Apo 3 2014 para Pantalla

MICROBIOLOGA I - FCV - UNLP APO 3: MICROBIOLOGA MARCHA BACTERIOLGICA 2014
Dra. Mercedes GATTI Responsable del Aula Virtual Curso MICROBIOLOGIA I 2014- FCV-UNLP 1

ACTIVIDAD PRESENCIAL OBLIGATORIA 3 (para visualizar en pantalla)
Microbiologia: Bacteriologa Marcha bacteriolgica

Tipo de actividad: terico y prctica

Objetivos
Evaluar la necesidad de la relacin existente entre la Microbiologa con otras ciencias.
Destacar la importancia de la Microbiologa en las Ciencias Veterinarias.
Describir la citologa y morfologa microbiana.
Utilizar adecuadamente, con habilidad, precisin y soltura, el material de laboratorio microbiolgico, as
como tambin otros instrumentos, respetando las normas de seguridad y conservacin en su uso.
Descubrir el valor instrumental de la esterilizacin en el material de laboratorio microbiolgico.
Comprobar experimentalmente la importancia de la coloracin de Gram y Ziehl Neelsen como medio de
identificacin de microorganismos.
Relacionar los distintos tipos de respiracin microbiana con el concepto de microorganismo aerobio y
anaerobio. Descubrir la interrelacin existente entre los distintos tipos de medios de cultivo, mtodos de
siembra y aislamiento en microorganismos aerobios y anaerobios.
Inferir la importancia de los mtodos bioqumicos, inmunolgicos identificacin bacteriana.

Contenidos

Microbiologa: Definicin. Relacin con otras ciencias. Clasificacin de la microbiologa: bacteriologa.

Citologa y patogenicidad bacteriana: Estructura, funcin. Mecanismos.

Laboratorio Microbiolgico: Principales equipos y materiales para el estudio microbiolgico:

Bioseguridad: definicin, grupos de riesgo y niveles de riesgo biolgico.

Esterilizacin: Asepsia y antisepsia: definiciones. Mtodos de esterilizacin

Marcha bacteriolgica: observacin de microorganismos, tcnicas y mtodos; cultivo de bacterias,
clasificacin y desarrollo; estudios bioqumicos y metablicos de las bacterias; pruebas de sensibilidad,
antibiograma y tcnicas complementarias del estudio bacteriolgico .



Lea la siguiente consigna
Aplique los contenidos temticos de las APOs 1 y 2 en los tems y situaciones problemticas
planteadas en este documento.
Resuelva las actividades identificadas con nmeros del 1) al 32) en el documento para texto
Word disponible en el sector materiales de la APO 3. Este PDF en pantalla le permite observar
consignas, definicin y detalles en las imgenes. Tenga en cuenta que, por su extensin y color
NO tiene como fin ser impreso.
Las imgenes se encuentran numeradas en referencia a los tems de las actividades propuestas.

La Microbiologa ocupa un lugar prominente entre las Ciencias Mdicas. Se encuentra sin duda
alguna entre las reas de las ciencias biolgicas que ms ha crecido en los ltimos aos. Desde el
punto de vista prctico, esta ciencia, se podra clasificar en:
- general - industrial - agrcola - ecolgica - mdico/sanitaria
Todas son igualmente importantes, pero la Microbiologa general, la mdico/sanitaria y la industrial
son las que nos ocupan en primera instancia como objeto de estudio en las ciencias veterinarias.
La Bacteriologa es una rama de la Microbiologa que se ocupa del estudio de las bacterias:
microorganismos procariotas y la Taxonoma permite su clasificacin bajo tres aspectos:
- nomenclatura: sistema de nombres aplicados a los diferentes microorganismos de acuerdo a reglas
internacionales (nomelatura binomial).
- clasificacin es el agrupamiento de los microorganismos de acuerdo a las caractersticas que
comparten, por ejemplo fenotpicas. Coloracin de Gram.
- identificacin es el proceso por el cual los microorganismos desconocidos son clasificados.
1.)- Comparando la estructura de las clulas procariotas con respecto a las eucariotas ,
complete el siguiente cuadro:
Caractersticas Clulas procariotas Clulas eucariotas
Grupos mayores
..
Algas, hongos, protozoos, plantas,
animales
Pared celular
..
Ausente: cuando est presente
contiene quitina o celulosa.
Estructura nuclear
Membrana nuclear
Cromosoma
Histonas

..

Presente
Mltiple, lineal
Presentes
Citoplasma
Ribosomas
Mitocondrias
Complejo de golgi
Retculo endoplsmico
Membrana citoplasmtica
Triglicridos

..

..


Movilidad
..
Flagelos (complejos); seudpodos; otros
rganos locomotores complejos.
Generacin de energa Asociada a la membrana citoplasmtica
..
Reproduccin sexual
.. ..
Recombinacin/intercambio
gentico

..
Cigota diploide formada a partir de
clulas germinales haploides; lameiosis
da como resultado la recombinacin
gentica

A continuacin se esquematiza una bacteria tipo:

2.a)- Mencione a que estructura bacteriana corresponde cada una de las referencias del
esquema de la bacteria tipo (Imagen 2)

1 5 .
2. 6 .
3 7 .
4 8 .

2.b)- Indique segn se criterio, si cada una de las estructuras previamente esquematizadas
se considera constitutiva o accesorias.
....

1
2
3
4
5
6
7
8
Imagen 2


Con algunas excepciones, las bacterias poseen pared celular compuesta de peptidoglicano y
otras sustancias. Podemos diferenciar tres tipos de pared celular cuya diferenciacin prctica incide
en la comprensin del diagnstico, la patogenicidad y la resistencia a los antimicrobianos de los grupos
bacterianos que las poseen.
En el siguiente esquema se muestran dos tipos de pared: de bacterias: Gram positivas y
Gram negativas:

3.a)- Describa las diferencias estructurales de ambos tipos de pared, Gram positivas y Gram
negativas.
....
....



3.b)- Explique la composicin del lipopolisacrido
....
....

En la Imagen 4 se observa un tercer tipo de pared, con presencia de acido miclico, glicolpidos y
arabinogalactanos.

4.)- A qu tipo de pared pertenece (Imagen 4) y que caractersticas le otorga a las
bacterias que la poseen?
....
....

Ciertas bacterias (por ejemplo Streptococcus y bacilos entricos) producen fcilmente y de forma
espontnea una serie de variantes capaces de replicarse en forma de pequeos elementos carentes de
pared celular. Estos microorganismos que reciben el nombre de formas L, pueden ser producidos por
otras especies, siempre y cuando se produzca una alteracin en la sntesis de la pared celular, por
ejemplo, por la accin de la penicilina o por la existencia en el medio de concentraciones elevadas de
sales.

Imagen 4
pared


Funcionalmente entonces, las bacterias se pueden dividir en varias secciones sobre la base
de: la coloracin de Gram, los requerimientos de O2 y la formacin de esporos entre otros.

Algunas bacterias bajo determinada condiciones medioambientales con capaces de producir
esporos.-
5.a)- Complete las referencias del esquema de la Imagen 5.

1
2
3
4

5.b)- Explique brevemente el mecanismo de esporulacin y sus condiciones medioambietales.
....
....

Por ser microorganismos vivos no observables a simple vista, las bacterias slo pueden
visualizarse con la ayuda de un microscopio.

Luego de observar las Imgenes 6 I y 6 II:

Imagen 5
1

2

3.

4.


6.a)- Mencione con qu tipo de microscopio fueron obtenidas y describa el poder de resolucin
del equipo en cada caso .
Imagen 6.I- Tipo de microscopio ..
Poder de resolucin ..

Imagen 6.II- Tipo de microscopio ..
Poder de resolucin ..



6.b)- En funcin de la morfologa y agrupacin, como se denominan las bacterias
referenciadas en las imgenes 6I y 6II ?
referencia denominacin referencia denominacin
6.Ia .. 6.Ie ..
6.Ib .. 6.IIf ..
6.Ic .. 6.IIg ..
6.Id .. ..
Retomando conceptos sobre la estructura de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
abordados en el tem 3, los microorganismos patgenos presentan en su superficie una serie de
patrones moleculares comunes y constantes que son reconocidos por el sistema inmune innato del
husped como primera lnea de defensa para impedir la invasin y diseminacin de los patgenos;
estos patrones alertan al husped de la presencia de organismos infectantes.
Los patrones moleculares asociados a patgenos (Pathogen-associated molecular
patterns), (PAMPs), son pequeas secuencias de molculas producidas nicamente por
microorganismos patgenos por lo que no se encuentran presentes en las clulas del husped. Son
habitualmente estructuras invariables de clases enteras de patgenos reconocidas por receptores
reconocedores de patrones (PRR) en las clulas de la inmunidad innata del husped . Esta
caracterstica permite al sistema inmune distinguir entre antgenos propios y extraos y responder de
manera distinta segn el microorganismo identificado.
7.a)- Observando la imagen 7a, investigue y reconozca dentro de los componentes estructurales de las
bacterias Gram negativas uno de los principales PMAPs que acta como diana para la activacin del sistema
inmune innato .
....

Imagen 7a


7.b)- Observando la imagen 7b, investigue y reconozca PMAPs dentro de los componentes de la
pared de las bacterias Gram positivas .

....

En la siguiente Imagen 8 se observan bacterias que han invadido un determinado tejido. Este
fenmeno de sobrevida dentro del organismo se debe a una estructura bacteriana que se observa en la
fotografa.

8.a)- Mencione la estructura referida en la Imagen 8 y cite los componentes qumicos que
la conforman.
....
Imagen 8
Imagen 7b


8.b)- Explique su funcin y su estructura.
....
En el siguiente esquema se observa una bacteria unida a una clula epitelial del aparato
urinario.

9.)- En base a la Imagen 9, mencione la estructura bacteriana que permite la unin y detalle
su funcin y componentes qumicos.
....
A continuacin se enumeran una serie de enzimas que contiene una bacteria patgena.
10.)- Marque con una cruz las enzimas que daan las clulas del hospedador y permiten la
diseminacin bacteriana. Explique el mecanismo o funcin de cada enzima involucrada en este
proceso.
Marque Enzima Mecanismo / Funcin

Hialuronidasa:
..

Atpasa

..
.
Oxidoreductasa

..

Colagenasa

..

Aminopeptidasa

..
.
Pirvico transferasa

..

Estreptoquinasa y
estafiloquinasa
..
bacteria
Clula uroepitelial

adhesinas
Imagen 9


Cuando se estudian las bacterias en laboratorio microbiolgico se presenta un riesgo potencial de
exposicin a infeccin del personal especializado y auxiliar al trabajar con material infeccioso. Por lo
tanto, se deben administrar todas las medidas necesarias para que el ambiente institucional est exento
de microorganismos hasta el lmite de lo posible. As los objetivos de la bioseguridad consisten en
proteger al laboratorista, a la comunidad y al medio ambiente de agentes potencialmente peligrosos.
El Smbolo de Bioseguridad se utiliza para indicar la presencia de riesgo biolgico actual o
potencial, debiendo identificar laboratorios, equipos, contenedores, habitaciones y materiales donde
exista este peligro.

El smbolo y signo internacional de peligro biolgico debe colocarse en las puertas de los
locales donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2 o superior, las que deben
permanecer cerradas.
El papel del veterinario y del microbilogo es fundamental en la asignacin de responsabilidades
para los programas de salud y seguridad en el trabajo, en clnicas, zoolgicos, laboratorios de
investigacin, granjas, y otros establecimientos. Las medidas de bioseguridad estn relacionadas con la
habilidad para prevenir la transmisin de agentes patgenos, as como para controlar su diseminacin
hacia los humanos y las instalaciones.

La OMS (Organizacin Mundial de la Salud) clasifica a los microorganismos infecciosos en cuatro
grupos en funcin del riesgo intrnseco



11.)- En relacin a los grupos de riesgo biolgico, complete el siguiente cuadro

Grupo de
riesgo
Riesgo individual Riesgo comunitario Caractersticas del
microorganismo
Riesgo 1 Escaso

.. ..
Riesgo2 ..

limitado ..
Riesgo 3 Elevado

.. ..
Riesgo 4

..

..
-Provoca enfermedad
grave en hombre y
animales.
-Se propaga con facilidad
en forma directa e
indirecta

Las instalaciones de los laboratorios se clasifican en cuatro niveles de bioseguridad que estn
relacionados con los grupos de riesgo en los que se clasifican los microorganismos infecciosos con los
que trabajan y se basan en un conjunto de aspectos tales como: las caractersticas de diseo y
construccin del laboratorio, elementos de contencin, equipos y procedimientos que se requieren para
el trabajo con agentes biolgicos de los diferentes grupos. Los laboratorios destinados a la docencia
e investigacin corresponden al grupo de riesgo biolgico 1 y nivel de bioseguridad 1, bsico.

12.)- Relacione grupos de riesgo y niveles de bioseguridad, prcticas y equipos de trabajo y
complete el siguiente cuadro.
Grupo de riesgo
Nivel de
bioseguridad
Tipo de laboratorio Prcticas de laboratorio
Equipos de
seguridad
1 1. Bsico Enseanza, investigacin
Buenas prcticas de laboratorio
(BPL)
Buenas tcnicas microbiolgicas
(BTM)
Equipo de proteccin individual
(EPI)
Ninguno en especial,
trabajo en banco
abierto
2 2. Bsico ..
..
Trabajo en banco
abierto ms cabina
de seguridad
biolgica (CSB) para
control de aerosoles
3 3. Contencin ..
..
..
4
4. Contencin
mxima
..
..
..



Las APOs 4 y 5 del presente curso se realizarn observando el nivel de bioseguridad 1,
donde el trabajo es generalmente realizado sobre mesadas abiertas y no demanda equipamiento de
contencin ni diseo especial de infraestructura. Dichas prcticas de laboratorio requieren de algunos
elementos que integran el equipo de proteccin indivividual (EPI).

13.a)- Defina EPI, reconozca sus componentes en la Imagen 12 detallando su utilidad
....

13.b)- Con que elementos de EPI considera necesario asistir a las APOs 4 y 5 ?
....

En las APOs 4 y 5 se observarn tambin, Buenas prcticas de laboratorio (BPL) y Buenas
tcnicas microbiolgicas (BTM).

14.a)- Investigando los conceptos de buenas prcticas y tcnicas, complete en el siguiente
cuadro las medidas a adoptar para cumplir con cada requisito de una prctica bsica.

Imagen 13


14.b)- Comente la Imagen 14.

..............................................................................................................................................................
Por otra parte, el etiquetado reglamentario de las sustancias y los preparados peligrosos es un
medio sencillo para informar y alertar sobre los peligros relacionados con su utilizacin. Presentan
pictogramas, serie de signos tratados con una sntesis formal de tal manera que transmiten el concepto
de forma rpida y tienen la particularidad de actuar en sistema. Las etiquetas informan inmediatamente
sobre el producto, evitando confusiones y errores a la hora de utilizarlo. Pueden presentar smbolos de
Prcticas bsicas para laboratorios de microbiologa
Requisitos Medidas
1 Evitar el contacto de material peligroso con la piel
y la boca.

..
2 Evitar la salida de material peligroso de las reas
de laboratorios.

...
.

3 Evitar accidentes con equipos. Usar ropa de
proteccin.

..
4 Evitar la contaminacin de material ajeno al
laboratorio.

..
5 Disminuir los riegos en accidentes.

...
Imagen 13


peligro, as como un nmero restringido de indicaciones sobre los riesgos y sobre las medidas de
prevencin a adoptar resultando imprescindibles en caso de accidente.
Pictogramas frecuentes en productos qumicos

15.)- Identifique pictogramas o smbolos de las imgenes 14a y 14b y describa la informacin que
brindan.

Imagen 15 a)
- Identificacin: .
- Informacin: .

Imagen 15.b)
- -Identificacin: .
-
- -Informacin: ..



Cuando se produce una enfermedad, los pasos a seguir para llegar a un diagnstico y
tratamiento correcto son varios y se encuentran estrechamente relacionados entre s.

Piense en la siguiente situacin: Se asla de una materia fecal de un porcino Salmonella
Typhimurium (bacteria patgena). En los datos remitidos con la muestra especifican que el animal tiene
temperatura corporal de 37C, come, toma agua, respira y defeca normalmente. No se observa ninguna
patologa.

16.)- Se puede considerar una infeccin en el animal, segn la situacin planteada? Explique
el fundamento de su respuesta.
..

Ubicado en un hospital veterinario de alta complejidad, que cuenta con los recursos necesarios
para el aislamiento y diagnstico bacteriolgico:

17.)- Explique, en funcin de la clasificacin, mtodos, equipos, temperaturas y tiempos, la
esterilizacin en la sala de ciruga haciendo referencia a los elementos del siguiente cuadro.
Tenga en cuenta si existen requerimientos de preparacin previa y cuales son los recursos que
permiten verificar el procedimiento de resultar necesario.
Elemento de la sala Situacin
camilla de operaciones
guantes de ltex
Ambos de ciruga
cofias
mascarillas
cubre botas
gazas
tijeras y pinzas
material de sutura
(agujas, hilos sintticos,
hilos de lino)

solucin fisiolgica
solucin de dextrosa.
sueros homlogos para
expansin plasmtica

sondas
jeringas descartables



cont Elemento de la sala Situacin
campos quirrgicos (telas
para cubrir el rea de
ciruga)

superficie de piel donde
se realizara la ciruga

hisopos para toma de
muestras y medio de
transporte para
bacteriologa

El trmino Marcha Bacteriolgica designa la serie ordenada de pasos que se deben seguir para
identificar correctamente una bacteria responsable de infeccin: en el Anexo 1, al final de este
documento se representa esquemticamente.
Cuando el veterinario clnico detecta la enfermedad en el paciente, comienza el proceso de
diagnstico microbiolgico. A partir de aqu deben obtenerse una o varias muestras biolgicas, como
sangre, hisopados de mucosas, exudados, orina, etc que permitan aislar al microorganismo causal o
elementos especficos de ese agente. Estas muestras deben obtenerse en tiempo y forma adecuados.
El laboratorio de Microbiologa realiza las etapas para la concrecin de un resultado. El
veterinario interrelaciona todos los datos obtenidos e inicia el tratamiento. Los pasos habituales de la
marcha bacteriolgica son:
- Decisin de realizar el estudio bacteriolgico
- Recoleccin de la muestra y transporte
- Observacin microscpica
- Observacin en fresco
- Coloracin
- Cultivo
- Tipificacin bioqumica
- Serotipificacin
- Estudios complementarios
- Antibiograma
- Serodiagnstico

El origen de las muestras que se manipulan en el laboratorio es variado, ya que stas pueden
provenir de cultivos realizados previamente o bien de material clnico. Tanto el tipo como la calidad del
material empleado para la toma de muestras son importantes, porque de una buena recoleccin de los
especimenes depende el xito del proceso de investigacin.


18. a)- Indique que tipo de muestras tomara en los animales vivos y muertos de una granja de
pollos parrilleros con signos respiratorios (lagrimeo, descargas nasales, dificultad para respirar,
ruidos respiratorios, inflamacin de senos infraorbitales) a fin realizar una marcha bacteriolgica
para el aislamiento de los posibles agentes causales.
..
18.b)- Describa las condiciones esenciales que deben tenerse en cuenta para la toma de
muestras en el punto anterior y para su transporte hasta el laboratorio de bacteriologa
considerando un tiempo mnimo de 24 hs de arribo al mismo.
..

18.c)- Mencione algunos medios de transporte que puede emplear para el envo de hisopados
traqueales e indique su finalidad.
..
18.d)- A fin de facilitar el diagnstico y los medios a emplear en la marcha bacteriolgica, se
decide tomar muestras de sangre para estudios serolgicos. Detalle los procedimientos para
obtener dicho suero y su envo al laboratorio:
..

Cuando un material biolgico es remitido al laboratorio de bacteriologa para su anlisis,
luego de verificar las condiciones aptas para su procesamiento: protocolo y/o ficha epidemiolgica,
En la Imagen 18 de la necropsia
realizada a las aves muertas para la toma
de muestras, se puede observar los
sacos areos abdominales con exudado
caseoso (aerosaculitis).

Imagen 18


transporte apropiado y cantidad adecuada, se inicia su procesamiento con la observacin directa.
Existen dos metodologas: en fresco y con coloracin.
19.a)- Describa como se realiza un examen en fresco. Que datos nos permite visualizar sobre
las bacterias?
..
19.b)- Distinga y describa los distintos elementos presentes en la observacin en fresco de
una muestra de orina en la Imagen 19.

El mtodo ms simple de aumentar el contraste entre la clula bacteriana y el medio que la rodea
es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas
o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas,
cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. A los fines prcticos se pueden
distinguir coloraciones simples, compuestas y diferenciales.

Imagen 20.I
Imagen 19
Imagen 20.II


20.a)- En las imgenes 20.I y 20.II se observan coloraciones simples. Justifique porque son
coloraciones simples
..
20.b)- Cite el colorante utilizado en 20.I y en 20.II.
..
21)- Cules son los componentes generales que se utilizan en las coloraciones compuestas?
..
22)- Complete el siguiente cuadro referido a las dos tcnicas de coloracin compuesta ms
frecuentemente usadas en el laboratorio de bacteriologa.
Componentes Coloracin de Gram Coloracin de Ziehl Neelsen
.. Violeta de genciana o cristal violeta Fucsina fenicada o de Ziehl
Mordiente qumico .. ..
Mordiente fsico .. ..
.. Alcohol-acetona Acido-alcohol
Colorante secundario .. ..
23)- Observe la tcnica de Gram partir de la Imagen 23. Detallando color y morfologa
cmo se visualizan, en este caso, las bacterias Gram positivas y negativas respectivamente ?

..
En la etapa de cultivo de la marcha bacteriolgica se propagan los microorganismos
brindndoles las condiciones ambientales adecuadas. Las bacterias adaptadas al hombre y los
animales tienen la capacidad de desarrollarse en medios nutritivos fuera del hospedador (in vitro). Los
microorganismos en crecimiento y reproduccin deben hacer rplicas de si mismos por lo que necesitan
Imagen 23
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
Safranina


el aporte de todas las sustancias necesarias para recrear su composicin qumica y realizar su
metabolismo

24.a)- Indique el sustrato que se utiliza para enviar un hisopado rectal al laboratorio de
bacteriologa. proveniente de un cerdo de maternidad con diarrea. Se indica como posible agente
etiolgico Escherichia coli enterotoxignico (microorganismo perteneciente a la familia de las
Enterobacterias). Mencione su finalidad.
..
24b)- En funcin al origen de la muestra, al agente etiolgico involucrado y a sus
caractersticas nutricionales, indicar el tipo de medio de cultivo que utilizara para su aislamiento.
..
24c)- Indicar el mtodo que utilizara para esterilizar el medio seleccionado.
..
24d)- Considerando que el microorganismo aislado no es nutricionalmente exigente, indicar el
medio en el cual lo REPICARA, con la intencin de obtener un cultivo puro para su posterior
identificacin
..
24e)- Con el objeto de realizar una incubacin selectiva, la placa sembrada fue incubada a
42 C. Indique la finalidad de la incubacin selectiva.
..
24.f)- Cite la denominacin que se utiliza para mencionar a los microorganismos que tienen la
capacidad de desarrollar a 37 C y a 42 C.


..
A continuacin, en la Imagen 25 se observa una placa de Agar Eosina Azul de Metileno (EMB),
en la cual se aprecia la presencia de desarrollo bacteriano de aspecto verde metalizado.

25.a)- Indique como se denominan al desarrollo bacteriano en medios slidos.
..
25.b)- Mencione los componentes presentes en el medio para que se aprecie el aspecto
mencionado.
..
25.c)- Indique como se clasifica este medio en funcin de su utilidad.
..
24.d)- Si el microorganismo que desarroll en la placa de EMB lo hubiese hecho en agar Mac
Conkey, cul sera el aspecto de las colonias?Por qu?
..
Los estudios bioqumicos o fisiolgicos (lectura complementaria) en la marcha
bacteriolgica tienen como finalidad la identificacin de los microorganismos responsables de los
cuadros clnicos obtenidos en los cultivos para aislamiento que, siendo morfolgicamente parecidas,
tienen actividad bioqumica distinta. Se utilizan medios de cultivo diferenciales que permiten evaluar
las actividades metablicas de los microorganismos sobre diferentes sustratos, a saber, azcares,
aminocidos, etc.
Imagen 25


26.a)- Seale el medio de cultivo y el sustrato correspondiente para cada una de las
siguientes determinaciones:

Determinacin Medio de cultivo Sustrato
Indol .. ..
Rojo de metilo .. ..
Voges Proskauer .. ..
Citrato .. ..

Despus de transcurrido el tiempo de incubacin debe efectuarse la lectura de los resultados.
Algunas determinaciones se evalan mediante el uso de reactivos mientras que otras lo hacen por
medio de indicadores de pH.

26.b)-Para las determinaciones antedichas, defina el tipo de revelador utilizado y el color
que da en positividad.

Determinacin Revelador Color positivo
Indol .. ..
Rojo de metilo .. ..
Voges Proskauer .. ..
Citrato .. ..


El tipo de metabolismo bacteriano se evala por medio de una tcnica especfica.

26.c)- Indique cul es el medio de cultivo y el sustrato empleado, la atmsfera de
incubacin y la evaluacin de los resultados.

Medio de cultivo y
sustrato
Atmsfera de siembra y de
incubacin
Evaluacin de resultados
..
..

.. ..
.. ..
.. ..

En algunos casos, es posible la identificacin bacteriana a partir su comportamiento enzimtico
sobre determinados medios de cultivo enriquecidos o mejorados.

26.d)- Complete correctamente los siguientes datos:

Actividad Producto Visualizacin de resultados
.. .. ..
.. .. ..
.. .. ..
.. .. ..

El medio BAM (Buenos Aires Modificado) permite evaluar cinco (5) actividades metablicas
bacterianas, dos de ellas exclusivamente dentro del medio de cultivo.
26.e)-Especifique cules son las pruebas, el sustrato para cada una de ellas, los reveladores
utilizados y el color final para los resultados positivos.
Determinacin Sustrato Revelador Color
.. .. .. ..
.. .. .. ..

Algo similar ocurre con el medio Kligler, pero con tres (3) determinaciones evaluables dentro del
medio de cultivo.



26.f)- Complete los mismos tems que para el caso anterior.
Determinacin Sustrato Revelador Color
.. .. .. ..
.. .. .. ..
.. .. .. ..

Los estudios complemetarios de la marcha bacteriolgica se realizan para llegar a una
identificacin mucho ms exacta de las bacterias. Por ejemplo: estudios de protenas constitutivas por
medio de la tcnica de electroforesis, estudios sobre la constitucin del DNA (Reaccin en cadena de
la polimerasa [PCR], hibridizacin de DNA o RNA, utilizacin de sondas biotiniladas; etc.).

27.a)- Defina antibiograma, antibitico y quimioterpico.
..
27.b)- En que medio de cultivo se recomienda universalmente realizar el antibiograma?
..

28)- Cual es el objetivo de la prueba de Reaccin en Cadena de Polimerasa (PCR)
..

29)- Mediante que pruebas serolgicas puedo evaluar la respuesta humoral de un
individuo.(Mencione por lo menos dos).
..


Situaciones problemticas A, B y C

Situacin A : Desde una granja de produccin porcina, remiten al laboratorio de bacteriologa
un trozo de pulmn obtenido a partir de un cerdo de engorde con manifestacin clnica de enfermedad
respiratoria y lesiones macroscpicas compatibles con pleuroneumona porcina.

30.a)- Indique las medidas de bioseguridad que debera utilizar para procesar esta muestra
para el aislamiento bacteriolgico (considere que uno de los posibles agentes etiolgicos presentes
puede ser el virus de influenza).
..
30.b)- Con la finalidad de observar el tipo y cantidad de estructuras presentes en la
muestra, indicar qu metodologa llevara a cabo.
..
30.c)- Considerando que los posibles agentes etiolgicos presentes en la muestra, tienen
altos requerimientos nutricionales, indique el medio de cultivo que utilizara para sembrarla y como
lo clasifica en funcin de su utilidad.
..
30.d)- Mencione los pasos que deben seguirse para prepara el medio anteriormente indicado
..
Si la muestra procesada en lugar de ser un trozo de pulmn, fuera una biopsia de amgdalas
(rea normalmente colonizada), debera utilizarse un medio selectivo.
30.e)- Indique los compuestos que deben adicionarse al medio mencionado en el tem 29.c)
para que sea selectivo.
..


Teniendo en cuenta que uno de los posibles agentes etiolgicos aislados a partir de la
muestra remitida es Actinobacillus pleuropneumoniae el cul no slo se caracteriza por su alto
requerimiento nutricional, sino tambin por ser mesfilo y capnfilo
30.f)-Indique las condiciones en las cuales deben ser incubadas las placas.
-Tiempo:....
-Temperatura:..
-Condicin atmosfrica .

30.g)- Con la finalidad de organizar un cepario, se decide conservar la bacteria aislada,
indique los posibles mtodos.
..
Situacin B- Remiten al laboratorio de bacteriologa una muestra de contenido intestinal, proveniente
de un bovino con diagnstico presuntivo de diarrea por bacterias anaerobias.

31.a)- Indique el medio de cultivo que utilizara para sembrar la muestra en caso de no
poseer jarra para cultivo de anaerobios. Mencione el componente que presenta el medio citado para
otorgarle la propiedad de ser apto para cultivo de anaerobios.

31.b)- Describa el procedimiento de siembra de muestras para aislamiento de bacterias
anaerobias.
..


La muestra fue sembrada en agar sangre e incubada en jarra de anaerobiosis durante 48 horas
a 37 C. Transcurrido este lapso de tiempo, se observa la placa con el desarrollo de las siguientes
colonias,

31.c)- Describa a continuacin las caractersticas de las colonias que desarrollaron .
..
Uno de los agentes involucrados en este tipo de afecciones, pertenece al gnero Clostridium y
se caracteriza por ser un bacilo gram positivo formador de esporo, siendo la localizacin y el tamao de
estos ltimos, una caracterstica que se tiene en cuenta para la tipificacin del microorganismo.
31.d)- Indique el procedimiento que se debe llevar a cabo para poner de manifiesto estas
caractersticas.

31.e)- Indique la metodologa a utilizar para corroborar que la condicin de anaerobiosis fue
correctamente realizada.
..

Situacin C : Con la finalidad de preparar una autovacuna (vacuna que se realiza a partir de
un microorganismo aislado a partir del paciente al cul se le va a administrar), remiten al laboratorio de
bacteriologa un hisopado tico de un perro adulto con diagnstico de otitis crnica (inflamacin del
conducto auditivo). Teniendo en cuenta que el conducto auditivo es un rea normalmente colonizada y
que son varias las especies de microorganismos posibles, causantes de la otitis.
Imagen 31


32.a)- Indique que tipos de medios de cultivo sembrara.
..

Si la finalidad es el AISLAMIENTO de un microorganismo

32.b)- Cite el tipo de siembra que realizara
..
Para la preparacin de la autovacuna, el cultivo bacteriano debe tener una concentracin 1,2 x
10
9
UFC/ml y encontrarse en velocidad constante de crecimiento.

32.c)- Indique la metodologa que utilizara para corroborar que el cultivo tiene la
concentracin requerida.
..
32.d)- Cite en qu fase de la curva de crecimiento bacteriano debe encontrarse el cultivo.
..
.
32.e)- Indique que tipo de medio de cultivo utilizara para la obtencin de grandes
concentraciones bacterianas
..



--Lectura complementaria: Pruebas bioqumicas. ( en Aula virtual Apo 3 Materiales)
--Bibliografa general

-Stanchi N., y col. Microbiologa veterinaria. Ed. Intermdica, 2007.
-Stanchi N y col. Bacteriologa prctica para el mdico veterinario. Ed. Fondo UCCuyo. 2009
-Basualdo J., De Torres R., Coto C., Microbiologa Biomdica. Editorial Atlante Argentina srl. 2
ed. 2006.

-- Link de inters
-Normas bsicas de seguridad en Laboratorios Secretara de gestin de la calidad FCV-UNLP
http://www.fcv.unlp.edu.ar/index.php?option=com_content&view=article&id=1412:novedades&c
atid=223:bioseguridad&Itemid=586

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