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LICENCIATURA
PLAN DE ESTUDIOS
QUIMICO
FARMACUTICO
BILOGO
2009
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
NOMBRE DE LA ASIGNATURA
Biologa Molecular
PRCTICA
NMERO
NOMBRE DE LA PRCTICA
FECHA Y
DURACIN
EXTRACCIN DE DNA
1y2
28- Feb-2015.
2 Horas
INTRODUCCIN
OBJETIVO
FUNDAMENTO
De las molculas orgnicas que forman parte de los seres vivos (protenas, glcidos, lpidos y los cidos
nucleicos) la nica que cumple las propiedades son los cidos nucleicos. El material gentico para las
clulas procariotas es el ADN/ARN, para las clulas eucariotas es el ADN y para los Virus es el ADN como
ARN. El ADN (cido desoxirribonucleico) es una molcula polimrica formada por unidades bsicas
llamadas nucletidos. El ADN contiene la informacin hereditaria que se transmite de generacin en
generacin.
El ADN es un cido nucleico que permite codificar la informacin de los organismos y, gracias a los
mecanismos de divisin celular, posibilita la transmisin de esa informacin de una generacin a otra. El
ADN se organiza en unidades de informacin llamadas genes, que corresponden a secuencias de ADN
que codifican para un producto (ARN o protenas). El lugar especfico que ocupa un gen en el cromosoma
se denomina loci o locus. Tcnicas de mapeo permiten determinar la ubicacin de diferentes genes a lo
largo de un cromosoma en distintas especies.
Para optimizar el almacenamiento de esta gran cantidad de informacin en cada clula, el ADN se
empaqueta junto a unas protenas estructurales llamadas histonas, formando la cromatina
Los nucleosomas son parte de la cromatina, complejo de ADN e histonas que durante la interfase del ciclo
celular se encuentra descondensada. Cuando en la clula se inicia el proceso de divisin, el material
gentico experimenta un empaquetamiento y los cromosomas se hacen visibles.
PROCEDIMIENTO
MATERIAL DE APOYO
*Saliva de algn integrante del
equipo.
Pipetas automticas.
EtBr.
SDS, NaCl, EDTA(solucin lisis)
Fenol/cloroformo
Vortex
DESARROLLO DE LA PRCTICA
a) Obtener muestra
1.-salivar por 10 min. Y colocar 5ml de saliva en un tubo de 15 ml, agregar 9 ml de PBS 1X
2.-centrifugar 5 min a 12000rpm y eliminar sobrenadante
b) Lisar
1.-agragar al tubo de 15ml (con paquete celular) 500 de solucin lisis (SDS, NaCl, EDTA) mezclar y
pasar a un tubo de 1.5ml
2.-agregar 2ml de protena k colocar en bao mara a 60C por 45 minutos
c) purificacin de ADN genmico
1.-agregar 1 volumen de fenol/cloroformo proporcional al volumen de la
Muestra, vortex por un minuto y centrifugar a 13,000rpm
2.-recuperar fase acuosa (superior) y pasar a otro tubo, agragar un volumen
Proporcional de muestra, vortex por un minuto y centrifugar a 13,000rpm
3.-recuperar fase acuosa y pasar a otro tubo, agregar 0.6 volumen de
Isopropanol (60% del volumen de la muestra)
4.-obtener hebra de ADN
5.-pasar hebra a tubo nuevo y lavar con EtOH 70%.
Segunda parte: Hgado de pollo
1.- Triturar 10 g de hgado de pollo en 50 ml de agua milli Q. Con ello, se consigue homogeneizar la
muestra: las clulas se rompen y los ncleos quedan sueltos.
2.- Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado sin romper.
Detallar cada uno de los pasos de la metodologa con una breve resea acerca de la funcin que tienen
cada uno de los reactivos as como cada uno de los equipos utilizados para esta prctica. Discutir
INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES
De cada uno de los resultados obtenidos discutir acerca de las semejanzas y diferencias con el
resto de los equipos, fundamentar sus conclusiones con una breve discusin acerca de lo que
tenemos actualmente en la bibliografa.
ANEXOS
Investigar acerca de las diferentes metodologas que tenemos actualmente para la extraccin de
DNA, su purificacin as como su identificacin con nuevas tcnicas de Biologa Molecular.
REFERENCIAS
1.- Lewin, B. Genes IX, Pearson Education, 2007. [Genes VII, Marbn, 2001 (2000)].
2.- Luque, J., y Herrez, . Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica. Ed. Harcourt, 2001.
3.- Lodish, H., et al. Molecular Cell Biology, 5th ed., W. H. Freeman, 2004. [Biologa celular y molecular (5
ed.). Editorial mdica panamericana, 2005 (2004)].
4.- Alberts, B., et al. Molecular Biology of the Cell, 5th ed., Garland Pub., 2007. [Biologa molecular de la clula
(4 ed.). Omega, 2004 (2002)].
5.- Watson, J.D., et al. Molecular Biology of the Gene, 6th ed., Benjamin Cummings and Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 2008. [Biologa molecular del gen (5 ed.) Edit. Mdica Panamericana, 2005 (2004)].
MECANISMO DE EVALUACIN
Puntualidad y asistencia
30 %
Bitcora
20%
Reporte
30%
Conocimientos previos
20%
1.- Considerando que algunas sustancias qumicas son irritantes (slido, lquido y gas) a la piel y
mucosa, los alumnos deben portar correctamente su bata de laboratorio, zapatos antiderrapantes,
cubrebocas, googles as como cumplir con las medidas de seguridad dentro del laboratorio.
2.- Al pesar o medir reactivos evite tirarlo o derramarlos en el sitio donde se encuentre, en caso de
hacerlo limpiar perfectamente el lugar.
3.- No deber regresar a los envases originales, los remanentes de reactivos utilizados, as como
deber tener precaucin de utilizar pipetas o esptulas limpias y secas para manejarlas.
4.- Cuando se transfiera un lquido con pipeta, deber utilizarse perilla de seguridad. Nunca
succionar con la boca.
5.- Tener cuidado cuando se efecta una reaccin qumica en tubo de ensaye, que la boca de este
no se dirija hacia el compaero o hacia s mismo, ya que puede haber proyecciones.
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