CITOMETRA DE FLUJO (CMF)

La citometra de fujo es una tcnica de anlisis celular que implica medir las caractersticas
de dispersin de luz y fuorescencia que poseen las clulas conforme se las hace pasar a
travs de un rayo de luz.
Para su anlisis por citometra de fujo, las clulas deen encontrarse individualmente en
suspensin en un fuido. Las clulas san!uneas pueden analizarse prcticamente de manera
directa, las clulas de tejidos slidos deen primero dispersarse.
FUNDAMENTO
La "itometra de #lujo $"%#& es una tcnica de anlisis celular multiparamtrico cuyo
fundamento se asa en hacer pasar una suspensin de partculas $!eneralmente clulas&
alineadas y de una en una por delante de un haz de lser focalizado. 'l impacto de cada
clula con el rayo de luz produce se(ales que corresponden a diferentes parmetros de la
clula y que son reco!idos por distintos detectores. 'stos convierten dichas se(ales en
se(ales electrnicas que posteriormente sern di!italizadas para permitir la medida
simultnea de varios parmetros en una misma clula. 'stos parmetros son)
* Parmetros relacionados con caractersticas intrnsecas de la clula, como su tama(o y la
complejidad de su n+cleo y citoplasma.
* Parmetros relacionados con caractersticas anti!nicas de cada clula $inmunofenotipo&.
Por lo tanto la "%# es capaz de identi,car una clula por medio de sus caractersticas
anti!nicas y-o por sus caractersticas morfol!icas de tama(o y complejidad.
LECTURA
Las se(ales producidas por la interaccin de las clulas con el haz de luz son de dos tipos)
* .e(ales de dispersin.
* .e(ales de fuorescencia.
a& .e(ales de dispersin) La dispersin resulta de la interaccin de la luz con una partcula
que produce un camio de direccin $no de la lon!itud de onda& en todas las
direcciones del espacio. Las caractersticas morfol!icas que determinan la dispersin
de la luz son fundamentalmente el tama(o celular, la memrana, el n+cleo y el
material !ranular del interior de la clula, llamado complejidad. 'n los "itmetros de
#lujo se miden dos fracciones de dispersin)
*La luz dispersada en n!ulo cnico peque(o $/*0/1& que casi coincide con la direccin
de la luz incidente, llamada #." $#or2ard .catter&. 's una medida proporcional al
tama(o de la partcula que produce la dispersin.
*La luz dispersada en n!ulo recto llamada .." $.ide .catter&. 's proporcional a la
complejidad de la estructura interna de la partcula.
& .e(ales de #luorescencia) 3n fuorocromo es una molcula qumica que asore luz a
una determinada lon!itud de onda $ener!a& y emite a una lon!itud superior $menor
ener!a&. 'l espectro de asorcin o e4citacin es el ran!o sore el que un fuorocromo
asore luz, y el espectro de emisin es el ran!o sore el que un fuorocromo emite luz.
"uando un fuorocromo interacciona con la luz de e4citacin procedente del lser emite
ener!a radiante. 5eido a que parte de la ener!a se utiliza para la asorcin, la luz
emitida es de menor ener!a que la luz de e4citacin, es decir la lon!itud de onda
emitida es mayor. La diferencia entre la lon!itud de onda de asorcin y emisin se
denomina .to6es shi7. Los citmetros de fujo permiten detectar se(ales de
fuorescencia procedentes de complejos 8nti!eno-8nticuerpo marcados con un
fuorocromo y situados en una clula, siendo la cantidad de se(al de fuorescencia
emitida i!ual a la proporcin de la cantidad de componentes fuorescentes de la
partcula.
CARACTERISTICAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO
La "%# es una tcnica sencilla que se aplica en la rutina diaria de muchos laoratorios
clnicos y de investi!acin, capaz de proporcionar resultados de forma rpida que pueden ser
aplicales al dia!nostico. 9racias a su !ran especi,cidad es capaz de distin!uir entre varias
polaciones celulares diferentes, y detectar una polacin celular en una muestra en la que
predominan otras polaciones celulares mayoritarias. Pero la principal caracterstica de la
"%# es que puede ofrecer informacin simultnea de varios parmetros de cada una de las
clulas analizadas y la relacin entre los parmetros de una clula y los de otra clula
tamin analizada. Permite el anlisis de dos parmetros de dispersin, .."-#." y tres de
fuorescencia $en equipos con un solo lser&, #l0, #l: y #l;, y de una cuarta fuorescencia en
equipos con dos lseres.
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO
5eido a la necesidad de utilizar una suspensin de partculas $clulas, n+cleos,
cromosomas, etc&, para ser ledos de una en una hace que se pierda informacin sore la
arquitectura de los tejidos que componen las clulas o de las propias clulas, as como la
interaccin entre estas y el medio que las rodea $patrones nodulares o difusos de los
linfomas&. #rente a este inconveniente la "%# presenta m+ltiples ventajas frente al
microscopio de fuorescencia y las tcnicas citoqumicas, como)
* Posiilidad de empleo de m+ltiples marcajes frente a un solo marcaje de la citoqumica y la
microscopia de fuorescencia.
* Posiilidad de analizar un elevado n+mero de partculas en un corto perodo de tiempo $<///
partculas-se!undo&.
* Posiilidad de cuanti,car la intensidad anti!nica por medio de los canales medios de
fuorescencia.
* %ayor sensiilidad y ojetividad que le permiten detectar enfermedad mnima residual y
caracterizar polaciones celulares poco aundantes en condiciones normales como los
as,los.
* Posiilidad de analizar polaciones celulares y eptopos celulares.
* Permite almacenar informticamente la informacin del anlisis para poderla utilizar en
cualquier momento y reanalizar anlisis hechos con anterioridad.
* Posiilidad de cuanti,car las molculas anti!nicas presentes en un !rupo celular.
Podeis ampliar en)
222.citometriadefujo.com
http://youtu.be/E!"#uD$%o&