INTRODUCCION

Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias qumicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiacin se
puede estudiar la absorcin de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible,
sino tambin en ultravioleta e infrarrojo. Se denomina espectrofotometra a la
medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe un sistema qumico en
funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a las mediciones a una determinada
longitud de onda. La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz
es un flujo de cuantos de energa llamados fotones; la luz de una cierta longitud de
onda est asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida
de energa.
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de
soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa
radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la
luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes
de onda no absorbida.







ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION DE MASAS
La Espectrometra por absorcin de Masas es una poderosa tcnica microanaltica
usada para identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos
conocidos, y para elucidar la estructura y propiedades qumicas de molculas. La
deteccin de compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades realmente
pequeas (algunos p moles) de muestra y obtener informacin caracterstica como el
peso y algunas veces la estructura del analito.
En todos los casos, alguna forma de energa es transferida a las molculas a analizar
para afectar la ionizacin. En la tcnica clsica de impacto electrnico (electrn
ionization EI), algunas de las molculas ionizadas del analito explotan en una
variedad de fragmentos ionizados, el patrn de fragmentacin resultante as como los
iones residuales constituyen el espectro de masas. En principio, el espectro de masas
de cada compuesto es nico y puede ser usado como huella qumica para
caracterizar el analito.
Corra el ao 1912 cuando el cientfico J. J. Thomson (Premio Nobel en 1906) empujado
por su afn de descubrir los secretos ms profundos de la qumica, se las ingeni para
crear el primer espectrmetro de masa y obtener de l los primeros espectros de
elementos como O2, N2, CO y COCl2.
Pero el mrito no fue solo de l, ya que la espectrometra de masas comenz a ver la
luz en el ao 1886 cuando Goldstein descubri los iones positivos, sigui cogiendo
forma con W. Wien que consigui analizarlos por defleccin magntica en 1898 y que
dio un paso definitivo cuando W. Kaufmam consigui analizar los rayos catdicos
usando campos elctricos y magnticos paralelos en 1901. Todos estos avances
permitieron a la privilegiada mente de J. J. Thomson idear el primer espectrmetro de
masas (Skoog, Hiller, Nieman, 2000, 182).
A partir de ese da se comenz a usar en los laboratorios de qumica para separar iones
atmicos y moleculares en funcin del cociente masa/carga con la unidad Thomson
(Th) como unidad fundamental. Y aunque su avance era firme, su uso para analizar
macromolculas no fue posible hasta la dcada de los 80, cuando el profesor J. B. Fenn
utiliz el mtodo de ionizacin por electropulverizacin ("electrospray") de una
solucin acuosa de protenas. De esta forma consigui producir pequeas gotas de una
muestra que se reducen de tamao al evaporarse el agua que las transporta, mientras
los iones de protenas permanecen en forma de suspensin libre. La relacin
masa/carga de los iones as obtenidos permite su anlisis en cualquier espectrmetro
de masas. Bilogos y qumicos pueden ahora rpidamente identificar las protenas y
obtener su imagen tridimensional (Rubinson, Rubinson, 2000, pg. 289).
La espectrometra de masas atmicas es una herramienta muy verstil y util para
identificar los elementos presentes en una muestra y determinar las concentraciones
de cada una de las materias que la componen. Esta tcnica nos permite determinar
prcticamente todos los elementos del sistema peridico.
Esta tcnica ofrece numerosas ventajas frente a las tcnicas espectofotomtricas ya
que:
Los lmites de deteccin que son, para muchos elementos, tres rdenes de
magnitud ms sensibles frente a los mtodos pticos.
Espectros notablemente ms sencillos, generalmente nicos y con frecuencia
fcilmente interpretables.
Capacidad para medir relaciones isotpicas atmicas.
En cambio, tambin tienen una serie de desventajas que no podemos obviar como:
El coste del instrumento es de dos a tres veces el de los instrumentos pticos
atmicos.
La deriva del instrumento puede ser del orden del 5 o 10%/hora.
Contiene unas determinadas interferencias.
Con la espectrometra de masas somos capaces de proporcionar informacin acerca
de:
La composicin elemental de las muestras: de esta se encarga la espectrometra
de masas atmico.
De la composicin de las molculas inorgnicas, orgnicas y biolgicas.
De la composicin cualitativa y cuantitativa de mezclas complejas.
De la estructura y composicin de superficies slidas.
De las relaciones isotpicas de tomos en las muestras.
Hoy en da se contina avanzando y cabe citar al cientfico japons K. Tanaka, que
bombardeando muestras de macromolculas biolgicas en estado slido o viscoso con
rayos lser, consigui su dispersin en porciones ionizadas de pequesimo tamao,
aptas para su anlisis por espectrometra de masas. Un mtodo para determinar la
masa de macromolculas en espectrometra es acelerarlas en una cmara de vaco y
medir su "tiempo de vuelo". Los blancos del espectrmetro son alcanzados por las
molculas en un orden determinado por sus unidades Thomson. Las ms rpidas son
las ms ligeras y de mayor carga (Rubinson, Rubinson, 2000).
Estos mtodos poseen muchas aplicaciones como son el desarrollo de productos
farmacuticos, control de sustancias nutritivas y diagnsticos precoces de
enfermedades como la malaria, cncer de mama, cncer de prstata, etc.



RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR
La Resonancia Magntica Nuclear (RMN) es la herramienta analtica que proporciona
mayor informacin estructural y estereoqumica en un tiempo asequible. La tcnica no
es destructiva y tiene aplicaciones en todas las reas de la Qumica y en algunas de la
Biologa. Disponiendo de accesorios adecuados permite la observacin de tejidos
(accesorio de microimagen). Con otros tipos de instrumentos es una tcnica de
diagnstico en Medicina. Esta multidisciplinariedad y el coste de los instrumentos,
fuera del alcance de cualquier Departamento, hacen a la RMN objeto de un servicio
general en todas las Universidades modernas.
La Resonancia Magntica Nuclear es una espectroscopia de absorcin cuyo
fundamento es la absorcin de energa (radiofrecuencias) por un ncleo
magnticamente activo, que est orientado en el seno de un campo magntico, y que
por efecto de esa energa cambia su orientacin. Las partes fundamentales de un
espectrmetro de RMN son un imn, actualmente una bobina superconductora, que
suministra el campo magntico principal, un oscilador de radiofrecuencias que
suministra la energa necesaria para cambiar la orientacin de los ncleos, una bobina
detectora que recibe las seales y un sistema informatizado que gobierna todo el
aparato y que incluye un sistema de amplificacin y registro.
Entre los ncleos ms frecuentes en los compuestos orgnicos son magnticamente
activos el protn (
1
H), carbono (
13
C), nitrgeno (
15
N), fsforo (
31
P) y flor (
19
F).
Las muestras, generalmente, son disoluciones en disolventes que no tengan tomos de
protio (
1
H). Frecuentemente se usan el deuterocloroformo,
hexadeuterodimetilsulfxido, xido de deuterio, deuterobenceno, deuteropiridina y
otros.
Los espectros ms comunes son representaciones de la intensidad de absorcin frente
a la frecuencia de resonancia (generalmente a travs del parmetro ) y presentan
seales cuya posicin, forma y tamao estn ntimamente relacionadas con la
estructura molecular. El anlisis detallado de estos espectros proporciona valiosa
informacin estructural y estereoqumica. Espectros bidimensionales permiten
relaciones entre distintos ncleos o distintas magnitudes del mismo ncleo.

Adems, el equipamiento del servicio permite el estudio de muestras en estado slido.
La RMN en estado slido es una tcnica adecuada y cada vez ms utilizada para el
estudio de las propiedades estructurales de una amplia variedad de materiales amorfos
o poco cristalinos. A diferencia de las muestras en disolucin, las muestras en estado
slido dan lugar a espectros con seales anchas, resultado de la suma de diversos
factores. Estos espectros, sin embargo, contienen informacin nica acerca de la
estructura y la dinmica de los materiales estudiados.
Las interacciones responsables del ensanchamiento de las seales son la anisotropa
del desplazamiento qumico, los acoplamientos dipolares (homo y heteronucleares) y el
acoplamiento cuadrupolar. Se han desarrollado tcnicas que permitan obtener
espectros de alta resolucin conservando en lo posible la informacin que aportan
estas interacciones: giro con ngulo mgico (MAS, Magic Angle Spinning), polarizacin
cruzada (CP, Cross Polarization) o secuencias multipulso especficas para slidos
(CRAMPS, Combined Rotation and Multiple Pulse Spectroscopy).
El desarrollo de los mtodos indicados anteriormente ha permitido el uso de la RMN en
estado slido para el estudio estructural de sustancias poco solubles, como polmeros,
vidrios, cermicas, resinas, etc., siendo una alternativa muy interesante para materiales
de baja cristalinidad que no pueden ser estudiados por tcnicas de difraccin. Tambin
permite el estudio de factores dinmicos difcilmente observables por otras vas. Existe,
as mismo, gran nmero de estudios realizados sobre materiales biolgicos: virus,
molculas fibrilares (seda, colgeno, celulosa), protenas, carbohidratos...o
compuestos con fines farmacuticos (estudio de polimorfos).
La tcnica aporta una informacin complementaria a otras ms convencionales en la
caracterizacin de fases condensadas. Por una parte, permite el estudio a corto alcance
de materiales estructuralmente desordenados y, por otra, diferencia tomos con
nmeros atmicos similares.
Finalmente, indicar que este es un servicio abierto que puede usar cualquier organismo
pblico o privado interesado en el anlisis estructural qumico.


ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA
En qumica analtica, la espectrometra de absorcin atmica es una tcnica para
determinar la concentracin de un elemento metlico determinado en una muestra.
Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de 62 metales diferentes en una
solucin.

Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del siglo XIX, la forma moderna
fue desarrollada en gran medida durante la dcada de los 50 por un equipo de qumicos
de Australia, dirigidos por Alan Walsh.


PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASA

La tcnica hace uso de la espectrometra de absorcin para evaluar la concentracin de
un analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley de Beer-Lambert.

En resumen, los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser promovidos a
orbitales ms altos por un instante mediante la absorcin de una cantidad de energa
(es decir, luz de una determinada longitud de onda). Esta cantidad de energa (o
longitud de onda) se refiere especficamente a una transicin de electrones en un
elemento particular, y en general, cada longitud de onda corresponde a un solo
elemento.

Como la cantidad de energa que se pone en la llama es conocida, y la cantidad restante
en el otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la ley de Beer-
Lambert, calcular cuntas de estas transiciones tiene lugar, y as obtener una seal que
es proporcional a la concentracin del elemento que se mide.



INSTRUMENTOS

Para analizar los constituyentes atmicos de una muestra es necesario atomizarla. La
muestra debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es transmitida y medida por un
detector. Con el fin de reducir el efecto de emisin del atomizador (por ejemplo, la
radiacin de cuerpo negro) o del ambiente, normalmente se usa un espectrmetro
entre el atomizador y el detector.

Tipos de atomizadores

Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden usarse
otros atomizadores como el horno de grafito o los plasmas, principalmente los plasmas
de acoplamiento inductivo.

Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo lateralmente (10
cm) y no en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza del quemador se puede
controlar mediante un ajuste del flujo de mezcla de combustible. Un haz de luz pasa a
travs de esta llama en el lado ms largo del eje (el eje lateral) e impacta en un
detector.

Anlisis de los lquidos

Una muestra de lquido normalmente se convierte en gas atmico en tres pasos:

1. Desolvacin. El lquido disolvente se evapora, y la muestra permanece seca.
2. Vaporizacin. La muestra slida se evapora a gas.
3. Atomizacin. Los compuestos que componen la muestra se dividen en tomos
libres.

Fuentes de luz

La fuente de luz elegida tiene una anchura espectral ms estrecha que la de las
transiciones atmicas.

* Lmparas de ctodo hueco. En su modo de funcionamiento convencional, la luz es
producida por una lmpara de ctodo hueco. En el interior de la lmpara hay un ctodo
cilndrico de metal que contiene el metal de excitacin, y un nodo. Cuando un alto
voltaje se aplica a travs del nodo y el ctodo, los tomos de metal en el ctodo se
excitan y producen luz con una determinada longitud de onda. El tipo de tubo catdico
hueco depende del metal que se analiza. Para analizar la concentracin de cobre en un
mineral, se utiliza un tubo catdico de cobre, y as para cualquier otro metal que se
analice.

* Lsers de diodo. La espectrometra de absorcin atmica tambin puede ser llevada a
cabo mediante lser, principalmente un lser de diodo, ya que sus propiedades son
apropiadas para la espectrometra de absorcin lser. La tcnica se denomina
espectrometra de absorcin atmica por lser de diodo (DLAAS o DLAS), o bien,
espectrometra de absorcin por modulacin de longitud de onda.


MTODOS DE CORRECCIN DE FONDO

El estrecho ancho de banda de las lmparas catdicas huecas hace que sea raro el
solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una lnea de absorcin de un
elemento se solape con otra. La emisin molecular es mucho ms amplia, por lo que es
ms probable que algunas bandas de absorcin molecular se superpongan con una
lnea atmica. Esto puede resultar en una absorcin artificialmente alta y un clculo
exagerado de la concentracin en la solucin. Se utilizan tres mtodos para corregir
esto:

* Correccin de Zeeman. Se usa un campo magntico para dividir la lnea atmica en
dos bandas laterales. Estas bandas laterales estn lo suficientemente cerca de la
longitud de onda original como para solaparse con las bandas moleculares, pero estn
lo suficientemente lejos como para no coincidir con las bandas atmicas. Se puede
comparar la absorcin en presencia y ausencia de un campo magntico, siendo la
diferencia la absorcin atmica de inters.

* Correccin de Smith-Hieftje (inventada por Stanley B. Smith y Gary M. Hieftje) - La
lmpara catdica hueca genera pulsos de alta corriente, provocando una mayor
poblacin de tomos y auto-absorcin durante los pulsos. Esta auto-absorcin provoca
una ampliacin de la lnea y una reduccin de la intensidad de la lnea a la longitud de
onda original.

* Lmpara de correccin de deuterio. En este caso, se usa una fuente de amplia emisin
(una lmpara de deuterio), para medir la emisin de fondo. El uso de una lmpara
separada hace de este mtodo el menos exacto, pero su relativa simplicidad (y el hecho
de que es el ms antiguo de los tres) lo convierte en el ms utilizado.


CONCLUSION
Son anlisis cuantitativos y cualitativos, de amplia utilizacin para determinacin de
estructuras orgnicas. En alguna de ellas no se utiliza ningn tipo de radiacin por lo
que bsicamente no se puede tomar como una tcnica espectroscpica, una de ellas
es la espectroscopia de masas.
Los procesos son puramente fsicos, no destructivos y se pueden volver a recuperar.

BIBLIOGRAFIA
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
http://mural.uv.es/caloan/
https://investigacion.us.es/scisi/sgi/servicios/rmn