Microscopio compuesto

Un microscopio compuesto tiene ms de una lente objetiva. Los microscopios compuestos

se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan
finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y
organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres
sistemas:
El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y
detener los instrumentos a observar.
El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestos de tal manera
que producen las ranuras de luz.
El sistema ptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los
objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".
ndice
1 Parte mecnica del microscopio
2 Sistema optico
3 Sistema de iluminacin
4 Trayectoria del rayo de luz a travs del microscopio
5 Campo del microscopio
6 Tipos de microscopios
6.1 El microscopio electrnico
6.1.1 Invencin del microscopio electrnico
6.1.2 Funcionamiento del microscopio electrnico
6.1.3 Tipos de microscopios electrnicos
6.1.4 Microscopio electrnico de barrido
6.2 Microscopio quirrgico
7 Medicin a travs del microscopio
8 Mantenimiento del microscopio
Parte mecnica del microscopio


Esquema de un micoscopio ptico.
La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el
carro y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin;
adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.
El pie y soporte: contiene la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general
forma de Y o bien es rectangular.
La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por
su parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinacin del tubo para mejorar la
captacin de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porcin superior y por
el extremo inferior se adapta al pie.
El tubo: tiene forma cilndrica . El tubo se encuentra en la parte superior de la columna
mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los
tornillos.
El tornillo macromtrico o macroscopico: girando este tornillo, asciende o desciende el
tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera.
Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.
El tornillo micromtrico o microscopico: mediante el ajuste fino con movimiento casi
imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido
de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm, que se
utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va
a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los rayos
luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en
otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o
producir movimientos circulares.
Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la preparacin. Se encuentran
en la platina.
El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al
girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo
que se nota por el ruido de un pin que lo fija.
Sistema optico
Es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo
componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la
muestra que el ocular luego ampla.
El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la
cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen
formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van
desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que
poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del
objeto observado.
Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el
aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la
preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:
objetivos secos y objetivos de inmersin.
Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la
preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que
producen, la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos
datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su
apertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de
objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los
objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.
El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para
observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el
objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de
cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o
anillos de color negro que rodea su extremo inferior.
Sistema de iluminacin
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada.
Comprende los siguientes elementos:
Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de tungsteno
sobrevoltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella se sita un
condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite
controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que
exceda el campo de observacin produciendo luces parsitas.
El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya
alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener
dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara
cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar).
Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma
funcin que el espejo.
Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos
luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que
el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es
generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores
de inmersin, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la
preparacin. La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos igual que la
del objetivo empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder separador. El condensador
puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo,
bajndose para su uso con objetivos de poca potencia.
Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para
ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste,
lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del
sistema ptico.
Trayectoria del rayo de luz a travs del microscopio
El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al
condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada
sobre la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta
llegar al ocular, donde es captado por el ojo del observador.
Propiedades del microscopio
Poder separador. Tambin llamado a veces poder de resolucin, es una cualidad del
microscopio, y se define como la distancia mnima entre dos puntos prximos que pueden
verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es
menor a una dcima de milmetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de
la radiacin empleada; en el microscopio ptico, el poder separador mximo conseguido es de
0,2 dcimas de micrmetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio
electrnico, el poder separador llega hasta 10 .
Poder de definicin. Se refiere a la nitidez de las imgenes obtenidas, sobre todo respecto a
sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la correccin de las aberraciones de
las lentes utilizadas.
Ampliacin del microscopio. En trminos generales se define como la relacin entre el
dimetro aparente de la imagen y el dimetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el
microscopio aumenta 100 dimetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces
mayor linealmente que el tamao real del objeto (la superficie de la imagen ser 100
2
, es decir
10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que est proporcionando un microscopio,
basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por
ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacin con que
estamos viendo la muestra ser: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del
objeto est ampliada 450 veces, tambin expresado como 450 dimetros.
Campo del microscopio]


Paramecium aurelia. Microscopio ptico. El mejor conocido de los ciliados. Las burbujas que se ven
son vacuolas. Todo el cuerpo est cubierto de cilios, que se ven borrosos debido a sus rpidos movimientos.
Se denomina campo del microscopio al crculo visible que se observa a travs del
microscopio. Tambin podemos definirlo como la porcin del plano visible observado a travs
del microscopio.
Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es
inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el dimetro del campo del
microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrmetro, al que se har referencia
en el siguiente punto.
Tipos de microscopios
Existen diversas clases de microscopios, segn la naturaleza de los sistemas de luz, y otros
accesorios utilizados para obtener las imgenes.
El microscopio compuesto u ptico utiliza lentes para ampliar las imgenes de los objetos
observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de
onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y
consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular
cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas
tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con
mayor nitidez los detalles.
El Microscopio invertido el sistema optico de este tipo de microscopio est en posicin al
revs comparado con un microscopio optico convencional. La fuente de luz y el condensador
estn dispuestos sobre la plataforma apuntando hacia abajo; y los objetivos y la torrecilla
estn debajo de la plataforma apuntando hacia arriba. Las nicas partes que estn en una
disposicin normal son el tubo binocular o trinocular, as mismo la muestra que es colocada
sobre la plataforma o platina mecnica. Presenta la ventaja de poder observar cultivos enteros
o grandes muestras bajo estados ms naturales y con menores condiciones de estres.
El Microscopio estereoscpico: es un tipo de microscopio hace posible la visin
tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada
aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeos
aumentos. El ptimo de visin estereoscpica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del
microscopio.
Microscopio de campo oscuro. Este microscopio est provisto de un condensador
paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino
que iluminan oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos
sobre un fondo oscuro.
Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los
rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacin.
Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas
sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energticas. El
tratamiento del material biolgico con flurocromos facilita la observacin al microscopio.
El microscopio electrnico
Invencin del microscopio electrnico
En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrnico a base de lentes
electrostticas. Ese mismo ao Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados obtenidos
con un microscopio electrnico Siemens, construido con lentes magnticas. As nace el
microscopio electrnico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican microscopios
electrnicos que superan en resolucin al microscopio ptico.
Estos logros no slo representan un avance en el campo de la electrnica, sino tambin en el
campo de la Biologa, pues son muchas las estructuras biolgicas que se han descubierto y
que revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrnico.
Funcionamiento del microscopio electrnico
El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vacio. El
ctodo est constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite
los electrones, los cuales son atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de
50.000 a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto
que se observa, cuya preparacin exige tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la
preparacin, sobre la cual se desvan de manera desigual.
Se acostumbra a utilizar el trmino microoscopicos para las fotografas tomadas a travs del
microscopio ptico y micrografa o electromicrografa para las que se toman en el microscopio
electrnico.
Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de
2.000.000X mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un amplificador de imagen
y una cmara de televisin. En resumen, el microscopio electrnico consta esencialmente de:
Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.
Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones.
Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz.
Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen.
Proyector o lente proyectora, que ampla la imagen.
Pantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.
Tipos de microscopios electrnicos
Existen varios tipos de microscopios electrnicos, que cada da se perfeccionan ms.
El microscopio electrnico de transmisin que utiliza un haz de electrones acelerados por un
alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccin muy fina de la muestra, sean
tejidos, clulas u otro material.
El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa
de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes
magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la muestra, y
se produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un monitor. El
microscopio electrnico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisin y con el de
barrido y resulta muy til para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios analticos que
detectan seales caractersticas de los elementos que constituyen la muestra.
Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnticas as como la aplicacin de tcnicas histoqumicas y bioqumicas, adems del
empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biologa celular.
Microscopio electrnico de barrido
El microscopio electrnico de barrido est situado a la izquierda del operador, y las imgenes
computarizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un microscopio
electrnico de transmisin puede resolver objetos ms pequeos que uno de barrido, este
ltimo genera imgenes ms tiles para conocer la estructura tridimensional de objetos
minsculos.
Microscopio quirrgico
El empleo de microscopios quirrgicos ha permitido que los cirujanos lleven a cabo
intervenciones que parecan imposibles, como la reimplantacin de un miembro y la ciruga de
los ojos y odos. Estos microscopios son en especial tiles cuando es necesario realinear para
unir o reparar fibras nerviosas y vasos sanguneos individuales. Se usa para operaciones de
dificultad.
Medicin a travs del microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o
microorganismos que est observando a travs del microscopio. Para estas mediciones
pueden utilizarse varios mtodos.
Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de objetivo, que
consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de
longitud), con separaciones, entre cada divisin, de una centsima de milmetro.
Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en dcimas de
milmetros. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta
que las lneas de la escala graduada aparezcan ntidas. Luego se hace superponer la escala
del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro
objetivo y una lnea del micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin ocular. Veamos
un ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09 mm) equivalen a 30 divisiones del
micrmetro ocular, cada divisin del ocular equivaldr a: 0,09 mm/30 = 0,003 mm = 3 m
Quiere decir que para el objetivo calibrado y el ocular utilizado, cada divisin del micrmetro
ocular equivale a 3 m. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que hemos
expuesto, teniendo el microscopio ocular podran hacerse todas las mediciones que se
deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparacin, procedemos as:
haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular.
Si la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada divisin equivale
a 3 m, la longitud del Paramecium ser 75x3= 225 m. Tambin se pueden efectuar
mediciones en el microscopio con cmara clara y utilizando una regla. En realidad, estas
medidas no son tan exactas como cuando se utilizan micrmetros por errores que se
introducen superponiendo imgenes.
Mantenimiento del microscopio
El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo.
Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una
bolsa plstica o campana de vidrio.
Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede
humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc.
Que hayan cado sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse
papel de ptico que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio fotografa o
utilizar un pao de algodn. Para el polvillo se puede utilizar un perilla con pincel de pelo de
camello. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las
huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel de ptica, envolviendo un
palillo con algo de punta con una solucin de ter/alcohol (70-30 %) y luego pasarlo por la
superficie cuantas veces sea necesario. La limpieza de la ptica ha de realizarse en espiral,
desde el centro hacia el exterior. El aceite de cedro que queda sobre la lente frontal del
objetivo de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de finalizada la observacin.
Para ello se puede pasar el papel de ptica impregnado con una gota de xilol. En caso de
estar seco debe ponerse la zona a remojo con la solucin sealada.
Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado
hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la
formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que producen emanaciones
fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.
Conclusiones
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los
rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sita cerca del objeto
que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que
la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La
imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una
lupa. El ocular est situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace
divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una
gran imagen invertida situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan
realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual...