INTRODUCCIN

La muerte celular programada es un proceso celular fundamental que es esencial

para el desarrollo y para el mantenimiento de la homeostasis de los tejidos
adultos. Su misin es eliminar las clulas superfluas, daadas, infectadas o
transformadas. Esta forma de muerte celular o apoptosis se realiza mediante la
activacin de un programa intrnseco y se caracteriza por el mantenimiento de las
membranas celulares intactas permitiendo as su eliminacin por fagocitosis. Las
clulas que sufren apoptosis exhiben una morfologa caracterstica que incluye
condensacin citoplasmtica y nuclear, la rotura especfica de protenas celulares,
la fragmentacin de la clula en cuerpos apoptticos, y la rotura endoltica del
DNA en fragmentos oligonucleosmicos. Los cuerpos apoptticos son fagocitados
por macrfagos o incluso por clulas vecinas. Las seales que desencadenan la
apoptosis incluyen, dao celular causado por radiaciones ionizantes, infeccin
vrica o seales extracelulares. En el programa de suicidio celular interviene la
transcripcin de genes especficos y su traduccin, lo cual permite suprimir tal
suicidio inhibiendo tanto la transcripcin como la traduccin. Estos hechos
demuestran que la muerte celular programada o apoptosis est mediada por
mecanismos celulares intrnsecos. La apoptosis implica una programacin
gentica de la clula que promueve una cascada dependiente de energa de
cambios morfolgicos y bioqumicos en el interior de la clula que conducen a su
muerte y eliminacin La mayor parte del conocimiento que hoy tenemos de la
gentica molecular de la apoptosis proviene de investigaciones sobre el nematodo
Caenorhabditis elegans. Se trata de un nematodo hermafrodita, cuyo ejemplar
adulto, de 1 mm de longitud, se forma a partir de 1090 clulas somticas de las
cuales 131 mueren por apoptosis. En este gusano se han observado cuatro fases
en la apoptosis: decisin si una clula ha de morir; muerte; fagocitosis de los
cuerpos apoptticos por los macrfagos y degradacin de los cuerpos fagocitados.



APOPTOSIS
1. DEFINICIN:
La apoptosis o muerte celular programada es el proceso ordenado por el que la clula muere
ante estmulos extra o intracelulares. La apoptosis es fundamental en el desarrollo de rganos
y sistemas, en el mantenimiento de la homeostasis del nmero de clulas y en la defensa
frente a patgenos. Es un proceso finamente regulado que cuando se altera produce graves
patologas como malformaciones, defectos en el desarrollo, enfermedades autoinmunes,
enfermedades neurodegenerativas o aparicin de tumores.







La apoptosis es fundamental en los siguientes procesos:
Remodelado durante el desarrollo embrionario. Un ejemplo puede ser la eliminacin
de las zonas interdigitales.
Desarrollo de rganos y sistemas. El establecimiento del correcto circuito de
conexiones neuronales durante el desarrollo necesita que las neuronas que no
establezcan contactos sinpticos mueran por apoptosis. Tambin en el
establecimiento de un repertorio inmune adecuado es necesario que los linfocitos T
que reconocen antgenos propios mueran en el proceso de seleccin negativa.
Mantenimiento de la homeostasis celular. Es crucial el manteniendo de un nmero
determinado de clulas estableciendo un equilibrio entre divisin y muerte celular.
En sistemas como la mdula sea o el aparato digestivo es especialmente importante
que los procesos de apoptosis funcionen adecuadamente.
Defensa frente a patgenos. Clulas infectadas por virus o bacterias disparan
procesos de apoptosis como defensa.
Defensa frente al desarrollo de tumores. Procesos de apoptosis tambin protegen
frente al desarrollo de algunos tipos de tumores.
Las clulas que son inducidas a sufrir apoptosis o suicidio celular presentan las
caractersticas siguientes:
Reducen su tamao.
Sus mitocondrias se abren y dejan salir el citocromo c.
En la superficie celular surgen una especie de vejigas.
Se degrada la cromatina (DNA y protenas) de sus ncleos.
Se rompen en fragmentos rodeados de membrana, denominados cuerpos
apoptticos.
La fosfatidil serina, fosfolpido que se encuentra en la cara interna de la
membrana, se expone en la superficie.
La fosfatidil serina se une a receptores de las clulas fagocticas (macrfagos y
clulas dendrticas) que fagocitan los cuerpos apoptticos.
Las clulas fagocticas segregan citoquinas que inhiben la inflamacin.

2. FASES DE LA APOPTOSIS
En la muerte por apoptosis, la serie de acontecimientos sucede de manera tan ordenada,
que este proceso de suicidio celular se denomina muerte celular programada. Pueden
diferenciarse varias fases en la apoptosis:
A. Fase efectora, adopcin sin retorno del compromiso hacia la muerte. Se caracteriza por
el aumento en el contenido de Ca++ intracelular, que origina la activacin de ciertos
grupos enzimticos (endonucleasas y proteasas -caspasas), junto con cambios en el
citoesqueleto celular que producen cambios en el tamao y forma celular.
B. Fase degradativa, se degradan las protenas y los cidos nucleicos y hay cambios en la
membrana celular. Los cuerpos apoptticos son fagocitados por macrfagos impidiendo la
salida del contenido celular al exterior y evitando inflamacin. En esta fase las
endonucleasas se encargan de fragmentar el DNA, las caspasas degradan las protenas, se
producen cambios marcados en el citoesqueleto, y se condensa la cromatina.
C. Fase de eliminacin, los macrfagos fagocitan los cuerpos apoptticos, atrados por
ligandos especficos de la fosfatidilserina, presentes en la superficie de las clulas
apoptticas.
Existen dos razones diferentes para explicar por qu las clulas mueren por apoptosis: La
eliminacin de clulas en exceso y la eliminacin de clulas que representan un peligro
para la integridad del organismo.
Ejemplos de eliminacin de clulas en exceso:
La reabsorcin de la cola de los renacuajos
La eliminacin de las membranas interdigitales en la formacin de los dedos en el feto.
Para llegar al estado adulto el nematodo el C.elegans tiene que perder por apoptosis
131 clulas
La eliminacin del endometrio al iniciarse la menstruacin
La formacin de las sinapsis entre neuronas en cerebro requiere la eliminacin por
apoptosis de una serie de clulas.

Ejemplos de eliminacin de clulas que representan un peligro para la integridad del
organismo:

Clulas infectadas con virus, son destruidas por los linfocitos T citotxicos.
Clulas del sistema inmune. Despus de la respuesta inmune, las clulas efectoras han
de ser eliminadas para prevenir que ataquen a los constituyentes propios del organismo.
Los linfocitos T citotxicos inducen la apoptosis en cada una de las distintas clulas del
sistema inmune e incluso en ellas mismas. Cualquier defecto en la maquinaria apopttica
de estas clulas inmunes, se encuentran asociados con enfermedades autoinmunes tales
como el lupus eritematosus o la artritis reumatoide.
Clulas con DNA lesionado. La lesin en su genoma hace que las clulas puedan llegar a
desarrollar cncer. Las clulas responden a la lesin al DNA incrementando la produccin
de p53, un poderoso inductor de la apoptosis. Las mutaciones en p53 producen una
protena defectiva que a menudo se detecta en clulas cancerosas
Clulas cancerosas. La radioterapia y la quimioterapia inducen la apoptosis en algunos
tipos de cncer.

3. INDUCCIN DE LA APOPTOSIS
Para que una clula sea inducida a morir por apoptosis se necesita que dicha clula deje
de recibir seales de supervivencia y comience a recibir seales de muerte. Las seales
estimuladoras de la supervivencia son necesarias para que las clulas se mantengan vivas.
Estas seales han de ser continuas y proceden de otras clulas. Entre estas seales
positivas estn los factores del crecimiento y las hormonas. En ciertos tipos de clulas
hematopoyticas, el crecimiento y la supervivencia depende de la presencia continua de
factores del crecimiento (CSF, factores estimuladoresde colonias), y la eliminacin de ellos
conduce irremediablemente a la apoptosis en lugar de a la cesacin del crecimiento.
Las seales de muerte que conducen a la apoptosis son muy diversas: elevados niveles de
oxidantes en el interior de la clula; lesin del
DNA por oxidantes, luz ultravioleta, radiaciones ionizantes, frmacos quimioteraputicos,
etc.; molculas que se unen a receptores especficos en la superficie de la clula y
transmiten seales para iniciar el programa
apopttico. Entre estos activadores de muerte se encuentran el TNF que se une al TNFR,
el ligando Fas (FasL) que se une al receptor Fas, denominado tambin CD95, etc.
La apoptosis est conducida por dos clases de proteasas especializadas, las caspasas
iniciadoras y las caspasas efectoras. Las caspasas, verdaderas guillotinas moleculares, son
cistena proteasas que se expresan como zimgenos inactivos y que se procesan a estado
activo por proteolisis.
Las caspasas iniciadoras se activan despus de un estmulo apopttico por autoproteolisis.
Las caspasas efectoras o ejecutoras se activan por las caspasas iniciadoras en una cascada
amplificadora. La activacin de las caspasas es una etapa crucial para la activacin de la
apoptosis cualquiera que sea el estmulo. Son las verdaderas ejecutoras de la apoptosis y
presentan las caractersticas siguientes:
1. son cistena proteasas especficas de aspartato porque tienen cistena como grupo
nucleoflico para la rotura del sustrato y tienen un requerimiento especfico por el residuo
aspartato (D) de sus sustratos que los rompen en los enlaces D-X,
2. son sintetizadas como procaspasas que adquieren su actividad por proteolisis,
3. efectan la proteolisis en una serie especfica de sustratos, proceso que es irreversible y,
4. las caspasas y sus inhibidores siempre coexisten en las clulas normales, lo cual
previene de una activacin accidental que supondra una muerte innecesaria de clulas
normales.
Las procaspasas (30-50kD) contienen tres dominios: un prodominio N- terminal, una
subunidad grande (p20) y una subunidad pequea (p10). Hasta la fecha se han identificado
14 caspasas de mamferos. En base a la similitud de la secuencia entre los dominios de las
subunidades, estas caspasas se dividen en tres grupos: El grupo inflamatorio que
comprende a las caspasas -1, -4, -5, -11, -12, -13, -14, el grupo iniciador de la apoptosis
que incluye las caspasas -2, -8, -9, -10, y el grupo efector o ejecutor de la apoptosis que
incluye a las restantes Las caspasas inflamatorias y las iniciadoras poseen prodominios
largos, excepto para la 14 que no lo tiene o lo tiene muy corto. El prodominio largo
contiene el dominio efector de muerte (DED) o el dominio de reclutamiento de las
caspasas (CARD). DED y CARD se parecen al dominio de muerte (DD); y los tres pertenecen
a la superfamilia de los dominios de muerte. Estos dominios median las interacciones
protena-protena entre las procaspasas y sus adaptadores y juegan importantes papeles
en la activacin de las procaspasas. Por el contrario, los prodominios cortos de las
caspasas ejecutoras no es probable que puedan mediar interacciones entre protenas. Ha
sido determinada la estructura tridimensional de las caspasas -1, -3, y 8: Se componen de
dos heterodmeros (p10 -p20) que se unen para formar un tetrmero dispuesto en
direccin opuesa, con las dos subunidades pequeas adyacentes rodeadas por las dos
subunidades grandes. Cada heterodmero contiene un sitio activo al que contribuyen las
dos subunidades con residuos necesarios para la unin al sustrato y la catlisis.







La capacidad proteoltica de las caspasas activas conduce a la degradacin de una serie de
protenas y lleva consigo las misiones siguientes:
cortar contactos con clulas vecinas,
reorganizar el citoesqueleto,
activar las endonucleasas (fragmentacin del DNA),
desmantelar las lminas nucleares (condensacin),
expresar seales de fagocitosis (fosfatidilserina), y
activar protenas especficas para preparar a la clula para el cese de las funciones
metablicas.

En general, son dos las vas que conducen a la activacin de las caspasas. Una es la
mediada por ligandos que se unen a receptores en la superficie celular; y la otra es la
mediada por estrs celular o por lesin en el DNA. Estas dos vas, tambin denominadas
extrnsecas e intrnsecas, respectivamente, pueden solaparse, aunque, la transduccin de
seales es diferente.
La va intrnseca, requiere la disrupcin de la membrana mitocondrial y la liberacin de
protenas mitocondriales tales como el citocromo y smac/diablo. El citocromo c funciona
unindose a Apaf-1 (factor activador de la proteasa apopttica) para inducir la activacin
de la caspasa-9 y con ello la cascada de las caspasas, mientras que smac/diablo se une y
antagoniza al inhibidor de las protenas apoptticas (IAP). La permeabilizacin de la
membrana mitocondrial se regula por las acciones opuestas de los miembros de la familia
Bcl-2. Las protenas multidominios proapoptticas Bcl-2, como Bax y Bak , pueden
activarse directamente por interaccin con la protena Bid que posee solo el dominio BH3.
Alternativamente, la unin de otras protenas apoptticas, solo BH3, como Noxa, Puma,
Bad y Bim a las antiapoptticas Bcl2 y BclXL, origina la inactivacin de Bax y Bak. La
liberacin regulada de factores pro-apoptticos de la mitocondria causa la induccin de las
caspasas iniciadoras y efectoras o ejecutoras y una prdida del potencial de membrana
mitocondrial.

La extrnseca se inicia por unin de un ligando con su receptor transmembrana (FAS, TNFR,
TRAIL, etc) para activar a las caspasas iniciadoras (caspasas-9 y 10), que a su vez, activan
por proteolisis a las caspasas ejecutoras o efectoras, tales como las caspasas-3 y 7. Esta
va puede ser regulada por diferentes factores, entre ellos el inhibidor de las protenas
apoptticas (IAP) que afecta a las caspasas iniadoras y a las ejecutoras.

En el organismo adulto la apoptosis resulta esencial para mantener la homeostasis de los
tejidos ya que elimina clulas excedentarias o clulas daadas que podran ser peligrosas
para el organismo. Cuando los mecanismos que regulan la apoptosis fallan, tanto por
exceso como por defecto, este equilibrio se altera y pueden originarse diversas patologas.
La resistencia a la apoptosis es una de las caractersticas que contribuyen a la generacin
de un tumor y tambin puede ser la causa de algunas enfermedades autoinmunes. En el
caso contrario, un exceso de apoptosis podra estar relacionado con enfermedades
neurodegenerativas.

La fragmentacin del ADN y ruptura de protenas por las caspasas:
Una de las caractersticas ms importantes de la apoptosis es la condensacin del ncleo y
la fragmentacin del ADN en fragmentos de 200bp (pares de bases) o mltiplos de ellos
("escalera de ADN"). Adems, muchas protenas celulares sufren una ruptura o proteolisis,
generalmente catalizada por protenas con actividad enzimtica denominadas caspasas.
Todas las caspasas (cisten-proteasas) tienen una cistena en su centro activo y producen
cortes en protenas, justo detrs del aminocido Asp. Cuando se inicia el proceso de
apoptosis, se activan las caspasas, se cortan protenas y finalmente el ADN.
Existen dos rutas principales de activacin de la apoptosis. Una que se inicia en la
membrana a nivel de unas protenas, denominadas receptores de muerte, que al unirse a
determinadas protenas extracelulares (ligandos) desencadenan la activacin de las
caspasas. La otra va se inicia en respuesta al dao celular causado por radiacin o
determinados compuestos txicos.
Papel de la mitocondria en la apoptosis:
Durante la apoptosis las mitocondrias liberan al citosol protenas que participan en el
proceso de manera decisiva. Una de estas protenas es el citocromo c que una vez en el
citosol produce la activacin de algunas caspasas. La liberacin de protenas de la
mitocondria va acompaada de una prdida de su funcin como orgnulo generador de
energa, ya que se afecta el proceso de transporte electrnico.
Fagocitosis de las clulas apoptticas:
En las clulas apoptticas se producen cambios en la distribucin de lpidos de la
membrana plasmtica. Un fosfolpido normalmente presente slo en la cara interna de la
bicapa lipdica, la fosfatidilserina, se transloca a la cara externa. La fosfatidilserina en la
superficie celular acta como seal para que la clula apopttica sea reconocida y
eliminada por los fagocitos.