflamatoria piogranulomatosa sugiere la presencia de organismos micobacteriales .
C2- Describir y fundamentar las siguientes imgenes.

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Imgenes C2

C3- Mencionar los recursos de la marcha bacteriolgica que permiten confirmar el agente etiolgico
involucrado:

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Luego de cuatro semanas de incubacin, en el cultivo de la muestra obtenida se observan


colonias desiguales y de coloracin beige que desarrollan una pigmentacin amarillo-naranja cuando
se exponen a la luz.

Imgenes C4
C4- De acuerdo a las caractersticas fenotpicas observadas en el cultivo, mencionar el grupo bacteriano
al que puede corresponder el agente etiolgico del caso clnico C.

C5- Teniendo en cuenta el crecimiento lento, con desarrollo en los cultivos a 25 C, 37 C. (no a 45C) y
de acuerdo al resultado de las pruebas de tipificacin propuestas en la imagen C5, Qu
microorganismo se presume y cmo se confirma la identificacin del aislamiento?.
Imgen C5

Reduccin de nitrato
Reaccin positiva

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Reduccin de telurito
Reaccin negativa

===============================================================================

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Situacin D- El aborto enzotico de los pequeos rumiantes o aborto enzotico ovino (AEO), es
una enfermedad de distribucin mundial, y es la principal causa de aborto infeccioso en pequeos
rumiantes en numerosos pases.
El contagio suele producirse por va oral mediante la ingestin de bacterias presentes en el
agua o comida contaminadas, o mediante el lamido e ingesta de restos placentarios. Otra va de
infeccin es la aergena, a travs de la inhalacin de aerosoles presentes en ambientes
contaminados. Existen otras vas de transmisin posibles pero menos significativas como son la
venrea, la orofecal y a travs de la secrecin lctea en el caso del ganado caprino.

1.- Indicar el agente etiolgico productor de la enfermedad.

------------------------------------------------------------------------------Tras la infeccin por va oronasal, el microorganismo se establece en los rganos linfoides


farngeos donde, tras un periodo de multiplicacin, se establece un estado de latencia, que puede
durar ms o menos tiempo en funcin del momento en que los animales queden gestantes. A
mediados de la

gestacin,

se diseminan va

hemolinftica hasta alcanzar la placenta,

desencadenando el aborto, 2-3 semanas antes de la fecha estimada de parto, o un parto a trmino
de corderos muertos o muy dbiles que mueren pocos das despus (Imagen D1) .

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Los cambios patolgicos en la placenta se


hacen evidentes a partir de los 90 das de
gestacin. Durante las etapas finales (de los das
125 a 140 de gestacin), la placenta se
encuentra masivamente infectada y las
alteraciones de la unin fetoplacentaria pueden
llegar a provocar el aborto (Imagen D2).

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Imagen D2

Imagen D3

2.- En funcin de la representacin esquemtica de la Imagen D3 sobre los mtodos utilizados


en el diagnstico del AEO y a las muestras remitidas al laboratorio, completar el siguiente
cuadro:
Tcnicas laboratoriales
Directas
Indirectas

Nombre de la tcnica

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Fundamento

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La imagen D4 corresponde a la visualizacin de muestras con la tincin de Stamp (izquierda),


Giemsa (centro), inmunofluorescencia (derecha).
3.- Explicar el fundamento de la visualizacin de las tcnicas de citodiagnstico mencionadas y
vincular la respuesta con el cuadro del item 2 (anterior)

Imagen D4

4 - Mencionar recursos para el aislamiento del agente responsable del cuadro clnico.

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Situacin E - Psitacosis (palabra que procede del griego psittakos, que significa loro) es una
enfermedad aguda que produce fiebre y genera una neumona, as como sntomas generales
parecidos a los de la gripe en el humano. En las aves produce una enfermedad sistmica; segn la
cepa del organismo, especie, edad y la condicin del ave, las infecciones pueden ser asintomticas o
resultar en signos clnicos leves a graves.

1.- Indicar el agente etiolgico productor de la enfermedad.


-------------------------------------------------------------------------Cada genotipo del microorganismo

tiende a asociarse con ciertas especies de aves. El

genotipo A que generalmente se encuentra en las aves psitcidas y puede provocar una enfermedad
grave en esta especie da el nombre genrico a la enfermedad. El genotipo B con frecuencia se
asocia con las torcazas, pero tambin se han informado casos en las aves psitcidas y en los pavos.
El genotipo C aparece en los patos y los gansos. El genotipo D ha sido aislado principalmente de los
pavos y se considera el ms virulento para esta especie; este genotipo tambin se ha encontrado en
las garcetas y en las gaviotas. El genotipo E tiene un rango diverso de huspedes, aparece en las
torcazas y adems ha sido aislado de ratites (avestruces y andes), patos y pavos enfermos. El
genotipo F, que se ha encontrado en un pavo y en un ave psitcida, aparentemente es muy poco
frecuente entre las especies domsticas. Se han informado casos del genotipo E/B, que fueron
descritos por primera vez en el 2005, en los patos, pavos y las torcazas; es posible que se
descubran huspedes adicionales. En ocasiones se han informado casos de infeccin en mamferos,
tales como los perros, gatos, caballos, bovinos (cepa WC) y las ratas almizcleras (cepa M56).

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2.- Fundamentar la siguiente afirmacin, en relacin al diagnstico del agente etiolgico indicado
en el tem anterior (1) y mencionar tipos de muestra a recolectar.

Las muestras slo deben enviarse bajo condiciones seguras y a laboratorios autorizados
para evitar la propagacin de la enfermedad.
3 - Mencionar recursos y tcnicas para el diagnstico del agente propuesto en el item 1
(Situacin E) a partir de las muestras propuestas en el item 2 (Sit E).

4- Indique el nombre de las forma infecciosa (imagen E1) del agente propuesto en el item 1
(Situacin E) que se encuentra fuera de las clula y se caracteriza por ser resistente a la
desecacin, permanecer viable durante meses si est protegida por detritos orgnicos;
sobrevivir hasta 2 meses en el alimento de aves, 15 das en el vidrio y 20 das en la paja.

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Situacin F- Canino macho mestizo, con siete aos de edad

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presenta cuadro de decaimiento,

inapetencia, quejidos, hematemesis y melena. Al examen clnico destacaba una linfoadenomegalia,


escasas petequias en las mucosas y en la pared abdominal, dolor lumbar, paresia de miembros
posteriores, conjuntivitis y se observ la presencia de garrapatas de color caf que el propietario
ha intentado eliminar con cierta dificultad segn refiere. Los exmenes de laboratorio demostraron
severa anemia y trombocitopenia.

La Imagen F1 confirma como agente


responsable del cuadro clnico Rickettsia
conorii por inmunoflorescencia indirecta
(IFI).

Imagen F1

1.- Mencione la entidad clnica (grupo) al que pertenece el agente bacteriano mencionado
teniendo en cuenta las manifestaciones clnicas descriptas.

2.- Esquematice el ciclo biolgico de Rickettsia conorii y mencione el "rgano blanco" del
agente bacteriano en el animal afectado que explica la manifestacin que caracteriza el cuadro
clnico.

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